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猪EFNB2基因的分离与鉴定
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作者 马海明 柳小春 施启顺 《湖南农业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期652-654,共3页
根据人与小鼠的EFNB2基因DNA序列,采用PCR方法从湖南宁乡猪中成功分离出了该基因2个片段,将该DNA序列与GenBank的数据库进行序列同源性比较,鉴定为猪的EFNB2基因3′-UTR和内含子3,长度分别为390 bp和732 bp,GenBank收录号分别为AY880671... 根据人与小鼠的EFNB2基因DNA序列,采用PCR方法从湖南宁乡猪中成功分离出了该基因2个片段,将该DNA序列与GenBank的数据库进行序列同源性比较,鉴定为猪的EFNB2基因3′-UTR和内含子3,长度分别为390 bp和732 bp,GenBank收录号分别为AY880671和DQ206822. 展开更多
关键词 efnb2基因 DNA序列 克隆
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miR-497靶向调控疾病易感基因EFNB2的分子机制研究 被引量:1
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作者 孟凡波 张蕊 +6 位作者 李琦 邓红利 马建兵 王玉琛 许华阳 王一心 马捷 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期17-22,共6页
目的用分子克隆和双荧光素酶报告基因的方法研究miR-497对精神分裂症易感基因EFNB2的靶向调控作用,为miR-497在精神分裂症中的分子功能研究奠定基础。方法运用生物信息学在线软件预测,发现与精神分裂症相关的miR-497可能直接调控疾病易... 目的用分子克隆和双荧光素酶报告基因的方法研究miR-497对精神分裂症易感基因EFNB2的靶向调控作用,为miR-497在精神分裂症中的分子功能研究奠定基础。方法运用生物信息学在线软件预测,发现与精神分裂症相关的miR-497可能直接调控疾病易感基因EFNB2。随后采用分子生物学技术扩增EFNB2基因3′-UTR中包含与miR-497种子序列相结合的片段,将该片段连接入pmirGLO质粒载体构建野生型的重组体(WT),并突变EFNB2基因3′-UTR与种子序列相结合的碱基序列,构建突变型的重组体(MUT)。最后将miR-497阴性对照(NC)和模拟物(mimics)分组转染HEK293T细胞系,并在24、48h后分别进行双荧光素酶报告基因活性测定。结果测序结果表明EFNB2基因3′-UTR的野生型(WT)和突变型(MUT)分别成功构建入pmirGLO载体中,表明WT和MUT的重组体均构建成功。转染24、48h后的双荧光素酶报告基因活性检测结果表明,miR-497mimics与NC相比,显著性降低了报告基因的活性。结论本研究在细胞水平证明了miR-497可直接调控精神分裂症易感基因EFNB2,为后续miR-497在精神分裂症中的功能研究提供了新思路和新线索。 展开更多
关键词 精神分裂症 miR-497 efnb2 靶基因 分子机制
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EFNB2基因rs550067317位点基因多态性与精神分裂症相关性研究 被引量:1
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作者 汪斌 项则文 +1 位作者 陈莹 蔡靓 《浙江中西医结合杂志》 2019年第6期494-497,共4页
精神分裂症是一种慢性、严重和致残的精神疾病,其临床特征是幻觉、妄想和认知缺陷,其遗传度高达80%[1]。EFNB2基因位于13q33染色体上,与精神分裂症有很强的联系。研究发现,EFNB2基因与中国汉族人群中的精神分裂症有关[2]。研究表明,micr... 精神分裂症是一种慢性、严重和致残的精神疾病,其临床特征是幻觉、妄想和认知缺陷,其遗传度高达80%[1]。EFNB2基因位于13q33染色体上,与精神分裂症有很强的联系。研究发现,EFNB2基因与中国汉族人群中的精神分裂症有关[2]。研究表明,microRNA表达失调可能与精神分裂症相关[3-5]。microRNA-137(miR-137)的变异是迄今为止鉴定的与精神分裂症风险相关性最为密切的基因座之一,与较差的认知表现有关。与miR-137相关的精神分裂症风险可能与其更广泛的下游遗传效应有关[6]。rs550067317位于EFNB2基因的3’-UTR,该区域是miR-137的结合位点,本研究探讨EFNB2基因rs550067317位点单核苷酸多态性与精神分裂症的相关性,同时分析miR-137的作用,报道如下。 展开更多
关键词 efnb2 精神分裂症 miR-137 单核苷酸多态性
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EFNB2对膀胱癌细胞增殖、侵袭及迁移的影响及其机制 被引量:2
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作者 郭江 张克勤 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期250-256,共7页
目的研究EFNB2对膀胱癌细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移等生物学功能的影响,探讨其作为免疫治疗的可能性。方法以膀胱癌细胞系T24、5637、J82和UM-UC-3细胞为研究对象,选用人膀胱上皮永生化细胞系SV-HUC-1细胞作为阴性对照。通过慢病毒载体... 目的研究EFNB2对膀胱癌细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移等生物学功能的影响,探讨其作为免疫治疗的可能性。方法以膀胱癌细胞系T24、5637、J82和UM-UC-3细胞为研究对象,选用人膀胱上皮永生化细胞系SV-HUC-1细胞作为阴性对照。通过慢病毒载体转染shRNA-EFNB2进行敲低实验,然后分别采用qRT-PCR和Western blot检测细胞中EFNB2的mRNA和蛋白表达水平;CCK8和克隆形成实验检测细胞增殖活力;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率;Transwell和细胞划痕实验检测细胞侵袭和迁移能力;Western blot检测Bcl2、Bax、Vimentin和E-cadherin的蛋白表达水平。结果与人膀胱上皮永生化细胞系SV-HUC-1细胞相比,膀胱癌细胞系中EFNB2的表达水平显著增高,其中以T24细胞表达最高(P<0.01)。敲低T24细胞系EFNB2基因表达后,T24细胞增殖活力显著下降(P<0.05);细胞周期虽然尚未有显著变化,但细胞凋亡率显著增高(P<0.05),并且抗凋亡蛋白Bcl2表达显著下降(P<0.05),促凋亡蛋白Bax表达显著升高(P<0.01);T24细胞侵袭(P<0.05)和迁移(P<0.05)能力均显著下调,并且对EMT有抑制作用的分子E-cadherin表达升高而促进EMT的分子Vimentin表达则下降,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论EFNB2在膀胱癌细胞系T24细胞的增殖、侵袭和迁移等生物学功能中发挥重要作用,为膀胱癌免疫治疗的潜在靶标。 展开更多
关键词 膀胱尿路上皮癌 efnb2 免疫治疗 细胞增殖
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pEFNB2-shRNA载体对人宫颈癌Hela细胞EFNB2表达、增殖及凋亡的影响
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作者 谢秋群 唐雄志 +2 位作者 罗兆芹 杨炜 彭广涛 《山东医药》 CAS 北大核心 2011年第47期42-44,共3页
目的 pEFNB2-shRNA载体对人宫颈癌Hela细胞EFNB2表达、增殖及凋亡的影响。方法将人宫颈癌Hela细胞随机分为实验组、对照组、空白组,采用RT-PCR法及Western blot法检测转染48 h后EFNB2基因及mR-NA表达,MTT法检测244、8、72、96 h细胞增殖... 目的 pEFNB2-shRNA载体对人宫颈癌Hela细胞EFNB2表达、增殖及凋亡的影响。方法将人宫颈癌Hela细胞随机分为实验组、对照组、空白组,采用RT-PCR法及Western blot法检测转染48 h后EFNB2基因及mR-NA表达,MTT法检测244、8、72、96 h细胞增殖率,流式细胞仪检测24、48 h细胞凋亡率。结果实验组EFNB2mRNA、EFNB2蛋白水平及各时点细胞生存率明显低于对照组及空白组,各时点凋亡率明显高于对照组及空白组,P均<0.05。结论 pEFNB2-shRNA载体能有效抑制Hela细胞的增殖活性,促进其凋亡,其机制可能为抑制EFNB2 mRNA及蛋白的表达。 展开更多
关键词 RNA干扰 efnb2-shRNA载体 细胞凋亡
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人EFNB2基因shRNA表达载体的构建及表达
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作者 谢秋群 唐雄志 罗兆芹 《华夏医学》 CAS 2011年第1期1-3,共3页
目的:构建针对人EFNB2基因的特异性shRNA真核表达载体,并在宫颈癌Hela细胞中表达。方法:运用基因工程技术构建pEFNB2-shRNA载体,转染Hela细胞,通过RT-PCR及Western blot检测干扰效率,筛选抑制作用明显的载体。结果:构建获得的pEFNB2-sh... 目的:构建针对人EFNB2基因的特异性shRNA真核表达载体,并在宫颈癌Hela细胞中表达。方法:运用基因工程技术构建pEFNB2-shRNA载体,转染Hela细胞,通过RT-PCR及Western blot检测干扰效率,筛选抑制作用明显的载体。结果:构建获得的pEFNB2-shRNA表达载体能够有效抑制EFNB2基因的表达(P<0.05),其中以pEFNB2-shRNA1的抑制作用最强,对EFNB2mRNA表达的抑制率为81.2%,对蛋白表达的抑制率为69.7%。结论:shRNA EFNB2能有效下调EFNB2基因表达水平。 展开更多
关键词 SHRNA efnb2 基因表达
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血管生成因子对先天性食管闭锁大鼠肺发育的影响 被引量:1
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作者 王军 高琳琳 刘晓梅 《国际儿科学杂志》 2018年第5期401-404,415,共5页
目的 研究血管生成因子Efnb2和Ephb4在先天性食管闭锁并食管气管瘘(esophageal atresia and tracheoesophageal fistula,EA-TEF)大鼠肺组织中的表达情况,探讨血管调控因子Efnb2及其受体Ephb4对EA-TEF大鼠肺组织发育的影响.方法 24只雌性... 目的 研究血管生成因子Efnb2和Ephb4在先天性食管闭锁并食管气管瘘(esophageal atresia and tracheoesophageal fistula,EA-TEF)大鼠肺组织中的表达情况,探讨血管调控因子Efnb2及其受体Ephb4对EA-TEF大鼠肺组织发育的影响.方法 24只雌性Wistar大鼠随机分成实验组(EA-TEF组)和对照组(CON组),每组各12只,妊娠第7~9天实验组给予阿霉素1.75 mg/kg腹腔灌注建立EA-TEF大鼠模型,分别在胚胎第15天(El5)、18天(El8)和21天(E21)剖宫产取胎鼠肺组织,采用Q-PCR和免疫组织化学检测Efnb2、Ephb4的表达情况.结果 (1)两组胎鼠肺发育过程中Efnb2 mRNA与Ephb4的变化趋势基本一致,小管期(El8)含量最高,囊泡期(E21)降低并恢复至假腺体期(El5)水平.胎肺小管期Efnb2mRNA表达水平EA-TEF组(50.65±12.65)明显高于对照组(23.63±11.31) (P <0.05),假腺体期和囊泡期两组比较无统计学意义;假腺体期Ephb4 mRNA表达水平EA-TEF组(4.32±2.88)明显高于对照组(1.01±0.19) (P <0.05),小管期和囊泡期两组无统计学意义.(2)胎肺不同发育时期,Efnb2、Ephb4蛋白在血管上皮、肺泡及支气管上皮表面均有表达,分布模式无统计学意义.EA-TEF组小管期Efnb2(162.70±10.04)和Ephb4(152.20±12.32)蛋白表达量增多,而囊泡期回复至正常水平.结论 血管生成因子Efnb2及其受体Ephb4可调控胎肺组织的分支发育,阿霉素诱导的EA-TEF模型鼠胎肺发育小管期两者同时升高可能是对肺发育不良的代偿机制. 展开更多
关键词 食管闭锁并食管气管瘘 胎肺 大鼠 EPHB4 efnb2
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基于生物信息学筛选非肌层浸润性膀胱癌复发关键基因并验证 被引量:1
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作者 郭江 张克勤 《重庆医学》 CAS 2022年第21期3726-3733,共8页
目的利用生物信息学筛选非肌层浸润性膀胱癌复发关键基因,并进一步对其在膀胱尿路上皮癌中的作用及临床意义进行实验验证。方法从NCBI GEO数据库中下载数据,筛选复发性非肌层浸润性膀胱尿路上皮癌与正常膀胱黏膜差异表达基因,按差异表... 目的利用生物信息学筛选非肌层浸润性膀胱癌复发关键基因,并进一步对其在膀胱尿路上皮癌中的作用及临床意义进行实验验证。方法从NCBI GEO数据库中下载数据,筛选复发性非肌层浸润性膀胱尿路上皮癌与正常膀胱黏膜差异表达基因,按差异表达倍数(logFC)及P值排序,前250个(Top250)基因在Metascape数据库进行富集分析并可视化,Top54基因在GEPIA2数据库做生存分析取P值最低基因作为关键基因;免疫组织化学检测关键基因在临床膀胱癌样本中复发性非肌层浸润性膀胱癌组织和癌旁组织的表达,样本来源于该院病理科;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、Western blot检测关键基因及蛋白在膀胱尿路上皮癌细胞系中与膀胱黏膜上皮细胞中的表达,集落形成实验、CCK-8、划痕实验和Transwell等实验检测敲低该基因表达对膀胱癌细胞系中T24细胞的增殖、迁移与侵袭等生物学功能的影响。结果差异表达基因Top250富集分析显示差异表达基因主要参与细胞周期调控、细胞分裂DNA生物合成、染色质结合蛋白泛素化的正调控等,筛选出54个显著差异表达基因(上调14个,下调40个),关键基因是促癌基因肝配蛋白B2(EFNB2)。验证试验结果显示,与对应癌旁组织比较,EFNB2高表达于复发性非肌层浸润性膀胱癌组织(P<0.01),与对照组T24细胞比较,EFNB2敲低组T24细胞的增殖、迁移、侵袭均显著降低(P<0.05)。结论EFNB2是促进非肌层浸润性膀胱癌复发的关键基因,是一个潜在的复发性非肌层浸润性膀胱癌的治疗靶点。 展开更多
关键词 非肌层浸润性膀胱癌 复发 生物信息学 关键基因 促癌基因肝配蛋白B2
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