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Cav3.1在宫颈癌组织中的表达及靶向下调Cav3.1对宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响 被引量:3
1
作者 张小鹏 吴晓钱 +3 位作者 余欣怡 潘春晨 蔡兆根 杨媛媛 《现代肿瘤医学》 CAS 北大核心 2022年第10期1859-1865,共7页
目的:分析Cav3.1在宫颈癌组织中的表达及靶向下调Cav3.1对人宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用免疫组织化学染色法检测Cav3.1在68例宫颈癌组织和40例非癌宫颈组织中的表达;实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)、Western blot... 目的:分析Cav3.1在宫颈癌组织中的表达及靶向下调Cav3.1对人宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用免疫组织化学染色法检测Cav3.1在68例宫颈癌组织和40例非癌宫颈组织中的表达;实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)、Western blot检测宫颈癌HeLa细胞中Cav3.1的表达;采用siRNA瞬时转染技术靶向下调Cav3.1表达,CCK-8检测下调Cav3.1表达后宫颈癌HeLa细胞增殖情况,流式细胞仪检测下调Cav3.1表达后宫颈癌HeLa细胞凋亡情况;Western blot检测宫颈癌HeLa细胞中Bcl-2、Bax、Cleaved-Caspase3的表达。结果:Cav3.1在宫颈癌组织中的表达显著高于对照组(P<0.01)。宫颈癌HeLa细胞中Cav3.1的表达水平显著高于HcerEpic细胞(P<0.01)。与对照组相比,siRNA-Cav3.1组的Cav3.1相对表达水平显著下降(P<0.01)。与空白对照组、mock组相比,siRNA-Cav3.1组HeLa细胞的增殖能力减弱,凋亡能力增强,差异有统计学意义(P<0.01)。Western blot显示siRNA-Cav3.1组Bax、Cleaved-Caspase3的相对表达量比对照组升高,而Bcl-2降低(P<0.01)。结论:Cav3.1在宫颈癌组织和细胞中高表达。靶向下调Cav3.1可以抑制HeLa细胞的增殖、促进其凋亡。Cav3.1在宫颈癌的生物学行为中可能起着关键的作用,有望成为一种新的有效的宫颈癌治疗靶点及肿瘤检测的分子生物学标志物。 展开更多
关键词 宫颈癌 cav3.1 HELA细胞 增殖 凋亡
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T型钙通道Cav3.1、Cav3.2蛋白在宫颈癌组织中的表达及其意义 被引量:1
2
作者 郭艳蒲 李亚 +1 位作者 张娜 张冬梅 《疑难病杂志》 CAS 2015年第12期1273-1276,F0003,共5页
目的研究T型钙通道Cav3.1、Cav3.2蛋自在宫颈癌患者中的阳性表达率及其与宫颈癌临床病理学特征的关系。方法将2012年6月—2014年12月行子宫切除术并经病理学检查确诊为宫颈癌患者74例作为宫颈癌组,同期因子宫肌瘤进行子宫切除术患者74... 目的研究T型钙通道Cav3.1、Cav3.2蛋自在宫颈癌患者中的阳性表达率及其与宫颈癌临床病理学特征的关系。方法将2012年6月—2014年12月行子宫切除术并经病理学检查确诊为宫颈癌患者74例作为宫颈癌组,同期因子宫肌瘤进行子宫切除术患者74例作为对照组,采用SP免疫组化染色对手术切除标本进行染色,观察2组患者T型钙通道Cav3.1、Cav3.2蛋白的阳性表达率及其与宫颈癌Cav3.1、Cav3.2蛋白过表达率与临床病理特征的关系。结果宫颈癌组Cav3.1及Cav3.2的阳性表达率(94.59%、90.54%)均明显高于对照组(12.16%、14.86%),差异有统计学意义(x^2=101.029、85.005,P<0.01);Cav3.1、Cav3.2蛋白表达与患者年龄、病程、病理分型、肿瘤大小无关(Cav3.1:x^2=2.381、1.782、0.982、0.338,P>0.05;Cav3.2:0.773、0.673、0.862、0.762,P>0.05);与临床分期、细胞分化程度、淋巴结转移有关(Cav3.1:x^2=5.336、6.772、16.882,P<0.01;Cav3.2:10.934、12.762、6.542,P<0.01)。结论宫颈癌患者T-型钙通道Cav3.1、Cav3.2表达增高,T型钙通道Cav3.1、Cav3.2蛋白可能成为宫颈癌的治疗靶点及肿瘤检测的分子生物学标记物。 展开更多
关键词 T型钙通道 cav3.1表达 Cav3.2表达 宫颈癌
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靶向下调Cav3.1诱导人喉癌Hep-2细胞凋亡
3
作者 江旋 许为青 潘春晨 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2021年第11期1723-1727,共5页
目的探讨Cav3.1在喉鳞癌组织和细胞中的表达以及靶向下调Cav3.1在喉鳞癌细胞增殖和凋亡的影响。方法应用免疫组织化学、RT-PCR和Western blot方法检测30例喉癌患者中Cav3.1在喉癌组织、正常切缘黏膜组织中的表达情况;siRNA瞬转技术构建... 目的探讨Cav3.1在喉鳞癌组织和细胞中的表达以及靶向下调Cav3.1在喉鳞癌细胞增殖和凋亡的影响。方法应用免疫组织化学、RT-PCR和Western blot方法检测30例喉癌患者中Cav3.1在喉癌组织、正常切缘黏膜组织中的表达情况;siRNA瞬转技术构建靶向下调Cav3.1的Hep-2细胞系,应用Western blot检测各组细胞BAX、Cleaved-caspase-3、BCL-2的表达情况,应用CCK-8实验检测该喉癌细胞增殖的情况,Annexin V-PI染色技术检测喉癌Hep-2细胞凋亡的情况。结果相对癌旁组织,Cav3.1在喉癌组织中高表达(P<0.05);下调组Cav3.1在喉癌细胞中mRNA和蛋白的表达水平明显降低(P<0.05);下调Cav3.1可抑制喉癌细胞的增殖(P<0.05),促进喉癌细胞的凋亡(P<0.05),Western blot验证下调Cav3.1,BAX、Cleaved-caspase-3蛋白表达显著升高,BCL-2表达明显下降(P<0.05)。结论Cav3.1在喉癌组织和喉癌细胞系中高表达,下调Cav3.1抑制喉癌细胞的增殖,促进喉癌细胞凋亡。 展开更多
关键词 喉鳞癌 HEP-2 cav3.1 增殖 凋亡
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Isoprenylated Flavonoids as Cav3.1 Low Voltage-Gated Ca^(2+)Channel Inhibitors from Salvia digitaloides
4
作者 Jian-Jun Zhao Song-Yu Li +3 位作者 Fan Xia Ya-Li Hu Yin Nian Gang Xu 《Natural Products and Bioprospecting》 CAS 2021年第6期671-678,共8页
Saldigones A-C(1,3,4),three new isoprenylated flavonoids with diverse flavanone,pterocarpan,and isoflavanone architec-tures,were characterized from the roots of Salvia digitaloides,together with a known isoprenylated ... Saldigones A-C(1,3,4),three new isoprenylated flavonoids with diverse flavanone,pterocarpan,and isoflavanone architec-tures,were characterized from the roots of Salvia digitaloides,together with a known isoprenylated flavanone(2).Notably,it’s the first report of isoprenylated flavonoids from Salvia species.The structures of these isolates were elucidated by extensive spectroscopic analysis.All of the compounds were evaluated for their activities on Cav3.1 low voltage-gated Ca^(2+)channel(LVGCC),of which 2 strongly and dose-dependently inhibited Cav3.1 peak current. 展开更多
关键词 Salvia digitaloides Isoprenylated flavonoid cav3.1 low voltage-gated Ca^(2+)channel(LVGCC)
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Effects of 9-cis retinoic acid on human homeobox gene NKX3.1 expression in prostate cancer cell line LNCaP
5
作者 Jiang, AL Zhang, PJ +5 位作者 Chen, WW Liu, WW Yu, CX Hu, XY Zhang, XQ Zhang, JY 《Asian Journal of Andrology》 SCIE CAS CSCD 2006年第4期435-441,515,共7页
Aim:To study the regulatory effects of 9-cis retinoic acid(RA)on the expression of human homeobox gene NKX3.1 in prostate cancer cell line LNCaP.Methods:Flow cytometry,reverse transcriptase polymerase chain reaction a... Aim:To study the regulatory effects of 9-cis retinoic acid(RA)on the expression of human homeobox gene NKX3.1 in prostate cancer cell line LNCaP.Methods:Flow cytometry,reverse transcriptase polymerase chain reaction and Western blotting were performed to evaluate the effects of 9-cis RA on NKX3.1 expression and cell cycle of LNCaP cells.To identify a regulatory region within the NKX3.1 promoter contributing to the regulation induced by 9-cis RA, we have constructed an NKX3.1 promoter-reporter plasmid,pGL_3-1040bp,and its 5′-deletion mutants,which were transfected into LNCaP cells with treatment of 9-cis RA in indicated concentrations.Results:With the treatment of 9-cis RA,the NKX3.1 promoter activity was increased in reporter gene assay and NKX3.1 expression was enhanced at both mRNA and protein levels in LNCaP cells.We found that the region between -936 and -921 in the upstream of NKX3.1 gene involved the inducible regulation by 9-cis RA treatment.In flow cytometry,9-cis RA treatment caused accumulation of cells in the G_1 phase of the cell cycle and a fewer cells pass through to G_2/M.Conclusion:Our results demonstrated that 9-cis RA as a differentiating agent can arrest prostate cancer cells in G_1 phase and reduce cell mitosis,and upregulate the expression of human homeobox gene NKX3.1,which is thought to play an important role in prostate differentiation and to act as a tumor suppressor gene in the prostate.(Asian J Androl 2006 Jul;8:435-441) 展开更多
关键词 NKX3.1 gene 9-cis retinoic acid gene expression prostate cancer cell
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调控T型钙通道Ca_v3.1电压依赖性失活的分子结构域(英文) 被引量:2
6
作者 贺秉军 胡芬 +4 位作者 商学良 韩丽鑫 吴广彦 李俊英 孙金生 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2014年第9期877-886,共10页
T型钙通道(Cav3)广泛分布于各类细胞,其显著的电生理学特点是低电位激活和快速的电压依赖性失活.失活在通道的生理功能调节中起十分重要的作用,但具体参与通道失活的分子基础目前并不完全清楚.为明确Cav3.1通道中调控电压依赖性失活... T型钙通道(Cav3)广泛分布于各类细胞,其显著的电生理学特点是低电位激活和快速的电压依赖性失活.失活在通道的生理功能调节中起十分重要的作用,但具体参与通道失活的分子基础目前并不完全清楚.为明确Cav3.1通道中调控电压依赖性失活的结构域,用Cav1.2通道(无电压依赖性失活)结构域Ⅰ和Ⅱ中的S1-S4、S5-S6区及Ⅰ和Ⅱ间的联系区替换Cav3.1中的相应区域,构建嵌合通道,并在卵母细胞中表达,用电压钳技术分析通道的电生理学特性.结果表明,替换Ⅰ中的S1-S4或S5-S6区可使Cav3.1的失活特性显著改变,但这种改变主要是由激活-失活偶联所致.Ⅱ的替换使通道的失活曲线参数发生显著改变,表明结构域Ⅱ,包括S1-S4和S5-S6均参与Cav3.1失活过程的调控.Ⅰ、Ⅱ间的联系区及Ⅰ中的S5-S6主要调控Cav3.1的失活速率,Ⅰ和Ⅱ中的S1-S4对通道失活速率无影响.综上所述,结构域Ⅱ是调控Cav3.1电压依赖性失活的关键因素,结构域Ⅰ不参与该通道失活过程的调控.Ⅰ、Ⅱ间的联系区及Ⅰ中的S5-S6主要调控Cav3.1通道的失活速率,Ⅰ、Ⅱ中的S1-S4对通道失活速率无影响. 展开更多
关键词 T型钙通道cav3.1 电压依赖性失活 结构域 电生理
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食管鳞癌中CAV-1基因的表达及甲基化状态 被引量:2
7
作者 周珍 郭艳丽 +4 位作者 韩立杰 郭炜 李书梅 沈素朋 董稚明 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期789-793,共5页
背景与目的:作为重要的表观遗传学现象之一,DNA甲基化对基因表达发挥着重要的调控功能。研究表明肿瘤细胞基因组正常DNA甲基化模式异常改变所导致的肿瘤相关基因功能异常可能参与肿瘤发生与发展。本研究通过检测食管鳞状细胞癌(esophage... 背景与目的:作为重要的表观遗传学现象之一,DNA甲基化对基因表达发挥着重要的调控功能。研究表明肿瘤细胞基因组正常DNA甲基化模式异常改变所导致的肿瘤相关基因功能异常可能参与肿瘤发生与发展。本研究通过检测食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinomas,ESCC)组织中质膜微囊蛋白-1(caveolin-1,CAV-1)基因的表达及甲基化状态,探讨CAV-1基因在食管鳞癌发生及发展中的作用。方法:分别应用甲基化特异性PCR(MSP)、RT-PCR法、免疫组织化学SP法检测食管癌及相应癌旁正常黏膜组织标本中CAV-1基因甲基化状态、mRNA及蛋白表达情况。结果:CAV-1 mRNA在食管癌和癌旁正常组织中的表达量分别为0.86±0.56和0.40±0.36,食管癌组织中CAV-1 mRNA表达量明显高于癌旁正常组织,2者差异有统计学意义(P<0.05)。CAV-1 mRNA表达与患者的淋巴结转移及肿瘤组织学分级有关(P<0.05);食管鳞癌组织中,CAV-1蛋白表达阳性率为66.7%(34/51);显著高于正常食管黏膜组织(15.7%,8/51)(P<0.01)。CAV-1蛋白表达与患者的淋巴结转移有关(P<0.05),而与肿瘤的临床分期和分化程度无关(P>0.05)。51例食管癌组织中1例发生了基因启动子区甲基化,甲基化率为2.0%(1/51);而相应癌旁正常黏膜组织中未发现有该基因的甲基化现象。食管癌组织中该基因的甲基化率与相应癌旁正常组织相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:CAV-1基因在食管鳞癌组织中mRNA及蛋白表达均明显高于癌旁正常黏膜组织,该基因的高表达对于肿瘤的发生及淋巴结的转移起到了一定的促进作用;癌及癌旁组织中该基因的表达异常均与该基因的甲基化状态无关。 展开更多
关键词 食管磷癌 甲基化 CAV-1基因 表达
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鸡贫血病毒vp1和vp2基因在毕赤酵母中的表达及产物免疫学特性的初步研究 被引量:1
8
作者 林欢 高宏雷 +4 位作者 王晓艳 高玉龙 宋修庆 李术强 王笑梅 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期495-499,共5页
利用特异性引物从pBluemCAV中PCR扩增得到鸡贫血病病毒(CAV)vp1、vp2基因,经EcoRⅠ和NotⅠ双酶切处理,纯化后,克隆至EcoRⅠ和NotⅠ双酶切处理的表达载体pPIC9K中,构建了真核表达质粒pPIC9K-VP1和pPIC9K-VP2。将pPIC9K-VP1和pPIC9K-VP2... 利用特异性引物从pBluemCAV中PCR扩增得到鸡贫血病病毒(CAV)vp1、vp2基因,经EcoRⅠ和NotⅠ双酶切处理,纯化后,克隆至EcoRⅠ和NotⅠ双酶切处理的表达载体pPIC9K中,构建了真核表达质粒pPIC9K-VP1和pPIC9K-VP2。将pPIC9K-VP1和pPIC9K-VP2转化至毕赤酵母SMD1168中,在0.5%甲醇诱导下表达CAV-VP1、CAV-VP2蛋白,运用Westernblot和Dot-ELISA鉴定表达蛋白。结果表明,重组酵母菌株表达出约54ku和24ku的目的蛋白,与针对鸡贫血病毒的单克隆抗体发生特异性反应。将表达产物乳化后免疫6周龄BALB/c小鼠,用ELISA、IFA检测免疫小鼠血清,均检测到抗体。 展开更多
关键词 鸡贫血病毒 VP1基因 VP2基因 真核表达 毕赤酵母
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HOGG1特异性锤头状核酶真核表达载体的构建及鉴定 被引量:1
9
作者 张勤 张遵真 衡正昌 《毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期111-113,共3页
目的 设计并合成人8 羟基鸟嘌呤 DNA糖苷酶(HOGG1)特异性的锤头状核酶(hammerheadribozyme)基因并构建其真核表达载体。鉴定含有核酶靶基因HOGG1cDNA保守序列的真核表达载体。方法 运用计算机软件人工设计并合成核酶基因(RZ) ,将核酶... 目的 设计并合成人8 羟基鸟嘌呤 DNA糖苷酶(HOGG1)特异性的锤头状核酶(hammerheadribozyme)基因并构建其真核表达载体。鉴定含有核酶靶基因HOGG1cDNA保守序列的真核表达载体。方法 运用计算机软件人工设计并合成核酶基因(RZ) ,将核酶基因克隆到真核表达载体pcDNA 3 1中,重组子由BamHI和EcoRI酶切,琼脂糖凝胶电泳鉴定及DNA测序证实。含有HOGG1基因cDNA保守序列的真核表达载体经BamHI和EcoRI酶切电泳鉴定。结果 RZ人工合成后与pcDNA 3 1连接,酶切电泳及DNA测序证实合成的核酶基因序列正确并已被准确克隆入pcDNA 3 1的BamHI和EcoRI位点之间,命名为pcDNA 3 1 RZ。1 3kb的HOGG1基因cDNA保守序列准确克隆于pcDNA 3 1的BamHI和EcoRI酶切位点之间,命名为pcDNA 3 1 HOGG1。结论 成功合成HOGG1特异性的锤头状核酶基因并构建了该基因的真核表达载体,以及核酶靶基因的真核表达载体。 展开更多
关键词 G1特异性 真核表达载体PCDNA3.1 鉴定 HOGG1 基因CDNA 8-羟基鸟嘌呤 琼脂糖凝胶电泳 锤头状核酶基因 DNA测序 保守序列 计算机软件 基因克隆 人工合成 基因序列 靶基因 酶切 糖苷酶 重组子 克隆人 设计 准确 位点
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鸡贫血病毒VP2基因的克隆、序列分析及表达 被引量:1
10
作者 杨雨辉 陈奖励 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期224-226,共3页
目的 :为探讨鸡贫血病毒的分子生物学特征。方法 :采用PCR方法获得鸡贫血病毒的VP2基因 ,采用平端连接将其克隆到PUC119载体上进行测序 ,采用粘端连接将其亚克隆到PET载体上并进行原核表达。结果 :发现CAV SJ1株的VP2基因共有 6 5 1个碱... 目的 :为探讨鸡贫血病毒的分子生物学特征。方法 :采用PCR方法获得鸡贫血病毒的VP2基因 ,采用平端连接将其克隆到PUC119载体上进行测序 ,采用粘端连接将其亚克隆到PET载体上并进行原核表达。结果 :发现CAV SJ1株的VP2基因共有 6 5 1个碱基 ,同国外TK5 80 3、2 6P4、Cux 1、82 2毒株的VP2基因相比分别有 6、7、8、7个碱基的差别 ,其中 3个是SJ1株特有的碱基变化。由基因序列推导出的CAV SJ1株VP2蛋白的氨基酸序列同这些毒株相比都有 4个氨基酸的差别 ,同国外这些毒株共有 7个氨基酸的差别。原核表达的融合蛋白分子量为 34kD ,占菌体蛋白含量的 10 .5 %。结论 :CAV的分子生物学的特性较稳定 。 展开更多
关键词 鸡贫血病毒 VP2基因 克隆 序列分析
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人pcDNA3.1(+)-Cav-1真核表达载体的构建及鉴定
11
作者 文秋元 朱德茂 +2 位作者 袁松英 任彩萍 王磊 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期7-10,共4页
目的构建pcDNA3.1(+)-Cav-1真核表达载体,建立稳定转染pcCav-1的6-10B细胞系(6-10B-Cav-1)。方法提取5-8F细胞总RNA,利用RT-PCR获取caveolin-1(Cav-1)开放读码框(Openreading frame,ORF)序列构建Cav-1/TA亚克隆载体,再将双酶切后的目的... 目的构建pcDNA3.1(+)-Cav-1真核表达载体,建立稳定转染pcCav-1的6-10B细胞系(6-10B-Cav-1)。方法提取5-8F细胞总RNA,利用RT-PCR获取caveolin-1(Cav-1)开放读码框(Openreading frame,ORF)序列构建Cav-1/TA亚克隆载体,再将双酶切后的目的片段连入pcDNA3.1(+)真核表达载体并转染6-10B细胞。结果 RT-PCR扩增Cav-1基因ORF序列在783 bp附近见目的条带;质粒酶切鉴定及菌落PCR鉴定分别在783 bp及346 bp附近见目的条带;转染6-10B细胞后,转染组与对照组相比,Cav-1在mRNA水平表达差异具有统计学意义(P=0.027),在蛋白质水平前者比后者高出2倍以上。结论人Cav-1重组真核表达载体pcDNA3.1(+)-Cav-1构建成功并获得稳定表达Cav-1的6-10B细胞,为进一步检测Cav-1在鼻咽癌转移过程的作用奠定基础。 展开更多
关键词 鼻咽癌 caveolin-1(Cav-1) 转移 真核表达载体 转染
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重组hPPAR-α受体表达质粒的构建 被引量:1
12
作者 唐小峦 《海峡药学》 2014年第9期144-145,共2页
目的构建人PPAR-α受体的重组表达质粒。方法从基因库获取人PPAR-α基因蛋白编码区全长序列,依照引物设计原则及编码序列上已有酶切位点设计引物并添加酶切位点。从正常肝组织细胞提取总RNA,逆转录得cDNA,PCR扩增目的片段,克隆到pcDNA3.... 目的构建人PPAR-α受体的重组表达质粒。方法从基因库获取人PPAR-α基因蛋白编码区全长序列,依照引物设计原则及编码序列上已有酶切位点设计引物并添加酶切位点。从正常肝组织细胞提取总RNA,逆转录得cDNA,PCR扩增目的片段,克隆到pcDNA3.1真核表达载体,测序鉴定重组质粒目的基因蛋白编码区全长序列及开放阅读框的正确性,命名为pcDNA-hPPAR-α。结果核酸测序结果表明所得pcDNA-hPPAR-α的蛋白编码全长序列与基因库一致,正向插入载体pcDNA3.1多克隆位点NheⅠ和KpnⅠ之间,开放阅读框正确。结论成功构建重组质粒pcDNA-hPPAR-α。 展开更多
关键词 PPAR-Α 质粒 PCDNA3.1
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pcDNA 3.1-AKR1B10真核表达载体的构建
13
作者 杨少龙 徐文涛 石斌 《现代诊断与治疗》 CAS 2012年第2期95-97,共3页
从胰腺癌PaTu8988S细胞中提取总RNA,并克隆AKR1B10基因,构建pcDNA 3.1-AKR1B10真核表达载体。转化感受态大肠杆菌DH5α细胞,提质粒,酶切及测序鉴定,pcDNA 3.1-AKR1B10真核表达载体构建成功。
关键词 AKR1B10 PCDNA3.1 真核表达载体
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人端粒酶催化亚单位(hTERT)特异性锤头状核酶真核表达载体的构建及鉴定
14
作者 樊丽 许景伟 邹宇 《齐齐哈尔医学院学报》 2008年第21期2564-2566,共3页
目的设计并合成人TERT特异性的锤头状核酶(hammerhead ribozyme)基因并构建其真核表达载体。含有核酶靶基因hTERTcDNA保守序列的T载体pMD18-T-hTERT的构建。方法运用计算机软件人工设计并合成核酶基因(RZ),将核酶基因克隆到真核表达载体... 目的设计并合成人TERT特异性的锤头状核酶(hammerhead ribozyme)基因并构建其真核表达载体。含有核酶靶基因hTERTcDNA保守序列的T载体pMD18-T-hTERT的构建。方法运用计算机软件人工设计并合成核酶基因(RZ),将核酶基因克隆到真核表达载体pcDNA 3.1(+)中,重组子由BamH I和EcoR I酶切,琼脂糖凝胶电泳鉴定及DNA测序。RT-PCR法扩增目的基因cDNA保守序列,与pMD-18进行T-A连接,重组子经菌液PCR及测序鉴定。结果RZ人工合成后与pcDNA 3.1(+)连接,酶切电泳及DNA测序证实合成的核酶基因序列正确并已被准确克隆入pcDNA 3.1(+)的BamH I和EcoR I位点之间,命名为pcDNA 3.1-RZ。220bp的hTERT基因cDNA保守序列准确克隆于pMD18-T,命名为pMD18-T-hTERT。结论成功合成hTERT特异性的锤头状核酶基因并构建了该基因的真核表达载体,以及核酶靶基因的pMD18-T-hTERT载体。 展开更多
关键词 HTERT 锤头状核酶 真核表达载体pcDNA3.1(+)
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三七根总苷对电压依赖性钙离子和钾离子通道的作用 被引量:1
15
作者 姜河海 年寅 张阿梅 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期921-927,共7页
目的探讨三七根总皂苷(RPNS)对电压依赖性钙离子和钾离子通道的作用。方法采用双电极电压钳检测RPNS 0.01,0.06,0.1,0.6,1及4 g·L^(-1)对表达在爪蟾卵母细胞的Cav1.2的作用;检测RPNS1 g·L^(-1)对Cav2.1,Cav2.2,Cav3.1,KCNH2,K... 目的探讨三七根总皂苷(RPNS)对电压依赖性钙离子和钾离子通道的作用。方法采用双电极电压钳检测RPNS 0.01,0.06,0.1,0.6,1及4 g·L^(-1)对表达在爪蟾卵母细胞的Cav1.2的作用;检测RPNS1 g·L^(-1)对Cav2.1,Cav2.2,Cav3.1,KCNH2,KCNQ1,KCNQ1/KCNE1及大电导钙激活钾通道(BK)的作用。结果双电极电压钳实验表明,RPNS对Cav1.2的抑制作用有明显的浓度效应关系,其EC50为0.048 g·L^(-1)。与细胞对照组相比,RPNS 1 g·L^(-1)对Cav1.2,Cav2.2和Cav3.1有明显的抑制作用,对其峰值电流的抑制率分别为(57.1±8.6)%,(17.2±0.7)%和(50.2±7.7)%(P<0.01);对BK通道有明显的激活作用,对其峰值电流激活率为(37.9±2.7)%(P<0.01);对Cav2.1,KCNH2,KCNQ1和KCNQ1/KCNE1通道无明显作用。结论RPNS明显抑制Cav1.2和Cav3.1,激活BK通道,但对Cav2.1,Cav2.2,KCNH2,KCNQ1及KCNQ1/KCNE1无明显作用。 展开更多
关键词 总皂苷 三七 Cav1.2 cav3.1 钾通道 爪蟾卵母细胞
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血管紧张素Ⅱ对大鼠血管平滑肌细胞T型钙通道及其信号转导通路的影响 被引量:1
16
作者 王菁卓 姚旭哲 +2 位作者 李斌 潘一龙 李晓东 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期802-805,共4页
目的研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对血管平滑肌细胞Cav3.1表达的影响及其作用机制。方法酶消化法原代培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞,应用第5代传代细胞,实验随机分为7组:对照组(不加任何药物)、AngⅡ组[加入AngⅡ(0.1μmol/L)培养24 h]、Ang... 目的研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对血管平滑肌细胞Cav3.1表达的影响及其作用机制。方法酶消化法原代培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞,应用第5代传代细胞,实验随机分为7组:对照组(不加任何药物)、AngⅡ组[加入AngⅡ(0.1μmol/L)培养24 h]、AngⅡ+氯沙坦钾组[加入氯沙坦钾(1μmol/L)培养1 h,再加入AngⅡ(0.1μmol/L)共同培养24 h]、AngⅡ+PD98059组[加入PD98059(10μmol/L)预刺激1 h,再加入AngⅡ(0.1μmol/L)共同培养24 h]、PD98059组[加入PD98059(10μmol/L)培养1 h]、AngⅡ+氯沙坦钾+PD98059组[先加入氯沙坦钾(1μmol/L),PD98059(10μmol/L)培养1 h,再加入AngⅡ(0.1μmol/L)共同培养24 h]、氯沙坦钾组[加入氯沙坦钾(1μmol/L)培养4 h]。RT-PCR、Western blot方法测定各组T型钙通道的表达。结果PCR结果显示:与对照组(1.000±0.315)比较,AngⅡ组Cav3.1表达量(17.930±0.954)明显增加(P<0.01);PD98059组、氯沙坦钾组Cav3.1表达量为0.928±0.262、0.978±0.292,与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);AngⅡ+氯沙坦钾组、AngⅡ+PD98059组、AngⅡ+氯沙坦钾+PD98059组的Cav3.1表达量分别为0.125±0.007、0.066±0.015、0.109±0.018,明显低于AngⅡ组(P<0.01)。Western blot结果显示:与对照组比较,AngⅡ+氯沙坦钾组、AngⅡ+PD98059组及AngⅡ+氯沙坦钾+PD98059组Cav3.1蛋白表达明显降低(P<0.05);而PD98059组及氯沙坦钾组Cav3.1蛋白表达与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 AngⅡ通过Ras/PKCζ/MEK/ERK1/2路径增加血管平滑肌细胞Cav3.1的表达。 展开更多
关键词 T型钙通道 cav3.1 血管平滑肌细胞 细胞增殖 血管紧张素Ⅱ
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G蛋白偶联受体对T型钙通道调节机制的研究进展 被引量:1
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作者 黄沙 黄东阳 张海林 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期1632-1635,共4页
T型钙通道组织分布广泛,并且在生理和病理情况中都发挥着非常重要的作用,如神经放电、激素分泌、疼痛、癌症等。因此,阐明T型钙通道的调节机制有重要意义。大量研究表明G蛋白偶联受体及下游多种第二信使都对T型钙通道起到一定调节作用... T型钙通道组织分布广泛,并且在生理和病理情况中都发挥着非常重要的作用,如神经放电、激素分泌、疼痛、癌症等。因此,阐明T型钙通道的调节机制有重要意义。大量研究表明G蛋白偶联受体及下游多种第二信使都对T型钙通道起到一定调节作用。该文重点总结了有关G蛋白偶联受体对T型钙通道的调节机制的研究进展。 展开更多
关键词 T型钙通道 Ca.3.1 Ca.3.2 Cav3.3 βγ亚基 G蛋白偶联受体 调节机制
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基因分析实现CAV VP_1基因在大肠杆菌中的高效表达
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作者 刘宝山 《现代畜牧兽医》 2007年第9期7-10,共4页
通过分子生物学软件DNASTAR对CAV VP1的基因分析发现,CAV VP1基因的5端非抗原区编码蛋白的密码子中存在连续的大肠杆菌稀有密码子。为了在大肠杆菌中高效表达CAV VP1,文章研究扩增了不含5’端稀有密码子的CAV VP1基因,并将其插入原核表... 通过分子生物学软件DNASTAR对CAV VP1的基因分析发现,CAV VP1基因的5端非抗原区编码蛋白的密码子中存在连续的大肠杆菌稀有密码子。为了在大肠杆菌中高效表达CAV VP1,文章研究扩增了不含5’端稀有密码子的CAV VP1基因,并将其插入原核表达载体pGEX-4T-1,构建了重组表达载体pGEX-VP1,成功进行了高效表达。电泳条带分析表明,融合蛋白的表达量在44%左右,为研究CAV VP1的抗原性提供了丰富的来源。 展开更多
关键词 CAV VP1 基因分析 高效表达
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人GRP78基因真核表达载体的构建及鉴定 被引量:1
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作者 吴琼 蔡云鹏 +1 位作者 汤海澎 魏嘉 《辽宁医学院学报》 CAS 2007年第4期26-28,共3页
目的利用PCR技术克隆人GRP78基因编码基因(约2000bp)。方法将PCR产物连接到pcDNA3.1(+)载体上,酶切鉴定后测序分析。结果序列分析表明,扩增片段与GenBank里登陆的序列同源性为100%。并以pcDNA3.1(+)表达载体为框架结构,尝试构建真核表... 目的利用PCR技术克隆人GRP78基因编码基因(约2000bp)。方法将PCR产物连接到pcDNA3.1(+)载体上,酶切鉴定后测序分析。结果序列分析表明,扩增片段与GenBank里登陆的序列同源性为100%。并以pcDNA3.1(+)表达载体为框架结构,尝试构建真核表达载体。结论测序分析结果表明序列同源性为100%。 展开更多
关键词 人GRP78基因 表达载体pcDNA3.1(+) 真核细胞
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犬传染性肝炎病毒IX基因的克隆及原核表达
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作者 杨拓 张洋 +6 位作者 孟焕 徐春瑛 袁宝 文力正 陈承祯 任文陟 陈健 《中国农学通报》 CSCD 北大核心 2010年第22期12-15,共4页
通过对犬传染性肝炎病毒(CAV-I)基因组的提取,PCR扩增获得了大小为1109bpCAV-I病毒结构IX基因片段,成功地将IX基因克隆至载体pMD-18T中,构建了pIX原核表达载体pGEX-4T1-IX,将重组质粒pGEX-4T1-IX转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,... 通过对犬传染性肝炎病毒(CAV-I)基因组的提取,PCR扩增获得了大小为1109bpCAV-I病毒结构IX基因片段,成功地将IX基因克隆至载体pMD-18T中,构建了pIX原核表达载体pGEX-4T1-IX,将重组质粒pGEX-4T1-IX转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,并实现了IX基因在该菌中的高效表达。对表达产物进行了Westernblot检测,分析结果表明表达蛋白能与抗CAV-I阳性血清发生特异性的抗原-抗体反应,为CAV-I的血清学诊断和免疫监测提供大量优质的抗原奠定了基础。 展开更多
关键词 犬传染性肝炎病毒 IX基因 IX蛋白 原核表达
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