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GM-CSF和IL-6的免疫佐剂活性及对小鼠生长性能、血液指标的影响
1
作者 成伟伟 容维中 +5 位作者 杨明 李元新 赵子惠 陈伯祥 王佳 周瑶 《饲料工业》 北大核心 2025年第1期95-102,共8页
为验证粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素6(IL-6)的免疫佐剂活性以及研究其对小鼠生长性能、血液指标的影响,试验扩增了GM-CSF基因和IL-6基因,并将GMCSF基因和IL-6基因分别克隆至载体p CDNA3.1-His-C和p ET-32a(+),且诱... 为验证粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素6(IL-6)的免疫佐剂活性以及研究其对小鼠生长性能、血液指标的影响,试验扩增了GM-CSF基因和IL-6基因,并将GMCSF基因和IL-6基因分别克隆至载体p CDNA3.1-His-C和p ET-32a(+),且诱导表达了IL-6蛋白。将构建的GM-CSF基因的重组载体、诱导表达的IL-6重组蛋白联合畜禽疫病防控技术研发课题组前期构建的TGEV DNA疫苗载体p-N-His分组免疫小鼠(设置p-N-His为对照),运用间接ELISA检测了特异性抗体水平。将构建的重组载体、诱导表达的重组蛋白和PBS分组免疫小鼠,测定了小鼠的生长性能、血清指标和免疫器官指数。结果显示,克隆的GM-CSF和IL-6基因大小分别为579 bp和576 bp,成功构建了真核表达载体p-GM-CSF和原表达载体p ET-IL-6,诱导表达的IL-6重组蛋白大小为38 ku。载体p-GM-CSF、IL-6蛋白联合p-N-His免疫小鼠后,p-N-His+p-GM-CSF、p-N-His+IL-6蛋白和p-N-His均刺激机体产生了特异性抗体,且p-N-His+IL-6蛋白抗体水平高于p-N-His+p-GM-CSF(P<0.05)。IL-6蛋白、p-GM-CSF和PBS分组免疫小鼠后,p-GM-CSF和IL-6蛋白组小鼠的生长性能指标均高于PBS组,且末重、平均日增重、料重比差异显著(P<0.05)。p-GM-CSF、IL-6蛋白、PBS组小鼠的生化指标总蛋白、白蛋白、球蛋白、尿素氮的含量差异均不显著(P>0.05),但IL-6蛋白组小鼠的葡萄糖显著升高(P<0.05),p-GM-CSF、IL-6蛋白、PBS组小鼠的免疫器官指数差异均不显著(P>0.05)。文章以p-N-His为靶载体验证出GM-CSF和IL-6具有较强免疫佐剂活性,且IL-6蛋白的效果强于GM-CSF。p-GM-CSF和IL-6蛋白能够提升小鼠的生长性能指标,对血液指标和免疫器官指数影响不大。 展开更多
关键词 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 白细胞介素6 免疫佐剂活性 生长性能 血液指标
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芍药内酯苷和芍药苷对环磷酰胺致血虚小鼠的补血作用及对GM-CSF,IL-3,TNF-α影响的比较研究 被引量：37
2
作者 朱映黎 张建军 +4 位作者 王景霞 阳志晖 黄银峰 屈胜胜 周恬恬 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期330-333,共4页
目的:比较研究芍药内酯苷、芍药苷对环磷酰胺致血虚小鼠的补血作用及机制。方法:采用环磷酰胺法复制小鼠血虚模型,灌胃芍药内酯苷、芍药苷单体提取物,检测小鼠外周血象、胸腺与脾脏指数及分离血清检验粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-C... 目的:比较研究芍药内酯苷、芍药苷对环磷酰胺致血虚小鼠的补血作用及机制。方法:采用环磷酰胺法复制小鼠血虚模型,灌胃芍药内酯苷、芍药苷单体提取物,检测小鼠外周血象、胸腺与脾脏指数及分离血清检验粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素-3(IL-3)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α),比较二者的补血作用及机制。结果:芍药内酯苷30 mg·kg-1与芍药苷30 mg·kg-1均能升高白细胞数(P<0.01);芍药内酯苷30 mg·kg-1与芍药苷30 mg·kg-1均能升高红细胞数(P<0.01,P<0.001)。芍药内酯苷30 mg·kg-1的胸腺指数明显升高(P<0.01),芍药苷30 mg·kg-1的胸腺指数则无升高作用,二者相比,芍药内酯苷优于芍药苷(P<0.05);芍药内酯苷15 mg·kg-1的胸腺指数明显升高(P<0.01),芍药苷15 mg·kg-1的胸腺指数无升高作用,二者之间相比,无统计学差异。芍药内酯苷30 mg·kg-1(P<0.01)、芍药内酯苷15 mg·kg-1(P<0.05)、芍药苷30 mg·kg-1(P<0.01)与芍药苷15 mg·kg-1(P<0.05)均能升高GM-CSF的含量。芍药内酯苷30 mg·kg-1与芍药苷30 mg·kg-1均能升高IL-3(P<0.001)。芍药内酯苷30 mg·kg-1与芍药苷30 mg·kg-1均能降低TNF-α(P<0.01),二者相比,有明显统计学差异(P<0.01),芍药内酯苷优于芍药苷。结论:芍药内酯苷和芍药苷能够通过机体的免疫调节作用对抗环磷酰胺导致的血虚状态,且芍药内酯苷对造血负向调控因子的作用更强,与芍药苷协同发挥作用,是白芍养血柔肝功效的重要成分。 展开更多
关键词 芍药内酯苷 芍药苷 血虚证 gm-csf IL-3 TNF-Α
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人参总皂甙诱导淋巴细胞表达GM-CSF的实验研究 被引量：17
3
作者 陈笛 王莎莉 +2 位作者 王亚平 王璐 姜蓉 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期411-414,共4页
目的　研究人参总皂甙 (TSPG)对人淋巴细胞表达GM CSF的影响 ,及其与人粒细胞 巨噬细胞系血细胞发生调控的关系。方法　采用造血祖细胞、胸腺细胞和脾细胞体外培养、造血生长因子生物学活性检测、免疫细胞化学和核酸分子原位杂交等技... 目的　研究人参总皂甙 (TSPG)对人淋巴细胞表达GM CSF的影响 ,及其与人粒细胞 巨噬细胞系血细胞发生调控的关系。方法　采用造血祖细胞、胸腺细胞和脾细胞体外培养、造血生长因子生物学活性检测、免疫细胞化学和核酸分子原位杂交等技术。结果　TSPG能显著刺激粒细胞 巨噬细胞系造血祖细胞 (CFU GM)增殖 ;经TSPG诱导制备的胸腺细胞和脾细胞条件培养液富含GM CSF样活性 ;TSPG能显著促进胸腺细胞和脾细胞的GM CSF蛋白和mRNA表达。结论　TSPG可能通过直接和 或间接途径促进淋巴细胞合成和分泌GM CSF ,进而促进CFU 展开更多
关键词 人参总皂甙 淋巴细胞 gm-csf 实验 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 粒细胞-巨噬细胞系造血祖细胞
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加味当归补血汤对血虚小鼠EPO和GM-CSF表达的影响 被引量：18
4
作者 姚楠 黄雪君 +2 位作者 杜铁良 曾晓会 陈玉兴 《广东药学院学报》 CAS 2013年第2期177-180,共4页
目的研究加味当归补血汤对环磷酰胺诱发的血虚小鼠促红细胞生成素(EPO)和粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)表达的影响。方法采用环磷酰胺诱导小鼠血虚,不同剂量的加味当归补血汤分别对NIH小鼠进行连续灌胃,给药10 d后收集小鼠血液、... 目的研究加味当归补血汤对环磷酰胺诱发的血虚小鼠促红细胞生成素(EPO)和粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)表达的影响。方法采用环磷酰胺诱导小鼠血虚,不同剂量的加味当归补血汤分别对NIH小鼠进行连续灌胃,给药10 d后收集小鼠血液、肾脏以及骨髓。测定各组小鼠血红细胞和血红蛋白数量、肾脏EPO mRNA和骨髓GM-CSF mRNA表达水平及血清EPO和GM-CSF含量。结果与模型组比较,加味当归补血汤组小鼠血红细胞和血红蛋白数量明显增加,肾脏EPO和骨髓GM-CSF的基因表达明显升高,血清EPO和GM-CSF的含量显著提高。结论加味当归补血汤能显著改善小鼠贫血,其机制可能与其明显提高EPO和GM-CSF的表达有关。 展开更多
关键词 加味当归补血汤 环磷酰胺 血虚 促红细胞生成素 粒细胞巨噬细胞集落刺激因子
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辐射诱导性启动子调控GM-CSF基因的表达 被引量：7
5
作者 杜楠 裴雪涛 +3 位作者 罗成基 冯凯 李梁 白慈贤 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期336-338,共3页
构建携带早期生长反应基因 (Egr 1)启动子的GM CSF和增强绿色荧光蛋白 (EGFP)双顺反子基因表达载体 (Egr EG)。通过脂质体转染骨髓基质细胞系HFCL(称为HFCL/EG) ,采用FACS分析EGFP表达的阳性细胞 ,用RT PCR、ELISA及集落增殖法分析GM CS... 构建携带早期生长反应基因 (Egr 1)启动子的GM CSF和增强绿色荧光蛋白 (EGFP)双顺反子基因表达载体 (Egr EG)。通过脂质体转染骨髓基质细胞系HFCL(称为HFCL/EG) ,采用FACS分析EGFP表达的阳性细胞 ,用RT PCR、ELISA及集落增殖法分析GM CSFmRNA、GM CSF含量的表达及对CFU GM的增殖作用。结果显示 :HFCL/EG细胞证实有外源性基因EGFP和GM CSF的整合和表达及对CFU GM的增殖作用。提示Egr 1调控序列启动的GM CSF基因修饰的基质细胞经辐射造血因子表达明显增高 ,并对造血细胞具有一定的保护作用。 展开更多
关键词 辐射效应 粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 基因表达 基因调控 造血细胞 gm-csf
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GM-CSF重组腺病毒扩增的骨髓树突状细胞体外经肿瘤抗原刺激后诱导抗肿瘤免疫应答 被引量：14
6
作者 章卫平 曹雪涛 +3 位作者 张明徽 黄欣 朱学军 叶天星 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1997年第1期29-33,共5页
用ＧＭ－ＣＳＦ重组腺病毒感染小鼠骨髓细胞，观察扩增到的骨髓树突状细胞的生物学功能。结果表明，ＧＭ－ＣＳＦ重组腺病毒一次性感染骨髓细胞，１ｗ后能从一只小鼠股骨中扩增到２．４×１０６～３．３×１０６树突状细胞，扩... 用ＧＭ－ＣＳＦ重组腺病毒感染小鼠骨髓细胞，观察扩增到的骨髓树突状细胞的生物学功能。结果表明，ＧＭ－ＣＳＦ重组腺病毒一次性感染骨髓细胞，１ｗ后能从一只小鼠股骨中扩增到２．４×１０６～３．３×１０６树突状细胞，扩增到的骨髓树突状细胞表达ＭＨＣ－Ⅱ、ＭＨＣ－Ⅰ、Ｂ７－１、Ｂ７－２和Ｉ－ＣＡＭ－１等免疫分子，分泌一定水平的ＧＭ－ＣＳＦ，对同种异体Ｔ细胞具有很强的刺激活性，体外经Ｂ１６肿瘤瘤苗刺激后免疫同系小鼠，能诱导出抗原特异性的ＣＴＬ活性，使免疫动物产生更强的保护性免疫反应，抵抗Ｂ１６细胞的攻击。提示可用ＧＭ－ＣＳＦ重组腺病毒从骨髓中扩增足够数量的树突状细胞，用于肿瘤的免疫治疗和基因治疗。 展开更多
关键词 骨髓细胞 树突状细胞 gm-csf 肿瘤免疫学
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双表达载体研究GM-CSF对HCVC基因免疫应答的影响 被引量：10
7
作者 廖国阳 姜述德 +3 位作者 孙明波 杨卉娟 陈俊英 张新文 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期289-291,294,共4页
目的 HCV C蛋白基因诱导的免疫应答较弱 ,因而增强 HCV C蛋白基因免疫对于开发 HCV疫苗具有极其的重要性。方法将 GM- CSF基因与 pc15 4基因插入双表达载体 pc DNA3 .0 BA构建成双价质粒 pc DNA3 .0 BApc15 4 GM- CSF,肌肉免疫 Balb/ c... 目的 HCV C蛋白基因诱导的免疫应答较弱 ,因而增强 HCV C蛋白基因免疫对于开发 HCV疫苗具有极其的重要性。方法将 GM- CSF基因与 pc15 4基因插入双表达载体 pc DNA3 .0 BA构建成双价质粒 pc DNA3 .0 BApc15 4 GM- CSF,肌肉免疫 Balb/ c小鼠。结果 GM- CSF和 pc15 4在 Cos- 7细胞中同时获得瞬时表达 ;pc DNA3 .0 BApc15 4 GM- CSF双价质粒较单价 pc DNA3 .0 BApc15 4诱导小鼠产生抗体的几何平均滴度显著增高 ( P=0 .0 4 ) ,而 pc DNA3 .0 BApc15 4 + pc DNA3 .0BAGMCSF混合质粒较单价质粒 pc DNA3 .0 BApc15 4诱导小鼠产生抗体的滴度极显著降低 ( P<0 .0 1)。HCV C蛋白抗原特异性的脾淋巴细胞增殖能力 ,双价质粒较单价及单价混合质粒极显著增高 ( P<0 .0 1)。结论双表达载体同时输送 GM- CSF与pc15 4基因能增强 Balb/ c小鼠对 HCV C蛋白基因的体液免疫应答及免疫鼠脾淋巴细胞对特异性抗原刺激的增殖能力。 展开更多
关键词 DNA疫苗 双表达载体 HCV-C蛋白 gm-csf
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以减毒沙门氏菌为载体的GM-CSF与生长抑素融合表达质粒对小鼠淋巴细胞增殖和GH及IGF-Ⅰ分泌的影响 被引量：7
8
作者 舒邓群 茆达干 +2 位作者 吴志敏 程宝 杨利国 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期814-818,共5页
40只22日龄小鼠，雌雄各半，平均分为4组。其中第1组为对照组，第2～4组分别经口给予以减毒沙门氏菌为载体的pcS／2SS、pGM—CSF／SS和pGM—CSF＋pcS／2SS DNA疫苗，剂量10^9CFU／只，2周后以相同剂量加强免疫一次，分析不同DNA疫苗对... 40只22日龄小鼠，雌雄各半，平均分为4组。其中第1组为对照组，第2～4组分别经口给予以减毒沙门氏菌为载体的pcS／2SS、pGM—CSF／SS和pGM—CSF＋pcS／2SS DNA疫苗，剂量10^9CFU／只，2周后以相同剂量加强免疫一次，分析不同DNA疫苗对小鼠淋巴细胞增殖和GH、IGF-Ⅰ分泌的影响。结果表明GM—CSF可增强免疫鼠脾淋巴细胞对特异性抗原刺激的增殖能力，以pGM—CSF／SS免疫组最强；DNA疫苗免疫组的GH和IGF-Ⅰ分泌水平都高于对照组。这些结果证明，GM—CSF对生长抑素DNA疫苗有一定的免疫增强作用，以减毒沙门氏菌为载体介导DNA疫苗通过口服途径免疫动物是一种较好的免疫方式。pGM—CSF／SS的免疫效果优于pGM—CSF＋pcS／2SS。 展开更多
关键词 gm—csf 生长抑素 减毒沙门氏菌 淋巴细胞增殖 GH IGF-Ⅰ
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小鼠GM-CSF基因真核表达载体的构建及其表达活性的鉴定 被引量：6
9
作者 张叔人 周春霞 +4 位作者 马文波 王东梅 张友会 高全立 张书岭 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第7期457-460,共4页
目的:构建小鼠GM-CSF基因的高效真核表达载体,筛选导入该载体后高水平表达GM-CSF的小鼠淋巴瘤细胞系RMA,并探讨转GM-CSF基因瘤苗治疗小鼠T淋巴细胞瘤的方法。方法:PCR扩增小鼠CM-CSF cDNA3’端770bp的片段,将其插入真核表达载体pcDNA3;... 目的:构建小鼠GM-CSF基因的高效真核表达载体,筛选导入该载体后高水平表达GM-CSF的小鼠淋巴瘤细胞系RMA,并探讨转GM-CSF基因瘤苗治疗小鼠T淋巴细胞瘤的方法。方法:PCR扩增小鼠CM-CSF cDNA3’端770bp的片段,将其插入真核表达载体pcDNA3;用电穿孔法将构建的载体导入小鼠淋巴瘤细胞系RMA,有限稀释法制备单个细胞克隆,经RT-PCR、骨髓祖细胞增殖实验和集落形成实验筛选相对高表达GM-CSF的RMA克隆,该克隆细胞经丝裂霉素灭活后免疫小鼠以诱导其产生抵抗RMA肿瘤细胞再攻击的能力。结果:构建的重组质粒含有预期片段,插入方向正确,核酸序列无误;且获得了高表达GM-CSF的RMA克隆,将其用丝裂霉素灭活免疫小鼠后使它们产生了抗肿瘤免疫保护力。结论:转GM-CSF基因瘤苗可能作为有效的抗T淋巴细胞瘤瘤苗。 展开更多
关键词 gm-csf基因 基因表达 免疫治疗 粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 T淋巴细胞瘤 免疫治疗
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猪粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)基因的克隆和序列分析及其基因表达 被引量：10
10
作者 舒邓群 茆达干 +3 位作者 曹少先 吴志敏 陈荣达 杨利国 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期234-240,共7页
采取三元杂交猪的外周血,提取单核细胞总RNA,采用RT-PCR克隆猪粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)cDNA(GenBank登录号为DQ108393)。以pcDNA3.1(-)为质粒载体,构建猪GM-CSF基因真核表达质粒pGM-CSF,对克隆片段进行测序,并进行不同物种... 采取三元杂交猪的外周血,提取单核细胞总RNA,采用RT-PCR克隆猪粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)cDNA(GenBank登录号为DQ108393)。以pcDNA3.1(-)为质粒载体,构建猪GM-CSF基因真核表达质粒pGM-CSF,对克隆片段进行测序,并进行不同物种间同源性的比较。将重组质粒转染COS-7细胞,Western blotting鉴定表达蛋白的特异性。序列分析表明,GM-CSF的cDNA开放阅读框为435 bp,编码144个氨基酸和大部分信号肽,与用作PCR引物设计的参考序列比较,其核苷酸的同源性为97.5%,氨基酸的同源性为95.1%,同绵羊、人、牛、小鼠和犬的GM-CSF序列比较,其核苷酸的同源性分别为86.2%、80.5%、81.7%、69.7%和81.8%,氨基酸的同源性分别为78.5%、71.3%、70.3%、55.9%和71.5%。Western blotting证实目的基因可以在真核细胞中特异性的表达GM-CSF蛋白。以上结果表明,猪的GM-CSF基因被成功克隆,它存在着种属特异性。这为进一步研究该基因的生物学作用特别是利用GM-CSF增强DNA疫苗的免疫效果奠定了基础。 展开更多
关键词 猪 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 基因克隆 序列分析 基因表达
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GM-CSF对MUC1基因疫苗抑制乳腺癌生长的增强作用 被引量：7
11
作者 袁时芳 李开宗 +3 位作者 王岭 颜真 韩苇 张英起 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期737-740,共4页
目的 :观察GM CSF有无增强MUC1基因疫苗对EMT6乳腺癌生长的特异性抑制作用。方法 :采用股四头肌肌肉注射法 ,将构建的MUC1基因疫苗pcDNA3.1 MUC1免疫雌性BALB/c小鼠 ,每 3wk 1次 ,共 3次。每次基因免疫后 1、3、5d ,皮下注射GM CSF 10 0... 目的 :观察GM CSF有无增强MUC1基因疫苗对EMT6乳腺癌生长的特异性抑制作用。方法 :采用股四头肌肌肉注射法 ,将构建的MUC1基因疫苗pcDNA3.1 MUC1免疫雌性BALB/c小鼠 ,每 3wk 1次 ,共 3次。每次基因免疫后 1、3、5d ,皮下注射GM CSF 10 0 μL(1μg/ 10 0 μL)。最后 1次基因免疫后第 3周 ,接种表达MUC1的EMT6小鼠乳腺癌细胞。两周后观察、记录肿瘤的生长情况。于肿瘤细胞接种后第 4 3天 ,处死全部动物 ,称量肿瘤的质量。用 4h51Cr释放法检测小鼠脾特异性CTL的杀伤活性。结果 :接种肿瘤细胞后 4 3d ,MUC1基因疫苗加GM CSF组、MUC1基因疫苗组、pcDNA3.1加GM CSF组及pcDNA3.1组 ,EMT6肿瘤的大小依次为 (135± 33.8)mm3 、(2 5 0± 34.3)mm3 、(5 6 8± 4 3.6 )mm3 和 (5 96± 4 8.2 )mm3 ;平均瘤质量 (g)依次为 (0 .81± 0 .4 2 )g、(1.2 3± 0 .4 1)g、(2 .30± 0 .4 8)g及 (2 .2 8± 0 .5 8)g。与对照组相比较 ,MUC1基因疫苗组EMT6肿瘤的生长受到明显抑制 (P <0 .0 5 ) ;与单独MUC1基因疫苗组相比较 ,MUC1基因疫苗加GM CSF组抗肿瘤生长的作用有显著差异 (P <0 .0 5 )。在效靶比为 10 0∶1、5 0∶1、2 5∶1和 12 .5∶1时 ,MUC1基因疫苗加GM CSF组特异性CTL对EMT6靶细胞的杀伤率 ,依次为 6 8.5 %、 5 3.4 %? 展开更多
关键词 MUC1 基因疫苗 gm-csf 乳腺肿瘤 免疫治疗
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地高辛标记的cDNA探针检测GM-CSFm RNA表达 被引量：7
12
作者 王亚平 王勇 +2 位作者 郑敏 姜蓉 李静 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第4期266-269,共4页
采用随机引物法对人ＧＭ－ＣＳＦｃＤＮＡ 探针进行地高辛标记，核酸分子原位杂交技术对人胸腺细胞、骨髓基质细胞、白血病细胞株（ＨＬ－６０，Ｋ５６２）、脐血细胞和胎肝组织的ＧＭ－ＣＳＦｍ ＲＮＡ的表达水平进行检测。结果表明：... 采用随机引物法对人ＧＭ－ＣＳＦｃＤＮＡ 探针进行地高辛标记，核酸分子原位杂交技术对人胸腺细胞、骨髓基质细胞、白血病细胞株（ＨＬ－６０，Ｋ５６２）、脐血细胞和胎肝组织的ＧＭ－ＣＳＦｍ ＲＮＡ的表达水平进行检测。结果表明：地高辛标记的ＧＭ－ＣＳＦｃＤＮＡ 探针使用简便、灵敏度高、特异性强、杂交结果直观，探针可较长时间保存和无放射性污染等优点。 展开更多
关键词 CM-csf CDNA探针 基因表达
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乙型肝炎HBsAg和GM-CSF融合表达质粒的构建及表达 被引量：9
13
作者 卿玉玲 赵嘉将 任红 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期201-204,207,共5页
目的　构建乙型肝炎HBsAg和GM CSF的融合表达质粒 ,借助GM CSF的免疫佐剂作用 ,提高乙型肝炎DNA疫苗的免疫效果。方法　用PCR方法及分子克隆技术构建融合表达质粒pcDNA3.1 S GM CSF和pcDNA3.1 GM CSF S ,并以重组质粒转染真核细胞 ,... 目的　构建乙型肝炎HBsAg和GM CSF的融合表达质粒 ,借助GM CSF的免疫佐剂作用 ,提高乙型肝炎DNA疫苗的免疫效果。方法　用PCR方法及分子克隆技术构建融合表达质粒pcDNA3.1 S GM CSF和pcDNA3.1 GM CSF S ,并以重组质粒转染真核细胞 ,研究重组质粒体外表达。结果　经酶切鉴定及DNA序列证实重组质粒构建正确 ,细胞转染试验表明重组质粒能在COS 7及HepG 2内表达。结论　乙型肝炎HBsAg和GM CSF的融合表达质粒构建成功 。 展开更多
关键词 乙型肝炎 HBSAG gm-csf 融合表达质粒 构建 表达
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细菌DNA和gm-csf基因对抑制素基因免疫的作用 被引量：5
14
作者 茆达干 吴结革 +3 位作者 舒邓群 薛春林 王锋 杨利国 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期139-142,共4页
40只小鼠分为4组,分别注射pC ISI(抑制素质粒)、pC ISI+细菌DNA、pC ISI+pGM-CSF和生理盐水(8.5 g.L-1)。pC ISI剂量为20μg,与佐剂等量混合,2周后加强免疫1次。试验结果表明,细菌DNA佐剂组诱导77.8%(7/9)的个体产生了抑制素阳性抗体,... 40只小鼠分为4组,分别注射pC ISI(抑制素质粒)、pC ISI+细菌DNA、pC ISI+pGM-CSF和生理盐水(8.5 g.L-1)。pC ISI剂量为20μg,与佐剂等量混合,2周后加强免疫1次。试验结果表明,细菌DNA佐剂组诱导77.8%(7/9)的个体产生了抑制素阳性抗体,抗体以IgG2α型为主,gm-csf佐剂组产生的抗体以IgG1型为主;基因佐剂联合抑制素基因免疫激发的淋巴细胞增殖能力显著高于抑制素基因单独免疫组(P<0.05);细菌DNA佐剂组阳性鼠的动情期血浆雌二醇高于阴性鼠(P<0.05),免疫对动情期孕酮水平无显著影响(P>0.05)。上述结果表明,细菌DNA和gm-csf能增强抑制素基因的免疫效果。 展开更多
关键词 抑制素 基因免疫 细菌DNA gm-csf
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猪GM-CSF基因对猪圆环病毒2型DNA疫苗诱导仔猪免疫反应的调节作用 被引量：7
15
作者 宋勤叶 温立斌 +2 位作者 杨汉春 郭鑫 陈艳红 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期120-125,共6页
粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)能够诱导树突状细胞的成熟和存活,并提高其抗原递呈功能,是非常有潜力的分子佐剂之一。为了探讨猪GM-CSF对猪圆环病毒2型(PCV2)DNA疫苗诱导免疫反应的调节作用,本研究将表达猪GM-CSF和PCV2衣壳蛋白... 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)能够诱导树突状细胞的成熟和存活,并提高其抗原递呈功能,是非常有潜力的分子佐剂之一。为了探讨猪GM-CSF对猪圆环病毒2型(PCV2)DNA疫苗诱导免疫反应的调节作用,本研究将表达猪GM-CSF和PCV2衣壳蛋白的重组质粒混合物(pcDNA3.1-gm-csf和pcDNA3.1-orf2)及在同一载体上表达PCV2衣壳蛋白与猪GM-CSF的双表达重组质粒(pIRES-orf2/gm-csf),分别接种于7日龄健康仔猪,共肌肉注射3次,每次间隔2周。结果表明猪GM-CSF基因能够明显增强PCV2DNA疫苗诱导的特异性体液免疫反应,提高外周血淋巴细胞(PBLC)对ConA刺激的增殖活性,增强NK细胞的杀伤功能,影响细胞因子IL-12、IFN-γ、IL-4和IL-10的表达水平。但GM-CSF基因单独表达和与PCV2衣壳蛋白基因在同一载体上表达,对上述4个细胞因子表达的影响有一定差异。 展开更多
关键词 猪gm-csf 猪圆环病毒2型 DNA疫苗 免疫调节
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GM-CSF与SS融合表达质粒对小鼠淋巴细胞增殖及GH和IGF-1分泌的影响 被引量：5
16
作者 舒邓群 茆达干 +2 位作者 杨利国 吴志敏 程宝 《扬州大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期11-15,共5页
以小白鼠为试验对象,分别肌肉注射生理盐水及pcS/2SS、pGM-CSF/SS、pGM-CSF+pcS/2SS质粒,每只50μg,免疫后第3周以相同剂量加强免疫1次,测定不同质粒对小鼠淋巴细胞增殖反应及血浆生长激素(GH)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)分泌水平,探讨... 以小白鼠为试验对象,分别肌肉注射生理盐水及pcS/2SS、pGM-CSF/SS、pGM-CSF+pcS/2SS质粒,每只50μg,免疫后第3周以相同剂量加强免疫1次,测定不同质粒对小鼠淋巴细胞增殖反应及血浆生长激素(GH)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)分泌水平,探讨GM-CSF对生长抑素DNA疫苗的免疫增强作用。结果表明:GM-CSF可增强小鼠脾脏淋巴细胞的增殖反应,以pGM-CSF+pcS/2SS组的增殖能力最强,显著高于pcS/2SS组和生理盐水组;同时注射2种表达质粒(pGM-CSF+pcS/2SS)的GH分泌水平和融合表达质粒(pGM-CSF/SS)的IGF-1分泌水平明显高于生理盐水组和pcS/2SS免疫组。这证明GM-CSF对生长抑素DNA疫苗有一定的免疫增强作用,可促进生长抑素DNA疫苗的免疫反应,提高血浆GH和IGF-1的分泌水平。 展开更多
关键词 小鼠 gm-csf 生长抑素 淋巴细胞增殖 生长激素 胰岛素样生长因子-1
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GM-CSF对脐血CD34^+巨核祖细胞体外扩增及分化的影响 被引量：5
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作者 陈舒 朱发明 +3 位作者 何吉 刘晋辉 秦斐 严力行 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2005年第6期1041-1043,共3页
本实验旨在研究GMCSF对脐血CD34+细胞诱导分化为巨核细胞的影响。采用免疫磁珠法分选CD34+细胞,在含有TPO+IL3+SCF并添加了不同浓度(5、20、100ng/ml)的GMCSF的无血清培养基中进行培养。培养6、10、14天后计数单个核细胞(MNC),检测CD41... 本实验旨在研究GMCSF对脐血CD34+细胞诱导分化为巨核细胞的影响。采用免疫磁珠法分选CD34+细胞,在含有TPO+IL3+SCF并添加了不同浓度(5、20、100ng/ml)的GMCSF的无血清培养基中进行培养。培养6、10、14天后计数单个核细胞(MNC),检测CD41+细胞比例和CFUMK。结果表明,培养14天后3种不同浓度GMCSF对MNC均有明显的扩增作用,其中以20和100ng/mlGMCSF的扩增效果较好。3种不同浓度的GMCSF均使CD41+细胞比例增加,20和100ng/ml与5ng/mlGMCSF相比更能提高CD41+细胞的比例。5和20ng/ml的GMCSF能促进CFUMK的形成,但100ng/ml的GMCSF却抑制CFUMK的形成。结论:在TPO+IL3+SCF细胞因子组合中添加GMCSF有利于促进脐血CD34+细胞诱导分化为巨核细胞。 展开更多
关键词 gm-csf 脐血 CD34^+细胞 巨核细胞 体外扩增
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MTT比色法在检测重组人GM-CSF生物活性中的应用 被引量：6
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作者 张冬梅 施晓青 +1 位作者 朱洁 秦浚川 《南京大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 1997年第2期253-258,共6页
探索了ＭＴＴ比色法的一系列实验条件，并利用ＧＭ－ＣＳＦ依赖细胞株ＴＦ－１，测定了家蚕基因工程生产的重组人ＧＭ－ＣＳＦ（ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ－ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｃｏｌｏｎｙ－ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇｆａｃｔｏｒ）的生... 探索了ＭＴＴ比色法的一系列实验条件，并利用ＧＭ－ＣＳＦ依赖细胞株ＴＦ－１，测定了家蚕基因工程生产的重组人ＧＭ－ＣＳＦ（ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ－ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｃｏｌｏｎｙ－ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇｆａｃｔｏｒ）的生物活性，并与半固体培养集落刺激法进行了比较。 展开更多
关键词 MTT 生物活性 基因工程 光度法 重线人gm-csf
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重组腺病毒介导的人野生型p53、GM-CSF和B7-1基因在肝癌细胞中的表达 被引量：4
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作者 施明 王福生 +5 位作者 刘明旭 金磊 雷周云 邱兆华 高兰兴 吴祖泽 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 2002年第2期123-125,共3页
目的　观察腺病毒载体对肝癌细胞的转染效率及其介导的人野生型 p5 3、GM CSF和B7 1基因在肝癌细胞中的表达。方法　不同MOI的Ad GFP感染肝癌细胞 ,48h后计算感染效率 ;BB 1 0 2以5 0MOI感染肝癌细胞 ,48h后免疫组化法及westernblot检... 目的　观察腺病毒载体对肝癌细胞的转染效率及其介导的人野生型 p5 3、GM CSF和B7 1基因在肝癌细胞中的表达。方法　不同MOI的Ad GFP感染肝癌细胞 ,48h后计算感染效率 ;BB 1 0 2以5 0MOI感染肝癌细胞 ,48h后免疫组化法及westernblot检测 p5 3表达 ,ELISA检测GM CSF的含量 ,FACS测定B7 1的表达。结果　MOI为 5 0 pfu/细胞时对肝癌细胞的转染效率达 80 %以上 ,目的基因均可在肝癌细胞中高效表达。结论　腺病毒载体对肝癌细胞具有较高的转染效率 ,目的基因均可在肝癌细胞中高效表达 ,为进一步研究BB 1 0 展开更多
关键词 重组腺病毒 肝癌细胞 p53 gm-csf B7-1 基因表达
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huIL-6-GM-CSF(9-127)融合蛋白的表达及活性测定 被引量：4
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作者 孙强明 戴长柏 +4 位作者 李洪钊 丁云菲 马雁冰 刘红岩 徐维明 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期253-257,共5页
目的　构建及表达具有huIL 6和huGM CSF双重生物学活性的huIL 6 GM CSF(9- 12 7)融合蛋白分子。方法　应用PCR技术对huIL 6和huGM CSF的基因分别加以改造 ,同时在二者之间加上连接肽序列 (G G S G S) 3 ,克隆PCR产物 ,并构建成pBV2 2 0... 目的　构建及表达具有huIL 6和huGM CSF双重生物学活性的huIL 6 GM CSF(9- 12 7)融合蛋白分子。方法　应用PCR技术对huIL 6和huGM CSF的基因分别加以改造 ,同时在二者之间加上连接肽序列 (G G S G S) 3 ,克隆PCR产物 ,并构建成pBV2 2 0 IL 6 GM CSF(9- 12 7)表达质粒 ,将表达质粒导入E .coliDH5α中 ,诱导表达融合蛋白。通过QSepharoseH .P .离子交换柱和SephacrylS 2 0 0分子筛柱二步柱纯化以获取目的蛋白。使用MTT法测量其huIL 6和huGM CSF生物学活性。结果　pUC18 IL 6 GM CSF(9- 12 7)的序列与理论设计完全一致 ,表达质粒在E .coliDH5α中得到高效表达 ,表达的融合蛋白占总蛋白含量的 30 %以上 ,表达产物以包涵体的形式存在。通过QSepharoseH .P .离子交换柱和SephacrylS 2 0 0分子筛柱二步柱纯化及复性后获得目的蛋白 ,其纯度达到 96 %以上。融合蛋白具有huIL 6和huGM CSF的双重生物学活性 ,其促进huIL 6依赖细胞株B9和huGM CSF依赖细胞株TF 1增殖的比活性分别为 2 .86× 10 7U/mg和 3.33× 10 8U/mg。结论　获得了具有较高纯度和双重生物学活性的huIL 6 GM CSF(9- 12 7) 展开更多
关键词 gm-csf 融合蛋白 基因表达 基因克隆 白细胞介素-6 生物活性蛋白
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