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Cloning and Sequence Analysis of Carbonic Anhydrase-related Protein 10-like in Apis mellifera
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作者 Zhaoying LI 《Agricultural Biotechnology》 CAS 2012年第4期46-48,53,共4页
[ Objective ] This study aimed to clone and analyze the gene sequence encoding carbonic anhydrase-related protein lO-like ( CARP X) from Apis mellif era. [Method] The cDNA sequence of CARPX gene was cloned through R... [ Objective ] This study aimed to clone and analyze the gene sequence encoding carbonic anhydrase-related protein lO-like ( CARP X) from Apis mellif era. [Method] The cDNA sequence of CARPX gene was cloned through RT-PCR, and then analyzed with bioinformatic method. [Result] The full-length cDNA sequence of CARPX was 972 bp long and encoded 324 amino acid residues, including a signal peptide and two transmembrane domains. The predicted molecular mass was 37.1 kDa and the predicted isoeleetric point was 7.458. The CARP X from A. mellifera shared close relationship with proteins from Apisflorae, Bombtas impatiens, Bombus terrestris, Nasonia vitripennis and Acyrthosiphon pisum. The insect CARP X family may include two subfamilies. [ Conclusion] The results pro- vide basis for studying CARPs family. 展开更多
关键词 apis mellifera CARP X gene CLONING Sequence analysis protein structure
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西方蜜蜂AmSTPKD3蛋白的分子特征与基因表达模式 被引量:1
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作者 董舒楠 邹培缘 +8 位作者 任亚萍 杜丽婷 李坤泽 臧贺 邱剑丰 周彤 傅佳妮 陈大福 郭睿 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第6期29-36,共8页
[目的]对西方蜜蜂(Apis mellifera)的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(AmSTPKD3)进行生物信息学分析,测定AmSTPKD3基因在西方蜜蜂工蜂的组织和发育阶段的表达模式,为AmSTPKD3的功能研究提供科学依据。[方法]利用相关生物信息学软件,预测AmSTPKD3... [目的]对西方蜜蜂(Apis mellifera)的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(AmSTPKD3)进行生物信息学分析,测定AmSTPKD3基因在西方蜜蜂工蜂的组织和发育阶段的表达模式,为AmSTPKD3的功能研究提供科学依据。[方法]利用相关生物信息学软件,预测AmSTPKD3的理化性质和分子特征,鉴定西方蜜蜂和其他物种(黑大蜜蜂(Apis laboriosa)、欧洲雄蜂(Bombus terrestris)、大蜜蜂(Apis dorsata)、小蜜蜂(Apis florea)、田野熊蜂(Bombus pascuorum)、东方蜜蜂(Apis cerana)、美洲东部熊蜂(Bombus impatiens)和巴西无刺蜜蜂(Frieseomelitta varia))STPKD3的结构域和保守基序。通过Mega 11.0软件对西方蜜蜂和其他物种的STPKD3进行系统进化分析。采用RT-qPCR方法,检测AmSTPKD3在西方蜜蜂不同组织(触角、毒腺、脑、中肠、脂肪体、表皮和咽下腺)和发育阶段(卵、3日龄幼虫、7和8日龄预蛹、12日龄蛹及1,2,6,12,15和18日龄成虫)的相对表达量。[结果]AmSTPKD3包含3 269个核苷酸,可编码831个氨基酸。AmSTPKD3的分子式为C4141H6511N1155O1283S40,分子质量约为94.29 ku,脂溶系数为77.36,等电点为6.09,平均亲水系数为-0.510,有99个磷酸化位点,但不含跨膜结构域和信号肽。在西方蜜蜂和其他8种蜜蜂的STPKD3中均鉴定到4个相同结构域和5个相同保守基序。西方蜜蜂与东方蜜蜂的STPKD3在进化树上聚为一支。AmSTPKD3在西方蜜蜂工蜂的触角、毒腺、脑、中肠、脂肪体、表皮和咽下腺中差异表达,在咽下腺中的表达量最高,且显著高于脑、中肠、脂肪体和表皮;AmSTPKD3在卵、3日龄幼虫、7和8日龄预蛹及12日龄蛹中差异表达,在卵和8日龄预蛹中的表达量相近,且显著高于3日龄幼虫和12日龄蛹;AmSTPKD3在1,2,6和12日龄成虫体内差异表达,在1日龄成虫体内的表达量最高且显著高于15和18日龄成虫。[结论]AmSTPKD3是潜在的亲水性蛋白和胞内蛋白,西方蜜蜂和其他9种蜂的STPKD3具有较高的保守性,西方蜜蜂与东方蜜蜂STPKD3的同源性最高,AmSTPKD3在西方蜜蜂工蜂的不同组织和发育阶段呈现动态差异表达。 展开更多
关键词 西方蜜蜂 丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶 理化性质 分子特征 系统进化 时空表达谱
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芹菜过敏原蛋白Api g 1基因的克隆与表达分析 被引量:9
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作者 李梦瑶 王枫 +4 位作者 侯喜林 蒋倩 王镇 马静 熊爱生 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期13-19,共7页
以2个芹菜(Apium graveolens)品种‘津南实芹’和‘美国西芹’为试验材料,分别克隆出过敏原蛋白Api g 1基因。序列分析表明,‘津南实芹’和‘美国西芹’中的过敏原蛋白基因Api g 1均含有1个480 bp的开放阅读框及1个148 bp的内含子,分别... 以2个芹菜(Apium graveolens)品种‘津南实芹’和‘美国西芹’为试验材料,分别克隆出过敏原蛋白Api g 1基因。序列分析表明,‘津南实芹’和‘美国西芹’中的过敏原蛋白基因Api g 1均含有1个480 bp的开放阅读框及1个148 bp的内含子,分别编码159个氨基酸,二者有2个核苷酸位点的差异,编码的氨基酸有1个位点差异。‘津南实芹’和‘美国西芹’的过敏原蛋白Api g 1与胡萝卜、欧芹等植物的过敏原蛋白相似度较高,在保守区域有7个甘氨酸残基,空间结构上由3个螺旋和7个折叠组成。实时定量PCR表达分析显示,该基因在主根中表达较高,茎其次,其他部位表达较弱,具有明显的组织特异性。 展开更多
关键词 芹菜 过敏原蛋白 api g 1基因 克隆 实时定量PCR 基因表达
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蜜蜂表皮蛋白apidermin(apd)基因家族3个新成员的特性鉴定及昆虫APD家族序列特征的分析 被引量:5
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作者 孙亮先 黄周英 +3 位作者 郑华军 葛清秀 龚丽萍 陈怀宇 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期12-23,共12页
Apidermin(APD)蛋白家族是一个新的昆虫结构性表皮蛋白家族。本研究结合生物信息学和RT-PCR扩增,对意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica(简称"意蜂")的apd-1-like,apd-3-like和中华蜜蜂Apis cerena cerena(简称"中蜂&quo... Apidermin(APD)蛋白家族是一个新的昆虫结构性表皮蛋白家族。本研究结合生物信息学和RT-PCR扩增,对意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica(简称"意蜂")的apd-1-like,apd-3-like和中华蜜蜂Apis cerena cerena(简称"中蜂")的apd-2等3个新的apd基因的结构特征和表达进行了分析,并分析了昆虫APD蛋白家族的序列特征。结果显示,在西方蜜蜂Apis mellifera(简称"西蜂")中,apd基因家族的6个成员串联排列在基因组序列第4号连锁群上,它们在A.m.ligustica雄蜂头部中的转录水平差异明显,且其启动子序列所含顺式元件也不同。中蜂apd-2和意蜂apd-1-like都含有3个外显子和2个内含子,而意蜂apd-3-like则由4个外显子和3个内含子组成。蛋白序列分析结果显示,目前已知的10条APD蛋白序列N末端均具有相似的信号肽序列,其成熟蛋白分子量为6.0~37.0kD,pI为6.2~10.8。其中西蜂的APD1-3、APD-like和东方蜜蜂Apiscerena的APD-2等5条较短的多肽中疏水氨基酸残基达52%~67%,且Ala含量最为丰富(占25%~34%);而丽蝇蛹集金小蜂Nasonia vitripennis的APD1-3和西蜂APD-1-like,APD-3-like等另外5条APD多肽富含Gly(21%~30%),其序列中疏水氨基酸残基含量为35%~41%。多肽序列多重比对和系统进化分析结果显示,APD家族可划分为2个亚家族。亚家族Ⅰ含有西蜂APD1-3和东方蜜蜂APD-2等4条较短的多肽序列,其N末端为一个长33aa的保守基序;亚家族Ⅱ由另外6条相对较长的多肽序列组成,其N末端保守基序长50aa,C末端保守基序长16aa。本文所描述的APD蛋白家族序列特征有助于以后从其他昆虫中鉴定新的apd基因。 展开更多
关键词 西方蜜蜂 东方蜜蜂 表皮蛋白 apidermin基因 APD家族 序列分析 生物信息学分析
原文传递
中华蜜蜂PP2A基因的时空表达谱及蛋白分子特征
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作者 康婧 陈颖 +7 位作者 孙恺玥 王勇杰 臧贺 冯睿蓉 付中民 陈大福 邱剑丰 郭睿 《应用昆虫学报》 北大核心 2025年第4期915-924,共10页
【目的】本研究旨在通过测定中华蜜蜂Apis cerana cerana蛋白磷酸酶2A(Protein phosphatase 2A ,PP2A)基因AcPP2A的时空表达谱和解析AcPP2A蛋白的理化性质和分子特征,为进一步研究PP2A在中华蜜蜂生长发育中的功能提供参考和基础。【方... 【目的】本研究旨在通过测定中华蜜蜂Apis cerana cerana蛋白磷酸酶2A(Protein phosphatase 2A ,PP2A)基因AcPP2A的时空表达谱和解析AcPP2A蛋白的理化性质和分子特征,为进一步研究PP2A在中华蜜蜂生长发育中的功能提供参考和基础。【方法】通过RT-qPCR检测AcPP2A在中华蜜蜂工蜂的触角、中肠、脑、毒腺、表皮、咽下腺和脂肪体等组织,卵、幼虫、预蛹和蛹及不同日龄工蜂成虫中的相对表达量。使用NCBI网站上的ORF工具,Expasy网站上的Protparam、ProtScale和SWISS-model软件,SignalP4.1 Server、NetPhos 3.1 Server、TMHMM和SOPMA等软件预测AcPP2A蛋白的分子特征和理化性质,鉴定中华蜜蜂和其他物种PP2A的保守基序和结构域,并构建系统进化树。【结果】AcPP2A含有5 174个核苷酸,可编码475个氨基酸;AcPP2A的蛋白分子量约为54.78 kD,脂溶系数为78.80,等电点为5.97,分子式为C2411H3781N671O742S23,平均亲水系数为﹣0.521;AcPP2A不含跨膜结构域和信号肽。中华蜜蜂、无刺蜂Melipona quadrifasciata、西方蜜蜂Apis mellifera、美洲东北熊蜂Bombus impatiens、橡子蚂蚁Temnothorax curvispinosus、苜蓿切叶蜂Megachile rotundata、火红熊蜂Bombus pyrosoma、巴西无刺蜂Frieseomelitta varia、顶切叶蚁Acromyrmex echinatior、东南蓝莓蜂Habropoda laboriosa、鸭嘴海豆芽Lingula anatina的PP2A含有相同的6个保守基序(Motif1、Motif2、Motif3、Motif4、Motif5和Motif6)和1个相同的结构域(CDC55超家族)。中华蜜蜂与橡子蚂蚁的PP2A在进化树上聚为一支。【结论】AcPP2A是潜在的酸性蛋白、亲水性蛋白和非跨膜胞内蛋白,具有较高的保守性;AcPP2A的表达存在组织及发育阶段的广泛性和差异性,在毒腺和卵发育中可能发挥重要功能。 展开更多
关键词 中华蜜蜂 蛋白磷酸酶2A 时空表达谱 蛋白分子特征
原文传递
意大利蜜蜂化学感受蛋白AmelCSP2序列分析及表达特性研究
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作者 张宇 宋彦婷 +1 位作者 郭丽娜 郭媛 《南方农业学报》 北大核心 2025年第1期287-294,共8页
【目的】探究意大利蜜蜂(Apis mellifera)化学感受蛋白CSP2(AmelCSP2)序列特征及AmelCSP2基因组织表达特性,为阐明AmelCSP2蛋白的生物学功能提供理论参考。【方法】利用ProtParam、ProtScal、SignalP-5.0、TMHMM-2.0、PSORTb 3.0.3、Dic... 【目的】探究意大利蜜蜂(Apis mellifera)化学感受蛋白CSP2(AmelCSP2)序列特征及AmelCSP2基因组织表达特性,为阐明AmelCSP2蛋白的生物学功能提供理论参考。【方法】利用ProtParam、ProtScal、SignalP-5.0、TMHMM-2.0、PSORTb 3.0.3、DictyOGlyc-1.1、NetNGlyc-1.0、NetPhos 3.1、SWISS-MODEL、CD-search、SMART和STRING等生物信息学软件预测AmelCSP2蛋白理化性质、亲/疏水性、信号肽、跨膜结构域、亚细胞定位、O-糖基化位点、N-糖基化位点、磷酸化位点、高级结构、模体、结构域和蛋白互作网络。采用实时荧光定量PCR检测AmelCSP2基因在意大利蜜蜂触角、头(不含触角)、胸、腹、足、翅中的相对表达量。【结果】AmelCSP2蛋白编码117个氨基酸残基,理论分子量约13.06 kD,理论等电点(pI)为9.27,分子脂肪系数为92.56,不稳定系数为59.68,平均亲水性指数为-0.254,为两性不稳定蛋白。AmelCSP2蛋白在第1~21位氨基酸残基处有信号肽,不含跨膜结构域,主要定位于细胞周质、细胞质和细胞外膜。AmelCSP2蛋白不存在糖基化位点,但存在20个磷酸化位点。AmelCSP2蛋白二级结构中无规则卷曲占42.74%,α-螺旋占38.46%,延伸链占18.80%,蛋白三级结构较稳定。AmelCSP2蛋白属于OS-D超家族,在第32~116位氨基酸残基处存在唯一蛋白结构域OS-D。AmelCSP2蛋白可能与PYX2、ASP3、OBP3c、NT-7及OBP14蛋白存在相互作用。AmelCSP2基因在意大利蜜蜂的触角、头(不含触角)、胸、腹、足、翅中均有表达,触角中AmelCSP2基因相对表达量显著高于其他组织(P<0.05)。【结论】AmelCSP2蛋白具有典型的OS-D超家族结构域,并含有多个磷酸化位点,可能通过磷酸化修饰调控其功能。AmelCSP2蛋白可能与PYX2、ASP3、OBP3c、NT-7及OBP14蛋白相互作用,参与化学感受信号传导。AmelCSP2基因在意大利蜜蜂触角中高表达,其可能在嗅觉感受系统中承担气味分子运输功能。 展开更多
关键词 意大利蜜蜂 AmelCSP2蛋白 生物信息学 表达特性
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西方蜜蜂肽聚糖识别蛋白相关基因的剪接异构体鉴定及分析
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作者 冯佩林 朱乐冉 +9 位作者 臧贺 刘小玉 康婧 邱剑丰 刘锋 徐细建 骆群 陈大福 郭睿 徐国钧 《昆虫学报》 北大核心 2025年第2期133-143,共11页
【目的】本研究旨在系统鉴定和分析西方蜜蜂Apis mellifera肽聚糖识别蛋白(peptidoglycan recognition protein,PGRP)相关基因及其剪接异构体,探析PGRP基因剪接异构体编码蛋白的理化性质和分子特征,并测定PGRP基因剪接异构体在西方蜜蜂... 【目的】本研究旨在系统鉴定和分析西方蜜蜂Apis mellifera肽聚糖识别蛋白(peptidoglycan recognition protein,PGRP)相关基因及其剪接异构体,探析PGRP基因剪接异构体编码蛋白的理化性质和分子特征,并测定PGRP基因剪接异构体在西方蜜蜂工蜂成虫应答东方蜜蜂微孢子虫Nosema ceranae侵染中的表达模式,以期为西方蜜蜂PGRP基因剪接异构体的功能研究提供参考和依据。【方法】基于已获得的西方蜜蜂8和11日龄工蜂成虫中肠纳米孔测序数据,利用Blast工具将前期鉴定到的所有全长转录本分别比对到Nr和KEGG数据库,筛选出西方蜜蜂PGRP基因及其剪接异构体,并随机选择PGRP基因的5条剪接异构体通过RT-PCR验证序列的真实性。使用Gffcompare软件将鉴定到的PGRP基因序列比对至西方蜜蜂参考基因组以优化基因结构。采用Astalavista软件鉴定PGRP基因的可变剪接(alternative splicing,AS)事件类型,再通过RT-PCR和Sanger测序验证AS事件。利用相关软件预测和分析PGRP基因剪接异构体编码蛋白的理化性质和分子特征。采用RT-qPCR检测东方蜜蜂微孢子虫接种后西方蜜蜂工蜂成虫中肠中PGRP基因剪接异构体的相对表达量。【结果】共鉴定到西方蜜蜂的4个PGRP相关基因(PGRP-3,PGRP-S2,PGRP-LC和PGRP-LB)及其19条剪接异构体。通过RT-PCR与Sanger测序证实了PGRP基因5条剪接异构体(rna14029,ONT.6350.8,ONT.6350.10,rna24089和ONT.6350.7)的表达和序列真实性。PGRP-3(gene10434)的5′和3′端分别延长了8和1055 bp,PGRP-S2(gene10435)的5′和3′端分别延长了27和234 bp。通过RT-PCR证实了PGRP-S2的AS事件的真实性。剪接异构体ONT.6350.2编码蛋白的分子式为C_(966)H_(1502)N_(272)O_(275)S_(7),分子量约为21527.63 D,理论等电点为8.94,平均亲水性为-0.119,含有信号肽和PGRP结构域,不含跨膜结构域;剪接异构体ONT.6350.6编码蛋白分子式为C_(841)H_(1301)N_(243)O_(244)S_(5),分子量约为18860.46 D,理论等电点9.14,平均亲水性为-0.324,不含跨膜结构域和信号肽。西方蜜蜂与东方蜜蜂A.cerana的PGRP-S2在进化树上聚为一支。相较于未接种东方蜜蜂微孢子虫的对照组,接种东方蜜蜂微孢子虫的西方蜜蜂工蜂成虫中肠中剪接异构体ONT.6350.2的表达量在接种后2和4 d时显著上调,在接种后3 d时极显著上调;剪接异构体ONT.6350.6与ONT.6350.2的表达模式相同;剪接异构体ONT.6350.2和ONT.6350.6在接种东方蜜蜂微孢子虫后1-4 d时总体上均表现为上升表达趋势。【结论】本研究优化了西方蜜蜂参考基因组上已注释的PGRP-3和PGRP-S2基因结构;揭示剪接异构体ONT.6350.2的编码蛋白可能是分泌蛋白,而剪接异构体ONT.6350.6的编码蛋白可能是胞内蛋白;西方蜜蜂与东方蜜蜂的PGRP-S2同源性最高;剪接异构体ONT.6350.2和ONT.6350.6在西方蜜蜂工蜂成虫应答东方蜜蜂微孢子虫侵染中被激活表达。 展开更多
关键词 西方蜜蜂 东方蜜蜂微孢子虫 肽聚糖识别蛋白 纳米孔测序 剪接异构体
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江西省5种特色中蜂蜂蜜品质特性及抑菌活性研究
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作者 李震 周滔 +3 位作者 李淑云 曾青 李哲鹏 颜伟玉 《蜜蜂杂志》 2025年第9期1-10,共10页
为了探究锥属蜜、树参蜜、赤楠蜜、壳斗蜜及五倍子蜜等5种江西省中蜂蜂蜜的品质特性,试验对其蛋白质、氨基酸、矿物质、过氧化氢含量及抑菌能力进行研究。结果表明:锥属蜜蛋白质(0.675±0.010)g/100g和氨基酸(0.3736±0.0216)g/... 为了探究锥属蜜、树参蜜、赤楠蜜、壳斗蜜及五倍子蜜等5种江西省中蜂蜂蜜的品质特性,试验对其蛋白质、氨基酸、矿物质、过氧化氢含量及抑菌能力进行研究。结果表明:锥属蜜蛋白质(0.675±0.010)g/100g和氨基酸(0.3736±0.0216)g/100g含量最高。壳斗蜜富含镁、锰元素,赤楠蜜铜元素含量显著,五倍子蜜钙含量最高,而锥属蜜在锌、磷、硒元素的含量上具有明显优势。过氧化氢含量由高到低排序,依次为赤楠蜜、壳斗蜜、五倍子蜜、锥属蜜、树参蜜。5种蜂蜜均具有抑菌、杀菌能力,可以降低最大细菌密度、最大生长速率和延长延滞期。对大肠杆菌的抑制能力由强到弱依次为赤楠蜜>壳斗蜜>五倍子蜜=锥属蜜>树参蜜。说明不同蜜源的蜂蜜中蛋白质、氨基酸、矿物质、过氧化氢含量和抑菌能力均呈现显著差异。赤楠蜜表现出和麦卢卡蜂蜜相近的抑菌性,具有打造为抑菌剂的潜力。 展开更多
关键词 中蜂蜂蜜 蛋白质 氨基酸 矿物质 过氧化氢 抑菌能力
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意大利蜜蜂的Dna JC1的生物信息学分析
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作者 张雅林 徐瑞 +2 位作者 刘静怡 李胜楠 赵航 《蜜蜂杂志》 2025年第4期4-10,共7页
本研究通过生物信息学方法对意大利蜜蜂(Apis mellifera)的DnaJC1进行了深入分析,旨在揭示其在蜜蜂应对环境热激胁迫中的潜在作用。蜜蜂作为重要的授粉昆虫,在生态系统中扮演着关键角色,但面临着全球变暖等环境问题的威胁。DnaJC1作为Hs... 本研究通过生物信息学方法对意大利蜜蜂(Apis mellifera)的DnaJC1进行了深入分析,旨在揭示其在蜜蜂应对环境热激胁迫中的潜在作用。蜜蜂作为重要的授粉昆虫,在生态系统中扮演着关键角色,但面临着全球变暖等环境问题的威胁。DnaJC1作为Hsp40家族成员,具有分子伴侣功能,对维持细胞内蛋白质稳定性至关重要。本研究利用NCBI、DnaMAN、MEGA11等平台,对Dna JC1的理化性质、跨膜结构、保守区域、细胞定位、进化信息及蛋白互作网络展开分析。结果显示,DnaJC1具有亲水性,可能具有跨膜结构,并定位于内质网。此外,同源性分析和系统进化树的结果表明意大利蜜蜂的DnaJC1在进化上具有保守性。蛋白质互作网络揭示了DnaJC1与其他蛋白质的潜在互作关系。对DnaJC1的二级和三级结构的预测为进一步的实验研究奠定了基础。本研究不仅加深了对蜜蜂热激响应机制的认识,也为蜜蜂的保护和育种提供了理论支持。 展开更多
关键词 生物信息学 意大利蜜蜂 DnaJCl 蛋白质特征 同源性分析
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猪囊尾蚴API基因原核表达条件的优化 被引量:1
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作者 苏文强 胡鑫宇 +11 位作者 王秋霞 欧长波 郭爱疆 李辉 骆学农 余燕 张艳红 姜金庆 刘兴友 马金友 王松 才学鹏 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2017年第8期1-6,共6页
【目的】获得猪囊尾蚴凋亡蛋白酶抑制剂(API)基因在大肠杆菌中的最佳表达条件,为API功能研究奠定基础。【方法】以表达载体pEGX-4T-1、pET-30a及猪囊尾蚴API基因的原核表达载体pEGX-4T-1/API-Flag、pET-30a/API为材料,对影响API蛋白表... 【目的】获得猪囊尾蚴凋亡蛋白酶抑制剂(API)基因在大肠杆菌中的最佳表达条件,为API功能研究奠定基础。【方法】以表达载体pEGX-4T-1、pET-30a及猪囊尾蚴API基因的原核表达载体pEGX-4T-1/API-Flag、pET-30a/API为材料,对影响API蛋白表达的载体(pEGX-4T-1、pET-30a)、温度(25,30,37℃)、诱导时间(2,4,6,8h)、IPTG终浓度(0.2,0.4,0.6,0.8,1.0mmol/L)和卡那霉素终浓度(100,200,300,400mmol/L)等条件进行优化,筛选重组蛋白最佳的表达条件。对在最佳条件下获取的目的蛋白进行超声处理,4℃、10 000r/min离心分别收集上清液和沉淀,对目的蛋白进行可溶性分析;SDS-PAGE后,将目的蛋白条带转印至硝酸纤维素膜上,与抗His标签抗体共孵育,检测目的蛋白的反应原性。【结果】当选择pET系列载体(pET-30a)时,API表达量高于其在pGEX系列(pGEX-4T-1)中的表达量。API融合蛋白最佳表达条件为:在含200mmol/L卡那霉素的LB培养基上于37℃培养3h后,加入终浓度为0.4mmol/L的IPTG,再于30℃诱导培养6h。SDS-PAGE结果表明,pET-30a/API融合蛋白分子质量约为53ku,与预期蛋白分子质量一致。Western-blot检测结果显示,重组蛋白pET-30a/API能够识别特异性抗体,显示获得了大量表达正确的目的蛋白。【结论】确定了API基因的最佳表达条件,获得了较大表达量的API融合蛋白。 展开更多
关键词 猪囊尾蚴 凋亡蛋白酶抑制基因 api蛋白 原核表达
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生物蛋白API对肉兔生长性能和肠道健康的影响 被引量:2
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作者 张莉 汤加勇 +5 位作者 贾刚 田刚 刘光芒 陈小玲 蔡景义 赵华 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第7期4696-4703,共8页
本试验旨在研究饲粮中添加不同水平生物蛋白API(含鲶鱼抗菌肽parasin I功能片段的基因工程蛋白)对肉兔生长性能和肠道健康的影响。选取30日龄健康且体重[(644.93±31.92)g]相近的断奶伊拉商品肉兔144只,随机分为4组,每组18个重复,... 本试验旨在研究饲粮中添加不同水平生物蛋白API(含鲶鱼抗菌肽parasin I功能片段的基因工程蛋白)对肉兔生长性能和肠道健康的影响。选取30日龄健康且体重[(644.93±31.92)g]相近的断奶伊拉商品肉兔144只,随机分为4组,每组18个重复,每个重复2只兔。对照组饲喂基础饲粮,试验组分别在基础饲粮中添加0.1、0.5和1.0 mg/kg API。试验期8周。结果表明:1)饲粮中添加API对肉兔末重、平均日采食量(ADFI)、平均日增重(ADG)和料重比(F/G)无显著影响(P>0.05)。与对照组相比,饲粮中添加1.0 mg/kg API可降低肉兔腹泻率、死亡率和健康风险指数。2)与对照组相比,饲粮中添加1.0 mg/kg API可显著降低盲肠大肠杆菌数量(P<0.05),并显著提高盲肠丙酸比例(P<0.05)。3)与对照组相比,饲粮中添加1.0 mg/kg API可显著提高空肠封闭蛋白-1(Claudin-1)的mRNA相对表达量(P<0.05),饲粮中添加0.5和1.0 mg/kg API可显著提高空肠白细胞介素-2(IL-2)的mRNA相对表达量(P<0.05)。4)与对照组相比,饲粮中添加1.0 mg/kg API可显著提高空肠淀粉酶活性(P<0.05),饲粮中添加0.1、0.5和1.0 mg/kg API均可显著提高空肠脂肪酶和胰蛋白酶活性(P<0.05)。综上所述,饲粮中添加API可降低肉兔腹泻率、死亡率和盲肠大肠杆菌数量,提高空肠Claudin-1和IL-2的mRNA相对表达量,提高空肠消化酶活性,表明API可提高肉兔的消化能力和改善肠道屏障,从而促进肠道健康。综合来看,本试验饲粮中API的适宜添加水平为1.0 mg/kg。 展开更多
关键词 生物蛋白api 肉兔 生长性能 肠道健康
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生物蛋白API对肉鸡生长性能和肠道健康的影响 被引量:2
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作者 彭春芳 赵华 +6 位作者 唐昱婷 赵婉馨 贾刚 刘光芒 田刚 蔡景义 汤加勇 《四川农业大学学报》 CSCD 北大核心 2022年第5期676-682,689,共8页
【目的】旨在探讨不同水平生物蛋白API(artificial parasin I protein,含鲶鱼抗菌肽parasin I功能片段的基因工程蛋白)添加对肉鸡生长性能和肠道健康的影响。【方法】将450羽1日龄爱拔益加(AA)肉鸡随机分为5组,对照组饲喂基础饲粮,试验... 【目的】旨在探讨不同水平生物蛋白API(artificial parasin I protein,含鲶鱼抗菌肽parasin I功能片段的基因工程蛋白)添加对肉鸡生长性能和肠道健康的影响。【方法】将450羽1日龄爱拔益加(AA)肉鸡随机分为5组,对照组饲喂基础饲粮,试验组在基础饲粮中分别添加API 250、500、750、1000 mg/kg。每组10个重复,每个重复9只鸡,试验期为42 d。【结果】(1)API添加一定程度提高了鸡只末重,其中500 mg/kg API组鸡只末重较对照组提高了79.62 g/只(P>0.05)。(2)API添加降低了空肠隐窝深度并增加了其绒隐比(P<0.05),且结果呈二次线性变化(P=0.008),但对十二指肠和回肠的组织形态无显著影响(P>0.05)。(3)API添加具有提高空肠黏膜中α-淀粉酶活性的趋势(P=0.090),其中500 mg/kg API组α-淀粉酶活性最高;α-淀粉酶活性与API添加水平呈二次线性变化(P=0.033)。(4)API添加增加了盲肠中总菌数量(P<0.01),其中750 mg/kg API添加降低了大肠杆菌数量(P<0.05)且增加了乳酸杆菌数量(P<0.01);结果均与API添加水平呈二次线性相关(P<0.01)。(5)1000 mg/kg API添加上调了空肠中OCLN的表达丰度(P<0.05);500和750 mg/kg API添加下调了十二指肠中TNF-α的表达丰度(P<0.05);API添加上调了空肠中IL-10的表达(P<0.05),下调了空肠TNF-α(P<0.01)和IFN-γ(P<0.05)的表达。【结论】API通过改善肉鸡肠道形态屏障功能,提高肠道消化酶活性,进而促进肠道健康。总体来看,本试验条件下API添加以750 mg/kg对鸡只肠道健康的改善效果较好。 展开更多
关键词 生物蛋白api 肉鸡 生长性能 肠道健康 肠道菌群
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Co-IP联合质谱分析筛选中华蜜蜂气味受体OR1和OR2的互作蛋白
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作者 郭丽娜 申红英 +3 位作者 王珏 于点点 张旭凤 郭媛 《福建农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期7-16,共10页
【目的】中华蜜蜂(Apis cerana cerana)是我国特有的蜜蜂品种,其高度灵敏的嗅觉系统能在复杂气味环境中识别群体内化学信号以及区分食物源散发的特异性气味分子,气味受体(Odorant receptors,ORs)在中蜂识别气味分子的行为过程中起到了... 【目的】中华蜜蜂(Apis cerana cerana)是我国特有的蜜蜂品种,其高度灵敏的嗅觉系统能在复杂气味环境中识别群体内化学信号以及区分食物源散发的特异性气味分子,气味受体(Odorant receptors,ORs)在中蜂识别气味分子的行为过程中起到了重要而又关键的作用。通过分析筛选OR1和OR2的互作蛋白,为深入探究OR1和OR2蛋白在蜜蜂嗅觉系统中的功能提供理论依据。【方法】通过构建OR1和OR2基因的真核表达载体pFastBac-OR1和pFastBac-OR2载体,转染Sf9细胞,提取细胞总蛋白,利用免疫共沉淀(Co-IP)联合质谱分析技术筛选鉴定与OR1和OR2互作的细胞蛋白,并对这些互作蛋白进行GO功能注释、KEGG信号通路和蛋白互作网络分析。【结果】IP组和IgG组重组蛋白在细胞内得到正确表达,利用Co-IP联合质谱分析技术共筛选到273个与OR1互作的细胞蛋白和204个与OR2互作的细胞蛋白,主要为微管蛋白、热休克蛋白、核糖体蛋白等。对这些蛋白进行GO功能富积分析,发现这些蛋白质涉及多种生物学功能,包括RNA剪接、核糖体和能量运输有关。KEGG信号通路分析结果表明互作蛋白参与调节了多条细胞内的重要通路,包括核糖体、剪接体、RNA转运等与核糖体相关的通路,丙酮酸代谢、硫胺素新陈代谢、脂肪酸生物合成、淀粉和蔗糖代谢、FoxO信号通路,Hedgehog信号通路等。【结论】OR1和OR2可能通过与多种蛋白直接或间接的相互作用调控并影响其嗅觉感受。 展开更多
关键词 中华蜜蜂 气味受体 免疫共沉淀 蛋白互作
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意大利蜜蜂防御素-2蛋白序列分析及表达特性研究
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作者 邓晓银 于点点 +3 位作者 王珏 张旭凤 郭媛 郭丽娜 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期1454-1462,共9页
【目的】对意大利蜜蜂(Apis mellifera)防御素-2蛋白(Defensin-2,Def-2)进行蛋白序列分析和表达特性研究,以期为意大利蜜蜂防御素基因的免疫防御机制、发育和代谢途径研究提供理论基础。【方法】利用生物信息学在线网站及软件对Def-2蛋... 【目的】对意大利蜜蜂(Apis mellifera)防御素-2蛋白(Defensin-2,Def-2)进行蛋白序列分析和表达特性研究,以期为意大利蜜蜂防御素基因的免疫防御机制、发育和代谢途径研究提供理论基础。【方法】利用生物信息学在线网站及软件对Def-2蛋白进行预测分析,并采用实时荧光定量PCR对意大利蜜蜂不同发育时期(幼虫期、蛹期及1、5、10、15、20、25和30 d成年期工蜂)的基因相对表达量进行检测分析。【结果】意大利蜜蜂防御素-2基因(Def-2)编码104个氨基酸残基,相对分子量为11858.90 Da,理论等电点(pI)为8.54,为两性不稳定蛋白。该蛋白N-末端有一段含21个氨基酸的信号肽,存在1个跨膜结构域,亚细胞主要定位于内质网、液泡和高尔基体,无糖基化位点,存在15个磷酸化位点,其二级结构以无规卷曲(54.81%)为主、延伸链(28.85%)分布较多,α-螺旋(16.35%)分布较少,蛋白序列高度保守,与Def-1、GB44032-PA、Dl-2、Imd等蛋白存在基因互作关系,具有防御蛋白样结构域(DEFL),结构域采用以半胱氨酸稳定的α/β支架为特征的结构,亲缘关系与小蜜蜂极为相近。Def-2基因在意大利蜜蜂不同发育时期的表达水平存在差异且随日龄增大而升高,30 d的相对表达量显著高于其他日龄(P<0.05)。【结论】意大利蜜蜂Def-2蛋白属于两性不稳定蛋白,参与细胞间信号传输并维持细胞正常形态;蛋白序列高度保守,亲缘关系与小蜜蜂最近,且该基因在30 d成年期工蜂中高丰度表达,推测其可能调节免疫基因转运而影响蜜蜂的免疫识别过程。 展开更多
关键词 意大利蜜蜂 防御素-2蛋白 表达差异 实时荧光定量PCR
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意大利蜜蜂DnaJC28的生物信息学分析 被引量:1
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作者 王姝威 夏文丽 +2 位作者 张呈豪 汪雨馨 赵航 《蜜蜂杂志》 2024年第3期23-31,共9页
DnaJ家族基因在动植物热激胁迫响应过程发挥重要作用。前期,我们通过转录组数据筛选到意大利蜜蜂响应热激胁迫的热激蛋白家族的一个基因DnaJC28。本文旨在运用生物信息学的方法分析意大利蜜蜂DnaJC28理化性质、跨膜区、保守结构域、核... DnaJ家族基因在动植物热激胁迫响应过程发挥重要作用。前期,我们通过转录组数据筛选到意大利蜜蜂响应热激胁迫的热激蛋白家族的一个基因DnaJC28。本文旨在运用生物信息学的方法分析意大利蜜蜂DnaJC28理化性质、跨膜区、保守结构域、核定位和亚细胞定位、信号肽序列、修饰位点(磷酸化和糖基化)、同源性分析、亲缘关系、互作蛋白和蛋白质结构。理化性质分析得到:DnaJC28相对分子量约42389.89Da,含有115个氨基酸残基,是一种带正电的亲水性蛋白质。跨膜区预测分析结果显示:DnaJC28蛋白质不含有跨膜结构域,可能属于胞外蛋白。保守结构域预测显示:意大利蜜蜂DnaJC28蛋白质存在保守的J结构域,主要通过刺激重要伴侣Hsp70的ATP酶活性发挥作用。核定位和亚细胞定位预测结果显示:DnaJC28被预测为有极大的概率在细胞核中发挥作用,但发现在预测的DnaJC28编码蛋白中不存在经典的核定位信号。对此可解释为在热激胁迫条件下,定位于细胞质的亚型可以转移至细胞核内。信号肽预测结果显示:DnaJC28蛋白质无信号肽,属于非分泌性蛋白质。蛋白质修饰位点预测结果分析显示:DnaJC28蛋白质存在24个潜在的磷酸化位点和7个O-糖基化位点。蛋白质同源性预测结果显示:DnaJC28蛋白质具有保守性,可能在不同物种中发挥重要作用。亲缘关系预测结果显示:意大利蜜蜂的DnaJC28与蜜蜂属的大蜜蜂和蜜蜂科熊蜂属的欧洲熊蜂亲缘关系相近。蛋白质互作预测结果显示:意大利蜜蜂DnaJC28与Ac3和LOC552769这两种蛋白互作的可能性最高。蛋白质结构预测结果显示:二级结构主要包括α螺旋17个和无规则卷曲18个,不含β折叠结构。本研究可为进一步研究意大利蜜蜂DnaJC28的结构和功能提供参考。 展开更多
关键词 意大利蜜蜂 DnaJC28 生物信息学 蛋白质特征 同源性分析
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毛霉型豆豉后发酵阶段蛋白质水解产物的生成及影响因素 被引量:8
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作者 杨伊磊 李梦丹 +2 位作者 刘金 陈力力 蒋立文 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2017年第24期34-39,共6页
采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳、反相高效液相色谱等方法对毛霉型豆豉后发酵过程中蛋白质及其水解产物的变化情况进行研究,对各阶段蛋白质水解产物与不同因素指标的相关性进行分析,并采用APIZYM系统对毛霉所产胞外酶进行半定... 采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳、反相高效液相色谱等方法对毛霉型豆豉后发酵过程中蛋白质及其水解产物的变化情况进行研究,对各阶段蛋白质水解产物与不同因素指标的相关性进行分析,并采用APIZYM系统对毛霉所产胞外酶进行半定量检测。结果表明:蛋白质最终水解产物的分子质量主要集中在11~20 kD之间,后发酵0~7 d蛋白质分子质量下降迅速,且此阶段多肽成分发生较大改变,7~42 d主要引起的是多肽含量的变化;总酸含量与蛋白质水解物生成的相关性最高,相关系数为0.972,其次为褐变强度,再次为还原糖含量;API ZYM系统检测出毛霉可产生6种胞外酶。 展开更多
关键词 毛霉型豆豉 蛋白质 水解产物 apiZYM系统
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饲粮蛋白质水平对意大利蜜蜂归巢能力及记忆相关基因表达的影响 被引量:5
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作者 袁安 郭亚惠 +2 位作者 吴小波 黄晓 廖春华 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期296-302,共7页
本试验旨在研究饲粮蛋白质水平对意大利蜜蜂归巢能力及记忆相关基因表达的影响。选择9群群势相当的本地意大利蜜蜂,随机分为3组,每组3群。Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组分别饲喂蛋白质水平为15%、25%、35%的试验饲粮。饲喂45 d后,测定采集蜂分别在1 ... 本试验旨在研究饲粮蛋白质水平对意大利蜜蜂归巢能力及记忆相关基因表达的影响。选择9群群势相当的本地意大利蜜蜂,随机分为3组,每组3群。Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组分别饲喂蛋白质水平为15%、25%、35%的试验饲粮。饲喂45 d后,测定采集蜂分别在1 000、2 000 m处的回归率及不同日龄(刚出房、10日龄、20日龄)工蜂3个记忆相关基因[谷氨酸受体A型基因(GluRA)、N-甲基-D-天冬氨酸受体1型基因(Nmdar1)、酪胺受体1型基因(Tyr1)]的表达情况。结果表明:Ⅱ组和Ⅲ组蜜蜂在1 000、2 000 m处的回归率均显著高于Ⅰ组(P<0.05),但Ⅱ组与Ⅲ组之间差异不显著(P>0.05);Ⅲ组10和20日龄工蜂的G luRA相对表达量显著高于Ⅱ组和Ⅰ组(P<0.05),且Ⅱ组工蜂的GluRA相对表达量也显著高于Ⅰ组(P<0.05);Ⅱ组和Ⅲ组10和20日龄工蜂的Nmdar1相对表达量显著高于Ⅰ组(P<0.05),但Ⅱ组与Ⅲ组之间差异不显著(P>0.05);Ⅱ组和Ⅲ组10日龄工蜂的Tyr1相对表达量显著高于Ⅰ组(P<0.05),但Ⅱ组与Ⅲ组之间差异不显著(P>0.05);各试验组刚出房工蜂的GluRA、Nmdar1、Tyr1以及20日龄工蜂的Tyr1相对表达量差异均不显著(P>0.05)。由此得出,饲粮蛋白质水平过低会影响意大利蜜蜂的归巢能力及记忆相关基因的表达。 展开更多
关键词 意大利蜜蜂 蛋白质水平 回归率 记忆基因
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中华蜜蜂化学感受蛋白基因Acer-CSP1克隆与表达特征分析 被引量:13
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作者 李红亮 倪翠侠 +2 位作者 姚瑞 高其康 商晗武 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期962-968,共7页
化学感受蛋白(chemosensory proteins,CSPs)是昆虫化学感受系统中重要的组成部分之一。本研究克隆了中华蜜蜂Apis cerana cerana化学感受蛋白基因Acer-CSP1,其核苷酸全长351bp(GenBank登录号为FJ157352),编码116个氨基酸残基,预测... 化学感受蛋白(chemosensory proteins,CSPs)是昆虫化学感受系统中重要的组成部分之一。本研究克隆了中华蜜蜂Apis cerana cerana化学感受蛋白基因Acer-CSP1,其核苷酸全长351bp(GenBank登录号为FJ157352),编码116个氨基酸残基,预测蛋白分子量为13.85kD,等电点为4.89,且含有4个保守的半胱氨酸残基,均符合昆虫CSPs的一般特征,且与意蜂CSP1基因具有99.1%的相似性,与其他昆虫也有45.3%~68.0%的相似性。利用2-ΔΔCt法及绝对定量法的real-time PCR技术对Acer-CSP1在中蜂不同器官表达特征进行了研究,得出的一致结论为Acer-CSP1显著水平地高丰度表达于中华蜜蜂触角,其次大量表达于头部。由于触角为中华蜜蜂最主要的嗅觉器官,而头部则具有发达的感觉神经系统和味觉系统,这也提示Acer-CSP1极有可能参与中华蜜蜂的嗅觉以及其他化学感受功能。 展开更多
关键词 中华蜜蜂 化学感受蛋白 克隆 DNA序列分析 表达谱
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中华蜜蜂化学感受蛋白AcerCSP3的配基结合功能分析 被引量:19
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作者 李红亮 张林雅 +1 位作者 倪翠侠 商晗武 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期259-264,共6页
为研究中华蜜蜂Apis cerana cerana化学感受蛋白AcerCSP3在化学感受系统中的生理功能,本实验通过对AcerCSP3进行原核表达、分离纯化后,利用荧光法研究了体外重组AcerCSP3与1-NPN以及候选化学配基的结合特征。Scatchard方程显示AcerCSP3... 为研究中华蜜蜂Apis cerana cerana化学感受蛋白AcerCSP3在化学感受系统中的生理功能,本实验通过对AcerCSP3进行原核表达、分离纯化后,利用荧光法研究了体外重组AcerCSP3与1-NPN以及候选化学配基的结合特征。Scatchard方程显示AcerCSP3与1-NPN的解离常数KD为8.29μmol/L,结合位点数约等于1。在候选配基竞争1-NPN与AcerCSP3结合的实验中,5种配基均能在200μmol/L浓度下使1-NPN的相对荧光强度下降至50%以下,其中β-紫罗兰酮甚至能使1-NPN的相对荧光强度下降至10%左右,表明候选配基均与AcerCSP3有较强的结合能力,而3,4-二甲基苯甲醛与中蜂AcerCSP3的结合能力最强,KD达到18.77μmol/L。本研究所用化学配基均为植物花与叶片的挥发性的次生代谢产物,表明AcerCSP3可能作为中蜂化学感受系统的一部分,在其搜寻某些植物花粉蜜源时作为气味分子运载体发挥一定的作用。 展开更多
关键词 中华蜜蜂 化学感受蛋白 原核表达 纯化 化学配基 结合特征
原文传递
微孢子虫和狄斯瓦螨分别侵染后的意蜂血淋巴蛋白质含量变化 被引量:4
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作者 周婷 姚军 +1 位作者 王强 王风忠 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期530-533,共4页
微孢子虫Nosemaapis和狄斯瓦螨Varroadestructor (Acari:Varroidae)均为危害意蜂Apismellifera的重要寄生虫 ,该文对其危害后意蜂血淋巴蛋白质含量的变化进行了研究。用考马斯亮蓝法测定了意蜂受侵染后血淋巴的蛋白质总量 ,并用高压超... 微孢子虫Nosemaapis和狄斯瓦螨Varroadestructor (Acari:Varroidae)均为危害意蜂Apismellifera的重要寄生虫 ,该文对其危害后意蜂血淋巴蛋白质含量的变化进行了研究。用考马斯亮蓝法测定了意蜂受侵染后血淋巴的蛋白质总量 ,并用高压超薄层等电点聚焦法进行血淋巴蛋白质分类。结果显示 ,病蜂血淋巴蛋白质总量 ,在人工感染微孢子虫后 1~ 10天呈上升趋势 ,然后逐渐下降 ,感染后 12~ 2 7天保持在感染前意蜂血淋巴总蛋白质含量水平以下。螨侵染后意蜂血淋巴蛋白质含量明显增高 ,与健康意蜂相比差异极显著。高压超薄层等电点聚焦分析表明 :狄斯瓦螨自然侵染意蜂后 ,意蜂血淋巴蛋白质组分与健康对照组相比发生了明显改变。这些结果提示 。 展开更多
关键词 意蜂 微孢子虫 狄斯瓦螨 血淋巴总蛋白质 免疫反应
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