亚砷酸钠及其代谢产物诱导16HBE细胞BCL2L2-PABPN1表达及机制探讨 被引量：1

1

作者 施雅 尹锦瑶 +4 位作者 吴疆 蒋成兰 赵瑞欢 周倩 何越峰 《中国职业医学》 CAS 北大核心 2022年第5期522-529,共8页

目的探讨亚砷酸钠及其甲基化代谢产物诱导16HBE细胞融合基因B淋巴细胞瘤-2样蛋白2(BCL2L2)-多聚(A)结合蛋白核1(PABPN1)表达的差异及相关机制。方法(1)分别以浓度为1.5、3.0、4.5μmol/L的亚砷酸钠染毒16HBE细胞(设为低、中、高剂量砷... 目的探讨亚砷酸钠及其甲基化代谢产物诱导16HBE细胞融合基因B淋巴细胞瘤-2样蛋白2(BCL2L2)-多聚(A)结合蛋白核1(PABPN1)表达的差异及相关机制。方法(1)分别以浓度为1.5、3.0、4.5μmol/L的亚砷酸钠染毒16HBE细胞(设为低、中、高剂量砷染毒组),以浓度为4.5μmol/L一甲基胂酸(MMA)、二甲基胂酸(DMA)和亚砷酸钠染毒16HBE细胞(设为MMA组、DMA组和亚砷酸钠组),并设无毒物刺激的对照组。培养48 h后,以实时荧光定量聚合酶链式反应法(qRT-PCR)检测BCL2L2-PABPN1的表达。(2)设计两种小干扰RNA(siRNA)沉默片段转染16HBE细胞,以敲减BCL2L2-PABPN1,分别设为siRNA-1组和siRNA-2组;另设无敲减BCL2L2-PABPN1转染的对照组。培养48 h后,以qRT-PCR检测3组细胞中BCL2L2-PABPN1的表达,分别以MTS法、JC-1线粒体膜电位检测法检测细胞存活率和早期凋亡率,以Hoechest33342/碘化丙啶(PI)双重染色法观察细胞凋亡情况,以蛋白质免疫印迹法检测P53信号通路相关蛋白表达。结果(1)随着亚砷酸钠染毒剂量的增加,16HBE细胞BCL2L2-PABPN1相对表达水平增加(P<0.01);高剂量砷染毒组16HBE细胞BCL2L2-PABPN1相对表达水平分别高于对照组、低剂量砷染毒组和中剂量砷染毒组(P值均<0.05)。亚砷酸钠组16HBE细胞BCL2L2-PABPN1相对表达水平分别高于对照组、MMA组和DMA组(P值均<0.05);但对照组、MMA组和DMA组16HBE细胞BCL2L2-PABPN1相对表达水平两两比较,差异均无统计学意义(P值均>0.05)。(2)siRNA-1组、siRNA-2组16HBE细胞中BCL2L2-PABPN1相对表达水平和细胞存活率均低于对照组(P值均<0.05);但3组16HBE细胞早期凋亡率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。Hoechest33342/PI双重染色结果显示,siRNA-1组、siRNA-2组16HBE细胞核固缩和早期凋亡细胞的数量均较对照组增多。siRNA-1组、siRNA-2组16HBE细胞中P53、Ser392位点磷酸化P53、B淋巴细胞瘤-2相关死亡启动子、P21和细胞色素C的蛋白相对表达水平均高于对照组(P值均<0.05),P53上调凋亡因子蛋白相对表达水平均低于对照组(P值均<0.05)。结论亚砷酸钠可能通过诱导融合基因BCL2L2-PABPN1的表达,阻滞16HBE细胞凋亡;其机制与激活P53信号通路有关。亚砷酸钠甲基化代谢产物MMD和DMA对BCL2L2-PABPN1的表达无影响。BCL2L2-PABPN1可能通过BCL2L2和PABPN1基因的协同作用发挥抗凋亡效应。 展开更多

关键词 亚砷酸钠 融合基因 B淋巴细胞瘤-2样蛋白2(bcl2l2) 多聚(A)结合蛋白核1(PABPN1) bcl2l2-PABPN1 细胞凋亡 P53 信号通路

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猪嵌合RNABCL2L2CR克隆与功能初步分析

2

作者 杨秀芹 张晓涵 +4 位作者 郝婉君 张倩 李佳欣 何鑫淼 庞宇 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期54-61,共8页

研究前期鉴定一个嵌合子标签——BCL2L2CR,含有B细胞淋巴瘤/白血病-2样蛋白2(B-cell CLL/lymphoma 2 like protein 2,BCL2L2)重复序列,为分析BCL2L2CR作用,利用RT-PCR方法克隆其cDNA序列,采用流式细胞术、过表达、CCK-8和细胞划痕试验... 研究前期鉴定一个嵌合子标签——BCL2L2CR,含有B细胞淋巴瘤/白血病-2样蛋白2(B-cell CLL/lymphoma 2 like protein 2,BCL2L2)重复序列,为分析BCL2L2CR作用,利用RT-PCR方法克隆其cDNA序列,采用流式细胞术、过表达、CCK-8和细胞划痕试验等分子生物学技术分析其对细胞凋亡、增殖和迁移的影响。发现BCL2L2CR是BCL2L2外显子3部分序列发生顺式重复形成,前141个氨基酸与BCL2L2完全相同,含有BCL2同源结构域4、3和1,缺少同源结构域2;BCL2L2CR促进PK-15和3T3L细胞增殖和迁移。研究结果确定嵌合RNA BCL2L2CR具有一定功能,将为深入揭示BCL2L2CR功能提供基础,有助于进一步认识嵌合RNAs及其在正常生理活动中的作用。 展开更多

关键词 猪 嵌合RNA bcl2l2 克隆 细胞增殖 细胞迁移

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猪嵌合RNA BCL2L2-PABPN1剪接调控、表达与亚细胞定位分析

3

作者 杨秀芹 张倩 +4 位作者 李佳欣 郝婉君 张晓涵 何鑫淼 庞宇 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期79-87,共9页

相邻基因间顺式剪接(cis-splicing of adjacent gene,cis-SAGe)产生的嵌合RNA在细胞生长、疾病发生等生理活动中发挥重要作用,为探究cis-SAGe剪接调控机制,研究在前期克隆BCL2L2-PABPN1(BP)基础上,利用minigene、定点突变、瞬时转染、... 相邻基因间顺式剪接(cis-splicing of adjacent gene,cis-SAGe)产生的嵌合RNA在细胞生长、疾病发生等生理活动中发挥重要作用,为探究cis-SAGe剪接调控机制,研究在前期克隆BCL2L2-PABPN1(BP)基础上,利用minigene、定点突变、瞬时转染、半定量RT-PCR以及生物信息学分析等方法分析BP转录后剪接的调控元件,发现thyroid hormone receptor exon 9、gh-1 intron 3、srp40-exonic splicing enhancer、β-tropomyosin exon 6b等剪接增强子元件在嵌合子形成中发挥重要作用。同时比较分析BP与两个亲本基因组织表达以及亚细胞定位情况。研究结果将为进一步揭示BP转录后调控机制及功能提供基础。 展开更多

关键词 猪 嵌合RNA bcl2l2-PABPN1 剪接 顺式调控元件

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miR-15a下调BCL-2和BCL2L2对下咽鳞癌FaDu细胞凋亡影响

4

作者 路武豪 冯龙 娄卫华 《中国继续医学教育》 2016年第15期202-204,共3页

目的 miR-15a在许多癌症中均发现有表达异常,但其在下咽鳞状细胞癌的作用不清。本研究通过miR-15a抑制BCL-2和BCL2L2表达,探讨在将miR-15a对下咽鳞癌细胞凋亡的影响。方法通过Lipofectamine2000将miR-15a mimics转染入下咽鳞癌Fa Du细... 目的 miR-15a在许多癌症中均发现有表达异常,但其在下咽鳞状细胞癌的作用不清。本研究通过miR-15a抑制BCL-2和BCL2L2表达,探讨在将miR-15a对下咽鳞癌细胞凋亡的影响。方法通过Lipofectamine2000将miR-15a mimics转染入下咽鳞癌Fa Du细胞中。RT-PCR检测BCL-2和BCL2L2 m RNA的表达;Western Blotting检测BCL-2和BCL2L2蛋白的表达;流式细胞术检测检测miR-15a的对细胞凋亡的影响。结果 BCL-2和BCL2L2在Fa Du细胞中表达较强;转染miR-15a mimics后的Fa Du细胞中,BCL-2和BCL2L2蛋白和m RNA的表达水平逐渐下调;同时转染miR-15a mimics后,Fa Du细胞凋亡明显增加。结论 miR-15a可以下调BCL-2和BCL2L2的表达,促进下咽鳞癌细胞凋亡。 展开更多

关键词 miR-15a 下咽鳞癌 FaFu细胞 MIRNA 凋亡 BCL-2 bcl2l2

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miR-204-5p靶向调控BCL2L2促进急性肝衰竭大鼠肝细胞凋亡的研究

5

作者 王坤 朱传龙 +3 位作者 田健美 孔小行 成芳芳 李嫣 《医学研究杂志》 2023年第7期136-141,共6页

目的探讨miR-204-5p在急性肝衰竭大鼠肝组织中的表达情况及其促进肝细胞凋亡的的作用及潜在机制。方法根据随机数字表法将32只SD大鼠分为4组,即对照组(0h)、模型组(24、48、72h),每组8只。模型组腹腔注射D-氨基半乳糖联合脂多糖诱导急... 目的探讨miR-204-5p在急性肝衰竭大鼠肝组织中的表达情况及其促进肝细胞凋亡的的作用及潜在机制。方法根据随机数字表法将32只SD大鼠分为4组,即对照组(0h)、模型组(24、48、72h),每组8只。模型组腹腔注射D-氨基半乳糖联合脂多糖诱导急性肝衰竭,对照组为腹腔内注射等量的0.9%氯化钠溶液。分别取对照组及模型组造模完成后24、48、72h大鼠静脉血及肝组织,ELISA检测血清丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、总胆红素(total bilirubin,TBIL)的水平,通过HE、TUNEL染色法行肝组织病理学检查和肝细胞凋亡观察。生物信息学工具预测miR-204-5p的靶基因,采用双荧光素酶报告基因实验验证两者的靶向关系。RT-PCR和Western blot法检测肝组织中miR-204-5p、BCL2L2的表达情况。结果与对照组比较,模型组随着造模时间的延长,ALT、AST、TBIL值逐渐升高,肝组织坏死程度、炎性细胞浸润逐渐加重,肝细胞凋亡指数逐渐升高。RT-PCR结果显示,随着造模时间的延长,miR-204-5p基因的相对表达水平逐渐升高,而BCL2L2基因的相对表达水平逐渐降低;Western blot法检测结果亦显示,BCL2L2蛋白表达水平逐渐降低(P均<0.05)。miR-204-5p和BCL2L2之间存在靶向关系,miR-204-5p能够靶向调控BCL2L2表达。结论miR-204-5p可能通过靶向调控BCL2L2促进肝细胞凋亡,进而促进急性肝衰竭疾病的发生、发展。 展开更多

关键词 急性肝衰竭 微小RNA-204-5p bcl2l2 凋亡

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猪流行性腹泻病毒通过miR-133c-3p/BCL2L2轴调控细胞凋亡 被引量：2

6

作者 郑红青 吴旭锦 +4 位作者 朱小甫 尹宝英 高军花 李艳芝 植婵萍 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第8期2233-2243,共11页

旨在探讨miR-133c-3p在猪流行腹泻病毒(PEDV)引起的细胞凋亡过程中所起的作用,并探讨其发挥作用的机制。以PEDV感染MARC-145细胞为模型,检测PEDV感染过程中细胞的凋亡情况以及6个与凋亡相关microRNAs的表达差异,RT-qPCR检测PEDV感染过... 旨在探讨miR-133c-3p在猪流行腹泻病毒(PEDV)引起的细胞凋亡过程中所起的作用,并探讨其发挥作用的机制。以PEDV感染MARC-145细胞为模型,检测PEDV感染过程中细胞的凋亡情况以及6个与凋亡相关microRNAs的表达差异,RT-qPCR检测PEDV感染过程中与凋亡相关microRNAs的表达差异,合成miR-133c-3p的模拟物和抑制剂,转染MARC-145细胞,采用流式细胞术检测PEDV感染MARC-145细胞的凋亡情况,流式细胞术检测过表达和敲低miR-133c-3p后细胞的凋亡情况,采用生物信息学方法预测miR-133c-3p的靶基因,荧光素酶报告基因检测了miR-133c-3p和靶基因的结合情况,Western blot检测了过表达miR-133c-3p对BCL-w和PEDV蛋白表达水平的调控,用siRNA敲低BCL-w蛋白检测细胞凋亡情况。结果显示,PEDV的感染可以诱导MARC-145细胞凋亡(P<0.05),与凋亡相关的microRNAs,如miR-133c-3p和miR-149-5p的表达上调(P<0.05;P<0.001),miR-138-3p的表达下调(P<0.05)。其中,miR-133c-3p在病毒感染后升高了约5倍(P<0.01)。过表达miR-133c-3p后,细胞凋亡率显著升高(P<0.01);敲低miR-133c-3p后,细胞凋亡率降低(P<0.05)。用生物信息学方法预测miR-133c-3p与BCL2L2的3′UTR区域有结合位点,荧光素酶报告基因试验显示miR-133c-3p可以和BCL2L2基因靶向结合(P<0.01),过表达miR-133c-3p后细胞内BCL-w蛋白的表达明显下调,且病毒的感染可以降低BCL-w的表达水平,敲低BCL-w后细胞凋亡率显著升高(P<0.01)。PEDV感染后可以通过上调miR-133c-3p的表达来下调BCL2L2的表达,从而促进细胞的凋亡。 展开更多

关键词 猪流行性腹泻病毒 微小RNA133c-3p BCL2样蛋白 凋亡

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甘草提取物通过调控miR-212-5p/BCL2L2 基因抑制甲状腺肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭 被引量：6

7

作者 王中琴 胡青 张晋锋 《中华细胞与干细胞杂志（电子版）》 2021年第1期25-33,共9页

目的探讨甘草提取物GL-1对甲状腺肿瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法以10、20、30 μg/mL GL-1处理甲状腺肿瘤细胞CAL-62,或在CAL-62细胞中转染miR-212-5p mimics、anti-miR-212-5p、si-BCL2L2、pcDNA-BCL2L2。其中转染p... 目的探讨甘草提取物GL-1对甲状腺肿瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法以10、20、30 μg/mL GL-1处理甲状腺肿瘤细胞CAL-62,或在CAL-62细胞中转染miR-212-5p mimics、anti-miR-212-5p、si-BCL2L2、pcDNA-BCL2L2。其中转染pcDNA-BCL2L2细胞并以30 μg/mL GL-1处理。噻唑蓝比色法 (MTT)检测CAL-62细胞增殖,Transwell小室法检测CAL-62细胞迁移和侵袭,实时定量PCR (qPCR)检测CAL-62细胞中miR-212-5p表达,Western blot检测相关蛋白Bcl-2样蛋白2 (BCL2L2)、细胞周期蛋白D1 (Cyclin D1)和基质金属蛋白酶-2 (MMP-2)表达。生物学信息预测miR-212-5p的下游靶基因,双荧光素酶基因报告实验进一步验证。数据采用单因素方差分析、Tukey’s事后检验和t检验。结果与对照组相比,10、20、30 μg/mL浓度GL-1降低CAL-62细胞24、48、72 h的细胞活性 (P < 0.05),并呈剂量、时间依赖性。与对照组相比,10、20、30 μg/mL浓度GL-1干预后,CAL-62细胞侵袭数[(143.56±14.22)个、(100.32±10.23)个、(68.23±6.49)个比(189.65±15.23)个]、迁移数[(198.56±14.35)个、(141.35±12.58)个、(89.56±8.95)个比 (295.36±17.56)个]和BCL2L2蛋白表达量 (0.76±0.08、0.51±0.06、0.24±0.02比1.00±0.12)均降低 (P 均< 0.05),而miR-212-5p水平 (1.61±0.11、1.99±0.13、2.28±0.15比1.00±0.07)升高(P < 0.05),并呈剂量依赖性。过表达miR-212-5p和沉默BCL2L2表达在24、48、72 h时CAL-62细胞活性、细胞迁移数、侵袭数和Cyclin D1、MMP-2蛋白表达量降低 (P < 0.05)。生物学信息预测和双荧光素酶基因报告实验证实BCL2L2是miR-212-5p的靶基因。过表达miR-212-5p抑制BCL2L2蛋白水平,沉默miR-212-5p促进BCL2L2蛋白表达 (P < 0.05)。过表达BCL2L2可逆转GL-1对CAL-62细胞增殖、迁移、侵袭及Cyclin D1、MMP-2蛋白表达的抑制作用。结论 GL-1通过miR-212-5p/BCL2L2抑制甲状腺肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭。 展开更多

关键词 甘草 miR-212-5p bcl2l2 甲状腺肿瘤 增殖

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胃癌组织中miR-497表达及其生物学意义 被引量：4

8

作者 孙叶飞 周建平 《中国普外基础与临床杂志》 CAS 2014年第5期609-613,共5页

目的检测胃癌组织和癌旁组织中miR-497的表达差异，寻找其下游作用靶点。方法选取2010-2013年期间在中国医科大学附属第一医院胃肠外科手术切除的94例胃癌及其癌旁组织。用RT-PCR法定量检测miR-497在其中的表达；在线软件预测miR-497靶... 目的检测胃癌组织和癌旁组织中miR-497的表达差异，寻找其下游作用靶点。方法选取2010-2013年期间在中国医科大学附属第一医院胃肠外科手术切除的94例胃癌及其癌旁组织。用RT-PCR法定量检测miR-497在其中的表达；在线软件预测miR-497靶基因，用阴性对照及miR-497-mimics转染SGC-7901细胞系，RT-PCR及Western检测胃癌细胞miR-497过表达后靶点基因mRNA及蛋白水平的改变；MTT法检测miR-497-mimics组（miR-497过表达）细胞株与阴性对照组间对5-氟尿嘧啶（5-FU）化疗的敏感性。结果①miR-497表达量在胃癌组织中明显低于癌旁组织，差异有统计学意义（P〈0．01）。②BCL2L2被预测为miR-497的靶基因，miR-497在胃癌SGC-7901细胞中过表达后BCL2L2蛋白表达在miR-497-mimics组细胞中明显弱于阴性对照组细胞，BCL2L2mRNA在2组细胞中的表达差异无统计学意义（P〉0．05）。miR-497-mimics组细胞对5-FU的Ic50值明显低于阴性对照组细胞（P=0．0046）。结论miR-497在胃癌组织中低表达，BCL2L2为miR-497的靶基因，miR-497过表达可提高胃癌细胞对5-Fu的敏感性，这为进一步研究miR-497与BCL2L2在胃癌中的作用及治疗提供了新的方向。 展开更多

关键词 胃癌 miR-497 bcl2l2 化疗敏感性

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miR-491-5p对缺氧诱导的滋养细胞凋亡的促进作用及其机制 被引量：3

9

作者 全尚琨 张辉 +6 位作者 李昱霖 胡舒彤 盛思琪 张晴 刘达越 姜怡邓 李桂忠 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期42-48,共7页

目的探讨microRNA-491-5p(miR-491-5p)在缺氧诱导的滋养细胞凋亡中的作用及其对子痫前期的影响。方法选取人绒毛膜滋养层细胞,分为4组:对照组、缺氧组、缺氧+miR-491-5p mimic组和缺氧+miR-491-5p inhibit组。采用细胞活力染色检测滋养... 目的探讨microRNA-491-5p(miR-491-5p)在缺氧诱导的滋养细胞凋亡中的作用及其对子痫前期的影响。方法选取人绒毛膜滋养层细胞,分为4组:对照组、缺氧组、缺氧+miR-491-5p mimic组和缺氧+miR-491-5p inhibit组。采用细胞活力染色检测滋养细胞凋亡情况,qRT-PCR检测miR-491-5p的表达,TargetScan数据库预测miR-491-5p的靶基因,双荧光素酶报告基因实验验证miR-149-5p与B-细胞淋巴瘤因子2样蛋白2基因(BCL2L2)的靶向关系。miR-491-5pmimic和inhibitor分别转染滋养细胞后,qRT-PCR检测miR-491-5p的表达,Westernblotting检测BCL2L2蛋白的表达改变,细胞活力染色、Western blotting、流式细胞术检测滋养细胞凋亡情况。结果与对照组比较,缺氧组滋养细胞凋亡率明显增高(P<0.001),miR-491-5p表达明显增高(2.784±0.214 vs.1.000±0.000,P<0.01);生物信息学预测与双荧光素酶检测报告实验显示,miR-491-5p可与BCL2L2结合并调控其表达。与对照组比较,miR-491-5p mimic组miR-491-5p表达明显增高(7659.300±191.300 vs.5.467±0.503,P<0.01),而miR-491-5p inhibit组miR-491-5p表达明显降低(0.139±0.022vs.0.323±0.035,P<0.05)。与缺氧组比较,缺氧+miR-491-5pinhibit组滋养细胞凋亡率降低(11.56%±0.452%vs.16.67%±0.750%,P<0.01),BCL2L2和Bcl-2蛋白相对表达量增高(0.702±0.047vs.0.312±0.007,P<0.001;0.752±0.055vs.0.415±0.005,P<0.01),Bax蛋白表达降低(1.221±0.066vs.1.652±0.085,P<0.05);缺氧+miR-491-5pmimic组滋养细胞凋亡率增高(23.54%±1.233%vs.16.67%±0.750%,P<0.001),BCL2L2和Bcl-2蛋白相对表达量降低(0.211±0.013vs.0.312±0.007,P<0.01;0.203±0.011vs.0.415±0.005,P<0.001),Bax蛋白表达增高(2.362±0.284vs.1.652±0.085,P<0.01)。结论miR-491-5p可负向调控BCL2L2表达,促进缺氧诱导的滋养细胞凋亡,进而加速子痫前期的发展进程。 展开更多

关键词 滋养细胞 miR-491-5p bcl2l2 细胞凋亡 缺氧

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外泌体源性oar-miR-10b在绵羊痘病毒感染绵羊睾丸细胞中的动态表达及靶基因的鉴定 被引量：2

10

作者 孔贺磊 吴金恩 +3 位作者 郑亚东 何贵天 李雅婷 丁军涛 《动物医学进展》 北大核心 2018年第12期42-48,共7页

以绵羊痘病毒(SPPV)感染绵羊睾丸细胞4h后外泌体中miRNAs的高通量测序结果为基础,应用RT-qPCR分析SPPV感染绵羊睾丸细胞4h、24h、48h和72h后外泌体中oar-miR-10b的动态表达;用双荧光素酶报告载体鉴定oar-miR-10b的靶基因。结果显示,在S... 以绵羊痘病毒(SPPV)感染绵羊睾丸细胞4h后外泌体中miRNAs的高通量测序结果为基础,应用RT-qPCR分析SPPV感染绵羊睾丸细胞4h、24h、48h和72h后外泌体中oar-miR-10b的动态表达;用双荧光素酶报告载体鉴定oar-miR-10b的靶基因。结果显示,在SPPV感染的不同时期,oar-miR-10b呈先增加后减少的趋势,特别是感染后24h的差异表达量为2.15倍;PmirGLO-BCL2L2-WT+oar-miR-10b mimics共转染组与PmirGLO-BCL2L2-WT+miRNA Negative Control对照组相比差异极显著(P <0.01),证实BCL2L2为oar-miR-10b的靶基因。结果表明,oar-miR-10b在SPPV感染的不同时期呈差异性表达,其靶基因为BCL2L2,为深入研究oar-miR-10b在SPPV感染中的作用机制奠定基础。 展开更多

关键词 oar-miR-10b bcl2l2 实时荧光定量PCR 双荧光素酶报告系统

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miR-378对骨髓增生异常综合征细胞凋亡及增殖的影响

11

作者 匡兴怡 魏春梅 +1 位作者 张涛 王利 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期604-608,共5页

目的研究miR-378对骨髓增生异常综合征SKM-1细胞凋亡和增殖的影响。方法我们分别用miR-378重组慢病毒和阴性对照病毒感染SKM-1细胞。然后采用CCK-8检测miR-378对SKM-1细胞生长的影响,流式细胞仪检测各实验组细胞凋亡和周期情况,并用West... 目的研究miR-378对骨髓增生异常综合征SKM-1细胞凋亡和增殖的影响。方法我们分别用miR-378重组慢病毒和阴性对照病毒感染SKM-1细胞。然后采用CCK-8检测miR-378对SKM-1细胞生长的影响,流式细胞仪检测各实验组细胞凋亡和周期情况,并用Western blot检测凋亡过程中的关键因子cleaved-caspase-3蛋白的表达。用生物信息学方法预测miR-378可能的靶基因,用PCR和Western blot进行初步验证。结果 miR-378慢病毒转染组的细胞增殖活性明显降低,流式细胞术检测miR-378组的细胞凋亡率为(12.90±3.72)%,明显高于阴性对照病毒转染组和空白对照组[(3.21±1.91)%、(2.78±1.04)%,P<0.01];miR-378组的G0/G1期细胞增多,S期细胞减少。同时,Western blot结果显示miR-378过表达引起了cleaved-caspase-3的表达升高。用生物信息学方法预测抗凋亡蛋白基因BCL2L2为miR-378潜在的靶基因,并发现miR-378可以抑制BCL2L2蛋白的表达。结论 miR-378可以通过引起细胞凋亡和细胞周期阻滞来抑制SKM-1细胞的增殖,并降低BCL2L2蛋白的表达。 展开更多

关键词 骨髓增生异常综合征 miR-378 细胞凋亡 bcl2l2

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lncRNA NEAT1通过竞争性结合机制调控卵巢癌细胞生物学行为的作用和机制 被引量：1

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作者 赵达 包利利 +2 位作者 李波 俞岩 王晓黎 《现代肿瘤医学》 CAS 北大核心 2023年第20期3737-3743,共7页

目的:探讨lncRNA NEAT1在卵巢癌进展中的确切作用和分子机制,为卵巢癌的生物标志物的筛选及靶向治疗提供新的抑制。方法:采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-335-5p和BCL2L2在卵巢癌细胞和组织中的表达水平。MTT和Transwell实验检测... 目的:探讨lncRNA NEAT1在卵巢癌进展中的确切作用和分子机制,为卵巢癌的生物标志物的筛选及靶向治疗提供新的抑制。方法:采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-335-5p和BCL2L2在卵巢癌细胞和组织中的表达水平。MTT和Transwell实验检测细胞的增殖、迁移和侵袭能力。免疫印迹法(Western blot)分析BCL2L2的表达水平。双荧光素酶报告实验证实miR-335-5p和NEAT1/BCL2L2之间的相互作用。结果:与癌旁组织比较,卵巢癌组织中BCL2L2表达升高,而miR-335-5p的表达下降,差异均具有统计学意义(P<0.05)。miR-335-5p的过表达抑制了卵巢癌细胞中BCL2L2的表达,而抑制miR-335-5p的表达后,BCL2L2在卵巢细胞中的表达增加(P<0.05)。进一步发现miR-335-5p能够抑制卵巢癌细胞增殖和迁移,差异具有统计学意义(P<0.05)。此外,lncRNA NEAT1在卵巢癌组织中同样高表达且其促进卵巢癌细胞增殖和迁移、侵袭,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:lncRNA NEAT1能够通过miR-335-5p/BCL2L2通路调控卵巢癌细胞增殖及迁移,这可能是卵巢癌早期筛查或靶向治疗的潜在靶点。 展开更多

关键词 lncRNA NEAT1 卵巢癌 bcl2l2 miR-335-5p

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miR-214-3p对缺糖缺氧再灌注诱导PC12细胞凋亡的作用及机制 被引量：2

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作者 郭冬芬 任真奎 +2 位作者 胡玉梅 吴昌学 禹文峰 《贵州医科大学学报》 CAS 2021年第7期766-772,共7页

目的探讨miR-214-3 p对缺糖缺氧再灌注诱导PC12细胞凋亡的作用及机制。方法利用数据库TargetScan 7.2预测miR-214-3 p和B淋巴细胞瘤因子2样蛋白2(BCL2L2)之间的结合位点;选取人胚肾293T细胞共转染分为BCL2L2 mRNA 3′UTR野生型荧光素酶... 目的探讨miR-214-3 p对缺糖缺氧再灌注诱导PC12细胞凋亡的作用及机制。方法利用数据库TargetScan 7.2预测miR-214-3 p和B淋巴细胞瘤因子2样蛋白2(BCL2L2)之间的结合位点;选取人胚肾293T细胞共转染分为BCL2L2 mRNA 3′UTR野生型荧光素酶报告载体+miR-214-3 p mimic(wt+mimic)组、BCL2L2 mRNA 3′UTR野生型荧光素酶报告载体+mimic negative control(wt+NC)组、BCL2L2 mRNA 3′UTR突变型荧光素酶报告载体+miR-214-3 p mimic(mut+mimic)组及BCL2L2 mRNA 3′UTR突变型荧光素酶报告载体+mimic NC(mut+NC组),检测4组293T细胞荧光素酶的发光活性;肾上腺嗜铬神经细胞瘤12(PC12)细胞转染miR-214-3 p mimic(mimic组)、miR-214-3 p mimic NC(mimic NC组)、miR-214-3 p inhibitor(inhibitor组),miR-214-3 p inhibitor NC(inhibitor NC组),采用蛋白免疫印迹法检测BCL2L2蛋白表达;PC12细胞作为对照(Control组),用缺氧缺糖(OGD/R)处理PC12细胞构建缺血再灌注细胞模型(OGD/R组),用miR-214-3 p mimic转染PC12细胞,然后用OGD/R处理PC12细胞(OGD/R+mimic组),采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测Control组和OGD/R组miR-214-3 p及BCL2L2 mRNA表达,采用蛋白免疫印迹法检测Control组、OGD/R组及OGD/R+mimic组裂解胱天蛋白水解酶3(Cleaved-caspase3)、B淋巴细胞瘤-2相关X(Bax)及B淋巴细胞瘤因子2(Bcl2)的蛋白表达。结果数据库Targetscan 7.2预测结果表明,miR-214-3 p与BCL2L2的3′UTR区之间存在结合位点;荧光素酶报告基因实验结果表明,wt+mimic组荧光素酶活性低于wt+NC组,mut+mimic组和mut+NC中荧光素酶活性无明显差异;mimic NC组BCL2L2的蛋白表达高于mimic组,inhibitor NC组BCL2L2的蛋白表达低于inhibitor组(P<0.05);与Control组比较,OGD/R组PC12细胞中BCL2L2 mRNA和蛋白表达水平降低、miR-214-3 p mRNA表达升高,差异有统计学意义(P<0.05);OGD/R组Cleaved-caspase-3和Bax表达分别高于Control组、低于OGD/R+mimic组,但Bcl2表达分别低于Control组、高于OGD/R+mimic组(P<0.05)。结论过表达miR-214-3 p可靶向结合并下调BCL2L2的表达,从而加速PC12细胞的凋亡。 展开更多

关键词 细胞凋亡 肾上腺嗜铬神经细胞瘤12细胞 缺糖缺氧再灌注 微小RNA 214-3p B淋巴细胞瘤因子2样蛋白2 Bcl2-Associated X的蛋白质

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microRNA-181c-5p抑制Bcl2L11/Bim减轻压力超负荷诱导的小鼠心力衰竭 被引量：1

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作者 蔡溪巍 王秋野 +1 位作者 孙世忠 王沈峰 《解剖科学进展》 CAS 2021年第1期61-64,共4页

目的探讨MicroRNA-181c-5p(miR-181c-5p)对压力超负荷诱导(TAC)的心力衰竭的作用机制。方法 30只雄性C57BL/6小鼠随机分成对照组、TAC组和TAC+miR-181c-5p组。采用主动脉弓缩窄诱导小鼠心力衰竭动物模型,造模过程中,对模型组小鼠心肌多... 目的探讨MicroRNA-181c-5p(miR-181c-5p)对压力超负荷诱导(TAC)的心力衰竭的作用机制。方法 30只雄性C57BL/6小鼠随机分成对照组、TAC组和TAC+miR-181c-5p组。采用主动脉弓缩窄诱导小鼠心力衰竭动物模型,造模过程中,对模型组小鼠心肌多点注射给予5×10^(6) U/10μL过表达miR-181c-5p慢病毒载体,实验第4周处死所有小鼠,收集心脏组织标本。采用HE染色观察组病理学改变;Masson染色观察胶原纤维沉积;TUNEL检测观察心肌组织凋亡;实时定量PCR和Western blot技术检测心肌组织miR-181c-5p表达及凋亡蛋白表达。结果 miR-181c-5p在TAC诱导的心力衰竭心肌组织中表达下调。miR-181c-5p过表达减轻心肌炎症细胞浸润和纤维化、降低心肌细胞凋亡和靶向抑制Bcl-2家族的促凋亡基因Bcl2L11/Bim的mRNA和蛋白表达。结论 miR-181c-5p通过抑制Bcl2L11/Bim表达减轻压力超负荷诱导的小鼠心力衰竭。 展开更多

关键词 微小RNA-181c-5p 心力衰竭 凋亡 Bcl2样11(Bcl2L11)基因 雄性C57BL/6小鼠

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