目的探讨达格列净(Dapagliflozin,DAPA)是否通过腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)信号通路对心力衰竭(Heart failure,HF)产生治疗作用。方法本研究从GSE57338、GSE116250和GSE141910三个公开数据集中收集HF相关...目的探讨达格列净(Dapagliflozin,DAPA)是否通过腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)信号通路对心力衰竭(Heart failure,HF)产生治疗作用。方法本研究从GSE57338、GSE116250和GSE141910三个公开数据集中收集HF相关的基因表达数据,GSE57338基于GPL11532平台,包含177例HF患者和136例健康对照的左心室组织基因表达数据;GSE116250基于GPL16791平台,包含50例HF患者和14例健康对照的左心室组织基因表达数据;GSE141910基于GPL16791平台,包含200例HF患者和166例健康对照的左心室组织基因表达数据。对以上数据进行差异表达基因分析和富集分析。通过基因集变异分析(Gene set variation analysis,GSVA)评估AMPK信号通路在HF中的活化情况。随后,构建急性心肌梗死(Acute myocardial infarction,AMI)诱导的HF大鼠模型,并将其分为对照组、模型组和DAPA治疗组。对实验大鼠进行超声心动图检测,评估心脏功能;通过苏木精-伊红(HE)和Masson染色观察心肌组织形态变化;利用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测脑型利钠肽(BNP)、心肌肌钙蛋白T(cTn-T)水平;通过TUNEL染色观察细胞凋亡情况;采用Western blot检测心肌组织中与AMPK信号通路相关蛋白的表达情况。结果在3个数据集中共鉴定出2677个交集基因,这些基因显著富集于磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)-蛋白激酶B(AKT)信号通路、神经营养因子信号通路、AMPK信号通路和雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路。对3个数据集进行GSVA评分结果显示,与健康对照相比,HF患者的AMPK信号通路显著下调(均P<0.001)。心功能超声结果显示,模型组大鼠表现出舒张和收缩功能障碍,DAPA治疗组大鼠在接受DAPA治疗后,左心室内径(LVID)、左心室收缩期内径(LVIDs)、舒张末期容积(EDV)和收缩末期容积(ESV)显著减少,射血分数(EF)和左心室缩短分数(FS)显著增加(P<0.05);模型组大鼠心肌纤维紊乱,心肌组织存在广泛的间质性出血,并有炎性细胞浸润,DAPA治疗后,大鼠心肌炎性细胞浸润程度和纤维化水平明显减少。接受DAPA治疗的HF大鼠血清中BNP和cTn-T水平、心肌细胞凋亡率均明显低于模型组(P<0.05);DAPA治疗组中磷酸化AMPK(p-AMPK)的表达显著增加(P<0.05)。结论AMPK信号通路在HF的病理过程中起重要作用,DAPA通过激活AMPK信号通路改善心肌炎症和功能损伤,显示出潜在的治疗价值。展开更多
目的探究宫颈癌细胞中AMP活化蛋白激酶(AMPK)调控肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)表型转化的作用及其机制。方法RT-qPCR,Western blot检测6例宫颈癌组织和HeLa,SiHa,Caski细胞系中AMPK的表达;siRNA技术建立HeLa细胞的AMPK敲除细胞系,CCK-8,划痕...目的探究宫颈癌细胞中AMP活化蛋白激酶(AMPK)调控肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)表型转化的作用及其机制。方法RT-qPCR,Western blot检测6例宫颈癌组织和HeLa,SiHa,Caski细胞系中AMPK的表达;siRNA技术建立HeLa细胞的AMPK敲除细胞系,CCK-8,划痕实验、Transwell实验探究AMPK/CCL18轴介导癌细胞恶性生物学行为。收集各组细胞条件培养液,通过宫颈癌细胞条件培养液与人单核细胞(THP-1)共培养,检测THP-1的募集和巨噬细胞分型相关标志物的表达情况。裸鼠荷瘤实验进一步体内检测AMPK对移植瘤增生的影响。结果qRT-PCR和Western blot检测显示,癌组织AMPK mRNA(1.78±0.30)及蛋白(1.71±0.33)表达量明显高于癌旁组织(1.00±0.10,1.00±0.11),差异具有统计学意义(t=5.966,4.990,均P<0.01);与人正常宫颈上皮细胞(HUCEC)相比,AMPK在三个宫颈癌细胞系(HeLa,SiHa,Caski)的mRNA及蛋白表达显著升高,差异具有统计学意义(F=5.958,3.457,均P<0.01)。与NC组比较,敲低AMPK抑制宫颈癌细胞增殖(1.33±0.18 vs 0.82±0.25),迁移(180.07±7.64 vs 126.98±29.00)和侵袭能力(115.90±13.19 vs 68.61±12.87),差异具有统计学意义(t=4.015,4.337,6.285,均P<0.01);同时抑制THP-1细胞的迁移(49.34±3.91 vs 33.96±10.94)、侵袭(28.54±3.06 vs 19.54±6.16)与M2型极化(1.01±0.13 vs 0.55±0.11),差异具有统计学意义(t=3.242,3.207,6.510,均P<0.01)。体内实验进一步证明敲低AMPK可以抑制宫颈癌瘤体组织的体积(721.56±93.70mm^(3) vs 520.02±47.54mm^(3))和重量(1.19±0.06g vs 0.86±0.20g),差异具有统计学意义(t=4.289,3.582,均P<0.01)。结论AMPK/CCL18轴可通过调控TAMs的M2型转化,促进宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。靶向阻断AMPK/CCL18轴可能为宫颈癌治疗提供新靶点和新策略。展开更多
文摘目的探讨达格列净(Dapagliflozin,DAPA)是否通过腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)信号通路对心力衰竭(Heart failure,HF)产生治疗作用。方法本研究从GSE57338、GSE116250和GSE141910三个公开数据集中收集HF相关的基因表达数据,GSE57338基于GPL11532平台,包含177例HF患者和136例健康对照的左心室组织基因表达数据;GSE116250基于GPL16791平台,包含50例HF患者和14例健康对照的左心室组织基因表达数据;GSE141910基于GPL16791平台,包含200例HF患者和166例健康对照的左心室组织基因表达数据。对以上数据进行差异表达基因分析和富集分析。通过基因集变异分析(Gene set variation analysis,GSVA)评估AMPK信号通路在HF中的活化情况。随后,构建急性心肌梗死(Acute myocardial infarction,AMI)诱导的HF大鼠模型,并将其分为对照组、模型组和DAPA治疗组。对实验大鼠进行超声心动图检测,评估心脏功能;通过苏木精-伊红(HE)和Masson染色观察心肌组织形态变化;利用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测脑型利钠肽(BNP)、心肌肌钙蛋白T(cTn-T)水平;通过TUNEL染色观察细胞凋亡情况;采用Western blot检测心肌组织中与AMPK信号通路相关蛋白的表达情况。结果在3个数据集中共鉴定出2677个交集基因,这些基因显著富集于磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)-蛋白激酶B(AKT)信号通路、神经营养因子信号通路、AMPK信号通路和雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路。对3个数据集进行GSVA评分结果显示,与健康对照相比,HF患者的AMPK信号通路显著下调(均P<0.001)。心功能超声结果显示,模型组大鼠表现出舒张和收缩功能障碍,DAPA治疗组大鼠在接受DAPA治疗后,左心室内径(LVID)、左心室收缩期内径(LVIDs)、舒张末期容积(EDV)和收缩末期容积(ESV)显著减少,射血分数(EF)和左心室缩短分数(FS)显著增加(P<0.05);模型组大鼠心肌纤维紊乱,心肌组织存在广泛的间质性出血,并有炎性细胞浸润,DAPA治疗后,大鼠心肌炎性细胞浸润程度和纤维化水平明显减少。接受DAPA治疗的HF大鼠血清中BNP和cTn-T水平、心肌细胞凋亡率均明显低于模型组(P<0.05);DAPA治疗组中磷酸化AMPK(p-AMPK)的表达显著增加(P<0.05)。结论AMPK信号通路在HF的病理过程中起重要作用,DAPA通过激活AMPK信号通路改善心肌炎症和功能损伤,显示出潜在的治疗价值。
文摘目的探究宫颈癌细胞中AMP活化蛋白激酶(AMPK)调控肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)表型转化的作用及其机制。方法RT-qPCR,Western blot检测6例宫颈癌组织和HeLa,SiHa,Caski细胞系中AMPK的表达;siRNA技术建立HeLa细胞的AMPK敲除细胞系,CCK-8,划痕实验、Transwell实验探究AMPK/CCL18轴介导癌细胞恶性生物学行为。收集各组细胞条件培养液,通过宫颈癌细胞条件培养液与人单核细胞(THP-1)共培养,检测THP-1的募集和巨噬细胞分型相关标志物的表达情况。裸鼠荷瘤实验进一步体内检测AMPK对移植瘤增生的影响。结果qRT-PCR和Western blot检测显示,癌组织AMPK mRNA(1.78±0.30)及蛋白(1.71±0.33)表达量明显高于癌旁组织(1.00±0.10,1.00±0.11),差异具有统计学意义(t=5.966,4.990,均P<0.01);与人正常宫颈上皮细胞(HUCEC)相比,AMPK在三个宫颈癌细胞系(HeLa,SiHa,Caski)的mRNA及蛋白表达显著升高,差异具有统计学意义(F=5.958,3.457,均P<0.01)。与NC组比较,敲低AMPK抑制宫颈癌细胞增殖(1.33±0.18 vs 0.82±0.25),迁移(180.07±7.64 vs 126.98±29.00)和侵袭能力(115.90±13.19 vs 68.61±12.87),差异具有统计学意义(t=4.015,4.337,6.285,均P<0.01);同时抑制THP-1细胞的迁移(49.34±3.91 vs 33.96±10.94)、侵袭(28.54±3.06 vs 19.54±6.16)与M2型极化(1.01±0.13 vs 0.55±0.11),差异具有统计学意义(t=3.242,3.207,6.510,均P<0.01)。体内实验进一步证明敲低AMPK可以抑制宫颈癌瘤体组织的体积(721.56±93.70mm^(3) vs 520.02±47.54mm^(3))和重量(1.19±0.06g vs 0.86±0.20g),差异具有统计学意义(t=4.289,3.582,均P<0.01)。结论AMPK/CCL18轴可通过调控TAMs的M2型转化,促进宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。靶向阻断AMPK/CCL18轴可能为宫颈癌治疗提供新靶点和新策略。
