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利用重组蛋白制备和鉴定分枝杆菌HSP65单克隆抗体 被引量:1
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作者 尹晓光 李大鹏 +4 位作者 万敏 张培因 胡晓平 王丽颖 于永利 《中国实验诊断学》 2006年第3期225-227,共3页
目的制备针对牛分枝杆菌热休克蛋白65(HSP65)的单克隆抗体(mAb)并进行鉴定。方法以CpGODN1826/Alum为佐剂,不同的HSP65融合蛋白为免疫抗原和检测抗窄,用聚乙二醇(PEG)法制备杂交瘤细胞,ELISA检测杂交瘤细胞分泌抗体的效价和类型,Western... 目的制备针对牛分枝杆菌热休克蛋白65(HSP65)的单克隆抗体(mAb)并进行鉴定。方法以CpGODN1826/Alum为佐剂,不同的HSP65融合蛋白为免疫抗原和检测抗窄,用聚乙二醇(PEG)法制备杂交瘤细胞,ELISA检测杂交瘤细胞分泌抗体的效价和类型,Western blot分析抗体的特异性。结果获得5株稳定分泌抗HSP65蛋白的McAb,3株细胞分泌的mAb为IgG1亚类,2株为IgG2a。ELISA和Western blot结果显示,mAb能特异性结合HSP65-PSA-tag、HSP65-MUC1-tag和HSP65重组蛋白,但与Chaperon-PSA重组蛋白和宿主菌BL21的菌体裂解蛋白不发生结合。结论纯化的重组蛋白可代替的牛分枝杆菌,用于HSP65 mAb的制备和鉴定。获得的HSP65 mAb为HSP65及其重组蛋白的功能研究奠定基础。 展开更多
关键词 牛分枝杆菌BcG HSP65 重组蛋白 单克隆抗体 cpg/alum
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CpG-ODN和氢氧化铝复合佐剂对流感病毒裂解疫苗免疫效果的影响 被引量:3
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作者 罗兴 刘颖 +4 位作者 杨春亭 龚敏卿 周军 于三科 许洪林 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期942-947,共6页
目的研究CpG-ODN和氢氧化铝复合佐剂对流感病毒裂解疫苗体液免疫和细胞免疫效果的影响,为今后研制新佐剂流感疫苗和解决流感疫苗产能不足的问题提供依据。方法以不同剂量的2009H1N1流感病毒裂解疫苗为抗原,分别以CpG-ODN、氢氧化铝以... 目的研究CpG-ODN和氢氧化铝复合佐剂对流感病毒裂解疫苗体液免疫和细胞免疫效果的影响,为今后研制新佐剂流感疫苗和解决流感疫苗产能不足的问题提供依据。方法以不同剂量的2009H1N1流感病毒裂解疫苗为抗原,分别以CpG-ODN、氢氧化铝以及CpG-ODN和氢氧化铝复合佐剂为疫苗佐剂免疫BALB/c小鼠,通过ELISA、血凝抑制试验和假病毒中和试验等方法评价体液免疫效果,通过ELISPOT、胞内细胞因子染色和体内CTL杀伤等方法评价细胞免疫效果。结果与无佐剂对照组相比,CpG-ODN或氢氧化铝单独使用能够在一定程度上增强体液免疫,2针免疫后不同抗原剂量组中抗原特异性IgG抗体滴度、血凝抑制抗体滴度和中和抗体滴度分别提高3-6倍、2~4倍和4~8倍。CpG-ODN和氢氧化铝复合佐剂具有更强的佐剂效应,2针免疫后不同抗原剂量组中抗原特异性IgG抗体滴度、血凝抑制抗体滴度和中和抗体滴度分别提高23-57倍、9-20倍和16-64倍。根据体液免疫结果,复合佐剂能够使流感病毒裂解疫苗的抗原用量降低至少16倍。此外,复合佐剂能够显著增强流感病毒裂解疫苗的细胞免疫应答,不但能够促进抗原特异性CD4’T细胞的IFN-y分泌,而且能够促进抗原特异性CD8‘T细胞的CTL杀伤活性。结论CpG-ODN和氢氧化铝复合佐剂能够增强流感病毒裂解疫苗的体液免疫和细胞免疫应答并显著降低抗原用量。 展开更多
关键词 流感疫苗 疫苗佐剂 cpg-ODN 氢氧化铝 复合佐剂
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新型冠状病毒刺突蛋白受体结合域在毕赤酵母中的分泌表达优化及其免疫原性研究
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作者 胡冬冬 孙家夺 +10 位作者 王紫琰 刘海涛 孙怡然 钱大伟 李冬 陈荣军 安娇 周晨亮 刘革 范江 江元翔 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第7期520-526,共7页
目的利用毕赤酵母高效表达新型冠状病毒刺突蛋白受体结合域(receptor binding domain,RBD),并评估以该RBD蛋白作为抗原所制备的疫苗组合物的免疫原性。方法选取RBD蛋白并合成对应基因片段,将其构建至pPICZαA质粒,质粒经线性化转化后整... 目的利用毕赤酵母高效表达新型冠状病毒刺突蛋白受体结合域(receptor binding domain,RBD),并评估以该RBD蛋白作为抗原所制备的疫苗组合物的免疫原性。方法选取RBD蛋白并合成对应基因片段,将其构建至pPICZαA质粒,质粒经线性化转化后整合到毕赤酵母基因组中进行重组表达。Western blot和基于BLI(Biolayer Interferometry)技术的定量分析方法对培养上清中RBD蛋白进行检测,筛选能够分泌表达RBD蛋白的单克隆菌株。通过优化发酵工艺,包括培养基的盐浓度调整和诱导条件优化(pH、温度和时间等参数),实现RBD蛋白的高效表达,并在小鼠体内评估其免疫原性。结果筛选获得重组RBD蛋白表达效果较好的RBD-X33单克隆菌株。通过优化后的发酵工艺,即采用HBSM培养基、诱导pH为6.5±0.3、诱导温度为22℃、诱导时间持续120 h,实现发酵收获上清中重组RBD的表达量达到240 mg/L。在小鼠免疫原性试验中,采用铝+CpG双佐剂系统吸附重组RBD蛋白的疫苗组合物能够激发小鼠产生2.7×10^(6)结合抗体滴度和726.8活病毒(野生型)中和抗体滴度。结论采用毕赤酵母表达系统能够高效表达重组RBD蛋白,且所表达的RBD蛋白能够有效激发动物产生免疫应答。本研究为基于RBD蛋白的重组新型冠状病毒疫苗的开发提供了参考。 展开更多
关键词 新型冠状病毒 刺突蛋白 受体结合域 毕赤酵母 重组蛋白疫苗 铝+cpg佐剂
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