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STAg与BCG-DNA和氢氧化铝佐剂联合免疫小鼠的免疫效果 被引量:10
1
作者 张影 杨英超 +3 位作者 张瑾 薄淑英 辛晓芳 王国治 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2011年第10期1177-1179,共3页
目的观察弓形虫可溶性速殖子抗原(Soluble tachyzoite antigen,STAg)与BCG-DNA和A(lOH)3佐剂联合免疫小鼠的免疫效果。方法将BALB/c小鼠随机分为5组,分别经小鼠头背部皮下注射20μg STAg、50μg BCG-DNA+20μgSTAg、50μg A(lOH)3+20μg... 目的观察弓形虫可溶性速殖子抗原(Soluble tachyzoite antigen,STAg)与BCG-DNA和A(lOH)3佐剂联合免疫小鼠的免疫效果。方法将BALB/c小鼠随机分为5组,分别经小鼠头背部皮下注射20μg STAg、50μg BCG-DNA+20μgSTAg、50μg A(lOH)3+20μg STAg、50μg BCG-DNA+50μg A(lOH)3+20μg STAg,对照组注射生理盐水,共免疫4次。末次免疫后1周处死小鼠,采血分离血清,并制备脾细胞悬液,ELISA法测定小鼠血清IgG值及抗体效价;ELISPOT法检测分泌特异性IFNγ的淋巴细胞数量。结果 A(lOH)3+BCG-DNA+STAg组小鼠血清抗体效价和IgG值及产生特异性IFNγ的淋巴细胞数量均显著高于STAg组、BCG-DNA+STAg组和A(lOH)3+STAg组(P<0.05)。结论 STAg联合BCG-DNA和A(lOH)3佐剂能诱导小鼠产生更强的体液免疫和细胞免疫应答,A(lOH)3与BCG-DNA佐剂对弓形虫STAg具有免疫协同效应。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 可溶性速殖子抗原 bcg-dna 氢氧化铝 佐剂 免疫
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BCG-DNA对哮喘患者外周血单个核细胞IFN-γ和IL-4产生的作用
2
作者 商艳 胡振林 +3 位作者 李强 施柯 刘忠令 孙树汉 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第7期718-720,共3页
目的 :研究免疫活性物质卡介苗基因组 DNA(BCG- DNA)对哮喘患者外周血单个核细胞 (PBMC) IFN- γ和 IL- 4产生的影响。 方法 :分离哮喘患者 PBMC,分别加入 BCG- DNA、地塞米松刺激培养 ,EL ISA检测培养上清中 IFN- γ及 IL- 4含量 ,RT- ... 目的 :研究免疫活性物质卡介苗基因组 DNA(BCG- DNA)对哮喘患者外周血单个核细胞 (PBMC) IFN- γ和 IL- 4产生的影响。 方法 :分离哮喘患者 PBMC,分别加入 BCG- DNA、地塞米松刺激培养 ,EL ISA检测培养上清中 IFN- γ及 IL- 4含量 ,RT- PCR检测 PBMC IFN-γ m RNA及 IL - 4 m RNA的表达量 ,并与空白对照组相比较。结果 :地塞米松在体外对哮喘患者PBMC产生的 IFN-γ m RNA和蛋白、IL - 4 m RNA和蛋白均有抑制作用 ;BCG- DNA抑制哮喘患者 PBMC IL - 4 m RNA和蛋白的分泌 ,而促进 IFN -γ m RNA和蛋白的分泌 ,与对照组比较差异显著 (P<0 .0 1 ) ,且在体外对 PBMC无毒性。 结论 :BCG-DNA不仅具有和地塞米松相同的下调 IL - 4表达的作用 ,而且还具有地塞米松所没有的诱导 IFN -γ表达的作用 ,利于纠正哮喘患者体内存在的 Th1 / Th2比例失衡状态 。 展开更多
关键词 bcg-dna 哮喘 外周血 单个核细胞 IFN-R IL-4
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BCG-DNA对哮喘小鼠气道反应性和气道炎症的影响 被引量:2
3
作者 李斌恺 赖克方 +1 位作者 沈璐 王法霞 《广州医药》 2017年第1期1-4,8,共5页
目的观察不同剂量卡介苗核酸(Bacille Calmette-guerin DNA,BCG-DNA)在不同干预时间对哮喘小鼠气道高反应性及气道炎症的干预作用。方法 1.将Balb/c雌鼠随机分为哮喘模型组、NS对照组、BCGDNA干预组。干预组根据干预的时间和干预制剂剂... 目的观察不同剂量卡介苗核酸(Bacille Calmette-guerin DNA,BCG-DNA)在不同干预时间对哮喘小鼠气道高反应性及气道炎症的干预作用。方法 1.将Balb/c雌鼠随机分为哮喘模型组、NS对照组、BCGDNA干预组。干预组根据干预的时间和干预制剂剂量的不同分为-7DNA1μg、-7DNA10μg、-7DNA100μg、10DNA1μg、10DNA10μg、10DNA100μg、17DNA1μg、17DNA10μg、17DNA100μg组。2.在末次激发48小时后,测定各浓度级乙酰甲胆碱激发下的增强的呼气间歇(Enhanced Pause,Penh)值,将其与小鼠激发前吸入NS后的Penh的百分比(Penh%NS),作为其气道反应性评价指标;其次对肺泡灌洗液进行细胞学分析。结果 1.气道反应性:1-7DNA1μg组从Mch为3.12~50 mg/m L之间的Penh%NS显著低于哮喘组(P<0.05);2-7DNA10μg组和-7DNA 100μg组从Mch为6.25~25 mg/m L之间的Penh%NS显著低于哮喘组(P<0.05);310DNA10μg组从Mch为12.5~25 mg/m L之间的Penh%NS显著低于哮喘组(P<0.05);4 10DNA100μg组从Mch为3.12、12.5~50 mg/m L之间的Penh%NS显著低于哮喘组(P<0.05);5 17DNA1μg组在Mch为3.12、12.5 mg/m L的Penh%NS显著低于哮喘组(P<0.05);6 17DNA10μg组在Mch为12.5 mg/m L之间的Penh%NS显著低于哮喘组(P<0.05)2.气道炎症:10DNA1μg、-7DNA10μg、10DNA10μg和17DNA10μg组的BALF细胞分类Eos%分别为:35.34±3.81、27.30±6.91、38.20±6.56、42.17±5.17;显著低于哮喘组的Eos%(48.8±6.12)(P<0.05);10DNA1μg组的Eos%显著低于-7DNA1μg组的Eos%(P<0.05);-7DNA10μg组的Eos%显著低于10DNA10μg、17DNA10μg、-7DNA1μg和-7DNA100μg组的Eos%(P<0.05)。结论 BCG-DNA能降低哮喘小鼠的气道高反应性,减轻哮喘小鼠的气道炎症,早期(-7 d)中小剂量的干预效果较佳。 展开更多
关键词 支气管哮喘 卡介苗 核酸 气道高反应性 气道炎症
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Effect of intratracheally administered BCG-DNA on murine model of asthma 被引量:1
4
作者 商艳 李强 +5 位作者 孙树汉 施柯 周凤娟 商蕾 刘忠令 胡振林 《Journal of Medical Colleges of PLA(China)》 CAS 2004年第1期11-14,共4页
Objective: To investigate the effect of intratracheally administered BCG DNA on a murine model of asthma. Methods: BALB/C mice were divided into 4 groups: normal control group, asthma model group, BCG DNA administered... Objective: To investigate the effect of intratracheally administered BCG DNA on a murine model of asthma. Methods: BALB/C mice were divided into 4 groups: normal control group, asthma model group, BCG DNA administered before OVA sensitization group, BCG DNA administered after OVA challenge group. The asthma models were developed by immunizing BALB/C mice with OVA. A total of 100 μg BCG DNA was intratracheally administered before OVA sensitization and after OVA challenge. WBC count and eosinophil percentage (EOS%) in bronchoalveolar lavage fluid (BALF) were measured. Changes of IL 4 , IL 5,IL 12, IFN γ in BALF were determined by ELISA. Pulmonary inflammation was observed on normal pathological slides and the proliferation and mucus secretion of goblet cells stained by AB PAS were also observed. Results: IL 4 , IL 5,IL 12, IFN γ in BALF of normal control group were(32.3±5.7)pg/ml,(15.6±3.9)pg/ml,(80±8.5)pg/ml,(153.2±9.4)pg/ml respectively. IL 4,IL 5 in BALF of asthma model group increased to (299±15.6)pg/ml and (206.7±9.3)pg/ml, while IL 12 and IFN γ decreased to (20.4±4.1)pg/ml and (51.6±5.5) pg/ml respectively. BCG DNA administered intratracheally before OVA sensitization and after OVA challenge significantly increased IL 12 [(71.6±8.3)pg/ml,(67.8±8.1pg/ml)] and IFN γ [(119.0±11.3)pg/ml,(114.7±10.1)pg/ml] in the BALF. Meanwhile, BCG DNA decreased IL 4 [(82.1±6.1)pg/ml,(86.3±5.9)pg/ml] and IL 5 [(32.3±4.6)pg/ml,(37.4±5.3)pg/ml]. Eosinophil level in BALF was inhibited and the pulmonary inflammation was dramatically relieved compared to asthma model group. Conclusion: Intratracheally administered BCG DNA can induce IL 12 and IFN γ secretion,inhibit Th2 response which can relieve allergic airway inflammation and provide a new way in the treatment and prevention of asthma. 展开更多
关键词 BCG DNA bronchial asthma CYTOKINE
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BCG-CpG-DNA对重组HBsAg的免疫佐剂作用 被引量:16
5
作者 赵爱华 乔来艳 +2 位作者 贾淑珍 寇丽杰 王国治 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2007年第5期356-358,361,共4页
目的研究BCG-CpG-DNA对重组HBsAg的免疫佐剂作用。方法以BCG-CpG-DNA与重组HBsAg混合免疫小鼠,以铝佐剂疫苗为对照,采用放射免疫法检测抗-HBs中和抗体水平,ELISA法分析抗体亚类,酶联免疫斑点试验(ELIS-POT)检测CD8+细胞毒T淋巴细胞(CTL... 目的研究BCG-CpG-DNA对重组HBsAg的免疫佐剂作用。方法以BCG-CpG-DNA与重组HBsAg混合免疫小鼠,以铝佐剂疫苗为对照,采用放射免疫法检测抗-HBs中和抗体水平,ELISA法分析抗体亚类,酶联免疫斑点试验(ELIS-POT)检测CD8+细胞毒T淋巴细胞(CTL)功能。结果BCG-CpG-DNA能提高抗-HBs中和抗体水平,促进抗原特异性IgG2a的产生,诱导Th1型免疫应答,与铝佐剂协同作用能部分逆转Th2反应。同时能增强抗原特异性CD8+T淋巴细胞的杀伤作用,实验组与对照组比较差异有显著意义。结论BCG-CpG-DNA对HBsAg有较好的免疫佐剂作用,有可能成为一种新型的免疫佐剂。 展开更多
关键词 BCG—CpG-DNA 免疫佐剂 HBSAG
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BCG-CpG-DNA免疫活性作用的初步研究 被引量:13
6
作者 赵爱华 寇丽杰 +2 位作者 乔来艳 贾淑珍 王国治 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2006年第6期574-577,共4页
目的研究BCG-CpG-DNA的免疫学活性。方法通过淋巴细胞增殖、T细胞亚群分析、细胞因子产生、对NK细胞杀伤功能影响等试验,检测BCG-CpG-DNA的免疫活性。结果BCG-CpG-DNA能促进小鼠T、B淋巴细胞增殖,活化巨噬细胞分泌IL-12,并能增强ConA诱... 目的研究BCG-CpG-DNA的免疫学活性。方法通过淋巴细胞增殖、T细胞亚群分析、细胞因子产生、对NK细胞杀伤功能影响等试验,检测BCG-CpG-DNA的免疫活性。结果BCG-CpG-DNA能促进小鼠T、B淋巴细胞增殖,活化巨噬细胞分泌IL-12,并能增强ConA诱导IFN-γ产生,提高小鼠脾细胞中CD3+、CD4+、CD8+T细胞亚群的含量,同时增强小鼠NK细胞的杀伤活性。实验组与对照组所有结果差异均有显著意义(P<0.05)。结论BCG-CpG-DNA能活化抗原呈递细胞(APC),并具有较好的免疫活性。 展开更多
关键词 BCG-CPG-DNA 佐剂 免疫活性
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卡介菌及其衍生制品鉴别实验用BCG DNA国家参考品的研制 被引量:5
7
作者 赵爱华 寇丽杰 +8 位作者 乔来艳 贾淑珍 严君喜 张媛媛 郝娟 何秀云 严东珍 赵秀芹 王国治 《中国药事》 CAS 2010年第3期244-247,共4页
目的建立BCG DNA定性用国家参考品,供BCG菌株、卡介菌多糖核酸注射液等卡介菌衍生制品鉴别实验用。方法以紫外分光法检测260nm和280nm的吸光度值,比较A260/280的比值,考量国家参考品BCG DNA的纯度指标;以多重PCR法检测BCG DNA特异性缺失... 目的建立BCG DNA定性用国家参考品,供BCG菌株、卡介菌多糖核酸注射液等卡介菌衍生制品鉴别实验用。方法以紫外分光法检测260nm和280nm的吸光度值,比较A260/280的比值,考量国家参考品BCG DNA的纯度指标;以多重PCR法检测BCG DNA特异性缺失区RD1区是否存在,验证所制备的BCG DNA可作为定性用国家参考品,组织3家实验室对该参考品进行验证;并在不同时间,观察其稳定性。结果所制备的BCG DNA A260/286=1.96>1.8;BCG DNA国家参考品经多重PCR扩增BCG缺失区RD1的产物为约200bp DNA片段,与卡介菌巴斯德株DNA结果相同,3家实验室的验证结果一致,该制品经37℃4周,4℃3个月、6个月、12个月放置后,PCR结果不变。结论该BCG DNA制品纯度高,稳定,可作为BCG DNA定性用国家参考品,在卡介苗相关制品的质量控制中,做为BCG菌株、卡介菌多糖核酸注射液等卡介菌衍生制品鉴别实验用的国家参考品。 展开更多
关键词 BCG DNA 参考品 质量控制 卡介菌 卡介菌多糖核酸注射液
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BCG-CpG-DNA制备、理化特性及免疫刺激活性的初步研究 被引量:18
8
作者 赵爱华 贾淑珍 +2 位作者 乔来艳 寇丽杰 王国治 《微生物学免疫学进展》 2005年第1期39-43,共5页
采用机械破碎、CTAB沉淀、酚:氯仿:异戊醇抽提法从卡介菌(BCG)中制备BCG-CpG-DNA,经化学方法确定其理化成分,通过双抗体夹心ELISA法检测小鼠IgM水平检测其免疫刺激活性.结果显示每克半干重的卡介菌提取BCG-CpG-DNA约0.9mg.提取物主要成... 采用机械破碎、CTAB沉淀、酚:氯仿:异戊醇抽提法从卡介菌(BCG)中制备BCG-CpG-DNA,经化学方法确定其理化成分,通过双抗体夹心ELISA法检测小鼠IgM水平检测其免疫刺激活性.结果显示每克半干重的卡介菌提取BCG-CpG-DNA约0.9mg.提取物主要成分为BCG-CpG-DNA,分子量大小在3 000~15 710 bp,含少量的多糖和蛋白;紫外分光扫描在260nm有最大吸收;对特异性识别DNA长链的CCGG中的CpG位点的限制性内切酶HpaⅡ高度敏感;能够活化小鼠B细胞产生IgM.所制备的BCG-CpG-DNA含较多的未甲基化CpG基序,具有免疫刺激活性功能. 展开更多
关键词 BCG-CPG-DNA 卡介菌(BCG) CPG基序
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BCG-CpG-DNA一般毒性的初步评价 被引量:6
9
作者 赵爱华 乔来艳 +4 位作者 贾淑珍 寇丽杰 王雯 李凤祥 王国治 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2010年第8期797-802,共6页
目的观察BCG-CpG-DNA对小鼠急性毒性和28d长期毒性作用,评价其一般毒性。方法小鼠分别经背部皮下给予BCG-CpG-DNA100、250和500μg1次(急性毒性试验)和7次(28d长期毒性试验),对照组注射生理盐水。单次给药后观察小鼠的生长情况和体重变... 目的观察BCG-CpG-DNA对小鼠急性毒性和28d长期毒性作用,评价其一般毒性。方法小鼠分别经背部皮下给予BCG-CpG-DNA100、250和500μg1次(急性毒性试验)和7次(28d长期毒性试验),对照组注射生理盐水。单次给药后观察小鼠的生长情况和体重变化,14d后观察脏器是否发生病变;重复给药期间及末次给药后3周恢复期内,每周观察小鼠外观体征、局部刺激性和体重变化;末次给药后3d及3周检测血液学、血液生化学指标及主要脏器系数和抗双链DNA抗体水平。结果 BCG-CpG-DNA急性毒性试验中,各组小鼠均健康存活,体重增加,无毒性反应。BCG-CpG-DNA28d长期毒性试验中,动物体重、行为活动无异常,给药部位无局部刺激性表现;BCG-CpG-DNA重复给药可提高小鼠免疫细胞的数量;末次给药后3d,各试验组脾脏系数均高于对照组,且差异有统计学意义(P<0.05),经过3周恢复期回复正常;各试验组血清中抗双链DNA水平与对照组比较,差异无统计学意义,均低于25U/ml的临界值。结论 BCG-CpG-DNA主要影响小鼠的免疫细胞和免疫器官,未见其他明显的急性毒性和长期毒性作用,表明BCG-CpG-DNA具有较好的安全性。 展开更多
关键词 BCG-CPG-DNA 毒性试验 安全性评价
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BCG-CpG-DNA重复给药对小鼠免疫毒性的初步评价 被引量:5
10
作者 郑亮 赵爱华 +6 位作者 王雯 乔来艳 贾淑珍 寇丽杰 李凤祥 吴小南 王国治 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2010年第9期922-925,929,共5页
目的观察BCG-CpG-DNA重复给药对小鼠免疫器官和免疫功能的影响,评价BCG-CpG-DNA的免疫毒性。方法将BALB/c小鼠随机分为4组,对照组注射生理盐水,实验组分别注射低(100μg)、中(250μg)、高(500μg)剂量的BCG-CpG-DNA,于28d内分别经背部... 目的观察BCG-CpG-DNA重复给药对小鼠免疫器官和免疫功能的影响,评价BCG-CpG-DNA的免疫毒性。方法将BALB/c小鼠随机分为4组,对照组注射生理盐水,实验组分别注射低(100μg)、中(250μg)、高(500μg)剂量的BCG-CpG-DNA,于28d内分别经背部皮下免疫7次,分别于初次免疫后14d、末次免疫后3d和3周,检测各组小鼠免疫器官脏器系数、淋巴细胞转化功能、细胞因子释放(ELISPOT法)、T细胞亚群变化(免疫荧光法)和NK细胞杀伤活性(乳酸脱氢酶法)。结果 BCG-CpG-DNA重复给药7次,主要影响小鼠初级免疫器官,表现为脾肿大,对胸腺、肝脏和肾脏无影响;对细胞免疫功能的影响是增强淋巴细胞转化功能;降低中、高剂量组CD3+T细胞亚群含量;提高体内分泌IFNγ和IL-4的细胞数二者的比例;增强NK细胞的杀伤能力。结论 BCG-CpG-DNA重复给药累计达3.5mg,小鼠表现为免疫功能增强,对免疫器官和免疫功能无不良影响,未见免疫毒性副作用。 展开更多
关键词 BCG-CPG-DNA 免疫毒性 安全性评价
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探讨BCG初次免疫结核杆菌DNA疫苗加强免疫方案的效应 被引量:2
11
作者 唐权 窦骏 +3 位作者 赵枫姝 禇莉莉 潘猛 王永仿 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期591-594,共4页
目的:探讨BCG初次免疫(BCG-prime),结核杆菌共表达DNA疫苗加强免疫(DNA疫苗-boost)的策略对小鼠的免疫效果。方法:将BCG及结核杆菌重组DNA疫苗依次免疫小鼠,通过检测CTL和NK细胞的杀伤活性和特异性淋巴细胞增殖,以及小鼠血清抗体及细胞... 目的:探讨BCG初次免疫(BCG-prime),结核杆菌共表达DNA疫苗加强免疫(DNA疫苗-boost)的策略对小鼠的免疫效果。方法:将BCG及结核杆菌重组DNA疫苗依次免疫小鼠,通过检测CTL和NK细胞的杀伤活性和特异性淋巴细胞增殖,以及小鼠血清抗体及细胞因子的水平,观测BCG-prime、共表达结核杆菌Ag85A/GM-CSFDNA疫苗boost策略对小鼠的免疫效果。结果:采用prime-boost免疫策略组的小鼠CTL的杀伤活性明显增强、特异性淋巴细胞明显增殖、IFN-γ的水平明显增高,NK细胞杀伤活性与对照组相比也有一定提高,但未超过BCG单独免疫效果。免疫小鼠血清特异性抗体的滴度超过单独DNA疫苗免疫组。结论:在采用BCG-prime-结核杆菌DNA疫苗boost免疫策略后,能增强对小鼠的免疫效应,尤其是Th1型细胞免疫反应增强明显,为进一步在动物体内进行保护性效应试验的研究提供了实验依据。 展开更多
关键词 结核杆菌 抗原85A BCG DNA疫苗 prime-boost免疫策略
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BCG-CpG-DNA对A群脑膜炎球菌多糖疫苗的免疫佐剂作用 被引量:7
12
作者 赵爱华 李凤祥 +3 位作者 贾淑珍 寇丽杰 乔来艳 王国治 《中国医药生物技术》 CSCD 2010年第2期94-97,共4页
目的探讨免疫佐剂BCG-CpG-DNA对A群脑膜炎球菌多糖疫苗的作用。方法将不同剂量(5、10、100μg)的免疫佐剂BCG-CpG-DNA与A群脑膜炎球菌多糖疫苗直接混合后,皮下免疫小鼠,与未添加佐剂疫苗比较,ELISA法检测抗原特异性IgG抗体水平,并分析... 目的探讨免疫佐剂BCG-CpG-DNA对A群脑膜炎球菌多糖疫苗的作用。方法将不同剂量(5、10、100μg)的免疫佐剂BCG-CpG-DNA与A群脑膜炎球菌多糖疫苗直接混合后,皮下免疫小鼠,与未添加佐剂疫苗比较,ELISA法检测抗原特异性IgG抗体水平,并分析抗体亚类IgG1和IgG2a的水平。结果BCG-CpG-DNA能提高A群脑膜炎球菌多糖疫苗特异性抗体IgG水平,并能促进抗原特异性抗体亚类的产生,其中佐剂中、高剂量(10、100μg)实验组IgG、IgG2a水平与未加入免疫佐剂疫苗之间差异有统计学意义。结论BCG-CpG-DNA对A群脑膜炎球菌多糖疫苗有免疫佐剂作用。 展开更多
关键词 BCG-CPG-DNA 免疫佐剂 A群脑膜炎球菌多糖疫苗
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BCG-CpG-DNA对重组HBsAg免疫原性的影响 被引量:11
13
作者 李凤祥 赵爱华 +1 位作者 张洁 王国治 《微生物学免疫学进展》 2008年第3期10-14,共5页
为了研究BCG-CpG-DNA对重组HBsAg免疫原性的影响,了解其佐剂功能。采用不同剂量BCG-CpG-DNA与不同剂量重组(汉逊酵母)表达的HBsAg或Al-HBsAg混合免疫小鼠,与同剂量铝佐剂疫苗对比,以放射免疫法检测抗-HBs中和抗体水平和抗体持续时间,EL... 为了研究BCG-CpG-DNA对重组HBsAg免疫原性的影响,了解其佐剂功能。采用不同剂量BCG-CpG-DNA与不同剂量重组(汉逊酵母)表达的HBsAg或Al-HBsAg混合免疫小鼠,与同剂量铝佐剂疫苗对比,以放射免疫法检测抗-HBs中和抗体水平和抗体持续时间,ELISA法检测抗体亚类。结果显示,BCG-CpG-DNA和HBsAg混合,抗-HBs的中和抗体水平达到或高于同剂量铝佐剂疫苗;BCG-CpG-DNA和Al-HBsAg混合,抗-HBs的中和抗体水平高于同剂量铝佐剂疫苗,并有统计学显著意义(P<0.05);添加BCG-CpG-DNA组抗体水平4周时增加不明显,到10周则显著地高于同剂量铝佐剂疫苗组,IgG2a抗体水平也高于相应的对照组。实验结果表明BCG-CpG-DNA对HBsAg有较好的免疫佐剂作用,并和AL佐剂有协同作用。 展开更多
关键词 BCG-CPG-DNA 免疫佐剂 HBSAG
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卡介菌基因组DNA制备工艺研究 被引量:1
14
作者 王静 胡振林 +2 位作者 周凤娟 凌亦凌 孙树汉 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2005年第1期36-38,共3页
目的 摸索制备高纯度卡介菌 (MycobacteriumbovisBacillusCalmette Gu啨rin ,BCG)基因组DNA(BCG -DNA)的制备工艺。方法 采用超声破碎结核杆菌 ,加热使蛋白变性初步去除菌体蛋白 ,进一步经蛋白酶消化 ,乙醇沉淀DNA组分 ,再经离子... 目的 摸索制备高纯度卡介菌 (MycobacteriumbovisBacillusCalmette Gu啨rin ,BCG)基因组DNA(BCG -DNA)的制备工艺。方法 采用超声破碎结核杆菌 ,加热使蛋白变性初步去除菌体蛋白 ,进一步经蛋白酶消化 ,乙醇沉淀DNA组分 ,再经离子交换和凝胶过滤层析 ,去除残余菌体蛋白和多糖 ,精制DNA ,并进行质量检测。结果 所制备的BCG -DNA片段大小介于 2 0 0~ 2 5 0bp之间 ,纯度大于 95 % ,蛋白含量占 0 . 1% ,多糖残留占 3 .5 %。结论此方法制备的BCG- DNA纯度较高 ,且无有机溶剂残留 ,适用于BCG DNA制备。 展开更多
关键词 BCG 卡介菌 多糖 结核杆菌 超声 DNA 酶消化 制备工艺 高纯度 去除
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结核分枝杆菌ESAT6、CFP10基因DNA疫苗对小鼠免疫原性的初步研究 被引量:4
15
作者 王慧勤 李跃峰 +6 位作者 李志强 温书香 陈鹏博 赵庆亮 纪太旺 曹旭东 陈创夫 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期458-463,共6页
目的研究ESAT6、CFP10基因DNA疫苗分别与卡介苗联合免疫小鼠,以诱导免疫效果。方法以构建的真核表达载体pEGFP-N1-ESAT6、pEGFP-N1-CFP10与卡介苗共同免疫随机分成8组的80只小鼠,分别标记为:生理盐水组(SLYS)、卡介苗组(KJM)、pEGFP-N1... 目的研究ESAT6、CFP10基因DNA疫苗分别与卡介苗联合免疫小鼠,以诱导免疫效果。方法以构建的真核表达载体pEGFP-N1-ESAT6、pEGFP-N1-CFP10与卡介苗共同免疫随机分成8组的80只小鼠,分别标记为:生理盐水组(SLYS)、卡介苗组(KJM)、pEGFP-N1组(P-N1)、pEGFP-N1-ESAT6组(P-N1-E)、pEGFP-N1-CFP10组(P-N1-C)、卡介苗加pEGFP-N1组(K+P-N1)、卡介苗加pEGFP-N1-ESAT6组(K+P-N1-E)和卡介苗加pEGFP-N1-CFP10组(K+P-N1-C)。每只小鼠皮内注射100μL卡介苗,每只小鼠肌肉注射50μg质粒,每组共注射3次。以纯化的ESAT6、CFP10蛋白作为抗原,用DOT-ELISA方法检测小鼠血清中的抗体;用ELISA方法检测小鼠血清中IFN-γ的变化。结果免疫3次后的小鼠血清中检测到针对CFP10蛋白的抗体,未检测到针对ESAT6蛋白的抗体。但二者血清中IFN-γ水平都有显著上升,K+P-N1-C和K+P-N1-E免疫3次后,测得的IFN-γ平均含量为(107.591±7.3281)pg/mL和(95.7503±9.0184)pg/mL,显著高于免前、一免、二免(P<0.01)。结论结核分枝杆菌ESAT6,CFP10基因DNA疫苗和卡介苗联合应用后可诱导小鼠产生有效的细胞免疫应答,为DNA疫苗的研究奠定一定的基础。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 ESAT6 CFP10 DNA疫苗 卡介苗
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Ag85A与Ag85B DNA疫苗联合免疫对可移植性鼠膀胱肿瘤的免疫调节效应 被引量:2
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作者 杨晓峰 张晓俊 王鹏 《现代泌尿外科杂志》 CAS 2009年第1期8-11,共4页
目的探讨联合应用Ag85A与Ag85B DNA疫苗抗膀胱肿瘤的免疫效应。方法采用小鼠膀胱癌BTT739细胞株,构建可移植性T739小鼠膀胱肿瘤模型。随机法分为6组:生理盐水组、BCG组、pcDNA3.1+组、pcDNA-Ag85A组、pcDNA-Ag85B组及pcDNA-Ag85A和pcDNA... 目的探讨联合应用Ag85A与Ag85B DNA疫苗抗膀胱肿瘤的免疫效应。方法采用小鼠膀胱癌BTT739细胞株,构建可移植性T739小鼠膀胱肿瘤模型。随机法分为6组:生理盐水组、BCG组、pcDNA3.1+组、pcDNA-Ag85A组、pcDNA-Ag85B组及pcDNA-Ag85A和pcDNA-Ag85B联合组。荷瘤后第7天、14天和21天各肌注1次,末次注射后第7天检测各组小鼠脾脏的CD4+和CD8+T细胞亚群数量及CD4+/CD8+比值、小鼠血清IFN-γ、肿瘤体积重量并进行组织病理学检查。结果Ag85A与Ag85B DNA疫苗联合免疫组CD4+和CD8+T细胞亚群数量及CD4+/CD8+比值、血清IFN-γ明显高于DNA疫苗单独免疫组;小鼠的肿瘤重量明显低于DNA疫苗单独免疫组,差异有显著性(P<0.05);肿瘤组织病理学分析Ag85A与Ag85B DNA疫苗联合免疫组肿瘤坏死较DNA疫苗单独免疫组明显,且瘤体周围及瘤体内炎性细胞浸润较多。但Ag85A与Ag85B DNA疫苗联合、pcDNA-Ag85A、pcDNA-Ag85B DNA疫苗单独应用组均不及单纯应用BCG的免疫调节效应。结论Ag85A与Ag85B DNA疫苗联合免疫在抗膀胱肿瘤过程中具有明显的免疫效应,明显优于DNA疫苗单独免疫,二者联用具有协同增强免疫效应;但Ag85A与Ag85B DNA疫苗联合免疫效应尚达不到BCG的作用。 展开更多
关键词 膀胱癌 卡介苗 DNA疫苗 AG85A AG85B
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BCG-CpG-DNA重复给药对家兔的安全性评价 被引量:2
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作者 蔡皇界 赵爱华 +3 位作者 王雯 李凤祥 王国治 吴小南 《中国药事》 CAS 2011年第5期430-433,共4页
目的观察BCG-CpG-DNA对家兔的毒性作用,进行安全性评价。方法用BCG-CpG-DNA 100、250、500μg在28d内分7次对家兔进行肌肉免疫,大腿股四头肌局部刺激,对照组注射等量生理盐水。观察每次注射后注射局部变化情况,末次免疫后2d检测血液学... 目的观察BCG-CpG-DNA对家兔的毒性作用,进行安全性评价。方法用BCG-CpG-DNA 100、250、500μg在28d内分7次对家兔进行肌肉免疫,大腿股四头肌局部刺激,对照组注射等量生理盐水。观察每次注射后注射局部变化情况,末次免疫后2d检测血液学、血液生化学指标及主要脏器系数,观察注射局部肌肉刺激情况,并取注射部位肌肉和主要免疫器官做病理学检查。结果 BCG-CpG-DNA重复给药后肉眼观察对注射部位皮肤和肌肉无明显刺激作用;血液学结果显示可提高免疫细胞的数量,对血液学其他指标、血液生化学指标和脏器系数无明显的影响;病理学检查结果提示BCG-CpG-DNA引起注射部位肌肉的轻微炎症反应,对主要免疫器官无影响。结论 BCG-CpG-DNA对家兔具有较好的安全性。 展开更多
关键词 BCG-CPG-DNA 毒性 安全性评价
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分支杆菌DNA的不同提取方法在PCR反应中的定性评价 被引量:3
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作者 王海军 陈迪 +4 位作者 王春雨 储结园 陈国栋 苏凤艳 王全凯 《经济动物学报》 CAS 2010年第2期107-112,共6页
采用已报道过的分支杆菌DNA7种不同提取方法分别对标准BCG菌株和结核病鹿肺样本DNA提取后比较并进行聚合酶链反应(PCR)扩增,通过PCR反应对几种DNA提取方法做出定性评价。结果表明:方法5和7有100%临床样本检测率,方法7所得DNA浓度和纯度... 采用已报道过的分支杆菌DNA7种不同提取方法分别对标准BCG菌株和结核病鹿肺样本DNA提取后比较并进行聚合酶链反应(PCR)扩增,通过PCR反应对几种DNA提取方法做出定性评价。结果表明:方法5和7有100%临床样本检测率,方法7所得DNA浓度和纯度最高。说明临床样本分支杆菌DNA提取过程中使用物理和化学方法裂解细胞,使用蛋白酶K和氯仿纯化、异丙醇沉淀DNA是十分必要的。 展开更多
关键词 分支杆菌 DNA提取 BCG 鹿肺样 PCR
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基因重组卡介苗高效电转化条件的实验研究 被引量:4
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作者 王靖宇 李丽君 韩瑞发 《山西医药杂志(上半月)》 CAS 2010年第1期17-19,共3页
目的探讨卡介苗(BCG)电转化中影响转化效率的因素。方法利用电转化仪将穿梭质粒pYL-hB7-2转入BCG中,考察其影响因素并优化转化条件。转化子利用卡那霉素抗性筛选和聚合酶链反应(PCR)及酶链免疫吸附试验(ELISA)鉴定。结果重组BCG获得较... 目的探讨卡介苗(BCG)电转化中影响转化效率的因素。方法利用电转化仪将穿梭质粒pYL-hB7-2转入BCG中,考察其影响因素并优化转化条件。转化子利用卡那霉素抗性筛选和聚合酶链反应(PCR)及酶链免疫吸附试验(ELISA)鉴定。结果重组BCG获得较高的转化效率,最高可达8/9。外加电场强度和质粒浓度是决定电转化效率的关键因素,感受态细胞的状态,如生长期和冰浴时间均可影响转化效率。结论成功解决了基因重组BCG构建过程中电转化的问题。 展开更多
关键词 卡介苗 DNA 重组 电转化
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联合应用Ag85A和GM-CSF DNA疫苗对小鼠移植性膀胱癌BTT739细胞瘤免疫治疗的研究 被引量:1
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作者 张辉 宋永胜 商超 《现代肿瘤医学》 CAS 2011年第6期1049-1051,共3页
目的:探讨联合应用Ag85A与GM-CSF DNA疫苗对小鼠移植性膀胱癌BTT739细胞瘤免疫治疗的效果。方法:选用小鼠膀胱癌BTT739细胞株,构建T739小鼠移植瘤模型。随机数字表法分为5组:生理盐水组、空载体组、Ag85A组、联合应用组和BCG组。荷瘤后... 目的:探讨联合应用Ag85A与GM-CSF DNA疫苗对小鼠移植性膀胱癌BTT739细胞瘤免疫治疗的效果。方法:选用小鼠膀胱癌BTT739细胞株,构建T739小鼠移植瘤模型。随机数字表法分为5组:生理盐水组、空载体组、Ag85A组、联合应用组和BCG组。荷瘤后第7天、14天和21天各肌注1次,末次注射后第7天检测各组小鼠脾脏的CD4+和CD8+T细胞亚群数量及CD4+/CD8+比值、血清IFN-γ和肿瘤重量。结果:与生理盐水组对比,单独应用Ag85A和联合应用Ag85A与GM-CSF DNA疫苗均能够升高CD4+和CD8+T细胞的百分比及CD4+/CD8+的比值,提高血清IFN-γ浓度,降低移植瘤重量,差异具有统计学意义(P<0.05)。联合应用的效果要明显优于单独应用组,差异具有统计学意义(P<0.05),但尚不及单纯应用BCG的免疫治疗效果。结论:联合应用Ag85A与GM-CSF DNA疫苗能够提高荷瘤小鼠的免疫功能,从而达到了抑制肿瘤生长的作用,其效果明显优于单独应用Ag85A DNA疫苗,二者联用具有协同增强免疫效应。 展开更多
关键词 膀胱癌 DNA疫苗 卡介苗 AG85A GM-CSF
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