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不同载体微球在p300与RORγt Co-IP实验效率的比较
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作者 王秀男 滕霄 +4 位作者 刘彪 殷浩程 任翠平 刘淼 沈际佳 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2019年第11期1722-1725,共4页
目的:在免疫共沉淀(Co-IP)过程中使用Protein A/G-琼脂糖珠捕获蛋白和使用Protein A/G-磁珠捕获蛋白的比较分析。方法先通过共转染Flag-p300和Myc-RORγt质粒入人胚肾细胞系293T(HEK293T)进行过表达,裂解细胞制备蛋白,分别使用Protein A... 目的:在免疫共沉淀(Co-IP)过程中使用Protein A/G-琼脂糖珠捕获蛋白和使用Protein A/G-磁珠捕获蛋白的比较分析。方法先通过共转染Flag-p300和Myc-RORγt质粒入人胚肾细胞系293T(HEK293T)进行过表达,裂解细胞制备蛋白,分别使用Protein A/G-琼脂糖珠捕获蛋白和使用Protein A/G-磁珠捕获蛋白进行Co-IP;再通过分离人脐血单个核细胞诱导分化人辅助性T细胞17(Th17)进行Co-IP比较分析;通过CCK8实验排除转染试剂等对细胞活性毒性。结果过表达的HEK293T细胞和诱导分化的Th17细胞中均显示腺病毒E1A结合蛋白(p300)与维甲酸相关孤儿核受体(RORγt)在Co-IP过程中使用Protein A/G-磁珠捕获大分子的p300蛋白效果好于中分子的RORγt蛋白,使用Protein A/G-琼脂糖珠捕获中分子的RORγt蛋白效果好于大分子的p300蛋白。结论在Co-IP过程中使用Protein A/G-磁珠捕获大分子蛋白效果较好,使用Protein A/G-琼脂糖珠捕获中分子蛋白效果较好。 展开更多
关键词 P300 维甲酸相关孤儿核受体 co-ip PROTEIN A/G-琼脂糖珠 PROTEIN A/G-磁珠
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植物中验证蛋白相互作用的Pull-down和Co-IP技术 被引量:6
2
作者 徐重益 《植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期62-68,共7页
蛋白互作在细胞生命活动中发挥关键作用,在不同时空层面上参与多种细胞学过程,因此研究蛋白互作对理解分子调控网络至关重要。通常情况下,利用酵母双杂交系统筛选植物蛋白互作必须通过体外和体内系统进行验证。Pull-down和Co-IP是验证... 蛋白互作在细胞生命活动中发挥关键作用,在不同时空层面上参与多种细胞学过程,因此研究蛋白互作对理解分子调控网络至关重要。通常情况下,利用酵母双杂交系统筛选植物蛋白互作必须通过体外和体内系统进行验证。Pull-down和Co-IP是验证植物蛋白互作的常用技术。Pull-down被广泛用于体外验证蛋白间的直接互作;而在植物活体内,利用本氏烟草(Nicotiana benthamiana)叶片瞬时表达蛋白,继而通过Co-IP进行鉴定是目前验证蛋白互作最简单且最有效的方法之一。该文对GST Pull-down和烟草瞬时表达系统中Co-IP技术原理及实验方案进行详细描述,以期为验证植物蛋白互作提供参考。 展开更多
关键词 植物 蛋白互作 Pull-down co-ip
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弓形虫致密颗粒(GRA23)互作蛋白筛选
3
作者 姜鑫 王静 +2 位作者 付江明 李树东 范学伟 《今日畜牧兽医》 2025年第7期8-10,共3页
刚地弓形虫作为一种专性细胞内寄生顶复门原虫,其致病性主要依赖于分泌效应蛋白对宿主细胞功能的调控。研究表明,致密颗粒蛋白23(GRA23)作为关键毒力因子,通过介导纳虫空泡(PV)与宿主细胞质间的分子交换参与寄生虫营养获取过程。然而,GR... 刚地弓形虫作为一种专性细胞内寄生顶复门原虫,其致病性主要依赖于分泌效应蛋白对宿主细胞功能的调控。研究表明,致密颗粒蛋白23(GRA23)作为关键毒力因子,通过介导纳虫空泡(PV)与宿主细胞质间的分子交换参与寄生虫营养获取过程。然而,GRA23调控这一过程的分子机制,特别是其与宿主特异性蛋白的相互作用网络尚未阐明。本研究通过GST pulldown联合液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)技术,从35个候选互作蛋白中鉴定出过氧化物酶体生物发生因子3(PEX3)和热休克蛋白90家族成员TRAP1两个关键互作靶点,并经免疫共沉淀(Co-IP)实验验证。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 GRA23 co-ip PEX3 TRAP1
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FAST角点检测算法IP的软硬件协同测试系统
4
作者 牛致远 邓杰 +1 位作者 冯冲 施展 《佳木斯大学学报(自然科学版)》 2025年第9期5-8,20,共5页
随着SoC设计中IP核数量迅速增加,传统测试方法在成本和验证周期方面面临挑战。为提高图像算法IP核测试的效率与准确性,构建了一种基于FPGA异构计算的软硬件协同物理测试系统。系统以ZYNQ7100芯片为核心,构建软硬协同验证框架:在ARM端部... 随着SoC设计中IP核数量迅速增加,传统测试方法在成本和验证周期方面面临挑战。为提高图像算法IP核测试的效率与准确性,构建了一种基于FPGA异构计算的软硬件协同物理测试系统。系统以ZYNQ7100芯片为核心,构建软硬协同验证框架:在ARM端部署Linux系统并集成OpenCV库生成标准测试数据,借助AXI总线实现IP物理测试数据采集。所设计系统以FAST角点检测IP电路为目标进行验证,结果显示,在ZYNQ平台上实现3.22倍加速,准确率与召回率均超过95%。该系统在提高测试效率的同时,具备良好的工程实用性与优化策略参考价值。 展开更多
关键词 软硬件协同 IP核测试 FAST角点检测 异构计算
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以音乐为主题的服饰设计探索
5
作者 达瓦顿珠 武雨薇 《染整技术》 2025年第6期108-110,共3页
音乐与服饰均为人类文化表达的重要载体,二者融合能够创造出独特的艺术氛围,赋予穿着者更难忘的情感体验。因此,围绕音乐元素在服饰设计中的创造性转化,并结合具体案例探讨音乐主题服饰的设计策略,旨在为音乐主题服饰设计提供切实可行... 音乐与服饰均为人类文化表达的重要载体,二者融合能够创造出独特的艺术氛围,赋予穿着者更难忘的情感体验。因此,围绕音乐元素在服饰设计中的创造性转化,并结合具体案例探讨音乐主题服饰的设计策略,旨在为音乐主题服饰设计提供切实可行的方法,推动服饰从音乐衍生品升级为文化传播媒介,同时期望为跨学科艺术创作提供参考。 展开更多
关键词 音乐主题 服饰设计 IP联名服饰 功能美学
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Z世代驱动下速食食品的IP联名营销创新策略
6
作者 陈淼 《食品安全导刊》 2025年第15期162-164,共3页
本文分析Z世代驱动下速食食品的IP联名营销存在的问题,并提出创新策略,旨在为速食食品企业构建可持续的IP联名营销模式提供理论参考。
关键词 Z世代 速食食品 IP联名营销 营销创新
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潮玩IP联名服装的图案设计与应用
7
作者 郭晨 《西部皮革》 2025年第16期93-95,共3页
潮玩知识产权(IP)以其独特的视觉语言和文化属性,已成为时尚产业中跨界联名的重要符号。文章围绕潮玩IP联名服装图案的设计与应用展开研究,分析其图案设计思路、构图布局、系列化策略以及不同材质与印制工艺对图案呈现的影响。阐述不同... 潮玩知识产权(IP)以其独特的视觉语言和文化属性,已成为时尚产业中跨界联名的重要符号。文章围绕潮玩IP联名服装图案的设计与应用展开研究,分析其图案设计思路、构图布局、系列化策略以及不同材质与印制工艺对图案呈现的影响。阐述不同服装品类图案的应用形式,以及跨界营销与推广策略,为服装行业与潮玩文化融合发展提供了有益参考。 展开更多
关键词 潮玩IP 服装 品牌联名 图案设计与应用
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新智共创:AIGC赋能红色IP产品创新扩散路径研究
8
作者 李子翔 《设计》 2025年第16期39-43,共5页
引入创新扩散理论探究AIGC共创技术下红色IP产品数智化转型路径。深入剖析当前红色IP产品传播过程中核心阻碍因素,并系统阐述AIGC共创技术在红色IP产品设计领域的应用价值及其所展现的新特征。输出红色IP产品数智化共创扩散路径,首先,... 引入创新扩散理论探究AIGC共创技术下红色IP产品数智化转型路径。深入剖析当前红色IP产品传播过程中核心阻碍因素,并系统阐述AIGC共创技术在红色IP产品设计领域的应用价值及其所展现的新特征。输出红色IP产品数智化共创扩散路径,首先,认知层面从用户采纳行为出发,提出了产品技术接受度与用户需求分析的双轴式研究方法,其次,创作层从产品的主体创新角度出发,提出红色IP产品人机共创实践路径。最后,传播层以数智化技术为依托,构建红色IP产品数字生态链。提升红色IP产品的扩散深度与速率,推动红色文化资源数字化转型有效发展,让红色基因在新质时代焕发新的活力。 展开更多
关键词 新智共创 AIGC共创技术 红色IP产品 创新扩散 数智化
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星载高速图像压缩软硬件优化设计 被引量:1
9
作者 刘玉娇 张少伟 +1 位作者 刘景熙 丁荣伟 《飞控与探测》 2025年第3期109-117,共9页
针对航天应用中高分辨率的非标准化图像高速压缩时所面临的软件复杂化和硬件资源消耗大的问题,提出了一种基于JPEG2000 IP核的高分辨率图像高速压缩软硬件协同优化设计方法。通过GTX高速接口和工业接口内核化简化了系统接口设计;通过第... 针对航天应用中高分辨率的非标准化图像高速压缩时所面临的软件复杂化和硬件资源消耗大的问题,提出了一种基于JPEG2000 IP核的高分辨率图像高速压缩软硬件协同优化设计方法。通过GTX高速接口和工业接口内核化简化了系统接口设计;通过第三方IP核和AXI高速总线技术精简了FPGA程序的软件架构;采用图像压缩性能软件仿真优化与IP压缩参数匹配的技术控制硬件压缩质量。最终设计的高分辨率图像高速压缩系统硬件的体积减小66%,质量减小46%,功耗降低62%;基于IP核的压缩系统比基于ADV212的压缩系统采样速度提高54%,最大实时压缩速度提高32%,单帧压缩时间减少25%。该设计方案能够满足航天任务中压缩性能好、资源消耗少、小型化、模块化的设计要求,同时为高质量的商业遥感压缩提供了一种参考。 展开更多
关键词 遥感图像压缩 JPEG2000 IP核 GTX接口 AXI总线 软硬件协同设计
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浅析手游IP计中的应用研究 被引量:1
10
作者 刘芳 李珮仪 《鞋类工艺与设计》 2024年第6期118-120,共3页
本文从手游IP在新式茶饮联名设计中的现状入手,分析手游IP在新式茶饮联名设计中的应用基础,对手游IP在新式茶饮联名设计中的应用规则进行细致的阐述,旨在更好地了解手游IP在新式茶饮联名设计中的未来发展趋势,认清IP联名的现状,归纳与总... 本文从手游IP在新式茶饮联名设计中的现状入手,分析手游IP在新式茶饮联名设计中的应用基础,对手游IP在新式茶饮联名设计中的应用规则进行细致的阐述,旨在更好地了解手游IP在新式茶饮联名设计中的未来发展趋势,认清IP联名的现状,归纳与总结IP联名的缺憾,实现跨圈双赢。 展开更多
关键词 新式茶饮 IP联名 手游 跨界联名
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价值共创理论下非遗产品创新研究——以佛山醒狮为例 被引量:1
11
作者 李沐纯 韩金涛 +2 位作者 杨佩璇 李心怡 陈雪 《韶关学院学报》 2024年第12期56-62,共7页
文化IP在文创产业中占据核心地位,与旅游业融合日益深化,对非遗文化具有显著的整合潜力.研究基于价值共创理论,深入探讨IP赋能对佛山醒狮非遗旅游产品创新的积极影响;并通过对IP功能的剖析及其在佛山醒狮中的应用案例,提出了“IP+产品+... 文化IP在文创产业中占据核心地位,与旅游业融合日益深化,对非遗文化具有显著的整合潜力.研究基于价值共创理论,深入探讨IP赋能对佛山醒狮非遗旅游产品创新的积极影响;并通过对IP功能的剖析及其在佛山醒狮中的应用案例,提出了“IP+产品+场景”的非遗文化旅游产品发展模式.结果表明,通过创造特色鲜明的IP、打造市场认可的产品以及营造沉浸式场景,能成功塑造醒狮形象并转化了其文化内涵,有效推动佛山醒狮旅游产品的竞争力提升.研究有助于非遗文化的广泛传播,也为其他非遗文化的发展提供有益借鉴. 展开更多
关键词 价值共创 非遗文化 旅游产品 IP 佛山醒狮
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流感病毒NP蛋白与宿主蛋白SNRPA的相互作用研究 被引量:4
12
作者 张杰 罗维玉 +7 位作者 周圆 王广文 赵玉辉 周陈陈 黄山雨 李呈军 陈化兰 姜丽 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期167-171,共5页
流感病毒核蛋白(NP)是由病毒RNA节段5编码的主要结构蛋白,与病毒基因组RNA及聚合酶(PB1、PB2、PA)构成核糖核蛋白(vRNP)复合体,是病毒基因组的转录和复制的基本功能单位。本实验室采用酵母双杂交技术从人细胞系cDNA文库中筛选与流感病... 流感病毒核蛋白(NP)是由病毒RNA节段5编码的主要结构蛋白,与病毒基因组RNA及聚合酶(PB1、PB2、PA)构成核糖核蛋白(vRNP)复合体,是病毒基因组的转录和复制的基本功能单位。本实验室采用酵母双杂交技术从人细胞系cDNA文库中筛选与流感病毒NP蛋白相互作用的宿主蛋白U1 small nuclear ribonucleoprotein A(SNRPA)。本研究通过酵母回交验证、免疫共沉淀(Co-IP)和GST pull down试验进一步证实NP与SNRPA之间存在直接相互作用。利用siRNA干扰基因的表达后,流感病毒的复制滴度在24 h和48 h分别下降2.7倍和1.75倍,表明SNRPA蛋白表达对流感病毒的复制发挥正调控作用。本研究丰富了流感病毒蛋白与宿主蛋白之间的蛋白质调控网络,为进一步研究流感病毒复制调控的机制奠定了基础。 展开更多
关键词 酵母双杂交 co-ip NP蛋白 SNRPA蛋白 相互作用
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组蛋白乙酰化酶调控MSCs经5-azaC诱导后的细胞周期和增殖特性 被引量:3
13
作者 周娜 朱静 +3 位作者 田杰 张亚兰 邓兵 李娅莎 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2010年第7期689-697,共9页
目的阐述组蛋白乙酰化酶GCN5在间充质干细胞(MSC)经5-氮杂胞苷(5-azaC)诱导过程中的作用及其转录调控机制。方法 MTT法、流式细胞术检测细胞周期和细胞增殖;定量PCR检测P21基因表达;CH IP技术验证GCN5募集蛋白复合体与P21基因的相互作用... 目的阐述组蛋白乙酰化酶GCN5在间充质干细胞(MSC)经5-氮杂胞苷(5-azaC)诱导过程中的作用及其转录调控机制。方法 MTT法、流式细胞术检测细胞周期和细胞增殖;定量PCR检测P21基因表达;CH IP技术验证GCN5募集蛋白复合体与P21基因的相互作用及P21基因启动子区域的乙酰化水平;Co-IP技术分离、串联质谱技术鉴定GCN5募集蛋白复合体组成。结果 MSCs经5-azaC诱导3 d后,G0/G1期细胞比例、P21基因表达量最高,此后逐渐降低,细胞增殖指数及G2/S期细胞比例与上述结果相反;筛选出GCN5募集蛋白复合体为:依赖ATP的染色质重塑复合体成分、转录起始复合体成分、转录因子和锌指结构蛋白;诱导组GCN5与P21基因启动子区域结合能力及P21基因启动子区域组蛋白H3乙酰化水平高于未诱导组。结论 GCN5募集蛋白复合体通过结合于P21基因启动子区域参与调控MSCs经5-azaC诱导体外分化过程中细胞周期G0/G1期和细胞增殖特性的调控。 展开更多
关键词 间充质干细胞 细胞周期 组蛋白乙酰化酶GCN5 co-ip CHIP
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蛋白质相互作用技术在分子水平的应用
14
作者 韩镌竹 杨文腰 高铎 《品牌与标准化》 2024年第6期181-183,共3页
基于蛋白复合物在钠离子通道相关疾病中的调控作用,本文综述了蛋白质相互作用构建蛋白质关系的网络和生物学通路中涉及的体内和体外相关检测方法,如酵母双杂交系统、双分子荧光互补、免疫共沉淀技术、融合蛋白Pull-Down技术、单分子下... 基于蛋白复合物在钠离子通道相关疾病中的调控作用,本文综述了蛋白质相互作用构建蛋白质关系的网络和生物学通路中涉及的体内和体外相关检测方法,如酵母双杂交系统、双分子荧光互补、免疫共沉淀技术、融合蛋白Pull-Down技术、单分子下拉、高通量蛋白质芯片、微生物质谱、串联亲和蛋白纯化,以及以生物信息学为主的研究方法,并通过相关检测技术在大分子蛋白复合物中的应用获得新的靶点。 展开更多
关键词 蛋白质-蛋白质相互作用 酵母双杂交系统 双分子荧光互补 免疫共沉淀技术 串联亲和蛋白纯化
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高脂、禁食条件下CIDEC互作蛋白的分析
15
作者 崔涵 靳艺 +3 位作者 杨冉冉 李一星 邹知明 周磊 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期3241-3248,共8页
脂肪过度沉积是引起肥胖的最主要原因。脂肪沉积水平受到脂肪代谢的影响。CIDEC是近年研究新发现的一种脂肪滴结合蛋白,是调控脂肪滴发育和脂肪沉积的关键因子。本研究以小鼠为动物模型,采用Co-IP和质谱分析等实验方法,从蛋白功能、亚... 脂肪过度沉积是引起肥胖的最主要原因。脂肪沉积水平受到脂肪代谢的影响。CIDEC是近年研究新发现的一种脂肪滴结合蛋白,是调控脂肪滴发育和脂肪沉积的关键因子。本研究以小鼠为动物模型,采用Co-IP和质谱分析等实验方法,从蛋白功能、亚细胞定位、GO、KEGG功能及其富集度等方面解析CIDEC在高脂和禁食条件下互作蛋白的差异,为理解CIDEC感应机体能量状态的分子机制,及在不同生理条件下的信号传导和功能转换提供实验依据。 展开更多
关键词 肥胖 CIDEC co-ip 互作蛋白 质谱
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鲍曼不动杆菌感染HeLa细胞与YY1互作的差异蛋白鉴定
16
作者 丁文一 安志远 《生物技术》 CAS 2023年第1期9-13,共5页
[目的]鉴定鲍曼不动杆菌感染HeLa细胞前后与YY1互作的差异蛋白。[方法]用脂质体转染法在HeLa细胞中过表达YY1;之后用Co-IP技术捕获与YY1相互作用的蛋白质;最后利用高效液相色谱质谱联用技术鉴定互作差异蛋白。用GO注释和KEGG分析预测蛋... [目的]鉴定鲍曼不动杆菌感染HeLa细胞前后与YY1互作的差异蛋白。[方法]用脂质体转染法在HeLa细胞中过表达YY1;之后用Co-IP技术捕获与YY1相互作用的蛋白质;最后利用高效液相色谱质谱联用技术鉴定互作差异蛋白。用GO注释和KEGG分析预测蛋白质的功能。[结果]经Co-IP和蛋白银染发现鲍曼不动杆菌感染组和YY1捕获组与IgG组比较在45~55 kDa和70~100 kDa处有明显的差异条带;质谱结果显示YY1捕获组的特有蛋白有81个,GO注释和KEGG分析表明这些差异蛋白定位于细胞核及核膜,具有RNA结合功能,主要参与了RNA剪切的生物学过程;与IgG组和YY1捕获组比较在鲍曼不动杆菌感染组中获得了SFRS4、CPSF2、LUC7L2和U2AF65这些差异蛋白。GO注释和KEGG分析表明这些差异蛋白定位于细胞核散斑,具有RNA结合功能,主要参与了mRNA剪切和核输出的生物学过程。[结论]鲍曼不动杆菌感染的HeLa细胞中与YY1作用的蛋白均参与了RNA剪切过程,提示鲍曼不动杆菌很可能利用这些蛋白来调节YY1,为进一步研究鲍曼不动杆菌与YY1的相互作用机制奠定了基础。 展开更多
关键词 鲍曼不动杆菌 转录因子YY1 co-ip/MS技术 HELA细胞 生信分析
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全反式视黄酸通过RARγ蛋白直接调控PPARγ2蛋白抑制骨髓间充质干细胞成脂分化 被引量:3
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作者 刘祖银 李清 +2 位作者 陈丽君 陈洁 刘友学 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期682-687,共6页
目的研究高浓度全反式视黄酸(atRA)抑制大鼠骨髓间充质干细胞(r BMSCs)成脂分化过程中,视黄酸核受体γ(RARγ)对过氧化物酶体增殖激活受体γ2(PPARγ2)与CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)调控的机制。方法体外分离、培养、诱导r BMSCs。... 目的研究高浓度全反式视黄酸(atRA)抑制大鼠骨髓间充质干细胞(r BMSCs)成脂分化过程中,视黄酸核受体γ(RARγ)对过氧化物酶体增殖激活受体γ2(PPARγ2)与CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)调控的机制。方法体外分离、培养、诱导r BMSCs。成脂分化诱导液中,加入0.5、1.0μmol/L atRA持续作用15 d后,real-time PCR和Western blotting分别检测RARγ、C/EBPα、PPARγ2的mRNA和蛋白表达水平。重组腺病毒过表达RARγ(over-RARγ)、沉默RARγ(si-RARγ)分别感染BMSCs,采用real-time PCR及Western blotting检测RARγ、C/EBPα、PPARγ2的mRNA及蛋白表达水平。Co-IP检测1.0μmol/L atRA持续成脂诱导15 d后,明确RARγ与PPARγ2两者之间是否有相互作用。结果诱导15 d结束时,与对照组相比,加入0.5、1.0μmol/L atRA后,RARγ表达明显增加(P<0.01,P<0.001),而PPARγ2、C/EBPα表达明显降低(P<0.001)。over-RARγ组:RARγmRNA和蛋白表达均较对照组明显增加(P<0.01),而PPARγ2、C/EBPαmRNA和蛋白表达均较对照组明显降低(P<0.05,P<0.01)。si-RARγ组:RARγ蛋白表达较对照组明显减低,但PPARγ2、C/EBPα却无明显变化。Co-IP结果提示:RARγ与PPARγ2蛋白之间有直接作用,形成复合物,未发现其与视黄酸反应元件(RARE)相结合证据。结论高浓度atRA抑制r BMSCs成脂分化,是通过激活视黄酸信号通路RARγ而实现的。RARγ下调成脂分化通路PPARγ2、C/EBPα表达是通过直接作用于下游的PPARγ2蛋白而实现的。 展开更多
关键词 全反式视黄酸 RARγ PPARΓ2 骨髓间充质干细胞 co-ip
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伪狂犬病病毒UL56蛋白与宿主蛋白Nedd4相互作用的研究 被引量:3
18
作者 王书文 吕闯 蔡雪辉 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期553-559,共7页
伪狂犬病病毒(PRV)UL56蛋白(pUL56)属于Ⅱ型膜蛋白。近期研究结果表明PRVpUL56与PRV对啮齿动物的致病性相关。为揭示PRVpUL56与宿主相互作用的分子基础,本研究通过免疫共沉淀(Co-IP)试验确定了pUL56与神经前体细胞表达的发育下调蛋白4(N... 伪狂犬病病毒(PRV)UL56蛋白(pUL56)属于Ⅱ型膜蛋白。近期研究结果表明PRVpUL56与PRV对啮齿动物的致病性相关。为揭示PRVpUL56与宿主相互作用的分子基础,本研究通过免疫共沉淀(Co-IP)试验确定了pUL56与神经前体细胞表达的发育下调蛋白4(Nedd4)存在相互作用。进一步,利用激光共聚焦试验确定过表达pUL56与Nedd4在转染HEK293T细胞的高尔基体存在共定位。通过互作,pUL56可以将细胞质分布的Nedd4重新定位于高尔基体。前期研究表明,含有WW结构域的宿主蛋白可以与含有PPxY(PY)基序的病毒蛋白互作。因此,本研究构建了pUL56PY基序丙氨酸突变体(PPxY/AAxY),利用Co-IP试验对pUL56突变体和Nedd4相互作用进行验证,结果表明随着pUL56PY基序突变的增加,蛋白互作能力逐渐减弱。此外,pUL56通过其PY基序显著下调Nedd4的表达。这些结果证实了PRVpUL56与Nedd4主要通过WW结构域/PY基序模式发挥相互作用,并下调Nedd4的表达。因此,本研究为阐明PRVpUL56与宿主相互作用的分子机制提供了参考依据。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 pUL56 高尔基体 co-ip 蛋白互作
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宿主细胞蛋白HSPA2与TGEV Nsp2的相互作用及其对病毒复制的影响 被引量:2
19
作者 王亚楠 韩露露 +7 位作者 孙傲颖 姜艳平 崔文 乔薪瑗 唐丽杰 徐义刚 李一经 王丽 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第21期1-6,14,175,共8页
为了探究猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)非结构蛋白2(Nsp2)与宿主细胞热休克蛋白70-2(HSPA2)的相互作用,以及HSPA2表达对TGEV复制的影响,试验利用RT-PCR方法获得猪源HSPA2基因并构建其真核表达载体pCMV-... 为了探究猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)非结构蛋白2(Nsp2)与宿主细胞热休克蛋白70-2(HSPA2)的相互作用,以及HSPA2表达对TGEV复制的影响,试验利用RT-PCR方法获得猪源HSPA2基因并构建其真核表达载体pCMV-Myc-HSPA2,通过Western-blot和间接免疫荧光试验检测真核表达载体pCMV-Myc-HSPA2在IPEC-J2细胞中的表达情况。利用免疫共沉淀(Co-IP)和共定位试验进一步验证TGEV Nsp2和宿主细胞蛋白HSPA2之间是否存在相互作用,利用基因过表达技术在IPEC-J2细胞中过表达HSPA2后接种TGEV,分别测定接种后36,48小时时病毒TCID50。结果表明:真核表达载体pCMV-Myc-HSPA2能够在IPEC-J2细胞中成功表达,HSPA2与Nsp2之间存在相互作用,并且HSPA2表达量升高后TGEV的TCID50略有升高。说明宿主细胞蛋白HSPA2与TGEV Nsp2之间存在相互作用,且HSPA2的表达对TGEV复制具有一定促进作用。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus TGEV) 热休克蛋白70-2(HSPA2) 蛋白互作 病毒复制 免疫共沉淀(co-ip) 真核表达
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MSCs心肌样细胞分化过程中GCN5募集促分化相关蛋白的筛选 被引量:5
20
作者 周娜 朱静 +4 位作者 田杰 李娅莎 邓兵 张亚兰 智深深 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2010年第1期61-68,共8页
筛选并分析间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)诱导分化为心肌样细胞过程中GCN5招募促分化相关蛋白集合体的组成。免疫荧光细胞化学、实时荧光定量PCR鉴定MSCs经5-氮杂胞苷(5-azacytidine,5-azaC)诱导分化为心肌样细胞;免疫共... 筛选并分析间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)诱导分化为心肌样细胞过程中GCN5招募促分化相关蛋白集合体的组成。免疫荧光细胞化学、实时荧光定量PCR鉴定MSCs经5-氮杂胞苷(5-azacytidine,5-azaC)诱导分化为心肌样细胞;免疫共沉淀技术分离、串联质谱鉴定GCN5募集蛋白集合体组成,并从心肌细胞分化角度筛选、验证分化相关蛋白因子。MSCs经5-azaC诱导分化的心肌样细胞表达心肌特异性基因GATA4、MEF2C和心肌细胞结构、功能蛋白cTnt、MHC和Cx43;筛选、验证出心肌细胞分化相关GCN5招募蛋白归类为:(1)DNA结合蛋白Sp1/KLF;(2)转录辅激活子PGC-1α和Rb1;(3)转录延伸复合体组成成分以及信号通路蛋白Akt。通过筛选获得MSCs经诱导向心肌样细胞分化过程中心肌分化相关蛋白因子,为进一步研究干细胞分化信号传导途径、特异性生物靶点干预以及提高干细胞分化效率打下了基础。 展开更多
关键词 间充质干细胞 分化 组蛋白乙酰转移酶GCN5 Co—IP MS/MS
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