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小麦光温敏雄性不育相关基因的DDRT-PCR分析及功能预测 被引量：19
1
作者 赵昌平 张立平 +5 位作者 李云伏 马荣才 单福华 张风廷 叶志杰 秦娜 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期56-62,共7页
以小麦光温敏雄性不育系BS210为试材,分别在北京顺义(可育环境)和安徽阜阳(不育环境)两种诱导育性表现的生态环境下种植,并于雌雄蕊分化期、药隔形成期、花粉母细胞形成期、四分体期和单核期5个时期提取小穗组织的RNA,利用DDRT-PCR方法... 以小麦光温敏雄性不育系BS210为试材,分别在北京顺义(可育环境)和安徽阜阳(不育环境)两种诱导育性表现的生态环境下种植,并于雌雄蕊分化期、药隔形成期、花粉母细胞形成期、四分体期和单核期5个时期提取小穗组织的RNA,利用DDRT-PCR方法分离不育系在光、温因子诱导下的差异表达mRNA,并通过反向Northern进行验证.对获得的20条差异表达的EST进行了测序和BLAST分析,得到了4个候选基因的片段,对其进行5′Race扩增、序列分析及功能预测.结果表明它们分别与水稻的DNA修复重组蛋白基因rad50、小麦穗部表达的LRR重复序列型类受体激酶基因、玉米叶片坏死斑点L1s1基因的序列相似性分别为89%、89%和88%,另外还筛选到1个未知功能的新基因片段,它和rad50分别在可育和不育环境下表达的mRNA具有相同的5′端编码区,但3′端非编码区序列出现长度差异.研究结果为深入探讨小麦光温敏雄性不育机理提供了有意义的理论依据. 展开更多
关键词 小麦 光温敏雄性不育 DDRT-PCR分析 不育相关基因片段
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不同着色期荔枝果皮总RNA的提取及mRNA差显分析 被引量：11
2
作者 杨转英 胡桂兵 +2 位作者 王惠聪 欧阳若 陈厚彬 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期281-285,共5页
以妃子笑和糯米糍2个主栽荔枝品种不同着色期的果皮为试材,经过大量的对比和筛选,采用改良Bugos法提取果皮中的总RNA,经核酸蛋白测定仪测定和凝胶电泳显示提取的总RNA完整性强,质量好,产率高(最高可达318.7μg/g),可用于RT-PCR等分子生... 以妃子笑和糯米糍2个主栽荔枝品种不同着色期的果皮为试材,经过大量的对比和筛选,采用改良Bugos法提取果皮中的总RNA,经核酸蛋白测定仪测定和凝胶电泳显示提取的总RNA完整性强,质量好,产率高(最高可达318.7μg/g),可用于RT-PCR等分子生物学实验。进一步的DDRT-PCR分析表明:高分辨力的cDNA片段在500～2 000 bp之间,不同品种、不同着色期的荔枝果皮,基因表达有较大差异。 展开更多
关键词 荔枝 果皮 总RNA 差异显示PCR
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棉纤维次生壁增厚相关基因的cDNA克隆与分析 被引量：10
3
作者 秦治翔 杨佑明 +2 位作者 张春华 徐楚年 翟志席 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期860-866,共7页
以陆地棉品种“徐州 14 2”植株开花后 14、18、2 4、30d的棉纤维和胚珠离体培养 12d、并分别在添加 0 (对照 )和10 0 μmol·L- 1 ABA的培养基中继代培养 5h的棉纤维为材料 ,用mRNA差异显示技术分析其基因表达差异。回收到 2 0条... 以陆地棉品种“徐州 14 2”植株开花后 14、18、2 4、30d的棉纤维和胚珠离体培养 12d、并分别在添加 0 (对照 )和10 0 μmol·L- 1 ABA的培养基中继代培养 5h的棉纤维为材料 ,用mRNA差异显示技术分析其基因表达差异。回收到 2 0条差异条带。利用反向Northern杂交鉴别和分析阳性差异条带 ,结果表明 :PG39 4在次生壁开始增厚以后表达 ,又被ABA诱导表达 ,为质的差异 ;PC39 1为ABA增强表达 ,PG10 2、PG2 0 3和PC2 0 4为ABA减弱表达 ,这 4个差异条带为量的差异。BLASTX分析表明 ,这 5个EST与拟南芥的蛋白激酶、普通烟草的细胞色素P4 5 0单加氧酶、乙二醛酶Ⅰ、异黄酮还原酶同系物和拟南芥的异黄酮还原酶的相似性分别为 5 1%、92 %、85 %、4 4 %和 6 5 %。进而推测这 5个EST与棉纤维次生壁增厚相关。 展开更多
关键词 棉纤维 次生壁增厚 相关基因 CDNA克隆 克隆分析
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川草2号老芒麦(Elymus sibiricus L.)atpA基因的克隆及其调控表达 被引量：11
4
作者 何文兴 徐莺 +3 位作者 唐琳 魏琴 李静 陈放 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第1期67-74,共8页
ATPase与植物的耐寒性密切相关. 运用mRNA差异显示技术(DDRT-PCR) 从耐寒植物川草2号老芒麦(ElymussibiricusL. cv.‘chuancao No.2’) 中获得了受冷抑制的atpA基因表达序列标签(EST) 序列,通过5'cDNA末端快速扩增(RACE) 获得了atp... ATPase与植物的耐寒性密切相关. 运用mRNA差异显示技术(DDRT-PCR) 从耐寒植物川草2号老芒麦(ElymussibiricusL. cv.‘chuancao No.2’) 中获得了受冷抑制的atpA基因表达序列标签(EST) 序列,通过5'cDNA末端快速扩增(RACE) 获得了atpA基因全长cDNA为1 754 bp,开放阅读框(ORF) 长1 518 bp,编码505个氨基酸. 氨基酸序列与小麦、水稻、玉米atpA基因分别具有95%、94%、94%的相似性. 对2℃低温胁迫及解除胁迫后恢复过程中共13个时段的RNA印迹分析表明,atpA基因在低温胁迫12 h转录受到强烈抑制,在低温胁迫开始后的4～8 h及解除胁迫后的16～24 h,其转录水平明显强于对照. 实验结果为揭示CF1 α亚基对调控ATPase在植物御冷性反应的作用,以及α亚基在植物低温信号转导中的作用提供了新的线索. 展开更多
关键词 atpA基因 mRNA差异显示(DDRT-PCR) 低温胁迫 川草2号老芒麦
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MPTP诱导的褐鼠黑质基因差异表达的研究 被引量：8
5
作者 徐磊 吕立夏 +4 位作者 杨秀丽 刘振国 陈生弟 李学礼 王尧 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第4期355-357,共3页
本研究目的在于获取１－甲基－４－苯基－１，２，３，６－四氢吡啶（ＭＰＴＰ）诱导的褐鼠黑质差异表达的表达序列标签（ＥＳＴ）。通过ＭＰＴＰ腹腔注射建立褐鼠帕金森病模型，利用差别显示反转录ＰＣＲ（ＤＤＲＴ－ ＰＣＲ）技术分... 本研究目的在于获取１－甲基－４－苯基－１，２，３，６－四氢吡啶（ＭＰＴＰ）诱导的褐鼠黑质差异表达的表达序列标签（ＥＳＴ）。通过ＭＰＴＰ腹腔注射建立褐鼠帕金森病模型，利用差别显示反转录ＰＣＲ（ＤＤＲＴ－ ＰＣＲ）技术分析ＭＰＴＰ 处理褐鼠与正常褐鼠黑质基因差异表达的状况，并筛选差异表达基因片段。结果经ＤＤＲＴ－ＰＣＲ 筛选并通过反Ｎｏｒｔｈｅｒｎ 杂交去除假阳性，最终获得２ 个差异表达基因片段。对其中一个片段进行克隆、测序和同源性比较发现，该片段为一个新的ＥＳＴ 序列，并且与胰岛素原样α肽具有同源性。本研究的结果提示，差异表达序列的分析有可能为研究ＭＰＴＰ诱导的褐鼠黑质变性的分子机理提供线索。 展开更多
关键词 帕金森病 MPTP 褐鼠 黑质基因 DDRT-PCR EST
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花椰菜细胞质雄性不育系及保持系中特异序列的克隆、分析 被引量：7
6
作者 王春国 陈小强 +3 位作者 李慧 赵前程 孙德岭 宋文芹 《分子细胞生物学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第1期19-27,共9页
以细胞质雄性不育花椰菜ogura-A和相应的保持系ogura-B为材料进行ISSR及DDRT-PCR分析。选用30条ISSR引物,经扩增共产生306条清晰可辨的条带。每条引物可产生6-12条带,其中引物ISSR3在两系中呈现多态性扩增,在保持系中特异扩增出一条110... 以细胞质雄性不育花椰菜ogura-A和相应的保持系ogura-B为材料进行ISSR及DDRT-PCR分析。选用30条ISSR引物,经扩增共产生306条清晰可辨的条带。每条引物可产生6-12条带,其中引物ISSR3在两系中呈现多态性扩增,在保持系中特异扩增出一条1100bp的片段,序列分析表明该片段与油菜、拟南芥线粒体基因组的部分序列高度相似,推测其可能来源于花椰菜线粒体基因组。在DDRT-PCR分析中,选用3条锚定引物、15条随机引物进行组合,最终共获得1122条大小在1000-50bp的带。经反向Northern杂交验证只有4条带特异的存在于两系中,分别命名为ogura-A205、ogura-A383、ogura-B307、ogura-B352。其中ogura-A205、ogura-A383只在细胞质雄性不育系中表达,而ogura-B307、ogura-B352在保持系中呈现特异性表达,分析表明四个差异序列均为首次报道。其中ogura-A205、ogura-B307至今尚未发现与之相似的序列,有待于进一步研究;ogura-A383、ogura-B352与报道的拟南芥、大白菜等的叶绿体基因的一些片段具较高相似性,推测ogura-A383、ogura-B352可能来源于花椰菜叶绿体基因组。以上结果为进一步阐明花椰菜细胞质雄性不育及育性保持的分子机制提供了新线索。 展开更多
关键词 花椰菜 细胞质雄性不育 ISSR DDRT-PCR
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正交法整体优化差异显示反应体系 被引量：7
7
作者 柳淑芳 杜立新 +2 位作者 朱靖 王爱华 李宏滨 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期836-840,共5页
mRNA差异显示PCR(mRNAdifferentialdisplayPCR ,DDRT PCR)是分离差异表达基因的有效方法 ,但该方法的准确性极易受到外部因素和内部因素的影响。采用正交法优化DDRT PCR反应条件 ,充分考虑到模板浓度、锚定引物浓度、随机引物浓度、dNTP... mRNA差异显示PCR(mRNAdifferentialdisplayPCR ,DDRT PCR)是分离差异表达基因的有效方法 ,但该方法的准确性极易受到外部因素和内部因素的影响。采用正交法优化DDRT PCR反应条件 ,充分考虑到模板浓度、锚定引物浓度、随机引物浓度、dNTPs浓度、镁离子浓度以及Taq酶用量等因素在差异显示反应过程中的交互作用 ,一次PCR反应即可确定最佳反应组合。将筛选出的条件用于DDRT PCR ,得到差显结果假阳性率低 ,重复性和稳定性好 ,而且简化了反应条件的优选程序 ,这表明正交法是优化差异显示反应条件的理想方法。为了进一步简化整个差异显示反应系统的操作程序 ,降低假阳性率 ,研究采用了非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 (polyacrylamidegelelectrophoresis,PAGE)和银染显示差异带的方法 ,并用反向Northern法来验证回收条带 。 展开更多
关键词 DDRT-PCR 正交优化 非变性PAGE 银染 反向Northern
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鸡贮精腺差异表达基因的研究 被引量：6
8
作者 朱金金 刘桂琼 +3 位作者 王志跃 郭春燕 黄军 赖毓妍 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期1176-1179,共4页
用mRNA差异显示技术对鸡贮精腺中基因的差异表达进行研究,分离并筛选出1个差异表达片段SST01,经测序和BLAST分析,发现SST01与鸡2号染色体上的neurexophilin基因高度同源(98%)。Neurex-ophilin是一种只在神经细胞中分泌的糖蛋白,说明神... 用mRNA差异显示技术对鸡贮精腺中基因的差异表达进行研究,分离并筛选出1个差异表达片段SST01,经测序和BLAST分析,发现SST01与鸡2号染色体上的neurexophilin基因高度同源(98%)。Neurex-ophilin是一种只在神经细胞中分泌的糖蛋白,说明神经系统参与贮精腺内精子的贮存或释放。Neurexophilin作为精液素的配体发挥功能,而精液素使细胞粘连,从而说明neurexophilin参与精子在贮精腺内的贮存过程。 展开更多
关键词 鸡 贮精腺 差异显示PCR neurexophilin
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库尔勒香梨萼片脱落与宿存相关基因的差异表达分析 被引量：11
9
作者 董芳园 张飞 +1 位作者 王钰婷 牛建新 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期57-64,共8页
利用mRNA差异显示(mRNA differential display PCR,DDRT-PCR)技术,寻找、筛选并确定与库尔勒香梨萼片脱落和宿存相关基因的差异表达时期以及相关的差异基因。[方法]以新疆库尔勒香梨盛花前期、盛花期及其盛花后期三个时期同一花序的第2... 利用mRNA差异显示(mRNA differential display PCR,DDRT-PCR)技术,寻找、筛选并确定与库尔勒香梨萼片脱落和宿存相关基因的差异表达时期以及相关的差异基因。[方法]以新疆库尔勒香梨盛花前期、盛花期及其盛花后期三个时期同一花序的第2和第4朵花为试材,通过DDRT-PCR技术分离和克隆库尔勒香梨萼片脱落和宿存相关基因片段。[结果]分离得到42条差异片段,其中双引物片段有7条,在GenBank中同源性比较发现有2条与控制开花以及激素调节有密切关系的SPL和MYB类转录因子有很高的同源性,分别是78%和86.83%。[结论]实验为获得香梨萼片脱落与宿存差异表达基因建立的体系。为相关基因全长的克隆奠定基础,并为进一步验证其功能提供依据。 展开更多
关键词 库尔勒香梨 萼片 DDRT—PCR 转录因子
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苦参碱诱导K562细胞分化相关cDNA的克隆 被引量：5
10
作者 张彦 蒋纪恺 +3 位作者 刘小珊 刘北忠 许相儒 何渝军 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2000年第4期337-339,共3页
目的　克隆苦参碱诱导人白血病K562细胞分化的相关基因，以求了解白血病细胞分化及苦参碱的作用机制。方法　以人白血病细胞K562为研究对象，在苦参碱诱导其分化的基础上，利用mRNA差异显示技术对K562细胞在苦参碱诱导前及诱导后48小时... 目的　克隆苦参碱诱导人白血病K562细胞分化的相关基因，以求了解白血病细胞分化及苦参碱的作用机制。方法　以人白血病细胞K562为研究对象，在苦参碱诱导其分化的基础上，利用mRNA差异显示技术对K562细胞在苦参碱诱导前及诱导后48小时的基因表达情况进行分析。结果　在苦参碱诱导前后的K562细胞之间存在明显的基因表达差异，一些基因在诱导后表达增强，而一些基因经苦参碱作用后表达减弱甚至完全抑制。经克隆和筛选获得部分表达差异的cDNA片段，为进一步研究苦参碱的诱导分化机制及肿瘤细胞发生和分化机制打下了基础。结论　苦参碱具有调控分化相关基因表达的作用，苦参碱诱导K562细胞分化是多基因共同参与的过程。 展开更多
关键词 苦参碱 K562细胞 CDNA 白血病 克隆 MRNA
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硫应激单环刺螠差异表达的初步研究 被引量：6
11
作者 霍继革 张志峰 +2 位作者 胡晓丽 王思锋 康庆浩 《中国海洋大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期457-462,共6页
采用mRNA差异显示技术(DDRT-PCR)研究了100μmol/L硫化物环境与正常海水中耐硫生物单环刺螠mRNA的表达差异,初步筛选出7条体腔液细胞的差异表达基因,其中1个cDNA克隆片段与其它物种的MAP kinase kinase kinase(MAPKKK)有较高同源性。进... 采用mRNA差异显示技术(DDRT-PCR)研究了100μmol/L硫化物环境与正常海水中耐硫生物单环刺螠mRNA的表达差异,初步筛选出7条体腔液细胞的差异表达基因,其中1个cDNA克隆片段与其它物种的MAP kinase kinase kinase(MAPKKK)有较高同源性。进一步采用RT-PCR技术对其在硫化物刺激前后的表达进行了检测,结果显示该基因在对照和应激后2 h6、h的个体中表达较弱;刺激12 h后表达量增高,并随应激时间增加,呈明显上调趋势。表明单环刺螠MAPK信号通路可被硫化物刺激激活,进而通过该信号通路调节下游生理反应,为进一步研究单环刺耐硫特性的分子机制奠定了基础。 展开更多
关键词 MRNA差异显示 单环刺螠 硫化物 MAPKKK RT-PCR MAPK信号通路
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中棉所47及其亲本苗期根和叶基因差异表达研究 被引量：3
12
作者 邢朝柱 赵云雷 +3 位作者 喻树迅 张献龙 郭立平 苗成朵 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期1275-1281,共7页
以国审高优势杂交棉中棉所47及其亲本苗期的根尖和顶尖叶为研究材料,采用差异显示技术(DDRT-PCR)分析了苗期杂种与亲本的根、叶基因表达差异,并结合中棉所47及其亲本的产量性状,分析了苗期基因表达差异与产量性状优势之间的关系。结果表... 以国审高优势杂交棉中棉所47及其亲本苗期的根尖和顶尖叶为研究材料,采用差异显示技术(DDRT-PCR)分析了苗期杂种与亲本的根、叶基因表达差异,并结合中棉所47及其亲本的产量性状,分析了苗期基因表达差异与产量性状优势之间的关系。结果表明:(1)苗期根和叶基因表达有差异的带分别占总统计带数的38.8%和65.2%,叶基因表达有差异的带比根丰富得多,说明一些对杂种优势起作用的基因可能在叶中开始表达;(2)杂种和亲本间存在显著的基因表达差异,这些差异表达分为4种类型:I.双亲共沉默型;II.单亲表达沉默型;III.杂种特异表达型;IV.单亲表达一致型。在根中,这4种比例分别为6.5%、10.6%、6.5%和15.2%;在叶中,这4种类型比例分别为4.4%、17.9%、15.1%和27.8%,两器官基因差异表达的类型比例趋势基本一致,单亲表达一致型所占比例最高,说明苗期这种表达类型可能对杂种优势的形成起主要作用;(3)进一步分析中棉所47的产量构成因素,单株铃数增加是杂种高产主要原因,进一步表明,苗期单亲基因表达一致型可能对杂交种后期单株成铃数的增加有较大的贡献。上述结果表明,苗期基因表达差异与杂种优势的形成存在着密切关系。 展开更多
关键词 基因差异表达 中棉所 苗期 亲本 基因表达差异 差异显示技术 杂种优势 产量构成因素 产量性状 单株成铃数 特异表达 单株铃数 类型 比例 杂交棉 杂交种 器官
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植物差异表达基因克隆技术及研究进展 被引量：5
13
作者 谢伟伟 王凭青 +2 位作者 杨青川 刘博 李志中 《重庆大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第12期96-100,共5页
随着分子生物学技术的深入发展,植物基因组研究已经由以全基因组测序为目标的结构基因组学转向以基因功能鉴定为目标的功能基因组学研究,目前分离并克隆差异表达基因已成为生命科学研究的热点.近些年来,国内外学者发展了多种分析差异表... 随着分子生物学技术的深入发展,植物基因组研究已经由以全基因组测序为目标的结构基因组学转向以基因功能鉴定为目标的功能基因组学研究,目前分离并克隆差异表达基因已成为生命科学研究的热点.近些年来,国内外学者发展了多种分析差异表达基因的技术来研究植物在不同发育阶段、不同生理状态下的基因表达状况,掌握了生命活动过程中的重要信息.文章对建立在RNA水平上克隆植物未知差异表达基因的几种关键技术及其研究进展进行了综述,阐述了各技术的原理、技术路线、优缺点及相应的改进方法,并对它们在植物抗逆研究中的应用现状及前景作了展望. 展开更多
关键词 差异表达 基因克隆 DDRT-PCR SSH RDA-PCR RAP-PCR
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电场处理柠条种子对干旱条件下幼叶基因表达的影响 被引量：5
14
作者 刘翔宇 杨体强 +5 位作者 胡燕飞 王郑 哈斯阿古拉 刘瑶 王文星 赵清春 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期2425-2431,共7页
以沙生植物柠条锦鸡儿为材料,设计自然对照（CK）、干旱处理对照（SCK）、电场处理（电场强度2 kV/cm,电场频率15 kHz,处理时间5 min）种子后在干旱条件下进行种子发芽（ET）,并采用3个锚定引物和26个随机引物形成78组引物,利用DDRT-PC... 以沙生植物柠条锦鸡儿为材料,设计自然对照（CK）、干旱处理对照（SCK）、电场处理（电场强度2 kV/cm,电场频率15 kHz,处理时间5 min）种子后在干旱条件下进行种子发芽（ET）,并采用3个锚定引物和26个随机引物形成78组引物,利用DDRT-PCR技术,分析电场处理柠条种子在干旱胁迫条件下生长的幼苗幼叶基因表达水平的变化,从基因转录水平探讨电场对柠条锦鸡儿抗旱性的影响机理.结果显示：（1）干旱胁迫组相对于自然对照组增加条带282条,缺失条带179条;电场处理组相对于自然对照组增加条带303条,缺失条带200条;电场处理组相对于干旱胁迫组增加条带236条,缺失条带257条.（2）回收差异片段获得电场处理诱导的3个差异表达序列（EST-1、EST 2、EST-3）,经Blastn比对,EST-1与大豆LOC100305895 （LOC100305895）一致性为76％,EST-2与鹰嘴豆UDP N-乙酰氨基葡糖肽N-乙酰葡糖胺基转移酶SEC like（LOC101506182）选择性剪切体X2一致性为88％,EST-3与百脉根克隆JCVI-FLLj-5 M12一致性为88％.（3）经Blastx比对,EST-1与1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构酶（390 aa）145～195氨基酸序列一致性达到52％,EST-2（308 bp）与氧连N-乙酰葡萄糖胺转移酶（744aa）706～744氨基酸序列一致性高达97％,EST-3与酰基辅酶A结合蛋白（90 aa）氨基酸序列一致性高达97％.研究结果为进一步从基因表达的角度分析电场的生物效应及其提高抗逆性的分子机理,为电场处理植物种子的农业技术应用提供理论依据. 展开更多
关键词 电场 柠条种子 干旱胁迫 DDRT-PCR技术
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δ差异显示法筛选仔猪ETEC F4ad受体相关基因 被引量：3
15
作者 蒋隽 施启顺 +3 位作者 刘鑫 马海明 贺长青 柳小春 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期939-943,共5页
初生仔猪泻痢的病原菌主要是肠毒素大肠杆菌(ETEC)F4,仔猪小肠上皮细胞有无F4受体对于仔猪抗病性具有重要意义。本试验采用δ差异显示法筛选仔猪F4ad受体相关基因。将获得的8条ESTs通过GenBank进行序列同源比对,发现其中1条与人糖基磷... 初生仔猪泻痢的病原菌主要是肠毒素大肠杆菌(ETEC)F4,仔猪小肠上皮细胞有无F4受体对于仔猪抗病性具有重要意义。本试验采用δ差异显示法筛选仔猪F4ad受体相关基因。将获得的8条ESTs通过GenBank进行序列同源比对,发现其中1条与人糖基磷脂酰肌醇锚1(GPI1)基因有91%同源性。表明该基因可作为F4ad受体候选基因进行进一步研究。 展开更多
关键词 肠毒素大肠杆菌 F4ad受体 δ差异显示 糖基磷脂酰肌醇锚1 仔猪
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mRNA差异显示分离棉花抗旱耐盐基因的相关cDNA片段 被引量：6
16
作者 聂新辉 曲延英 +1 位作者 尤春源 陈全家 《新疆农业大学学报》 CAS 2007年第4期72-75,共4页
采用mRNA差异显示(DDRT-PCR)技术,对抗旱、耐盐棉花品种(品系)分别进行25%PEG6000和1.3%NaCl胁迫诱导,利用优化的蛋白酶K法分别提取胁迫与非胁迫棉花叶片中的总RNA,以此为模板,选用12个锚定引物和20个随机引物的240个组合进行RT-PCR,产... 采用mRNA差异显示(DDRT-PCR)技术,对抗旱、耐盐棉花品种(品系)分别进行25%PEG6000和1.3%NaCl胁迫诱导,利用优化的蛋白酶K法分别提取胁迫与非胁迫棉花叶片中的总RNA,以此为模板,选用12个锚定引物和20个随机引物的240个组合进行RT-PCR,产物经6%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳后银染,共获得88条差异条带,二次PCR扩增,选择出41条表达稳定的差异条带。 展开更多
关键词 DDRT-PCR技术 抗旱 耐盐 蛋白酶K法 聚丙烯酰胺凝胶电泳
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利用DDRT-PCR技术分离和克隆玉米抗大斑病相关基因片段 被引量：6
17
作者 谷守芹 范永山 +1 位作者 韩建民 董金皋 《河北师范大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2005年第5期503-507,共5页
分离和克隆农作物的抗病基因是植物病理学及分子生物学研究的热点领域,笔者以一套含有不同主效抗病基因的玉米自交系B37,B37Ht1,B37Ht2为试验材料,接种玉米大斑病菌0号小种菌株01-27后,利用mRNA差异显示反转录PCR(mRNAdifferentialdispl... 分离和克隆农作物的抗病基因是植物病理学及分子生物学研究的热点领域,笔者以一套含有不同主效抗病基因的玉米自交系B37,B37Ht1,B37Ht2为试验材料,接种玉米大斑病菌0号小种菌株01-27后,利用mRNA差异显示反转录PCR(mRNAdifferentialdisplayreversetranscriptionPCR,DDRTPCR)技术分离玉米抗大斑病相关基因片段.通过反式Northern杂交检测,共获得了44条差异表达基因片段,其中与B37亲和性互作相关的片段17条,与B37Ht1和B37Ht2非亲和性互作相关的片段分别为11条和8条. 展开更多
关键词 玉米 玉米大斑病菌 DDRT—PCR 抗病相关基因片段
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半夏试管小块茎发育过程中相关基因差异表达的研究 被引量：3
18
作者 盛玮 张爱民 +3 位作者 黄月琴 薛建平 宋运贤 常莉 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期316-320,共5页
目的:分析半夏试管块茎形成过程中总mRNA差异表达的变化规律,为研究半夏试管块茎形成的分子机制提供了信息。方法:利用mRNA差异显示技术(DDRT-PCR),分离和克隆半夏试管小块茎发育的相关基因片段。结果和结论:分离到了15个半夏试管小块... 目的:分析半夏试管块茎形成过程中总mRNA差异表达的变化规律,为研究半夏试管块茎形成的分子机制提供了信息。方法:利用mRNA差异显示技术(DDRT-PCR),分离和克隆半夏试管小块茎发育的相关基因片段。结果和结论:分离到了15个半夏试管小块茎发育过程中特异表达的cDNA片段,在GenBank中进行同源性比较发现6个没有同源序列与之匹配,推测为新的cDNA片断;3个片段推导的氨基酸序列分别与真核生物启动子,MADS-box蛋白和乙烯信号转导因子有高度同源性。半定量RT-PCR进一步证实它们存在,并在半夏块茎形成不同天数高度特异表达。 展开更多
关键词 半夏 试管块茎 DDRT—PCR 基因表达
原文传递
mRNA差异显示技术及其在植物生理研究中的应用 被引量：7
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作者 王西平 刘振中 +1 位作者 秦宝福 赵明德 《西北农业大学学报》 CSCD 北大核心 2000年第6期197-202,共6页
简述了 m RNA差异显示技术的基本原理及其在基因表达差异、基因的鉴定与克隆、激素调控机理、抗逆性机理等方面的应用 。
关键词 MRNA差异显示 基因表达差异 基因克隆 植物生理
原文传递
茉莉酸甲酯对中国红豆杉细胞基因表达的mRNA差异显示研究 被引量：8
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作者 黄新 邱德有 黄璐琦 《分子植物育种》 CAS CSCD 2006年第5期627-632,共6页
茉莉酸甲酯是一种环戊烷衍生物型植物激素,在植物次生代谢物质生物合成中起着重要作用。我们以中国红豆杉悬浮培养细胞为材料,设两组平行实验,一组为阴性对照组,一组以茉莉酸甲酯进行诱导,所得细胞利用mRNA差异显示技术进行分析,研究了... 茉莉酸甲酯是一种环戊烷衍生物型植物激素,在植物次生代谢物质生物合成中起着重要作用。我们以中国红豆杉悬浮培养细胞为材料,设两组平行实验,一组为阴性对照组,一组以茉莉酸甲酯进行诱导,所得细胞利用mRNA差异显示技术进行分析,研究了茉莉酸甲酯对红豆杉细胞mRNA表达的差异,最终共获得34个差异表达片段。经二次扩增和单引物阴性对照实验及序列测定,共获得9个阳性差异表达片段。与GenBank数据库比对,结果表明其中2个片段与已知基因有较高的同源性,与欧洲赤松(Pinussylvestris)cDNA克隆的同源性为88%,与南方红豆杉(Taxusmairei)18SrRNA基因的同源性为93%,其余7个差异表达片段与GenBank中所有基因的同源性都非常低,可能代表了红豆杉细胞中的受茉莉酸甲酯诱导的未知基因序列。 展开更多
关键词 中国红豆杉细胞(Taxus chinensis) 茉莉酸甲酯 基因表达 差异显示
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