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腺病毒为载体的HSV1-TK基因对肿瘤细胞系抑制作用的研究 被引量：2
1
作者 朱乃军 李秋香 +2 位作者 李冬田 孙文敏 佟惠春 《天津医药》 CAS 北大核心 2002年第2期98-101,共4页
目的:用E1区缺失的含HSV1-TK基因和CMV启动子的重组腺病毒AdE1CMVHSV1-TK(AdTK)前体药物GCV即AdTK/GCV系统,观察其在体外对PG49、H460、MCF-7、Hela4种建株肿瘤细胞系的抑制作用、旁杀伤效应和AdTK/GCV系统处理的肿瘤细胞培养上清液对... 目的:用E1区缺失的含HSV1-TK基因和CMV启动子的重组腺病毒AdE1CMVHSV1-TK(AdTK)前体药物GCV即AdTK/GCV系统,观察其在体外对PG49、H460、MCF-7、Hela4种建株肿瘤细胞系的抑制作用、旁杀伤效应和AdTK/GCV系统处理的肿瘤细胞培养上清液对肿瘤细胞的杀伤效应。方法;采用MTT法测定细胞生长抑制率,AdLacZ作为对照病毒。结果:细胞生长抑制率随重组病毒的浓度、前体药物的浓度及作用时间的增加而升高,而对照病毒则没有显示出对肿瘤细胞明显的抑制作用。旁杀伤效应显示,细胞抑制率随导入AdTK病毒的肿瘤细胞比例的增加而升高。另外肿瘤细胞呈现出上清液浓度依赖性抑制,其生长抑制率随上清液浓度的增加而升高。结论:AdTK/GCV系统对4种肿瘤细胞系有明显的抑制作用及旁杀伤效应。 展开更多
关键词 HSV1-TK基因 药物前体 肿瘤细胞 基因疗法 腺病毒 旁杀伤效应
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重组HSV1-tkGFP/GCV荧光蛋白示踪系统的构建及对小鼠黑色素瘤的抑制作用 被引量：2
2
作者 曾玲 吴映雅 +5 位作者 谭宇蕙 丘鹏翔 张广献 刘娟 陈志从 杜标炎 《中药新药与临床药理》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期546-551,631,共7页
目的建立具有绿色荧光蛋白(GFP)示踪功能的单纯疱疹病毒1型胸苷激酶基因/更昔洛韦自杀基因系统(HSV1-tkGFP/GCV),并检测该系统对小鼠黑色素瘤的抑制作用。方法将阳性重组质粒pLXSN-tkGFP和pLXSN-DsRed2分别转染B16细胞,加G418进行筛选。... 目的建立具有绿色荧光蛋白(GFP)示踪功能的单纯疱疹病毒1型胸苷激酶基因/更昔洛韦自杀基因系统(HSV1-tkGFP/GCV),并检测该系统对小鼠黑色素瘤的抑制作用。方法将阳性重组质粒pLXSN-tkGFP和pLXSN-DsRed2分别转染B16细胞,加G418进行筛选。用GCV(5,50,500μmol·L-1)杀伤实验验证tk基因的表达。四甲基偶氮唑盐(MTT)法和荧光示踪法验证该系统存在旁杀伤效应。将B16-tkGFP和B16-RFP细胞按1∶1混合,接种于C57BL/6J小鼠进行肿瘤模型复制,随机分为模型组和GCV(50 mg·kg-1·d-1)组,腹腔注射给药,每3 d检测1次肿瘤大小(n=14)。结果成功获得能发出绿色荧光的B16-tkGFP细胞和能发出红色荧光的B16-RFP细胞,且tk基因在B16-tkGFP细胞中表达正常。该系统存在一定的旁杀伤效应。与模型组比较,GCV组小鼠肿瘤生长受到明显抑制(P<0.01)。结论重组HSV1-tkGFP/GCV系统对小鼠黑色素瘤有明显抑制作用,并可实现直观检测其旁杀伤效应,为后续中药联合自杀基因疗法的研究奠定基础。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒胸苷激酶基因 自杀基因系统 旁杀伤效应 黑色素瘤
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单纯疱疹病毒胸苷激酶与绿色荧光蛋白融合基因表达载体的构建 被引量：1
3
作者 吴映雅 谭宇蕙 +2 位作者 宁异真 杜标炎 李杰芬 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期275-278,282,共5页
目的建立既有TK活性又表达绿色荧光的融合蛋白治疗系统用于实验研究,为建立荧光活体成像技术,更为科学地进行肿瘤自杀基因增效中药成分的研究打下基础。方法DNA重组技术构建HSV1-TK cDNA与EGFP基因融合的真核细胞表达载体pTKGFP,用酶切... 目的建立既有TK活性又表达绿色荧光的融合蛋白治疗系统用于实验研究,为建立荧光活体成像技术,更为科学地进行肿瘤自杀基因增效中药成分的研究打下基础。方法DNA重组技术构建HSV1-TK cDNA与EGFP基因融合的真核细胞表达载体pTKGFP,用酶切鉴定并进行序列测定;polyFect转染液对鼠黑色素瘤细胞B16进行转染,荧光显微镜观察基因表达情况,MTT法检测转化细胞B16对GCV的敏感性。结果重组质粒pTKGFP经限制性酶切鉴定和DNA序列测定分析显示,TK基因已经成功与GFP基因连接,连接处无移码突变产生;荧光显微镜下观察显示,TK-GFP融合基因在B16中获得表达。其在细胞中的定位与文献资料一致,TKGFP主要集中于胞核区而GFP弥散分布于胞质中。TKGFP组细胞对GCV的敏感性大于对照组细胞,差异有显著性。结论构建了pTKGFP融合蛋白基因表达载体,并成功在B16中进行表达,所表达的融合蛋白具有TK活性和GFP的荧光活性,可用于后续性的体外与体内实验。 展开更多
关键词 HSV1-TK/GCV 自杀基因 绿色荧光蛋白 肿瘤
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ODDD乏氧靶向HSV1-TK/GCV系统对体外肝癌细胞的杀伤作用 被引量：1
4
作者 方艳秋 刘磊 +1 位作者 谭岩 蒋永兴 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期779-781,786,共4页
目的:探讨pEGFP-TK-ODDD基因表达载体乏氧特异性杀伤肝癌细胞的可行性。方法:通过LipofectamineTM2000将重组基因质粒pEGFP-TK-ODDD在肝癌细胞株SMMC7721和HepG2中进行瞬时转染。流式细胞仪分析EGFP的表达强度分析质粒转染效率。MTT法检... 目的:探讨pEGFP-TK-ODDD基因表达载体乏氧特异性杀伤肝癌细胞的可行性。方法:通过LipofectamineTM2000将重组基因质粒pEGFP-TK-ODDD在肝癌细胞株SMMC7721和HepG2中进行瞬时转染。流式细胞仪分析EGFP的表达强度分析质粒转染效率。MTT法检测GCV作用24小时后转染细胞在不同氧浓度下的生存率。结果:SMMC7721细胞和HepG2细胞质粒转染效率分别为33.23%和36.97%;MTT结果显示,GCV浓度为12.5 mg/L时,缺氧环境下转染pEGFP-TK-ODDD基因表达载体的SMMC7721细胞和HepG2细胞存活率,细胞的生存率分别为81.25%和76.55%,明显低于对正常氧环境中细胞生存率的92.12%和94.36%(P<0.05)。结论:ODDD可以特异的调控HSV1-TK/GCV系统对乏氧肝癌细胞的靶向杀伤作用。 展开更多
关键词 缺氧 肝癌 氧依赖降解结构域 自杀基因
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腺病毒伴随病毒载体介导的I型单纯疱疹病毒胸苷激酶基因转移及其杀肿瘤效应 被引量：3
5
作者 姚二梅 冯泽华 +2 位作者 吴小兵 颜子颖 侯云德 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 1998年第3期207-212,共6页
目的研究腺病毒伴随病毒（ＡＡＶ）载体介导杀肿瘤基因的转移及其在肿瘤治疗方面的应用。方法应用作者构建的腺病毒伴随病毒载体，克隆Ｉ型单纯疱疹病毒胸苷激酶（ＨＳＶＩ－ＴＫ）基因，构建质粒ｐＡＣＴＫ－１９。用ｐＡＣＴＫ－１９... 目的研究腺病毒伴随病毒（ＡＡＶ）载体介导杀肿瘤基因的转移及其在肿瘤治疗方面的应用。方法应用作者构建的腺病毒伴随病毒载体，克隆Ｉ型单纯疱疹病毒胸苷激酶（ＨＳＶＩ－ＴＫ）基因，构建质粒ｐＡＣＴＫ－１９。用ｐＡＣＴＫ－１９转染５型腺病毒（Ａｄ５）感染的重组ＡＡＶ包装细胞系ＡＥ１２０１，获得重组病毒ｒＡＡＶ／ＡＣＴＫ。再用此重组病毒感染肺癌细胞系Ａ５４９，并联合丙氧鸟苷（ＧＣＶ）作用，研究其体外对肺癌细胞的杀伤作用。结果重组ｒＡＡＣ／ＡＣＴＫ的滴度为３４×１０５ＣＦＵ／ｍｌ，感染肺癌细胞系Ａ５４９，实现了ＴＫ基因的转移及与细胞染色体的整合和表达，对Ａ５４９细胞具有杀伤作用。 展开更多
关键词 腺病毒伴随病毒 胸苷激酶基因 杀瘤效应
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HSV1-tk乳腺癌移植瘤裸鼠模型PET-CT报告基因显像
6
作者 徐文贵 戴东 +4 位作者 房娜 宋秀宇 王健 朱研佳 门晓媛 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第48期3420-3424,共5页
目的对^18F-FHBG体外摄取、体内分布及荷瘤裸鼠PET—CT显像等方面进行研究。方法利用吖井型计数器测定体外肿瘤细胞T47D和T47D—tk对^18F-FHBG的摄取、正常昆明小鼠和移植瘤裸鼠^18F-FHBG体内分布；并进行荷皮下移植瘤裸鼠^18F-FHBGPET... 目的对^18F-FHBG体外摄取、体内分布及荷瘤裸鼠PET—CT显像等方面进行研究。方法利用吖井型计数器测定体外肿瘤细胞T47D和T47D—tk对^18F-FHBG的摄取、正常昆明小鼠和移植瘤裸鼠^18F-FHBG体内分布；并进行荷皮下移植瘤裸鼠^18F-FHBGPET-CT显像。结果体外肿瘤细胞摄取实验显示T47D-tk细胞摄取^18F-FHBG的程度明显高于正常的T47D细胞，120min时T47D—tk细胞对^18F-FHBG的摄取为T47D细胞的64倍（P〈0．001）。正常小鼠注射^18F-FHBG后，主要分布于肝脏、肠道、肾脏和膀胱，而脑部未见明显放射性分布。荷皮下移植瘤裸鼠PET—CT显像显示，T47D．tk肿瘤浓聚^18F-FHBG的程度明显高于T47D肿瘤，且2h显像效果较好。结论体外T47D—tk细胞摄取^18F-FHBG的程度明显高于正常的T47D细胞；在小鼠体内^18F-FHBG主要经肠道和泌尿系统排泄。^18F-FHBG报告基因探针可以有效的定位于HSV1-tk基因表达的部位且与移植瘤裸鼠体内分布研究结果一致。这可为进一步开展^18F-FHBG报告基因显像与肿瘤基因治疗的监测提供有效手段和科学依据。 展开更多
关键词 基因探针 ^18F-FHBG PET—CT显像 HSV1-tk基因 乳腺癌
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