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胡子鲇Dmrt1基因全长cDNA克隆及其表达分析 被引量：16
1
作者 邓思平 王静杰 +2 位作者 吴天利 朱春华 李广丽 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期610-617,共8页
以胡子鲇(Clarias fuscus)为研究对象,利用RT-PCR技术和SMART RACE技术克隆获得Dmrt1基因cDNA全长,并利用生物信息学分析其结构及功能;利用半定量RT-PCR技术检测胡子鲇性腺(精巢/卵巢)、肌肉、肠、肝脏、心脏、头肾、鳃丝、脑和眼等10... 以胡子鲇(Clarias fuscus)为研究对象,利用RT-PCR技术和SMART RACE技术克隆获得Dmrt1基因cDNA全长,并利用生物信息学分析其结构及功能;利用半定量RT-PCR技术检测胡子鲇性腺(精巢/卵巢)、肌肉、肠、肝脏、心脏、头肾、鳃丝、脑和眼等10种组织以及Ⅱ—Ⅴ期精巢中Dmrt1基因表达。结果表明:胡子鲇Dmrt1基因cDNA全长为1417 bp,其中5′非编码区(5′-UTR)为35 bp,3′非编码区(3′-UTR)为516 bp,开放阅读框(ORF)包含864 bp,编码287个氨基酸(aa),预测所编码DMRT1为主要位于细胞核内的不稳定性亲水蛋白。氨基酸序列比对显示,胡子鲇DMRT1与已公布的非洲胡子鲇、蟾胡子鲇、黄颡鱼等鲇形目鱼类的相似性为83.3%—96.1%。胡子鲇DMRT1中具有DMRT基因家族共有的、保守性很高的DM结构域,此结构域具有典型的"C2H2C4"锌指结构,与上述鲇形目鱼类的相似性达100%,与斑马鱼、青鳉、虹鳟等鱼类的相似性为91.9%—97.3%,而与鸡、鼠、猪人等的相似性达80%以上。组织表达显示,胡子鲇Dmrt1基因仅在精巢中表达,且Ⅱ期精巢(即精子发生期)中Dmrt1基因表达量显著高于Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ期精巢(P<0.05),而卵巢及其他8种组织中均无表达,表明Dmrt1是胡子鲇精巢特异性表达基因,可能与胡子鲇的雄性性别决定、精子发生及精巢发育密切相关。 展开更多
关键词 胡子鲇 DMRT1 DM结构域 精子发生 表达分析
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半滑舌鳎Dmrt1蛋白表达、纯化及功能 被引量：6
2
作者 胡乔木 王凯琳 陈松林 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期1132-1138,共7页
通过分析半滑舌鳎（Cynoglossus semilaevis）Dmrtl重组蛋白注射卵巢后基因表达调控，探讨Dmrtl在半滑舌鳎性别决定与分化中的功能。实验利用原核表达系统（Pet-32a）对半滑舌鳎Dmrtl基因进行重组表达，并通过亲和层析纯化获得了重组目... 通过分析半滑舌鳎（Cynoglossus semilaevis）Dmrtl重组蛋白注射卵巢后基因表达调控，探讨Dmrtl在半滑舌鳎性别决定与分化中的功能。实验利用原核表达系统（Pet-32a）对半滑舌鳎Dmrtl基因进行重组表达，并通过亲和层析纯化获得了重组目的蛋白（Pet-32-dmrtl）。重组蛋白注射卵巢后实时定量PCR分析结果显示，Cypl9a和Foxl2在6～24h内两基因表达量均显著下调，Sox9a基因表达量在6～24h内有显著上调，但48h后3个基因的表达量逐渐恢复正常表达水平。研究结果证实，Dmrtl重组蛋白具有生物活性，且对性别相关基因表达调控具有一定的影响，在性别决定中发挥一定作用。 展开更多
关键词 半滑舌鳎 DMRT1 蛋白表达 功能 性别决定
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奥利亚罗非鱼DMRT1,DMO基因片段的克隆及序列分析 被引量：5
3
作者 唐永凯 王光花 吴婷婷 《生物技术》 CAS CSCD 2006年第2期1-3,共3页
根据其他鱼类DMRT基因中的保守序列设计了一对简并引物,利用RT-PCR扩增了雌雄奥利亚罗非鱼的DMRT基因,并对其扩增产物进行了克隆与测序。结果在雌雄奥利亚罗非鱼个体中获得了两个不同的片段,分别命名为DMO,DMRT1基因。序列同源性分析表... 根据其他鱼类DMRT基因中的保守序列设计了一对简并引物,利用RT-PCR扩增了雌雄奥利亚罗非鱼的DMRT基因,并对其扩增产物进行了克隆与测序。结果在雌雄奥利亚罗非鱼个体中获得了两个不同的片段,分别命名为DMO,DMRT1基因。序列同源性分析表明,奥利亚罗非鱼DMRT1,DMO cNA系列的同源性为61.78%,氨基酸同源性为86%,说明了DMRT基因存在性别差异。与尼罗罗非鱼、红鳍东方豚、虹鳟、青鱼将等鱼类DM保守区相比,氨基酸序列同源性为86%-100%,这充分显示了DM-RT基因在进化上的高度保守性。 展开更多
关键词 奥利亚罗非鱼 DM保守区 DMRT1基因 DMO基因
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异源和同源dmrt1基因过表达载体在青鳉体内的整合和表达 被引量：1
4
作者 李亚亚 陈松林 +3 位作者 林帆 王娜 刘洋 黄进强 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期425-431,共7页
利用半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)dmrt1基因和青鳉(Oryzias latipe)dmrt1基因构建过表达载体,采用显微注射技术将两种载体分别导入青鳉受精卵中,比较异源和同源dmrt1基因对青鳉胚胎孵化率的影响以及两种dmrt1基因在青鳉体内的基因... 利用半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)dmrt1基因和青鳉(Oryzias latipe)dmrt1基因构建过表达载体,采用显微注射技术将两种载体分别导入青鳉受精卵中,比较异源和同源dmrt1基因对青鳉胚胎孵化率的影响以及两种dmrt1基因在青鳉体内的基因整合率、基因表达率及对芳香化酶基因(cyp19a)表达的影响。结果表明,注射48 h后,两种载体均在胚胎内大量表达,注射青鳉同源性dmrt1载体的受精卵孵化率(69.5%)要显著高于注射异源性dmrt1载体的受精卵(36.5%)。30 dph(days post hatching)两组被注射稚鱼均能检测到基因整合,注射同源dmrt1的整合率(30%)要高于异源dmrt1(10%)。30 dph稚鱼体内检测不到异源性dmrt1载体的表达,但能检测到同源dmrt1载体的mRNA表达,同时芳香化酶基因的表达受到了抑制。本研究为研究舌鳎性别分化相关基因功能提供了基础,并为在模式鱼类中研究海水鱼相关基因功能累积了必要的资料。 展开更多
关键词 半滑舌鳎 青鳉 DMRT1 转基因鱼 显微注射
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中华鳖Dmrt1基因的克隆及表达分析
5
作者 薛冰霜 穆淑梅 +3 位作者 康现江 张晗 曹杰英 徐二虎 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期99-105,119,共8页
为研究Dmrtl基因对中华鳖（Pelodiscussinensis）性别分化的影响，采用RAcE方法获得该基因的eDNA全长序列，并利用荧光定量PCR技术分析了Dmrtt基因在中华鳖不同龄期及不同组织的表达情况。研究表明：中华鳖Dmrtl基因的cDNA序列全长为233... 为研究Dmrtl基因对中华鳖（Pelodiscussinensis）性别分化的影响，采用RAcE方法获得该基因的eDNA全长序列，并利用荧光定量PCR技术分析了Dmrtt基因在中华鳖不同龄期及不同组织的表达情况。研究表明：中华鳖Dmrtl基因的cDNA序列全长为2335bp，包括164bp的5’非编码区（5’UTR）、1064bp的3’端非编码区（3’UTR），1107bp的开放阅读框（ORF），编码368个氨基酸，预测分子量为39．20kD，理论等电点（pI）为7．58。同源性分析发现，中华鳖Dmrtl基因的氨基酸序列与部分物种的相似性在66％～97％。荧光定量PCR分析显示，该基因在三龄成鳖精巢中的表达量最高，且显著高于稚鳖精巢的表达量（P〈O．05），但与1龄幼鳖、2龄成鳖精巢的差异不显著（P〉O．05）；在稚鳖和1龄幼鳖卵巢中有微量表达，且表达量差异不显著（P〉0．05），成鳖卵巢中无表达；肌肉和肝脏在各龄期均无表达；温度对稚鳖性腺的表达量影响不明显。以上结果表明，在发育过程中精巢Dmrtl基因的表达量呈上升趋势，卵巢也只在稚鳖与幼鳖中有微量表达，结果暗示该基因在性别分化和功能维持上可能具有重要作用。 展开更多
关键词 中华鳖 DMRT1基因 荧光定量PCR
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中华鳖Dmrt1基因在雄性性别分化中的功能分析 被引量：12
6
作者 孙伟 史思瑞 +3 位作者 蔡晗 宓猛冬 钱国英 葛楚天 《中国科学：生命科学》 CSCD 北大核心 2015年第9期881-889,共9页
在大部分脊椎动物中,Dmrt1基因在雄性性别决定和性腺分化中起重要的调控作用.本文通过慢病毒-Dmrt1-sh RNA干扰和Dmrt1-OE过表达载体系统的构建,成功实现了Dmrt1基因在中华鳖胚胎发育过程中的高效异常表达,以探讨Dmrt1在中华鳖雄性性别... 在大部分脊椎动物中,Dmrt1基因在雄性性别决定和性腺分化中起重要的调控作用.本文通过慢病毒-Dmrt1-sh RNA干扰和Dmrt1-OE过表达载体系统的构建,成功实现了Dmrt1基因在中华鳖胚胎发育过程中的高效异常表达,以探讨Dmrt1在中华鳖雄性性别分化中的功能.结果显示,经过Dmrt1-sh RNA干扰处理后的ZZ胚胎,32.0%发育成雌性(生理)个体,而经过Dmrt1-OE过表达处理后,25.5%的ZW胚胎发育成雄性(生理)个体.苏木素/伊红(H&E)染色、q PCR和免疫组化分析表明,Dmrt1基因敲低后,ZZ胚胎性腺外形和组织结构明显雌性化,雄性特异性基因Amh和Sox9表达显著降低,雌性特异性基因Cyp19a1和Foxl2表达则显著上升,出现雄向雌的性逆转现象;而Dmrt1过表达后的ZW胚胎性腺则向睾丸分化,Amh和Sox9表达急剧上调,Cyp19a1和Foxl2表达显著下降,呈现雌转雄性逆转现象.上述研究表明,Dmrt1基因在中华鳖早期雄性性别形成过程中是必需的,且它的异位表达能够单独启动雄性分化,是中华鳖雄性性别分化的关键因子. 展开更多
关键词 DMRT1 性别分化 雄性 中华鳖 慢病毒载体
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