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重组C因子法在重组新型冠状病毒疫苗(CHO细胞)细菌内毒素检测中的应用
1
作者 刘骅 钱宁 +2 位作者 付莉 常艳 丁震 《中国生物制品学杂志》 2026年第1期101-107,共7页
目的探讨重组C因子(recombinant factor C,rFC)法用于重组新型冠状病毒疫苗(CHO细胞)中细菌内毒素定量检测的可行性,为该方法的应用提供更多的依据。方法使用rFC法试剂建立细菌内毒素标准曲线,通过干扰预试验确定稀释倍数,测定供试品溶... 目的探讨重组C因子(recombinant factor C,rFC)法用于重组新型冠状病毒疫苗(CHO细胞)中细菌内毒素定量检测的可行性,为该方法的应用提供更多的依据。方法使用rFC法试剂建立细菌内毒素标准曲线,通过干扰预试验确定稀释倍数,测定供试品溶液中加标内毒素的回收率进行干扰试验,完成供试品中细菌内毒素含量的定量检测。考查铝佐剂含量对内毒素检测的影响,并与动态显色法及现行标准方法凝胶法试验结果进行比对。结果标准曲线的线性范围为0.05~50 EU/mL,供试品在稀释50、100及200倍时均对反应无干扰作用,细菌内毒素回收率在50%~200%范围内。3批供试品的内毒素定量检测结果均符合规定,检测结果与凝胶法一致。铝佐剂含量与rFC法检测内毒素回收率的Correl函数相关系数为-0.8283,呈极强负相关。结论rFC法可用于重组新型冠状病毒疫苗(CHO细胞)细菌内毒素的定量检测,结果准确,精密度高,且减少和杜绝使用鲎资源,符合世界动物福利3R原则。 展开更多
关键词 重组新型冠状病毒疫苗(cho细胞) 重组C因子法 内毒素 荧光定量检测 鲎试剂
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大规模人群接种重组新型冠状病毒蛋白疫苗(CHO细胞)的安全性研究
2
作者 颜洁 高立冬 +9 位作者 张淑君 杨彦华 汪春梅 赖玲令 王玉芳 韩啸 陈行 聂勇 祁平平 方明礼 《实用预防医学》 2025年第9期1036-1039,1045,共5页
目的评价接种重组新型冠状病毒蛋白疫苗(CHO细胞)后的安全性。方法于2022年3月起,在湖南省招募符合标准的≥18岁人群为研究对象。共纳入受试者51344名,接种1-3剂次及加强针重组新型冠状病毒蛋白疫苗(CHO细胞)后,全程采取被动观察,并主... 目的评价接种重组新型冠状病毒蛋白疫苗(CHO细胞)后的安全性。方法于2022年3月起,在湖南省招募符合标准的≥18岁人群为研究对象。共纳入受试者51344名,接种1-3剂次及加强针重组新型冠状病毒蛋白疫苗(CHO细胞)后,全程采取被动观察,并主动观察收集每剂接种后前7 d、第30 d以及末剂接种后第3、6、9、12个月的不良事件,分析不良反应发生率。结果接种重组新型冠状病毒蛋白疫苗(CHO细胞)后不良事件总发生率分别为9.39%(4823/51344),与研究相关不良反应发生率8.81%(4525/51344)。女性不良反应发生率高于男性(χ^(2)=233.649,P<0.05),51岁及以上人群不良反应发生率低于50岁及以下人群(χ^(2)=63.958,P<0.05)。征集性不良反应发生率8.54%,其中局部、全身不良反应发生率分别为7.43%、1.11%,非征集性不良反应发生率0.27%。不良反应主要为局部反应,包括疼痛、肿胀、瘙痒;全身不良反应以疲劳/乏力、头痛、肌肉痛为主;非征集不良反应以头晕为主。不良反应严重程度以1、2级为主,3级不良反应以疼痛(18例)、发热(12例)为主,无疫苗相关的严重不良事件,无特别关注不良事件。结论重组新型冠状病毒蛋白疫苗(CHO细胞)接种后安全性良好。 展开更多
关键词 重组新型冠状病毒蛋白疫苗(cho细胞) 不良事件 安全性
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CHO细胞表达基因工程抗体的研究进展
3
作者 邓思棋 朱元源 +5 位作者 徐璐 李芳韬 赵俊杰 刘业兵 邬静 邹兴启 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第4期520-527,共8页
基因工程抗体为肿瘤、自身免疫性疾病和感染性疾病等提供了新的治疗途径,具有重要的临床使用价值。该抗体属第三代抗体,通过抗体基因改造、DNA重组和蛋白表达技术,在合适的宿主细胞中转录和翻译而进行生产。它具有可塑性强、制备周期短... 基因工程抗体为肿瘤、自身免疫性疾病和感染性疾病等提供了新的治疗途径,具有重要的临床使用价值。该抗体属第三代抗体,通过抗体基因改造、DNA重组和蛋白表达技术,在合适的宿主细胞中转录和翻译而进行生产。它具有可塑性强、制备周期短、操作简单、生产成本低廉等优点。目前,大多数批准上市的治疗性抗体是由中国仓鼠卵巢细胞(CHO)生产的,它能提供复杂的翻译后修饰,使抗体药物具备活性和稳定性。在开发抗体药物的过程中,现有的生产平台仍然面临抗体产量低、质量和稳定性不一致、生产成本高等挑战。本文将综述基因工程抗体的类型、CHO细胞以及重组表达载体的设计策略等,旨在优化表达系统,为提高抗体表达量和降低生产成本提供参考,以满足未来日益增长的生物医药需求。 展开更多
关键词 基因工程抗体 cho细胞 重组表达载体 生产力
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CHO细胞培养过程中柠檬酸积累特性研究
4
作者 何永梅 张欣然 +2 位作者 赵亮 谭文松 叶倩 《中国生物工程杂志》 北大核心 2025年第4期15-24,共10页
目的:探究中国仓鼠卵巢细胞(Chinese Hamster Ovary cell,CHO cell)流加培养过程中柠檬酸积累现象及特征,为认识和调控柠檬酸积累奠定基础。方法:以CHO细胞为研究对象,采用实验室前期建立的流加培养工艺,考察流加培养过程中柠檬酸积累特... 目的:探究中国仓鼠卵巢细胞(Chinese Hamster Ovary cell,CHO cell)流加培养过程中柠檬酸积累现象及特征,为认识和调控柠檬酸积累奠定基础。方法:以CHO细胞为研究对象,采用实验室前期建立的流加培养工艺,考察流加培养过程中柠檬酸积累特征,探究培养工艺参数(温度和葡萄糖浓度)对柠檬酸积累的影响,建立关键代谢参数[平均葡萄糖比消耗速率(Q_(Gluc))、乳酸比生成速率(q_(Lac))、抗体比生成速率(q_(p))和三羧酸循环(tricarboxylic acid cycle,TCA cycle)的总碳流量]与柠檬酸积累的相关性。结果:温度影响CHO细胞流加培养过程中柠檬酸积累,较低温度(31℃)条件下柠檬酸比生成速率显著增大;葡萄糖浓度对柠檬酸积累过程的影响有限,葡萄糖浓度控制在2~55 mmol/L的范围内不影响柠檬酸积累过程;通过考察多批不同培养工艺参数条件下的柠檬酸积累过程,发现柠檬酸比生成速率与葡萄糖比消耗速率、抗体比生成速率、TCA循环总碳流量呈正相关,与乳酸的比生成速率呈负相关。结论:柠檬酸在细胞外积累可能反映营养物质供给充足,细胞TCA循环代谢旺盛,细胞抗体生产能力增强。 展开更多
关键词 cho细胞 TCA循环 柠檬酸 温度 葡萄糖浓度 抗体生产
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重组新型冠状病毒蛋白疫苗(CHO细胞)生物学活性参考品的研制
5
作者 曹莎莎 何鹏 +8 位作者 王先翔 刘晓雅 韦芬 李静静 刘宇 王婷婷 王辰飞 王佳霁 胡忠玉 《药物分析杂志》 北大核心 2025年第10期1756-1764,共9页
目的:研制重组新型冠状病毒蛋白疫苗(CHO细胞)生物学活性参考品,用于其体外相对效力及小鼠体内效力评价。方法:选取检定合格的重组新型冠状病毒蛋白疫苗(CHO细胞)原液,经标定蛋白质含量后,加入佐剂制备的疫苗作为候选参考品;候选参考品... 目的:研制重组新型冠状病毒蛋白疫苗(CHO细胞)生物学活性参考品,用于其体外相对效力及小鼠体内效力评价。方法:选取检定合格的重组新型冠状病毒蛋白疫苗(CHO细胞)原液,经标定蛋白质含量后,加入佐剂制备的疫苗作为候选参考品;候选参考品经成品检验合格后,进行均一性检查;经5次独立试验使用Ⅲ期临床批疫苗制剂对候选参考品进行体外相对效力及小鼠体内效力检项标定;将候选参考品置(37±2)℃、(5±3)℃考察,分析其稳定性;分别应用Ⅲ期临床批疫苗制剂和候选参考品对6批待测疫苗制剂进行体外相对效力和小鼠体内效力适用性测试。结果:重组新型冠状病毒蛋白疫苗(CHO细胞)生物学活性参考品成品检定项目均符合规定;装量不低于标示量且精确度在±1%以内,粒径大小与分布D10、D50、D90的RSD分别为0.45%、0.39%、0.54%,抗原含量RSD为2.7%;Ⅲ期临床批疫苗制剂标定候选参考品,体外相对效力和小鼠体内效力均不低于0.5,且几何均值均为1.0,体外相对效力和小鼠体内效力几何变异系数(GCV)分别为8.9%、31%;候选参考品在(37±2)℃放置28 d、(5±3)℃放置36个月,体外相对效力及小鼠体内效力无明显上升或下降趋势,表明候选参考品稳定性较好;6批待测疫苗制剂体外相对效力和小鼠体内效力检测结果分布范围分别在0.9~1.0和0.7~1.4,表明候选参考品与原参考品一致性较好。结论:重组新型冠状病毒蛋白疫苗(CHO细胞)生物学活性参考品,可用于同质重组新型冠状病毒蛋白疫苗(CHO细胞)体外相对效力及小鼠体内效力评价。 展开更多
关键词 重组新型冠状病毒蛋白疫苗(cho细胞) 小鼠体内效力 体外相对效力 生物学活性参考品 抗原含量 稳定性考察
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CHO-Reg3a细胞株的构建及抑菌活性检测
6
作者 代爽 秦达 +6 位作者 吴书音 王延涛 李国军 汪登奎 戴秀秀 余丽芸 侯喜林 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2025年第7期115-121,共7页
为了利用中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary, CHO)细胞稳定表达再生胰岛衍生蛋白3a(regenerating islet-derived protein 3a, Reg3a),并获得具有抑菌活性的抑菌蛋白,试验先通过PCR扩增Reg3a基因,构建真核表达载体pcDNA3.1-Reg3a-EGFP... 为了利用中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary, CHO)细胞稳定表达再生胰岛衍生蛋白3a(regenerating islet-derived protein 3a, Reg3a),并获得具有抑菌活性的抑菌蛋白,试验先通过PCR扩增Reg3a基因,构建真核表达载体pcDNA3.1-Reg3a-EGFP后转染至对数生长期CHO细胞内,通过遗传霉素(G418)筛选阳性细胞,并采用有限稀释法进行单克隆细胞株筛选;随后利用Western-blot对细胞表达产物进行鉴定;最后使用纯化后的蛋白进一步进行抑菌活性试验。结果表明:重核真核表达载体pcDNA3.1-Reg3a-EGFP构建成功,连续传代20次仍正常表达。Western-blot鉴定显示在17.64 ku处有Reg3a特异性条带。纯化的Reg3a蛋白(0.8 mg/mL)可明显抑制产肠毒素性大肠杆菌C83912(ETEC-K99)、产肠毒素性大肠杆菌C83902(ETEC-K88)、产肠毒素性大肠杆菌C83916(ETEC-987p)及金黄色葡萄球菌,且对金黄色葡萄球菌的抑制效果更好。说明稳定表达Reg3a的CHO细胞株构建成功,且表达的Reg3a具有抑菌活性。 展开更多
关键词 Reg3a cho细胞 真核表达 抑菌活性 大肠杆菌 金黄色葡萄球菌
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UPLC法测定CHO细胞培养液中17种氨基酸的含量及其变化规律
7
作者 周杰 蔡俊 《化学与生物工程》 北大核心 2025年第4期64-68,共5页
采用超高效液相色谱(UPLC)法对CHO细胞培养液中17种氨基酸进行定量分析。结果表明,17种氨基酸色谱分离度均大于1.5,半胱氨酸在2~20μg·mL^(-1)浓度范围内相关系数R^(2)为0.9956,其他16种氨基酸在0.1~20μg·mL^(-1)浓度范围内... 采用超高效液相色谱(UPLC)法对CHO细胞培养液中17种氨基酸进行定量分析。结果表明,17种氨基酸色谱分离度均大于1.5,半胱氨酸在2~20μg·mL^(-1)浓度范围内相关系数R^(2)为0.9956,其他16种氨基酸在0.1~20μg·mL^(-1)浓度范围内相关系数R^(2)均不低于0.9987;方法检出限为0.02~1μg·mL^(-1),定量限为0.1~2μg·mL^(-1);精密度、重复性和稳定性相对标准偏差(RSD)均小于4%,适用于CHO细胞培养液中氨基酸的定量分析。根据CHO细胞培养液中氨基酸的含量变化,可推断酪氨酸、半胱氨酸可能为细胞生长的营养限制性成分,对CHO细胞基础培养基或补料培养基中氨基酸种类及含量的调控具有一定的指导意义。 展开更多
关键词 超高效液相色谱(UPLC) 氨基酸 cho细胞培养液
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CHO细胞基因组内稳定表达位点NW_003624203.1的鉴定
8
作者 谢润锋 朱梦娟 +2 位作者 石宇 陈东锋 徐庆刚 《四川动物》 北大核心 2025年第4期384-394,共11页
通过慢病毒感染CHO-K1细胞,以随机整合方法将ZsGreen1报告基因整合到CHO-K1基因组。经过连续多代的筛选,获得稳定表达ZsGreen1蛋白的重组CHO-K1细胞株。利用TAIL-PCR技术分离ZsGreen1报告基因在CHO-K1基因组内的整合位点,并利用CRISPR/C... 通过慢病毒感染CHO-K1细胞,以随机整合方法将ZsGreen1报告基因整合到CHO-K1基因组。经过连续多代的筛选,获得稳定表达ZsGreen1蛋白的重组CHO-K1细胞株。利用TAIL-PCR技术分离ZsGreen1报告基因在CHO-K1基因组内的整合位点,并利用CRISPR/Cas9技术和Bxb1整合酶系统在该位点定点整合了橙色荧光蛋白mOrange2基因和抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体基因,以验证该位点稳定表达外源蛋白的能力。结果表明,分离的稳定表达位点在CHO-K1细胞基因组NW_003624203.1上,位于616 bp处。定点整合构建的重组细胞在连续60代无血清悬浮培养过程中,能够稳定表达橙色荧光蛋白,并能稳定分泌表达单克隆抗体,培养上清中单克隆抗体含量可达14.9~21.6 mg·L-1。证实NW_003624203.1位点是CHO细胞基因组内的稳定表达位点,为使用位点特异性整合技术构建重组CHO细胞株提供了一种可行的方法。 展开更多
关键词 中国仓鼠卵巢(cho) 稳定表达位点 位点特异性整合 CRISPR/Cas9 Bxb1整合酶
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B-Lynch缝合术与Cho四边形缝合术治疗宫缩乏力性产后出血 疗效 比较 被引量：1
9
作者 吴珊珊 杨晓杰 田雪 《新乡医学院学报》 2025年第6期503-507,512,共6页
目的比较B-Lynch缝合术与Cho四边形缝合术治疗宫缩乏力性产后出血的疗效。方法选择2020年4月至2023年4月焦作市妇幼保健院收治的285例分娩伴宫缩乏力性产后出血患者为研究对象。根据手术方案将患者分为B-Lynch组(n=142)和Cho组(n=143),... 目的比较B-Lynch缝合术与Cho四边形缝合术治疗宫缩乏力性产后出血的疗效。方法选择2020年4月至2023年4月焦作市妇幼保健院收治的285例分娩伴宫缩乏力性产后出血患者为研究对象。根据手术方案将患者分为B-Lynch组(n=142)和Cho组(n=143),Cho组患者采用Cho四边形缝合术治疗,B-Lynch组患者采用B-Lynch缝合术治疗。记录2组患者术中、术后2 h内、术后2~24 h出血量以及手术时间。分别于分娩前、术后12 h,采用全自动凝血分析仪检测凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT)以及纤维蛋白原(FIB)水平。分娩前、术后42 d,采用放射免疫分析法检测血清黄体生成素(LH)、促卵泡激素(FSH)、雌二醇(E 2)水平。记录术后恶露排尽、月经恢复时间。术后6、12个月,采用彩色多普勒超声检测双侧子宫动脉收缩期峰值与舒张末期血流速度比值(S/D)、子宫动脉阻力指数(RI)。观察2组患者产褥感染、宫腔粘连、盆腔炎症等并发症发生情况。结果Cho组患者术中出血量、术后2 h内出血量以及术后2~24 h出血量均显著低于B-Lynch组(P<0.05)。2组患者手术时间、住院时间比较差异无统计学意义(P>0.05)。分娩前2组患者PT、APTT、TT、FIB水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。术后12 h,2组患者PT、APTT、TT显著长于分娩前,2组患者FIB水平显著低于分娩前(P<0.05);术后12 h,Cho组患者PT、APTT、TT显著短于B-Lynch组,FIB水平显著高于B-Lynch组(P<0.05)。Cho组患者恶露排尽时间、月经恢复时间显著长于B-Lynch组(P<0.05)。术后6、12个月,2组患者双侧子宫动脉S/D、RI比较差异无统计学意义(P>0.05)。分娩前、术后42 d,2组患者LH、FSH以及E 2水平比较差异无统计学意义(P>0.05);术后42 d,2组患者LH、FSH及E 2水平显著高于分娩前(P<0.05)。Cho组患者并发症发生率为3.50%(5/143),B-Lynch组并发症发生率为1.41%(2/142),2组患者并发症发生率比较差异无统计学意义(χ^(2)=1.339,P=0.247)。结论相较于B-Lynch缝合术,Cho四边形缝合术治疗宫缩乏力性产后出血具有更好的止血效果,有助于纠正患者凝血功能,但会延长恶露排尽、月经恢复时间。 展开更多
关键词 宫缩乏力性产后出血 B-LYNCH缝合术 cho四边形缝合术 止血效果 凝血功能
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基于DOE的重组CHO细胞培养工艺优化
10
作者 张雅婷 王逸如 +2 位作者 焦静雨 高栋 王海彬 《工业微生物》 2025年第3期170-172,共3页
本研究以公司自主构建的CHO-K1重组细胞株为对象,在3 L生物反应器中进行基础及补料培养基的筛选工作。应用Mintab19对降温温度、降温时间、接种密度三个因子进行全析因实验设计,同时对补料策略(补料时间及补料量)进行补充试验,然后以蛋... 本研究以公司自主构建的CHO-K1重组细胞株为对象,在3 L生物反应器中进行基础及补料培养基的筛选工作。应用Mintab19对降温温度、降温时间、接种密度三个因子进行全析因实验设计,同时对补料策略(补料时间及补料量)进行补充试验,然后以蛋白表达量为响应值进行模型分析,结合细胞生长曲线得到最优工艺参数,并通过3 L反应器进行工艺放大与验证。筛选后最优基础及补料培养基为:CD1005、CD1105a、CD1105b;筛选后最优工艺:接种密度为1.5×10^(6)cells/mL,培养温度为37℃→35℃,降温时间为第4天,补料策略为第3、5、7、9、11、13天分别流加5%的补料培养基a和0.5%的补料培养基b。优化后蛋白表达量达5.16 g/L,较原工艺增长19%,细胞比生产速率较原工艺增长17%。本研究显著提高了细胞的蛋白表达量和比生产速率,为后续进一步扩大生产奠定了基础。 展开更多
关键词 cho细胞 实验设计(DOE) 优化 工艺放大
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重组新型冠状病毒蛋白疫苗(CHO细胞)效力检测的不确定度分析
11
作者 刘炬 张文华 +1 位作者 李洋 倪明 《解放军药学学报》 2025年第1期62-68,共7页
目的分析重组新型冠状病毒蛋白疫苗(CHO细胞)效力检测的不确定度,寻找主要的不确定度影响因素,为进一步提高相关检测工作的质量提供参考。方法分别采用待测疫苗和疫苗参比品免疫小鼠,14 d后取血清,采用间接酶联免疫分析测定各血清的抗... 目的分析重组新型冠状病毒蛋白疫苗(CHO细胞)效力检测的不确定度,寻找主要的不确定度影响因素,为进一步提高相关检测工作的质量提供参考。方法分别采用待测疫苗和疫苗参比品免疫小鼠,14 d后取血清,采用间接酶联免疫分析测定各血清的抗体滴度。以待测疫苗和疫苗参比品滴度几何平均值的比值作为待测疫苗的效力检测结果。根据检测方法,进行不确定度来源分析,分别量化各不确定度分量,合成后得到重组新型冠状病毒蛋白疫苗(CHO细胞)效力检测的不确定度。结果通过对不确定度分量的分析和量化得出标准不确定度为0.5,不确定度最大的影响因素是实验动物的个体差异。结论通过实验动物体内试验进行效力检测,通常具有较大不确定度,需要谨慎评估方法和制定限值,以实现对相应药品质量的正确评价,开发体外效力检测替代方法也是提高检测质量的可靠途径。 展开更多
关键词 重组新型冠状病毒蛋白疫苗 cho细胞 疫苗效力检测 不确定度
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CHO跃迁:从普通到卓越
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作者 吕守升 《企业管理》 2025年第2期42-45,共4页
领英统计数据显示,在中国人力资源从业者中,仅有0.39%的员工能够最终升任首席人力资源官(CHO)。成为CHO已经很难,在这个位置上做出卓越成就更为不易。为了给从业者职业发展提供路径参考,同时给企业提供人才竞争和选拔的科学依据,2022年... 领英统计数据显示,在中国人力资源从业者中,仅有0.39%的员工能够最终升任首席人力资源官(CHO)。成为CHO已经很难,在这个位置上做出卓越成就更为不易。为了给从业者职业发展提供路径参考,同时给企业提供人才竞争和选拔的科学依据,2022年笔者发起“中国CHO研究(CCS)”项目,以深入探索卓越CHO的核心职能和高价值场景。 展开更多
关键词 首席人力资源官 cho 5E模型 高管团队 战略落地 组织变革
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卡前列素氨丁三醇联合改良Cho缝合术对治疗剖宫产产后出血的临床疗效
13
作者 娄春燕 《中国冶金工业医学杂志》 2025年第4期456-457,共2页
目的 本文探讨卡前列素氨丁三醇联合改良Cho缝合术对治疗剖宫产产后出血的临床疗效。方法 选取2022年6月—2023年6月贵阳市修文县百信医院收治的62例剖宫产产后出血产妇,依据随机数字表法将其分为对照组和观察组,每组均为31例。对照组... 目的 本文探讨卡前列素氨丁三醇联合改良Cho缝合术对治疗剖宫产产后出血的临床疗效。方法 选取2022年6月—2023年6月贵阳市修文县百信医院收治的62例剖宫产产后出血产妇,依据随机数字表法将其分为对照组和观察组,每组均为31例。对照组采用卡前列素氨丁三醇注射液治疗,观察组在对照组基础上联合改良Cho缝合术治疗,比较两组临床疗效等指标差异。结果 观察组临床总有效率高于对照组,止血时间、术后2、12 h出血量均少于对照组(均P<0.05)。结论 对于剖宫产产后出血产妇而言,在卡前列素氨丁三醇注射液治疗基础上增加改良Cho缝合术治疗有利于提高临床疗效,减少产后不同时间段的出血量,缩短止血时间。 展开更多
关键词 卡前列素氨丁三醇注射液 剖宫产 产后出血 改良cho缝合术 止血时间
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CHO-K1细胞的fut8及bax基因敲除及其细胞生长特性研究
14
作者 郭彤 金紫洋 吴光昊 《上海医药》 2025年第7期86-90,共5页
目的与方法 :本研究采用CRISPR-Cas9基因编辑方法,对CHO-K1细胞进行岩藻糖基转移酶基因fut8和细胞凋亡相关基因bax改构。结果 :对敲除fut8及bax基因的CHO-K1细胞通过单细胞培养在基因组水平进行鉴定,筛选获得CHO-K1(fut8^(-/-))及CHO-K1... 目的与方法 :本研究采用CRISPR-Cas9基因编辑方法,对CHO-K1细胞进行岩藻糖基转移酶基因fut8和细胞凋亡相关基因bax改构。结果 :对敲除fut8及bax基因的CHO-K1细胞通过单细胞培养在基因组水平进行鉴定,筛选获得CHO-K1(fut8^(-/-))及CHO-K1(bax^(-/-))双等位基因位点敲除的单细胞株。结论 :与野生型CHO-K1细胞相比,改构后的单细胞株生长曲线表明,CHO-K1(bax^(-/-))单细胞株仍可维持较高的活细胞密度,CHO-K1(fut8^(-/-))及CHO-K1(bax^(-/-))的倍增时间低于野生型细胞,可进一步探索作为工程宿主细胞高效表达外源抗体基因。 展开更多
关键词 cho-K1细胞 宿主细胞改造 岩藻糖基转移酶基因fut8 促调亡基因bax CRISPR-Cas9 基因敲除
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阻断细胞凋亡及乳酸代谢途径对CHO细胞鲁棒性及外源蛋白表达的影响 被引量：1
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作者 陆红 张彤阳 +4 位作者 吕若飞 侯卜琳 范婷文 杨怀义 那杰 《生物工程学报》 北大核心 2025年第8期3098-3109,共12页
中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cell,CHO cell)是最具代表性的哺乳动物细胞蛋白表达系统,被广泛应用于重组蛋白、疫苗等生物制药领域。然而,由于其易受环境因子、细胞凋亡、代谢抑制物等影响,鲁棒性差,细胞总活细胞密度和单... 中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cell,CHO cell)是最具代表性的哺乳动物细胞蛋白表达系统,被广泛应用于重组蛋白、疫苗等生物制药领域。然而,由于其易受环境因子、细胞凋亡、代谢抑制物等影响,鲁棒性差,细胞总活细胞密度和单位细胞生产率在很大程度上受到了限制。为提高其鲁棒性及外源蛋白表达效能,本研究利用CRISPR/Cas9技术,通过敲除细胞凋亡基因Bax和Bak及乳酸脱氢酶基因LDHa,阻断了细胞凋亡及乳酸代谢途径。细胞凋亡及单细胞活力检测结果表明,基因敲除的细胞系Bax^(–/–)、Bax-Bak^(–/–)、LDHa-Bax-Bak^(–/–)与野生型细胞CHO-K1相比,其凋亡细胞数量分别减少了22.51%、37.73%、64.12%,抗凋亡能力明显提升;利用星形孢菌素(staurosporine,STS)处理后,其单细胞活力分别提升了30.8%、22.0%、41.1%;利用嘌呤霉素(puromycin,Puro)处理后,其单细胞活力分别提升了26.7%、30.7%、38.8%。为进一步探讨阻断了细胞凋亡及乳酸代谢途径后所获细胞的生产性能,本研究在上述细胞中进行了人组织纤溶酶原激活剂(tissue plasminogen activator,tPA)的瞬时表达,结果表明,Bax^(–/–)、Bax-Bak^(–/–)、LDHa-Bax-Bak^(–/–)胞外分泌tPA较野生型细胞CHO-K1分别提高了11.12%、46.18%、63.13%;胞内tPA表达分别提高35.65%、130.00%、192.15%。综上所述,相比于阻断凋亡途径,同时阻断凋亡和乳酸代谢途径,能更好地提高细胞鲁棒性和其生产性能。本研究构建的细胞系有望成为药用多肽等蛋白质药物的递送载体,辅助多种疾病的治疗。 展开更多
关键词 BAX基因 BAK基因 LDHa基因 中国仓鼠卵巢细胞细胞活力 人组织纤溶酶原激活剂
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定点整合β1,4半乳糖基转移酶、α-2,6-唾液酸转移酶1和N-乙酰氨基糖基转移酶Ⅲ的CHO工程细胞株构建
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作者 李仙红 贾润清 +4 位作者 王友亮 漫未玲 朱天昊 阎新龙 林艳丽 《中国生物化学与分子生物学报》 北大核心 2025年第4期576-585,共10页
对哺乳动物细胞CHO进行糖基化改造,用于生产蛋白质类药物。首先测定CHO细胞Rosa26位点的基因组序列,设计gRNA序列,利用规律成簇的间隔短回文重复(CRISPR/Cas9)技术,将着陆架整合到CHO细胞的Rosa26位点处。通过重叠PCR及无缝连接技术构建... 对哺乳动物细胞CHO进行糖基化改造,用于生产蛋白质类药物。首先测定CHO细胞Rosa26位点的基因组序列,设计gRNA序列,利用规律成簇的间隔短回文重复(CRISPR/Cas9)技术,将着陆架整合到CHO细胞的Rosa26位点处。通过重叠PCR及无缝连接技术构建3个糖基转移酶共同表达的打靶载体,分别是β1,4半乳糖基转移酶(B4GALT1)、α-2,6-唾液酸转移酶1(ST6GAL1)和N-乙酰氨基糖基转移酶Ⅲ(GnTⅢ),并利用重组酶介导的盒式交换技术(recombinase-mediated cassette exchange,RMCE)将3个糖基转基因酶基因定点整合到CHO Rosa26位点中。PCR证实了3个糖基转移酶成功定点整合Rosa26位点,qRT-PCR证实3个糖基转移酶的mRNA表达水平均在50000倍以上,蛋白质免疫印迹法证实3个糖基转移酶的蛋白质表达水平均在4倍以上(P<0.001)。成功构建了Rosa26位点定点整合3个糖基转移酶的CHO工程细胞株。 展开更多
关键词 β-1 4半乳糖基转移酶 α-2 6-唾液酸转移酶1 N-乙酰氨基糖基转移酶Ⅲ 规律成簇的间隔短回文重复技术 重组酶介导的盒式交换技术 中国仓鼠卵巢细胞
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磁珠分离结合定量PCR法检测单克隆抗体产品中CHO细胞DNA残留量 被引量：14
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作者 王兰 李萌 +2 位作者 郭玮 于传飞 高凯 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2014年第4期555-558,共4页
目的 利用磁珠分离法结合定量PCR技术，建立单克隆抗体产品中CHO细胞DNA残留量的检测方法，并进行验证及初步应用。方法通过磁珠分离法提取样品中的残留DNA，再利用Taqman探针法对样品和标准DNA进行定量PCR测定，根据标准曲线对样品中的... 目的 利用磁珠分离法结合定量PCR技术，建立单克隆抗体产品中CHO细胞DNA残留量的检测方法，并进行验证及初步应用。方法通过磁珠分离法提取样品中的残留DNA，再利用Taqman探针法对样品和标准DNA进行定量PCR测定，根据标准曲线对样品中的DNA残留量进行分析。对建立的方法进行种属特异性、准确性及精密性验证，并对5个厂家15批单克隆抗体类产品中的残留DNA进行测定。结果该方法检测CHO细胞DNA残留的最低准确定量浓度可达1×10^-3pg／μl，DNA含量在1×10^-3～10^2 pg／μl范围内曲线线性良好，标准曲线的相关系数为0.994；该方法能特异性地检测CHO细胞DNA，对其他种属的DNA无扩增反应；该方法检测不同DNA加标量样品的DNA回收率相近，均值均在90％以上，3次测定的相对标准偏差均小于20％，92.6％加标样品的DNA回收率在70％～130％之间；该方法检测15批单克隆抗体类产品的DNA残留量均小于100pg／剂量，符合《中国药典》三部（2010版）有关CHO细胞残余DNA的要求。结论磁珠分离法可解决残留DNA检测中样品前处理的技术难点，定量PCR法能够简便、快速、准确地对不同工艺的单克隆抗体产品中CHO细胞DNA残留进行定量测定。 展开更多
关键词 磁珠分离法 定量聚合酶链反应 cho细胞 DNA残留 单克隆抗体 质量控制
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通过载体DHFR基因的弱化提高抗体在CHO细胞中的表达 被引量：10
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作者 白银 王琰 +3 位作者 张海荣 周丽君 吕英谦 俞莉章 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期62-64,67,共4页
目的:提高抗人膀胱癌人-鼠嵌合抗体在二氢叶酸还原酶缺陷的CHO细胞株(CHO/DHFR-)中表达的产量。方法:对表达载体中DHFR基因表达调控序列进行一系列的删除突变和点突变后,构建不同的嵌合抗体表达载体。用这些载体转染CHO细胞并以递增量... 目的:提高抗人膀胱癌人-鼠嵌合抗体在二氢叶酸还原酶缺陷的CHO细胞株(CHO/DHFR-)中表达的产量。方法:对表达载体中DHFR基因表达调控序列进行一系列的删除突变和点突变后,构建不同的嵌合抗体表达载体。用这些载体转染CHO细胞并以递增量的氨甲喋呤(MTX)筛选,用ELISA法测定每个加压水平的各组细胞中抗体的表达水平。结果:通过对表达载体中DHFR基因表达调控序列的突变,使DHFR的基础表达水平产生了不同程度的弱化。转染CHO细胞后,可明显提高MTX加压增加抗体表达的效果,抗体表达水平的增加基本与DHFR基因的弱化程度呈正相关。从弱化程度最高的pWS2-BDI组中,我们筛选得到表达量达55μg/(106细胞·24 h)的高表达细胞株,经锌离子进一步诱导后,表达量可达100μg/(106细胞·24 h)以上。结论:弱化表达载体中DHFR的表达,可提高MTX对工程抗体表达的增加效果。 展开更多
关键词 载体 DHFR基因 真核表达 抗体 cho细胞
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三种病毒启动子在中国地鼠卵巢(CHO)细胞中表达活性的比较 被引量：9
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作者 刘文军 杨芙蓉 +2 位作者 阮力 任贵方 朱既明 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第2期164-168,共5页
三种病毒启动子在中国地鼠卵巢（ＣＨＯ）细胞中表达活性的比较刘文军杨芙蓉阮力任贵方朱既明（中国预防医学科学院病毒学研究所北京１０００５２）关键词ＣＨＯｄｈｆｒ－细胞，启动子，瞬时表达，ＨＢｓＡｇ基因，ＣＡＴ基因目前大多... 三种病毒启动子在中国地鼠卵巢（ＣＨＯ）细胞中表达活性的比较刘文军杨芙蓉阮力任贵方朱既明（中国预防医学科学院病毒学研究所北京１０００５２）关键词ＣＨＯｄｈｆｒ－细胞，启动子，瞬时表达，ＨＢｓＡｇ基因，ＣＡＴ基因目前大多数哺乳动物细胞表达载体中的启动子－... 展开更多
关键词 乙型肝炎 表面抗原 cho 病毒 启动子 基因表达
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人IL-24基因在CHO细胞中的表达及其抗肿瘤效应 被引量：11
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作者 缪竞诚 陈雄艳 +2 位作者 盛伟华 谢宇锋 杨吉成 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期567-570,共4页
目的构建人IL-24基因真核表达载体,在CHO细胞中进行稳定表达,并检测重组表达蛋白rhIL-24的抗肿瘤活性。方法将测序验证的人IL-24基因亚克隆至真核表达载体pcDNA3,构建重组真核表达载体pcDNA3-hIL-24,转染CHO细胞进行稳定表达,经RT-PCR... 目的构建人IL-24基因真核表达载体,在CHO细胞中进行稳定表达,并检测重组表达蛋白rhIL-24的抗肿瘤活性。方法将测序验证的人IL-24基因亚克隆至真核表达载体pcDNA3,构建重组真核表达载体pcDNA3-hIL-24,转染CHO细胞进行稳定表达,经RT-PCR鉴定后用MTT法、Ho-echst染色和流式细胞术检测CHO细胞表达的rhIL-24诱导A549人肺腺癌细胞凋亡的抗肿瘤效应,用ELISA检测其刺激免疫细胞分泌IL-6和IFN-γ的功能。结果经双酶切和PCR鉴定,重组真核表达载体构建正确,人IL-24在CHO细胞中获得稳定表达,且所表达的人IL-24具有较强的诱导A549人肺腺癌细胞凋亡及上调免疫细胞表达IL-6和IFN-γ的免疫刺激活性。结论人IL-24基因的稳定表达和抗肿瘤效应的实验研究,为进一步研究人IL-24抗肿瘤的分子机制及潜在的应用奠定了基础。 展开更多
关键词 人白细胞介素-24 稳定转染 cho细胞 凋亡
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