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发根农杆菌诱导牡丹生根的初步研究 被引量:16
1
作者 杨至德 王雁 +2 位作者 刘雪梅 缪崑 汤巧香 《林业科学研究》 CSCD 北大核心 2007年第2期292-295,共4页
The paper explored the possibility of hairy root occurrence of peony induced by Agrobactrium rhizogenes.It showed that R1000 had the highest hairy root inducement with a hairy root rate of 35%,whereas strains A4,MSU-2... The paper explored the possibility of hairy root occurrence of peony induced by Agrobactrium rhizogenes.It showed that R1000 had the highest hairy root inducement with a hairy root rate of 35%,whereas strains A4,MSU-2 and MT232 had little difference in hairy root occurrence.Infect conditions had great influence on hairy root inducement,and the better ones are: acetosyringone concentration,30 mg·L-1;infection time,15 minutes;and culturing conditions of strains,temperature 28 ℃,28 hours shaking culture under dark environment with shaking.Pre-experiment on tissue culture system of peony was conducted,and got better medium composition as: WP+6-BA 0.5 mg·L-1+ IBA 0.1 mg·L-1+GA30.5 mg·L-1for base buds,and MS + 6-BA 2.0 mg·L-1+IBA 0.1 mg·L-1+GA3 0.5 mg·L-1for stem segments. 展开更多
关键词 发根农杆菌 牡丹 侵染 组织培养 毛状根
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根癌农杆菌介导的高羊茅遗传转化研究 被引量:16
2
作者 赵军胜 支大英 +1 位作者 薛哲勇 夏光敏 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第6期579-585,共7页
采用携带卡那霉素抗性基因nptⅡ和Na+/H+反向运输AtNHX1基因的表达载体pROK2/AtNHX1(带有35S启动子)和pROK2U/AtNHX1(带有ubi1启动子)的根癌农杆菌AGL1和GV3101,对4个品种高羊茅下胚轴来源的胚性愈伤组织进行了遗传转化。胚性愈伤组织... 采用携带卡那霉素抗性基因nptⅡ和Na+/H+反向运输AtNHX1基因的表达载体pROK2/AtNHX1(带有35S启动子)和pROK2U/AtNHX1(带有ubi1启动子)的根癌农杆菌AGL1和GV3101,对4个品种高羊茅下胚轴来源的胚性愈伤组织进行了遗传转化。胚性愈伤组织经根癌农杆菌感染和共培养后,用50~150mg/L巴龙霉素筛选抗性愈伤组织,获得1126棵再生植株,用10~20mg/L卡那霉素进一步筛选再生植株,总共得到525棵绿色抗性植株。抗性植株的总DNA用AtNHX1基因的特异引物进行PCR检测,其中21棵为PCR阳性,最高转化频率为1.77%。Southern杂交结果证实,外源基因以低拷贝整合到高羊茅的基因组中,实验发现,在不同品种之间转化效率有所差异。 展开更多
关键词 高羊茅 ATNHX1基因 根癌农杆菌 转基因植株
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大豆子叶节植株再生体系的优化及转EPSPS基因的研究 被引量:7
3
作者 王伟 王罡 +2 位作者 季静 郑丽红 关春峰 《作物杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期23-27,共5页
为提高农杆菌介导转化大豆子叶节再生体系的遗传转化效率,优化了激素水平、基因型、抗生素及筛选压力等影响植株再生的多个因素,并用EPSPS基因转化大豆子叶节。结果表明,不定芽诱导培养基中6-苄氨基嘌呤(6-BA)浓度为1.6mg/L时,不定芽诱... 为提高农杆菌介导转化大豆子叶节再生体系的遗传转化效率,优化了激素水平、基因型、抗生素及筛选压力等影响植株再生的多个因素,并用EPSPS基因转化大豆子叶节。结果表明,不定芽诱导培养基中6-苄氨基嘌呤(6-BA)浓度为1.6mg/L时,不定芽诱导率最高,黑农37和合丰35的不定芽诱导率较吉育91高,吲哚丁酸(IBA)诱导生根的适宜浓度为0.5~1.0mg/L。头孢霉素的最适抑菌浓度为500mg/L,草甘膦有效筛选压力为8mg/L,并获得转EPSPS基因的抗性植株。 展开更多
关键词 大豆 子叶节 植株再生 遗传转化 农杆菌介导
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农杆菌介导的DREB1A基因转化多花黑麦草及其转化体系的优化 被引量:5
4
作者 李子东 赵翠珠 +3 位作者 周玲君 刘艳玲 向凤宁 夏光敏 《山东大学学报(理学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期11-17,共7页
采用携带卡那霉素抗性基因nptII和GUS基因的ubiquitin启动子驱动的表达载体pBI121/DREB1A的根癌农杆菌AGL1,对多花黑麦草幼胚来源的胚性愈伤组织进行了遗传转化,并优化了各种影响因素。胚性愈伤组织经根癌农杆菌感染和共培养后,用50 mg/... 采用携带卡那霉素抗性基因nptII和GUS基因的ubiquitin启动子驱动的表达载体pBI121/DREB1A的根癌农杆菌AGL1,对多花黑麦草幼胚来源的胚性愈伤组织进行了遗传转化,并优化了各种影响因素。胚性愈伤组织经根癌农杆菌感染和共培养后,用50 mg/L巴龙霉素筛选抗性愈伤组织,待抗性愈伤组织在IB分化培养基上分化成苗后用25 mg/L卡那霉素进一步筛选再生植株,获得了部分抗性植株。抗性植株的总DNA用DREB1A基因的特异引物进行PCR检测,转化频率为2.14%,PCR-Southern blot进一步验证了转化植株基因组中含有该外源基因。各种影响转化效率因素的优化实验表明,当转化时菌液浓度的OD600为2.0、侵染时间为1 h、共培养时间为2 d、共培养温度为21℃及在共培养期间使用乙酰丁香酮等,均可明显提高转化频率。 展开更多
关键词 多花黑麦草 DREB1A基因 根癌农杆菌 遗传转化
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农杆菌介导水稻幼胚转化获转基因植株 被引量:16
5
作者 朱常香 宋云枝 +2 位作者 亓苏伟 郑成超 温孚江 《山东农业大学学报(自然科学版)》 CSCD 2000年第1期1-7,共7页
本研究以根癌农杆菌LBA4404(pTOK233)为供试菌株,以水稻幼胚为供试材料,对影响农杆菌介导基因的转化效率的因素进行了研究,确立了农杆菌介导的水稻高效转化体系。采用所确立的转化体系转化了Radon、中国91、024283个水稻品种(系)幼胚,... 本研究以根癌农杆菌LBA4404(pTOK233)为供试菌株,以水稻幼胚为供试材料,对影响农杆菌介导基因的转化效率的因素进行了研究,确立了农杆菌介导的水稻高效转化体系。采用所确立的转化体系转化了Radon、中国91、024283个水稻品种(系)幼胚,结果表明,gusA基因的瞬时表达率均在70%左右,最高为76%;gusA基因稳定表达率均在20%以上,平均为23%。转基因植株的GUS活性检测及Southern杂交分析表明,外源基因已整合于水稻基因组中,进行了有效地表达,且能稳定地遗传给后代,外源基因在后代遗传符合孟德尔遗传规律。 展开更多
关键词 根癌农杆菌 水稻幼胚 基因转化 转基因植株
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诱导根癌农杆菌vir区基因表达水稻代谢物的分离、鉴定和生物活性研究 被引量:4
6
作者 刘煜 黄志纾 +5 位作者 肖剑国 古练权 许东晖 李宝健 吴厚铭 马侃 《有机化学》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1995年第1期72-75,共4页
从孕穗期至开花期水稻(oryza satire L.cv.India IR 72)的茎叶提取液中,筛选并分离出二种能高效诱导根癌农杆菌(Agrobacterium tumfaciens)vir区基因表达的信号分子,这两种信号分子的化学结构分别是5,7,4′-三羟基-3′-5′-二甲氧基黄酮... 从孕穗期至开花期水稻(oryza satire L.cv.India IR 72)的茎叶提取液中,筛选并分离出二种能高效诱导根癌农杆菌(Agrobacterium tumfaciens)vir区基因表达的信号分子,这两种信号分子的化学结构分别是5,7,4′-三羟基-3′-5′-二甲氧基黄酮和5,4′-二羟基-3′,5′-二甲氧基-7-β-D-葡萄糖氧基黄酮。 展开更多
关键词 水稻 黄酮类 根癌农杆菌
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根癌农杆菌介导FPF1基因转化菊花的研究 被引量:11
7
作者 皮伟 李名扬 《西南大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期70-73,共4页
经过转化材料的筛选、KM筛选浓度、Cef抗菌浓度以及延迟筛选时间的测定,以根癌农杆菌(Agrobactriumtumefaciens)LBA4404菌株介导FPF1基因转化菊花,对转化材料进行连续KM筛选,获得105株抗性苗,部分植株经PCR检测呈阳性.田间观察部分抗性... 经过转化材料的筛选、KM筛选浓度、Cef抗菌浓度以及延迟筛选时间的测定,以根癌农杆菌(Agrobactriumtumefaciens)LBA4404菌株介导FPF1基因转化菊花,对转化材料进行连续KM筛选,获得105株抗性苗,部分植株经PCR检测呈阳性.田间观察部分抗性株与对照相比在株型、叶色及花期上表现出差异. 展开更多
关键词 菊花 根癌农杆菌 遗传转化
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根癌农杆菌介导欧美杨108遗传转化体系的优化 被引量:3
8
作者 邹莉 孙婷婷 +2 位作者 许继飞 于洋 谭昀 《安徽农业科学》 CAS 2012年第32期15585-15587,15616,共4页
[目的]优化根癌农杆菌介导的欧美杨108遗传转化体系。[方法]以欧美杨108无菌苗的叶片为外植体,通过农杆菌介导法对其遗传转化体系进行优化研究。[结果]试验获得的优化转化体系如下:农杆菌介导欧美杨108遗传转化的潮霉素最佳叶片分化浓度... [目的]优化根癌农杆菌介导的欧美杨108遗传转化体系。[方法]以欧美杨108无菌苗的叶片为外植体,通过农杆菌介导法对其遗传转化体系进行优化研究。[结果]试验获得的优化转化体系如下:农杆菌介导欧美杨108遗传转化的潮霉素最佳叶片分化浓度为2mg/L,生根浓度为1 mg/L。优化筛选的最适转化条件为:预培养48 h,菌液浓度OD600为0.4,侵染15 min,共培养48 h。试验共获得18个抗性愈伤和抗性芽,转化频率为4.3%;经PCR检测初步证明TCS基因已整合至欧美杨108再生植株中。[结论]该研究建立了高效欧美杨108叶片农杆菌介导的遗传转化体系。 展开更多
关键词 根癌农杆菌 欧美杨108 遗传转化
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天花粉蛋白基因导入欧美杨108 被引量:1
9
作者 孙婷婷 邹莉 +1 位作者 许继飞 于洋 《东北林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期164-166,174,共4页
为获得含有天花粉蛋白(TCS)的转基因欧美杨108植株,进行了植物表达载体的构建以及导入欧美杨108的研究。将北京大学惠赠的含有TCS启动子及结构基因的质粒pT1-3经SacⅠ和BamHⅠ双酶切后与同样双酶切的载体pCambia1301用T4 DNA连接酶相连... 为获得含有天花粉蛋白(TCS)的转基因欧美杨108植株,进行了植物表达载体的构建以及导入欧美杨108的研究。将北京大学惠赠的含有TCS启动子及结构基因的质粒pT1-3经SacⅠ和BamHⅠ双酶切后与同样双酶切的载体pCambia1301用T4 DNA连接酶相连,转化大肠杆菌,构建植物表达载体pC-tPro-TCS。将构建的植物表达载体转入农杆菌LBA4404,采用农杆菌介导法,将其导入欧美杨108中。结果表明,共得到18个潮霉素抗性愈伤和抗性芽,转化效率为4.3%。抗性体经PCR和PCR-Southern检测,初步确认TCS基因已经导入到欧美杨108中。 展开更多
关键词 欧美杨108 TCS基因 根癌农杆菌 遗传转化
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HBV S/HEV ORF2融合基因对番茄的遗传转化 被引量:2
10
作者 果洪宇 于源华 张振民 《长春理工大学学报(自然科学版)》 2007年第4期76-79,共4页
应用重组PCR技术将乙肝病毒(HBV)S基因连接在戊肝病毒(HEV)ORF2部分序列的5′端,二者通过柔性肽(Gly4Ser)2序列相连,构建成融合基因BE。将融合基因BE克隆到植物双元表达载体pBin438上,获得pBin438BE,然后用冻融法将其转入根癌农杆菌EHA... 应用重组PCR技术将乙肝病毒(HBV)S基因连接在戊肝病毒(HEV)ORF2部分序列的5′端,二者通过柔性肽(Gly4Ser)2序列相连,构建成融合基因BE。将融合基因BE克隆到植物双元表达载体pBin438上,获得pBin438BE,然后用冻融法将其转入根癌农杆菌EHA105中,侵染丽春番茄子叶和下胚轴,经预培养、共培养、筛选培养、生根培养获得了5株抗卡那霉素的番茄植株。提取抗性植株基因组DNA,进行PCR及PCR-Southern检测,4株获得阳性信号。初步表明目的基因已整合到了番茄基因组中。 展开更多
关键词 乙肝病毒S基因 戊肝病毒ORF2 融合基因 农杆菌 转基因番茄
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HBsAg/截短型HCV核心蛋白融合基因植物表达载体的构建及对番茄的遗传转化 被引量:1
11
作者 何秀霞 于源华 +2 位作者 于鹏 张晓 张振明 《长江蔬菜》 北大核心 2008年第07X期41-44,共4页
探索乙肝病毒表面抗原/截短型HCV核心蛋白融合基因在植物中表达乙肝丙肝双价抗原的可能性.以期为进一步研制植物乙肝丙肝双价口服疫苗打下基础。利用重组PCR技术将乙肝病毒(HBV)S基因连接在丙肝病毒(HCV)截短型核心蛋白序列的5′端,二... 探索乙肝病毒表面抗原/截短型HCV核心蛋白融合基因在植物中表达乙肝丙肝双价抗原的可能性.以期为进一步研制植物乙肝丙肝双价口服疫苗打下基础。利用重组PCR技术将乙肝病毒(HBV)S基因连接在丙肝病毒(HCV)截短型核心蛋白序列的5′端,二者通过柔性肽(Gly4Ser)2序列相连,构建成-融合基因BC,测序结果正确。将融合基因BC克降到植物表达载体pBin438上,获得pBin438BC,然后用冻融法将其转入根癌农杆菌EHA105中,采用叶盘法转化番茄。获得了15株抗卡那霉素的番茄植株。对抗性植株进行PCR及Southern检测,8株获得阳性信号,表明目的基因已整合到了番茄基因组中。提取阳性植株的总蛋白.经透析后.将适当浓度蛋白质点在PVDF膜上,用Dot-ELISA方法验证番茄中表达蛋白的活性。结果表明,转基因番茄中有重组蛋白的表达。 展开更多
关键词 乙肝病毒S基因 丙肝病毒核心蛋白 融合基因 农杆菌 转基因番茄
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根癌农杆菌attM基因的克隆及表达
12
作者 马宏 贾振华 +3 位作者 张岩峰 张星炜 房宝玲 宋水山 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期8-11,共4页
目的:利用γ-丁内酯在基因工程菌中合成聚-4-羟基丁酸酯。方法:利用PCR技术克隆内酯水解酶attM基因,进行体外表达,并导入质粒pKSSE5.3,构建新的工程菌,进行摇瓶培养。结果:测序结果显示DNA序列全长1 077 bp,包含771bp的开放阅读框,编码... 目的:利用γ-丁内酯在基因工程菌中合成聚-4-羟基丁酸酯。方法:利用PCR技术克隆内酯水解酶attM基因,进行体外表达,并导入质粒pKSSE5.3,构建新的工程菌,进行摇瓶培养。结果:测序结果显示DNA序列全长1 077 bp,包含771bp的开放阅读框,编码256个氨基酸。携带attM基因的表达载体能够进行正常表达,内酯酶活性为5.82U/mL;在摇瓶培养条件下,工程菌E.coli XL1-Blue(pKSSE5.3M9)的培养液中P(4HB)占细胞干重的含量为29%。结论:成功克隆了attM基因,新构建的工程菌能利用γ-丁内酯为碳源合成聚-4-羟基丁酸酯。 展开更多
关键词 根癌农杆菌 attM基因 Γ-丁内酯 4-羟基丁酸 聚-4-羟基丁酸酯 重组大肠杆菌
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Cry2A基因植物表达载体构建及其转化子生长曲线的建立
13
作者 高世武 郭晋隆 +2 位作者 许莉萍 杨颖颖 陈如凯 《亚热带农业研究》 2010年第4期284-288,共5页
根据定向克隆原则,以pCAMBIA2301为载体骨架,Cry2A基因为目的基因,构建了大小为15354 bp的植物表达载体p2AST2301。新载体带有抗虫基因Cry2A和筛选标记基因NPTⅡ,适合通过农杆菌进行遗传转化,并以抗生素G418为筛选底物。同时将新载体转... 根据定向克隆原则,以pCAMBIA2301为载体骨架,Cry2A基因为目的基因,构建了大小为15354 bp的植物表达载体p2AST2301。新载体带有抗虫基因Cry2A和筛选标记基因NPTⅡ,适合通过农杆菌进行遗传转化,并以抗生素G418为筛选底物。同时将新载体转化根癌农杆菌EHA105,获得了用于植物遗传转化的工程菌,并且明确了工程菌D600 nm值在1.0-1.6之间活力最强。 展开更多
关键词 Cry2A基因 表达载体 根癌农杆菌 EHA105
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农杆菌侵染过程中的Vir蛋白
14
作者 张坤 王继刚 李玉花 《生物技术通讯》 CAS 2007年第4期715-718,共4页
农杆菌作为目前广泛应用的遗传转化工具,其分子机理得到广泛深入的研究,尤其是位于Ti质粒上的Vir蛋白,在整个侵染过程中起非常重要的作用。从植物信号的感应到T-DNA的运输及整合,都是在Vir蛋白和植物因子的帮助下共同完成的。简要综述... 农杆菌作为目前广泛应用的遗传转化工具,其分子机理得到广泛深入的研究,尤其是位于Ti质粒上的Vir蛋白,在整个侵染过程中起非常重要的作用。从植物信号的感应到T-DNA的运输及整合,都是在Vir蛋白和植物因子的帮助下共同完成的。简要综述了近年来有关Vir蛋白在农杆菌侵染各阶段中作用的研究进展。 展开更多
关键词 Vir蛋白 T-DNA 农杆菌
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根癌农杆菌介导的金发草遗传转化条件的优化 被引量:3
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作者 李美玉 李锐 +2 位作者 于敏 王胜华 陈放 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期41-46,共6页
金发草(Pogonatherum paniceum)是一种多年生岩生草本植物,在生态恢复和景观建设中起着重要的作用。利用根癌农杆菌介导转化金发草胚性愈伤组织,通过GUS(β-葡萄糖苷酸酶)瞬时表达率研究菌液浓度、浸染时间、乙酰丁香酮(AS)浓度、葡萄... 金发草(Pogonatherum paniceum)是一种多年生岩生草本植物,在生态恢复和景观建设中起着重要的作用。利用根癌农杆菌介导转化金发草胚性愈伤组织,通过GUS(β-葡萄糖苷酸酶)瞬时表达率研究菌液浓度、浸染时间、乙酰丁香酮(AS)浓度、葡萄糖浓度、共培养时间等因素对金发草转化的影响,并利用确定的最佳条件将GUS基因转入金发草,获得稳定表达转化植株。结果表明:菌液浓度(OD600)为0.6,浸染时间为10min,添加20mg/L的乙酰丁香酮(AS)和10g/L的葡萄糖,共培养时间5d为最佳条件,GUS瞬时表达率最高。经过抗性筛选后最终获得阳性转基因植株频率为57%。再生植株经GUS染色和PCR检测证明,GUS基因已成功整合到金发草基因组中。此转化体系的建立为金发草的遗传改良及相关功能基因的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 金发草 愈伤组织 根癌农杆菌 遗传转化 GUS
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Production of Transgenic Plants:More, Better, and Faster
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作者 J. Layton L. Gilbertson 《分子植物育种》 CAS CSCD 2007年第2期273-273,共1页
Over the last two decades, transgenic plants have moved from being solely laboratory vehicles for basic research work to providing new varieties grown on large areas throughout the world. A number of
关键词 土豆 小麦 玉米 产量 种植
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