很多未知功能结构域DUF(domain of unknown function)在植物生长发育中扮演着重要的角色,本研究以含有DUF1005结构域的基因为研究对象,通过CRISPR/Cas系统对拟南芥中AT1G10020进行基因编辑,在AT1G10020的第二外显子上设计sg RNA靶点序列...很多未知功能结构域DUF(domain of unknown function)在植物生长发育中扮演着重要的角色,本研究以含有DUF1005结构域的基因为研究对象,通过CRISPR/Cas系统对拟南芥中AT1G10020进行基因编辑,在AT1G10020的第二外显子上设计sg RNA靶点序列,构建重组质粒,获得CRISPR/Cas9-AT1G10020重组质粒,并采用农杆菌介导的花序浸染法转化至野生型拟南芥。结果分析发现,经抗性筛选和测序鉴定,共筛选获得6种不同的编辑类型,包括插入、缺失等;且拟南芥幼苗时期的根长发育表型观察显示,基因编辑株系与野生型比较,具有更短的初生根和更少的侧根。本研究获得了AT1G10020编辑纯合突变体,并为DUF1005的生物学功能的研究提供基础,也有助于对未知功能DUF新基因的挖掘和阐释。展开更多
目的建立氟化物核糖开关转录反应体系以及成簇的规律间隔的短回文重复序列/Cas12a蛋白(clustered regularly interspaced short palindromic repeats-associated protein 12a,CRISPR/Cas12a)检测氟含量的方法。方法本研究利用氟化物核...目的建立氟化物核糖开关转录反应体系以及成簇的规律间隔的短回文重复序列/Cas12a蛋白(clustered regularly interspaced short palindromic repeats-associated protein 12a,CRISPR/Cas12a)检测氟含量的方法。方法本研究利用氟化物核糖开关在有氟或无氟下转录全长或非全长RNA并与CRISPR/Cas12a系统相结合,通过荧光法读取实验结果。对优化的CRISPR/Cas12a检测体系进行选择性和干扰性分析实验,并用于南极磷虾氟含量的检测。结果本研究成功建立了基于氟化物核糖开关转录反应体系CRISPR/Cas12a荧光检测方法,可在1.5 h内完成对样品的检测,检测结果与国家标准方法氟离子选择电极法基本保持一致。结论本研究建立的基于氟化物核糖开关转录反应和CRISPR/Cas12a的南极磷虾中氟含量检测方法具有高特异性和准确性,在氟含量的检测方面具有应用价值。展开更多
文摘很多未知功能结构域DUF(domain of unknown function)在植物生长发育中扮演着重要的角色,本研究以含有DUF1005结构域的基因为研究对象,通过CRISPR/Cas系统对拟南芥中AT1G10020进行基因编辑,在AT1G10020的第二外显子上设计sg RNA靶点序列,构建重组质粒,获得CRISPR/Cas9-AT1G10020重组质粒,并采用农杆菌介导的花序浸染法转化至野生型拟南芥。结果分析发现,经抗性筛选和测序鉴定,共筛选获得6种不同的编辑类型,包括插入、缺失等;且拟南芥幼苗时期的根长发育表型观察显示,基因编辑株系与野生型比较,具有更短的初生根和更少的侧根。本研究获得了AT1G10020编辑纯合突变体,并为DUF1005的生物学功能的研究提供基础,也有助于对未知功能DUF新基因的挖掘和阐释。
文摘目的建立氟化物核糖开关转录反应体系以及成簇的规律间隔的短回文重复序列/Cas12a蛋白(clustered regularly interspaced short palindromic repeats-associated protein 12a,CRISPR/Cas12a)检测氟含量的方法。方法本研究利用氟化物核糖开关在有氟或无氟下转录全长或非全长RNA并与CRISPR/Cas12a系统相结合,通过荧光法读取实验结果。对优化的CRISPR/Cas12a检测体系进行选择性和干扰性分析实验,并用于南极磷虾氟含量的检测。结果本研究成功建立了基于氟化物核糖开关转录反应体系CRISPR/Cas12a荧光检测方法,可在1.5 h内完成对样品的检测,检测结果与国家标准方法氟离子选择电极法基本保持一致。结论本研究建立的基于氟化物核糖开关转录反应和CRISPR/Cas12a的南极磷虾中氟含量检测方法具有高特异性和准确性,在氟含量的检测方面具有应用价值。
