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ChrA基因在大肠杆菌中的表达及其抗铬特性 被引量：4
1
作者 周思敏 董兰岚 +1 位作者 何元 肖虹 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第10期1290-1295,共6页
目的研究铬(Ⅵ)转运蛋白编码基因ChrA工程菌的抗铬(Ⅵ)能力及铬(Ⅵ)抗性机制。方法以沙雷氏菌S2基因组作为模板,PCR扩增ChrA基因,连接表达载体pET-28a(+),转化至E.coli BL21表达。测定ChrA工程菌的Cr(Ⅵ)抗性、摄取能力和外排Cr(Ⅵ)能力... 目的研究铬(Ⅵ)转运蛋白编码基因ChrA工程菌的抗铬(Ⅵ)能力及铬(Ⅵ)抗性机制。方法以沙雷氏菌S2基因组作为模板,PCR扩增ChrA基因,连接表达载体pET-28a(+),转化至E.coli BL21表达。测定ChrA工程菌的Cr(Ⅵ)抗性、摄取能力和外排Cr(Ⅵ)能力,探索铬(Ⅵ)负载时间、含氧阴离子(硫酸盐、钼酸盐、钒酸盐、钨酸盐)和呼吸抑制剂(缬氨霉素、寡霉素、CN-、NADH)对其抗Cr(Ⅵ)能力的影响,分析ChrA蛋白转运Cr(Ⅵ)的机制路径。结果成功构建pET-28a(+)-ChrA工程菌,并表达出膜蛋白ChrA;ChrA工程菌的Cr(Ⅵ)吸收能力低于对照株(P<0.05),Cr(Ⅵ)外排能力高于对照株(P<0.05);工程菌在50 mg/L Cr_2O_7^(2-)中负载30 min,新鲜溶液中释放10 min后,菌体中的Cr(Ⅵ)外排量达到20%,但随着铬(Ⅵ)负载时间延长,外排量逐渐减少;工程菌外排能力受含氧阴离子硫酸盐和钼酸盐显著抑制(P<0.05),推测ChrA蛋白是通过硫酸盐通道运输Cr(Ⅵ),而钨酸盐和钒酸盐对其Cr(Ⅵ)外排无明显抑制或促进作用;在抑制剂类别中,K+载体缬氨霉素、CN-显著性抑制其Cr(Ⅵ)外排,NADH促进其Cr(Ⅵ)外排(P<0.05),而寡霉素无明显抑制或促进作用,表明ChrA蛋白外排铬(Ⅵ)是利用质子动力通过细胞膜化学渗透作用把铬离子泵出细胞外。结论 ChrA蛋白具有将Cr(Ⅵ)从胞浆转运至胞外的作用,ChrA的表达提高了大肠杆菌的铬(Ⅵ)抗性能力。 展开更多
关键词 chra 工程菌 铬(Ⅵ)抗性 外排
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芽孢杆菌BC4铬抗性相关基因chrA的克隆表达
2
作者 苍岩 陈旭 +1 位作者 冉钟吕 蔡亚君 《武汉纺织大学学报》 2023年第5期25-30,共6页
以芽孢杆菌BC4菌株为对象,通过对其铬抗性相关基因chr A的克隆表达来测定其编码蛋白ChrA还原Cr(Ⅵ)的能力以及该蛋白在芽孢杆菌Cr(Ⅵ)去除中的作用,可帮助进一步阐明芽孢杆菌与Cr(Ⅵ)的作用机理,并为芽孢杆菌应用于铬污染治理奠定理论... 以芽孢杆菌BC4菌株为对象,通过对其铬抗性相关基因chr A的克隆表达来测定其编码蛋白ChrA还原Cr(Ⅵ)的能力以及该蛋白在芽孢杆菌Cr(Ⅵ)去除中的作用,可帮助进一步阐明芽孢杆菌与Cr(Ⅵ)的作用机理,并为芽孢杆菌应用于铬污染治理奠定理论基础。PCR扩增出芽孢杆菌BC4菌株铬抗性相关基因chr A,PCR产物经克隆与测序,得到chr A完整的DNA序列。该序列大小为1182bp,共编码393个氨基酸,预测编码蛋白分子量为43kDa。根据利用NCBI所进行的BLAST序列比对结果,判断该基因为铬转运蛋白编码基因。将chr A基因PCR产物双酶切后连接到表达载体pET28b并转化进大肠杆菌BL21中,对其表达产物进行分析。结果表明,chr A基因在大肠杆菌BL21中表达约43kDa的蛋白,与预期结果相符;重组菌株对Cr(Ⅵ)的耐受能力高于对照菌株,说明ChrA蛋白在芽孢杆菌BC4的Cr(Ⅵ)抗性机制中起重要作用,且重组菌株对Cr(Ⅵ)具备较强的抗性。 展开更多
关键词 芽孢杆菌 chra基因 基因克隆与表达 重组菌株
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子宫内膜增生组织中整合素α_1和嗜铬素A检测的临床意义 被引量：2
3
作者 高晓旭 韩世愈 《中国实用妇科与产科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期68-69,共2页
目的探讨整合素α1(ITGA1)和嗜铬素A(ChrA)与子宫内膜增生症的关系。方法2005年5月至2006年4月在哈尔滨医科大学附属第四医院和黑龙江省电力医院对95例子宫内膜增生症患者的子宫内膜组织进行分类,并应用免疫组织化学方法,对组织进行ITGA... 目的探讨整合素α1(ITGA1)和嗜铬素A(ChrA)与子宫内膜增生症的关系。方法2005年5月至2006年4月在哈尔滨医科大学附属第四医院和黑龙江省电力医院对95例子宫内膜增生症患者的子宫内膜组织进行分类,并应用免疫组织化学方法,对组织进行ITGA1和ChrA的检测。结果95例子宫内膜增生症患者的内膜组织中整合素α1检测的阳性率为78.9%,在各型组织中的阳性率分别为67.3%,69.6%,70.0%。嗜铬素A检测的总的阳性率为42.1%,在各型组织中的阳性率分别为36.5%,30.4%,70.0%。经统计学分析,整合素α1在各型增生组织中的阳性率无统计学意义,嗜铬素A在各型增生组织中的阳性率有统计学意义,两种因子在组织中的表达无明显相关性。结论整合素α1与子宫内膜的异常过度增生有一定关系。嗜铬素A与子宫内膜增生症的发生有一定的相关性,在细胞恶变的过程中发挥着重要的作用。 展开更多
关键词 子宫内膜增生症 整合素Α1 嗜铬素A
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