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联苯菊酯对西方蜜蜂生存、生理和肠道菌群的影响
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作者 施腾飞 张清 +4 位作者 牛井亨 叶良 黄明飞 于泽南 余林生 《环境昆虫学报》 北大核心 2026年第1期230-239,共10页
【目的】联苯菊酯广泛应用于蜜源作物害虫防治中,可能会对蜜蜂健康造成危害。本文主要探究了亚致死浓度联苯菊酯对西方蜜蜂Apis mellifera生存、取食、免疫解毒相关基因表达及肠道菌群的影响。【方法】利用5 mg/L和0.5 mg/L的联苯菊酯... 【目的】联苯菊酯广泛应用于蜜源作物害虫防治中,可能会对蜜蜂健康造成危害。本文主要探究了亚致死浓度联苯菊酯对西方蜜蜂Apis mellifera生存、取食、免疫解毒相关基因表达及肠道菌群的影响。【方法】利用5 mg/L和0.5 mg/L的联苯菊酯对西方蜜蜂处理7 d,统计各组蜜蜂的生存率和取食量;利用qPCR技术检测蜜蜂中肠中免疫和解毒基因表达变化;采用16S rDNA测序技术检测蜜蜂肠道菌群丰度、结构变化。【结果】结果显示:(1)5 mg/L联苯菊酯能够显著降低蜜蜂的生存率和花粉取食量(P<0.05),而对含联苯菊酯的糖水取食量没有显著影响;(2)5 mg/L联苯菊酯显著抑制蜜蜂中肠中CYP6AS3和CYP6AS10基因的表达(P<0.05),而诱导Abaecin、Apidaecin、Defensin、Hymenoptaecin基因上调表达(P<0.05);0.5 mg/L联苯菊酯显著抑制蜜蜂中肠中Lysozyme、CYP6AS10基因的表达(P<0.05),而诱导Apidaecin、Defensin基因上调表达(P<0.05);(3)联苯菊酯处理改变了蜜蜂肠道菌群的多样性,并影响特定肠道菌的丰度。【结论】结果表明联苯菊酯暴露不仅损害西方蜜蜂的生存和取食,并对其中肠的免疫解毒系统以及肠道稳态造成影响。 展开更多
关键词 西方蜜蜂 联苯菊酯 生存 基因表达 肠道菌群
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银腺杨转Cry I Ac和API双价抗虫基因的研究 被引量:10
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作者 李科友 樊军锋 +2 位作者 赵忠 李玲 朱海兰 《林业科学研究》 CSCD 北大核心 2007年第5期699-704,共6页
在建立以银腺杨(84K)叶片为外植体的再生系统基础上,通过农杆菌介导法把CryⅠ4c和API双价抗虫基因导人银腺杨(84K)基因组中。转化杨树叶片,在含有卡那霉素的培养基上诱导不定芽和诱导生根,获得了400株卡那霉素抗性转化再生植株... 在建立以银腺杨(84K)叶片为外植体的再生系统基础上,通过农杆菌介导法把CryⅠ4c和API双价抗虫基因导人银腺杨(84K)基因组中。转化杨树叶片,在含有卡那霉素的培养基上诱导不定芽和诱导生根,获得了400株卡那霉素抗性转化再生植株。抗性植株经PCR检测,有70株呈阳性。通过Southern杂交和ELISA检测进一步证明CryⅠ4c和API双价抗虫基因已整合到银腺杨(84K)基因组中,拷贝数1~2个,并得到了表达。转化植株用杨扇舟蛾幼虫进行饲虫试验,结果表明昆虫幼虫的死亡率高达60.0%~80.0%。同时,存活幼虫的生长发育也受到了明显抑制。本研究结果为杨树抗虫育种提供了新的种质资源。 展开更多
关键词 银腺杨(84K) CryⅠ 4c和api基因 转化 抗虫性
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用花粉管通道法将慈姑蛋白酶抑制剂基因(API)导入水稻获得转基因植株 被引量:5
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作者 王才林 朱镇 +8 位作者 赵凌 张亚东 林静 张所兵 陈涛 刘贤进 王冬兰 黄骏麒 龚蓁蓁 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2005年第4期245-248,共4页
采用花粉管通道法遗传转化技术,将慈姑蛋白酶抑制剂基因(API)导入水稻品系9311中,获得了转基因植株。抗虫性鉴定结果表明:部分转基因植株对水稻螟虫的抗性比对照明显提高;PCR扩增获得了与引物扩增片段长度相同的DNA片段,证实API基因已... 采用花粉管通道法遗传转化技术,将慈姑蛋白酶抑制剂基因(API)导入水稻品系9311中,获得了转基因植株。抗虫性鉴定结果表明:部分转基因植株对水稻螟虫的抗性比对照明显提高;PCR扩增获得了与引物扩增片段长度相同的DNA片段,证实API基因已整合到受体植株的基因组中。遗传分析表明,API基因能在有性生殖过程中传递给后代,并于T4代分离出抗性纯合的株系。 展开更多
关键词 水稻 抗虫 慈姑蛋白酶抑制剂基因 转基因植株 花粉管通道法
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慈姑蛋白酶抑制剂(API)基因导入棉花获得转基因植株 被引量:4
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作者 黄骏麒 龚蓁蓁 +5 位作者 吴敬音 陈松 束春娥 谢伟军 周宝良 沈新莲 《江苏农业学报》 CSCD 2001年第2期65-68,共4页
通过花粉管通道技术将慈姑蛋白酶抑制剂API(ArrowheadProteinaseInhibitor)基因转入棉花 ,获得了转基因植株。经对棉铃虫抗虫性鉴定和PCR、RT PCR、Southernblotting分析 。
关键词 慈姑蛋白酶抑制剂 api基因 棉花 转基因植株
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芹菜过敏原蛋白Api g 1基因的克隆与表达分析 被引量:9
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作者 李梦瑶 王枫 +4 位作者 侯喜林 蒋倩 王镇 马静 熊爱生 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期13-19,共7页
以2个芹菜(Apium graveolens)品种‘津南实芹’和‘美国西芹’为试验材料,分别克隆出过敏原蛋白Api g 1基因。序列分析表明,‘津南实芹’和‘美国西芹’中的过敏原蛋白基因Api g 1均含有1个480 bp的开放阅读框及1个148 bp的内含子,分别... 以2个芹菜(Apium graveolens)品种‘津南实芹’和‘美国西芹’为试验材料,分别克隆出过敏原蛋白Api g 1基因。序列分析表明,‘津南实芹’和‘美国西芹’中的过敏原蛋白基因Api g 1均含有1个480 bp的开放阅读框及1个148 bp的内含子,分别编码159个氨基酸,二者有2个核苷酸位点的差异,编码的氨基酸有1个位点差异。‘津南实芹’和‘美国西芹’的过敏原蛋白Api g 1与胡萝卜、欧芹等植物的过敏原蛋白相似度较高,在保守区域有7个甘氨酸残基,空间结构上由3个螺旋和7个折叠组成。实时定量PCR表达分析显示,该基因在主根中表达较高,茎其次,其他部位表达较弱,具有明显的组织特异性。 展开更多
关键词 芹菜 过敏原蛋白 api g 1基因 克隆 实时定量PCR 基因表达
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2个芹菜品种泛变应原Api g 4基因的克隆与分析 被引量:3
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作者 李梦瑶 王枫 +3 位作者 侯喜林 蒋倩 马静 熊爱生 《植物资源与环境学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期1-7,共7页
从芹菜(Apium graveolens Linn.)品种‘津南实芹’(‘Jinnanshiqin’)和‘美国西芹’(‘Meiguoxiqin’)中分别克隆获得泛变应原基因Api g 4;2个品种的Api g 4基因均包含1个长度为405 bp的开放阅读框,二者间有3个核苷酸位点的差异。2个... 从芹菜(Apium graveolens Linn.)品种‘津南实芹’(‘Jinnanshiqin’)和‘美国西芹’(‘Meiguoxiqin’)中分别克隆获得泛变应原基因Api g 4;2个品种的Api g 4基因均包含1个长度为405 bp的开放阅读框,二者间有3个核苷酸位点的差异。2个品种的Api g 4基因均能编码134个氨基酸,但二者编码的氨基酸序列有2个位点的差异。多重比对以及进化树分析结果均表明:2个芹菜品种Api g 4基因编码的氨基酸序列与其他植物的泛变应原氨基酸序列同源性较高,氨基酸序列高度保守;与同科植物欧芹〔Petroselinum crispum(Miller)Nyman ex A.W.Hill〕和胡萝卜(Daucus carota Linn.)的泛变应原氨基酸序列的同源性均达到90%以上,在进化树上也归为同一支。2个品种的泛变应原Api g 4均为疏水性蛋白,具有相似的三维空间结构,均包含3个α螺旋和7个β折叠。实时定量PCR分析结果显示:Api g 4基因在‘津南实芹’和‘美国西芹’根中的表达水平均最高,在茎和茎尖分生组织中的表达水平相对较低,在叶中的表达水平很弱,且2个品种间同一组织的Api g 4基因表达水平也有差异,表明Api g 4基因的表达具有明显的组织特异性。 展开更多
关键词 芹菜 泛变应原 api g4基因 克隆 同源性 基因表达
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蜜蜂表皮蛋白apidermin(apd)基因家族3个新成员的特性鉴定及昆虫APD家族序列特征的分析 被引量:5
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作者 孙亮先 黄周英 +3 位作者 郑华军 葛清秀 龚丽萍 陈怀宇 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期12-23,共12页
Apidermin(APD)蛋白家族是一个新的昆虫结构性表皮蛋白家族。本研究结合生物信息学和RT-PCR扩增,对意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica(简称"意蜂")的apd-1-like,apd-3-like和中华蜜蜂Apis cerena cerena(简称"中蜂&quo... Apidermin(APD)蛋白家族是一个新的昆虫结构性表皮蛋白家族。本研究结合生物信息学和RT-PCR扩增,对意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica(简称"意蜂")的apd-1-like,apd-3-like和中华蜜蜂Apis cerena cerena(简称"中蜂")的apd-2等3个新的apd基因的结构特征和表达进行了分析,并分析了昆虫APD蛋白家族的序列特征。结果显示,在西方蜜蜂Apis mellifera(简称"西蜂")中,apd基因家族的6个成员串联排列在基因组序列第4号连锁群上,它们在A.m.ligustica雄蜂头部中的转录水平差异明显,且其启动子序列所含顺式元件也不同。中蜂apd-2和意蜂apd-1-like都含有3个外显子和2个内含子,而意蜂apd-3-like则由4个外显子和3个内含子组成。蛋白序列分析结果显示,目前已知的10条APD蛋白序列N末端均具有相似的信号肽序列,其成熟蛋白分子量为6.0~37.0kD,pI为6.2~10.8。其中西蜂的APD1-3、APD-like和东方蜜蜂Apiscerena的APD-2等5条较短的多肽中疏水氨基酸残基达52%~67%,且Ala含量最为丰富(占25%~34%);而丽蝇蛹集金小蜂Nasonia vitripennis的APD1-3和西蜂APD-1-like,APD-3-like等另外5条APD多肽富含Gly(21%~30%),其序列中疏水氨基酸残基含量为35%~41%。多肽序列多重比对和系统进化分析结果显示,APD家族可划分为2个亚家族。亚家族Ⅰ含有西蜂APD1-3和东方蜜蜂APD-2等4条较短的多肽序列,其N末端为一个长33aa的保守基序;亚家族Ⅱ由另外6条相对较长的多肽序列组成,其N末端保守基序长50aa,C末端保守基序长16aa。本文所描述的APD蛋白家族序列特征有助于以后从其他昆虫中鉴定新的apd基因。 展开更多
关键词 西方蜜蜂 东方蜜蜂 表皮蛋白 apidermin基因 APD家族 序列分析 生物信息学分析
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生长激素诱导的跨膜蛋白基因(GHITM)在东方蜜蜂(Apis cerana)幼虫不同发育阶段的相对表达分析 被引量:1
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作者 龚志文 樊莹 +2 位作者 杨明华 董霞 李亚辉 《云南农业大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2016年第1期81-86,共6页
蜜蜂社会中,工蜂与蜂王基因型相同但由于基因的表达差异、表观遗传差异及营养控制等因素造成工蜂和蜂王表型有很大的不同。GHITM基因是参与家蚕蜕皮与变态发育的pgdr基因的直系同源物,但关于其在蜜蜂中的研究目前未见报道。本研究利用... 蜜蜂社会中,工蜂与蜂王基因型相同但由于基因的表达差异、表观遗传差异及营养控制等因素造成工蜂和蜂王表型有很大的不同。GHITM基因是参与家蚕蜕皮与变态发育的pgdr基因的直系同源物,但关于其在蜜蜂中的研究目前未见报道。本研究利用实时荧光定量PCR技术研究了此基因在东方蜜蜂工蜂蛹和幼年工蜂以及蜂王蛹期的mRNA相对表达量,目的是为了探究GHITM基因在东方蜜蜂级型分化分子机理及预测可能由该基因产生的蜜蜂成虫的行为。结果表明:在工蜂蛹及工蜂成虫中GHITM基因表达量随日龄而增加;在蜂王蛹中GHITM的表达量从封盖蛹到2日龄蛹中呈下降趋势,2日龄后表达量随日龄增加。本研究结果可为东西方蜜蜂基因表达差异及级型分化分子水平的研究和GHITM基因功能的研究提供一定的理论依据。 展开更多
关键词 东方蜜蜂 实时荧光定量PCR 基因相对表达 功能预测
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西方蜜蜂Cytochrome c基因的分子特征、系统进化及时空表达谱
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作者 李婧娴 宓诗雨 +6 位作者 左真祯 王伟 李紫诺 龚海宁 陈大福 郭睿 邱剑丰 《生物技术进展》 2026年第1期115-122,共8页
研究聚焦西方蜜蜂(Apis mellifera)的细胞色素c基因(cytochrome c,CytC),解析其分子特征、系统进化及时空表达模式。通过PCR扩增CytC的编码序列(coding sequence,CDS)并进行Sanger测序比对;利用ProtParam、Porter5、SWISSMODEL、STRING... 研究聚焦西方蜜蜂(Apis mellifera)的细胞色素c基因(cytochrome c,CytC),解析其分子特征、系统进化及时空表达模式。通过PCR扩增CytC的编码序列(coding sequence,CDS)并进行Sanger测序比对;利用ProtParam、Porter5、SWISSMODEL、STRING数据库等预测CytC蛋白的理化性质、结构域及磷酸化修饰位点并构建蛋白互作网络;采用MEGA软件对10个物种的CytC蛋白进行多序列比对与系统进化分析;通过RT-qPCR检测CytC在工蜂成虫7个组织、幼虫发育阶段和成蜂不同日龄的表达谱。结果表明,CytC的CDS全长327 bp,共编码108个氨基酸,分子量约为11 kD,等电点为9.50。CytC蛋白无信号肽与跨膜结构,含13个磷酸化位点;二级结构以无规则卷曲(48.15%)和α-螺旋(25.93%)为主。系统进化显示,西方蜜蜂与小蜜蜂和中华蜜蜂的CytC蛋白聚为一支,与熊蜂科物种的分化显著。时空表达谱表明,CytC基因在脑组织中表达最高,咽下腺中最低;CytC在卵期的表达量最高,且显著高于其他时期(P<0.05),在工蜂幼虫体内的表达水平总体表现为持续下降趋势;成蜂中,CytC表达量随成虫期日龄增加逐渐上升,在18日龄最高,在1日龄最低。综上,CytC是亲水性的胞内蛋白,具有保守的分子特征与功能,其可能在西方蜜蜂发育过程中发挥着重要作用。 展开更多
关键词 西方蜜蜂 时空表达谱 细胞色素C 基因表达
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Effects of H_2O_2 and NO on Flower Development and AP1 Gene Expression of Off-season Longan
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作者 Songgang LI Xinjun ZHANG +2 位作者 Lei ZHANG Jiwang HONG Yeyuan CHEN 《Agricultural Biotechnology》 CAS 2016年第4期23-25,30,共4页
[Objective] This study aimed to investigate the effects of H2O2 and NO on flower development and 4P1 gene expression of off-season longan. [Meth-od ]Nine-year-old off-season Chuliang longan was sprayed wit... [Objective] This study aimed to investigate the effects of H2O2 and NO on flower development and 4P1 gene expression of off-season longan. [Meth-od ]Nine-year-old off-season Chuliang longan was sprayed with enhancers and blockers of H2O2 and NO to analyze dynamic changes of flower development and API expression. [ Result] The expression level of API gene in off-season longan was improved during flower development. SNP and MV treatments up-regulated the expression level of API gene in leaves and terminal buds to varying degrees during lateral primordium formation. Especially, SNP treatment exhibited the most remark-able effect. DMTU treatment significantly inhibited the expression of AP1 gene in leaves and terminal buds during lateral primordium formation. L-NNA treatment slightly inhibited the expression of API gene in leaves and exerted no significant effect on expression of AP1 gene in terminal buds. [ Conclusion] It can be specu-lated that the enhancement of NO and H2O2 signals is conducive to flower development of off-season longan, while blocking H2O2 signals may inhibit flower develop-ment of off-season longan. 展开更多
关键词 LONGAN Flower development Hydrogen peroxide (H2O2) Nitric oxide (NO) api gene
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基于CRISPR/Cas9技术的西方蜜蜂AmBgb敲除及功能分析
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作者 赖雨 许瑞鑫 +8 位作者 朱雅楠 傅云熙 田林艳 吴胜利 陈志杰 单简 付艳芳 苏松坤 聂红毅 《昆虫学报》 北大核心 2026年第1期34-41,共8页
【目的】核心结合因子(core binding factor,CBF)β亚基(CBFβ)是一种重要的转录因子,在昆虫胚胎发育和免疫调节等过程中发挥关键作用,但是其在西方蜜蜂Apis mellifera中尚未报道。本研究旨在利用CRISPR/Cas9技术探究CBFβ在西方蜜蜂中... 【目的】核心结合因子(core binding factor,CBF)β亚基(CBFβ)是一种重要的转录因子,在昆虫胚胎发育和免疫调节等过程中发挥关键作用,但是其在西方蜜蜂Apis mellifera中尚未报道。本研究旨在利用CRISPR/Cas9技术探究CBFβ在西方蜜蜂中的生理功能。【方法】克隆西方蜜蜂Bgb(big brother)基因AmBgb的编码序列(coding sequence,CDS),并进行生物信息学分析;运用qRT-PCR检测AmBgb在西方蜜蜂不同发育发育阶段(1-3日龄工蜂卵,1,3和5日龄工蜂幼虫,工蜂预蛹,1,3,5,7和9日龄工蜂蛹,刚出房工蜂,10日龄哺育蜂以及21日龄采集蜂)的表达量;采用CRISPR/Cas9敲除西方蜜蜂卵中AmBgb,监测卵的发育和存活情况,并通过PCR和测序的方法检测靶位点,验证AmBgb在西方蜜蜂中的生理功能。【结果】西方蜜蜂AmBgb的CDS全长为759 bp,编码252个氨基酸,第39-201位氨基酸存在1个CBFβ结构域;AmBgb分子量为28982.37 D,无信号肽和跨膜结构,预测其为胞内蛋白;系统进化树显示西方蜜蜂AmBgb与东方蜜蜂A.cerana的Bgb高度同源(氨基酸序列一致性为99.21%),且亲缘关系最密切。AmBgb在2和3日龄工蜂卵中的表达量明显高于其他发育阶段的。基于CRISPR/Cas9处理的西方蜜蜂43粒卵中,有5粒卵孵化为幼虫且AmBgb靶位点无突变;随机对7粒死亡卵进行检测,发现6粒卵中AmBgb的靶位点出现基因编辑,包括不同长度插入、缺失或替换。【结论】西方蜜蜂AmBgb在2和3日龄卵中高量表达,敲除AmBgb导致卵不能正常孵化为幼虫。这些结果表明AmBgb在西方蜜蜂胚胎发育过程中发挥重要作用,这将为其他膜翅目(Hymenoptera)昆虫中该基因的生理功能研究提供理论指导。 展开更多
关键词 西方蜜蜂 核心结合因子β亚基 基因克隆 时期表达谱 CRISPR/Cas9
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猪囊尾蚴API基因原核表达条件的优化 被引量:1
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作者 苏文强 胡鑫宇 +11 位作者 王秋霞 欧长波 郭爱疆 李辉 骆学农 余燕 张艳红 姜金庆 刘兴友 马金友 王松 才学鹏 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2017年第8期1-6,共6页
【目的】获得猪囊尾蚴凋亡蛋白酶抑制剂(API)基因在大肠杆菌中的最佳表达条件,为API功能研究奠定基础。【方法】以表达载体pEGX-4T-1、pET-30a及猪囊尾蚴API基因的原核表达载体pEGX-4T-1/API-Flag、pET-30a/API为材料,对影响API蛋白表... 【目的】获得猪囊尾蚴凋亡蛋白酶抑制剂(API)基因在大肠杆菌中的最佳表达条件,为API功能研究奠定基础。【方法】以表达载体pEGX-4T-1、pET-30a及猪囊尾蚴API基因的原核表达载体pEGX-4T-1/API-Flag、pET-30a/API为材料,对影响API蛋白表达的载体(pEGX-4T-1、pET-30a)、温度(25,30,37℃)、诱导时间(2,4,6,8h)、IPTG终浓度(0.2,0.4,0.6,0.8,1.0mmol/L)和卡那霉素终浓度(100,200,300,400mmol/L)等条件进行优化,筛选重组蛋白最佳的表达条件。对在最佳条件下获取的目的蛋白进行超声处理,4℃、10 000r/min离心分别收集上清液和沉淀,对目的蛋白进行可溶性分析;SDS-PAGE后,将目的蛋白条带转印至硝酸纤维素膜上,与抗His标签抗体共孵育,检测目的蛋白的反应原性。【结果】当选择pET系列载体(pET-30a)时,API表达量高于其在pGEX系列(pGEX-4T-1)中的表达量。API融合蛋白最佳表达条件为:在含200mmol/L卡那霉素的LB培养基上于37℃培养3h后,加入终浓度为0.4mmol/L的IPTG,再于30℃诱导培养6h。SDS-PAGE结果表明,pET-30a/API融合蛋白分子质量约为53ku,与预期蛋白分子质量一致。Western-blot检测结果显示,重组蛋白pET-30a/API能够识别特异性抗体,显示获得了大量表达正确的目的蛋白。【结论】确定了API基因的最佳表达条件,获得了较大表达量的API融合蛋白。 展开更多
关键词 猪囊尾蚴 凋亡蛋白酶抑制基因 api蛋白 原核表达
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西方蜜蜂芳烃受体基因AmAHR和芳烃受体核转运因子基因AmARNT的生物信息学分析、表达模式及功能验证
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作者 许昌辉 张书琦 +5 位作者 杨志臣 梁晴 秦屿杨 李江红 段辛乐 黄少康 《昆虫学报》 北大核心 2026年第1期23-33,共11页
【目的】本研究旨在探究西方蜜蜂Apis mellifera芳烃受体(aryl hydrocarbon receptor,AHR)基因AmAHR和芳烃受体核转运因子(aryl hydrocarbon receptor nuclear translocator,ARNT)基因AmARNT在工蜂生长发育过程和杀虫剂胁迫下的表达模式... 【目的】本研究旨在探究西方蜜蜂Apis mellifera芳烃受体(aryl hydrocarbon receptor,AHR)基因AmAHR和芳烃受体核转运因子(aryl hydrocarbon receptor nuclear translocator,ARNT)基因AmARNT在工蜂生长发育过程和杀虫剂胁迫下的表达模式,为这两个基因的功能研究提供理论参考。【方法】通过基因克隆获得西方蜜蜂AmAHR和AmARNT的编码序列(coding sequence,CDS)全长并进行多物种间的同源序列比对和系统进化树构建。利用qRT-PCR检测AmAHR和AmARNT在西方蜜蜂工蜂不同发育阶段(卵、幼虫、蛹和成蜂)、8日龄成年工蜂组织(触角、咽下腺、前足、中足、后足、翅、中肠、后肠和蛰针,及剔除了上述组织的头、胸和腹)和8日龄工蜂成蜂分别口服杀虫剂高效氯氟氰菊酯(1.25,2.5,5和10 mg/L)、氟胺氰菊酯(30,60,120和240 mg/L)和甲酸(1.25,2.5,5和10 mg/L)后的头中的表达量。【结果】克隆获得的西方蜜蜂AmAHR和AmARNT CDS分别编码885和686个氨基酸,编码蛋白均含有1个螺旋-环-螺旋、2个PAS结构域和1个PAC结构域,属于亲水性胞内蛋白。与西方蜜蜂的AmAHR和AmARNT氨基酸序列高度一致的同源蛋白前23个来源物种均属膜翅目(Hymenoptera),AmAHR和AmARNT分别与蜜蜂属Apis的昆虫相应的AHR和ARNT聚为一支。从卵至成蜂的发育过程中,AmAHR的表达量呈单峰型,以白眼白蛹期的表达量最高,显著高于其他发育阶段的,是卵期表达量的37.86倍;AmARNT的表达量呈双峰型,在卵和3日龄预蛹中表达量最高。AmAHR和AmARNT在蛹期的表达量峰期紧邻,且AmARNT先于AmAHR到达表达量峰值。AmAHR的表达量在8日龄工蜂成蜂触角中最高,是头中表达量的34.08倍,且显著高于其他组织中的表达量。AmANRT在8日龄工蜂成蜂胸中的表达量显著高于其他组织中的表达量,是头中表达量的1.75倍。与对照组相比,8日龄工蜂成蜂饲喂15μL 5 mg/L高效氯氟氰菊酯后,头中AmAHR的表达量显著上调至1.83倍,饲喂30和60 mg/L氟胺氰菊酯后,头中AmAHR的表达量则分别上调至1.63和1.74倍,而饲喂120 mg/L氟胺氰菊酯后,头中AmAHR的表达量仅为对照的0.36倍,表达被抑制;饲喂1.25,2.5和5 mg/L的甲酸后,8日龄工蜂成蜂头中AmAHR的表达量分别上调至4.13,3.61和2.56倍。8日龄工蜂成蜂饲喂2.5,10 mg/L高效氯氟氰菊酯和30,120 mg/L氟胺氰菊酯使AmARNT的表达量显著下降,仅分别为对照的0.69,0.68,0.60和0.34倍,但饲喂2.5 mg/L甲酸使AmARNT的表达量上调至对照组的1.68倍。【结论】西方蜜蜂AmAHR和AmARNT分别与其他昆虫的进化关系较为保守;AmAHR和AmARNT在初化蛹期的表达峰同步,暗示两基因的表达有密切关联,且可能与工蜂预蛹的发育有关。AmAHR和AmARNT在两种菊酯类杀虫剂胁迫下表达趋势相同,而与其对甲酸的响应不同,推测与两类杀虫剂的解毒代谢差异机制相关,本研究为进一步挖掘昆虫AHR和ARNT的功能提供新的理论依据。 展开更多
关键词 西方蜜蜂 芳烃受体 芳烃受体核转运因子 基因克隆 时空表达谱 杀虫剂胁迫
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The Influence of Bt-Transgenic Maize Pollen on the Bacterial Diversity in the Midgut of Chinese Honeybees, Apis cerana cerana 被引量:5
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作者 JIANG Wei-yu GENG Li-li +6 位作者 DAI Ping-li LANG Zhi-hong SHU Chang-long LIN Yi ZHOU Ting SONG Fu-ping ZHANG Jie 《Journal of Integrative Agriculture》 SCIE CAS CSCD 2013年第3期474-482,共9页
Using culture-independent technique polymerase chain reaction-denaturing gradient gel electrophoresis (PCR-DGGE) and conventional culture techniques, ecological risk of transgenic maize pollen on gut bacteria of the... Using culture-independent technique polymerase chain reaction-denaturing gradient gel electrophoresis (PCR-DGGE) and conventional culture techniques, ecological risk of transgenic maize pollen on gut bacteria of the Chinese honeybee, Apis cerana cerana, was assessed. Honeybees were fed with Bt-transgenic maize pollen, non-transgenic near isoline pollen, linear crylAh gene (800 ng mL^-1) and supercoiled plasmid DNA (800 ng mL^-1) under laboratory conditions. The DGGE profile showed that the number of DGGE bands varied from 10.7 to 14.7 per sample, and the Shannon's index ranged from 0.85 to 1.00. The similarity calculated by PAST was mostly above 92%, indicating no obvious changes among treatments or within replicates. 14 bacterial strains affiliated with Alphaproteobacteria, Gammaproteobacteria, Firmicutes, and Actinobacteria were isolated and characterized on media under aerobic and anaerobic conditions. These results demonstrated that transgenic crylAh maize pollen did not induce significant changes of the honeybee gut bacterial community composition under laboratory conditions. 展开更多
关键词 Bacillus thuringiensis intestinal bacteria horizontal gene transfer transgenic maize apis cerana BIOSAFETY
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Cloning and Sequence Analysis of cDNA Encoding MRJP3 of Apis cerana cerana
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作者 SU Song-kun ZHNEG Huo-qing +2 位作者 CHEN Sheng-lu ZHONG Bo-xiong Stefan Albert 《Agricultural Sciences in China》 CAS CSCD 2005年第9期707-713,共7页
By screening the worker (Apis cerana cerana) heads cDNA library using a fragment of the mrjp3 gene of Apis cerana as probe, 120 positive clones were obtained. The clone containing A. cerana cerana MRJP3 (AccMRJP3)... By screening the worker (Apis cerana cerana) heads cDNA library using a fragment of the mrjp3 gene of Apis cerana as probe, 120 positive clones were obtained. The clone containing A. cerana cerana MRJP3 (AccMRJP3) cDNA was selected. Based on the sequencing of the inserts of the positive clone, a sequence of AccMRJP3 cDNA which is 1 887 bp long including a poly (A) tail was obtained. The AccMRJP3 cDNA encompassed an open-reading frame (ORF) with 1 779 bp encoding 593 amino acids. The un-translated regions (UTR) of the 5′ end and 3′end are 46 bp and 160 bp in length, respectively. Similar to AmMRJP3 and AdMRJP3, the putative AccMRJP3 also has a repetitive region. The comparison of the repetitive region of AccMRJP3, AmMRJP3 and AdMRJP3 shows some differences between them. 展开更多
关键词 apis cerana cerana MRJP3 gene cloning Sequence analysis
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Cloning and Sequence Analysis of Carbonic Anhydrase-related Protein 10-like in Apis mellifera
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作者 Zhaoying LI 《Agricultural Biotechnology》 CAS 2012年第4期46-48,53,共4页
[ Objective ] This study aimed to clone and analyze the gene sequence encoding carbonic anhydrase-related protein lO-like ( CARP X) from Apis mellif era. [Method] The cDNA sequence of CARPX gene was cloned through R... [ Objective ] This study aimed to clone and analyze the gene sequence encoding carbonic anhydrase-related protein lO-like ( CARP X) from Apis mellif era. [Method] The cDNA sequence of CARPX gene was cloned through RT-PCR, and then analyzed with bioinformatic method. [Result] The full-length cDNA sequence of CARPX was 972 bp long and encoded 324 amino acid residues, including a signal peptide and two transmembrane domains. The predicted molecular mass was 37.1 kDa and the predicted isoeleetric point was 7.458. The CARP X from A. mellifera shared close relationship with proteins from Apisflorae, Bombtas impatiens, Bombus terrestris, Nasonia vitripennis and Acyrthosiphon pisum. The insect CARP X family may include two subfamilies. [ Conclusion] The results pro- vide basis for studying CARPs family. 展开更多
关键词 apis mellifera CARP X gene CLONING Sequence analysis Protein structure
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Detections of mefA, ermB, and mphA Macrolides Resistant Genes in Bacteria Isolated from Covid-19 Patients from Selected Health Facilities in Ibadan, Nigeria
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作者 Florence Bamigbola Toyosi Raheem +1 位作者 Muinat Fowora Felicia Adesina 《Advances in Microbiology》 CAS 2023年第2期106-117,共12页
Background: COVID-19 is a disease caused by Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus 2 (SARS-CoV-2). Epidemiological data indicated that bacterial complications in COVID-19 would decrease clearance rate of the in... Background: COVID-19 is a disease caused by Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus 2 (SARS-CoV-2). Epidemiological data indicated that bacterial complications in COVID-19 would decrease clearance rate of the infecting agent and increase mortality rate. Macrolides such as Azithromycin are usually administered to COVID-19 patients as palliative treatments. Currently, a considerable number of bacterial strains have developed resistance to various antibiotics, especially macrolides. Resistance is reported to be due to possession of mefA, ermB, and mphA genes by Gram positive and Gram negative bacteria. Therefore, this study determined antibiotic resistance patterns and identify mefA, ermB and mphA macrolide-resistant genes in bacterial pathogens isolated from COVID-19 cases in Ibadan, Nigeria. Methods: 400 Nasopharyngeal samples were collected from symptomatic cases before antibiotic medication;structured questionnaires were administered to collect socio-demographic data of participants. Samples were cultured on Blood, Chocolate, MacConkey and Mannitol salt agar at 37°C for 48 hrs. Bacterial identification was performed using VITEK 2.0 ID cards and API 20E for Gram positive and negative bacteria respectively. Antibiotic Susceptibility Testing was performed using Kirby Bauer disc diffusion methods and VITEK 2.0 AST card kits. DNA of multidrug resistant bacterial isolates was extracted;resistant genes were determined using a polymerase chain reaction with specific primers. Amplified genes were detected using agarose gel electrophoresis. Results: 240 (60%) had bacterial growth and 97 (22.2%) yielded no growth. From the 240 bacterial isolates, 38 (15.83%) were multi-drug resistant including resistance to macrolides (Azithromycin) 20 (52.63%) of which were positive for either mefA or ermB, and none (0.0%) possess mphA gene;14 (36.8%) isolates had mefA gene, 10 (26.3%) isolates carried ermB gene. Conclusion: Multi-drug bacterial resistance including macrolides and quinolones was detected. Only mefA and ermB genes were detected in the bacterial isolates, especially in Gram positive organisms. The detection of mefA and ermB genes in the MDR bacterial isolates raised concern on the use of azithromycin as palliative treatment for COVID-19 symptomatic patients. 展开更多
关键词 SARS-CoV-2 Bacterial Co-Infection api 20E VITEK 2.0 and Resistant genes
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西方蜜蜂ATG5基因的克隆、分析及时空表达谱测定
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作者 吴伯文 范小雪 +4 位作者 刘彩珍 冯睿蓉 付志英 吴杨 郭睿 《应用昆虫学报》 北大核心 2025年第2期371-380,共10页
【目的】对西方蜜蜂Apis mellifera自噬相关基因5(Autophagy related gene 5,AmATG5)进行分子克隆和生物信息学分析,并检测AmATG5在工蜂7个组织和7个发育时间的表达谱,为进一步探究AmATG5的功能提供详实的参考依据。【方法】通过PCR扩增... 【目的】对西方蜜蜂Apis mellifera自噬相关基因5(Autophagy related gene 5,AmATG5)进行分子克隆和生物信息学分析,并检测AmATG5在工蜂7个组织和7个发育时间的表达谱,为进一步探究AmATG5的功能提供详实的参考依据。【方法】通过PCR扩增AmATG5的编码序列(Coding sequence,CDS)并进行Sanger测序验证。使用相关软件预测和分析AmATG5蛋白的理化性质、分子特征、保守基序、高级结构和蛋白互作网络。通过核质分离与RT-qPCR验证AmATG5的亚细胞定位。采用RT-qPCR检测AmATG5的相对表达水平。【结果】成功克隆到AmATG5的CDS;AmATG5含265个氨基酸,相对分子量约为31.41 kD,分子式为C_(1428)H_(2168)N_(372)O_(403)S_(13),含31个磷酸化位点和7个保守基序,不含跨膜结构域和信号肽;AmATG5 mRNA主要分布于细胞质;AmATG5与小蜜蜂Apis florea的ATG5在进化树上聚为一支;AmATG5包含110个无规则卷曲,93个α-螺旋,48条延伸链和14个β-转角;AmATG5与自噬相关蛋白1和自噬相关蛋白6等9个蛋白构成1个互作网络;AmATG5在工蜂的毒腺、中肠、咽下腺、脂肪体、脑、触角和表皮7个组织中差异表达,在脑中的表达量最高,而在表皮中的表达量最低;AmATG5的表达量在卵、1、3和5日龄幼虫阶段持续下降,在8日龄预蛹、11和16日龄蛹阶段持续上升,至16日龄蛹时达到最高。【结论】AmATG5为疏水性蛋白和胞内蛋白,通过与ATG6等9个蛋白潜在互作发挥作用;AmATG5在西方蜜蜂工蜂的不同组织和不同发育阶段动态差异表达,在脑和16日龄蛹中特异性高表达。 展开更多
关键词 西方蜜蜂 自噬 自噬相关基因5 分子特征 系统进化 表达谱
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过表达ace-miR-14-y对中华蜜蜂工蜂幼虫靶基因表达及个体和肠道重量的影响 被引量:1
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作者 徐国钧 刘小玉 +7 位作者 刘治滩 任亚萍 康婧 宓诗雨 胡艳雯 刘彩珍 陈大福 郭睿 《应用昆虫学报》 北大核心 2025年第1期114-122,共9页
【目的】探究过表达ace-miR-14-y对中华蜜蜂Apis cerana cerana工蜂幼虫靶基因表达及个体和肠道重量的影响,进而揭示ace-miR-14-y的潜在调控作用。【方法】使用茎环RT-PCR和Sanger测序验证ace-miR-14-y的表达和序列。采用相关软件预测... 【目的】探究过表达ace-miR-14-y对中华蜜蜂Apis cerana cerana工蜂幼虫靶基因表达及个体和肠道重量的影响,进而揭示ace-miR-14-y的潜在调控作用。【方法】使用茎环RT-PCR和Sanger测序验证ace-miR-14-y的表达和序列。采用相关软件预测和分析ace-miR-14-y的靶基因。通过饲喂模拟物(Mimic)进行幼虫肠道中ace-miR-14-y的过表达。利用RT-qPCR检测ace-miR-14-y的过表达效果及过表达ace-miR-14-y后靶基因的相对表达量。使用电子天平对幼虫个体和肠道进行称重。【结果】ace-miR-14-y在工蜂幼虫肠道中存在和表达;ace-miR-14-y共靶向265个基因,涉及33个GO条目与180条KEGG通路;mimic-miR-14组ace-miR-14-y的表达量显著高于mimic-NC组(P<0.05);过表达ace-miR-14-y后,靶基因Wg和AP-1的表达量均显著下调(P<0.05),幼虫个体和肠道的重量均极显著上升(P<0.01)。【结论】过表达ace-miR-14-y显著影响中华蜜蜂工蜂幼虫肠道中靶基因Wg和AP-1的表达及幼虫个体和肠道的重量,ace-miR-14-y通过调节Wg和AP-1表达发挥潜在的调控作用。 展开更多
关键词 中华蜜蜂 幼虫 ace-miR-14-y 过表达 靶基因
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西方蜜蜂caspase-3基因克隆、分析与表达模式
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作者 张天泽 李婧娴 +7 位作者 王梦怡 范小雪 邱剑丰 骆庆明 卢兆辉 陈大福 严提珍 郭睿 《应用昆虫学报》 北大核心 2025年第4期933-944,共12页
【目的】本研究旨在为深入开展西方蜜蜂Apis mellifera caspase-3基因(Am-caspase-3)的功能研究提供参考和依据。【方法】通过PCR扩增Am-caspase-3的编码序列(Coding sequences,CDS)后进行Sanger测序验证,并利用生物信息学工具预测Am-ca... 【目的】本研究旨在为深入开展西方蜜蜂Apis mellifera caspase-3基因(Am-caspase-3)的功能研究提供参考和依据。【方法】通过PCR扩增Am-caspase-3的编码序列(Coding sequences,CDS)后进行Sanger测序验证,并利用生物信息学工具预测Am-caspase-3蛋白的理化性质、分子特征及蛋白互作网络。利用MEGA软件进行西方蜜蜂和其他物种caspase-3系统进化分析。采用RT-qPCR检测Am-caspase-3在不同组织和发育阶段,工蜂成虫应答东方蜜蜂微孢子虫Nosema ceranae侵染过程以及工蜂幼虫应答蜜蜂球囊菌Ascosphaera apis侵染过程中的相对表达量。【结果】Am-caspase-3的CDS长度为1 023 bp,编码340个氨基酸。Am-caspase-3的分子式为C_(1760)H_(2703)N_(459)O_(539)S_(23),相对分子量为39 kD,不含跨膜结构域和信号肽区,但包含44个磷酸化位点,主要分布于细胞质。Am-caspase-3的二级结构包括184条无规则卷曲,90个α-螺旋,46条延伸链和20个β-转角。在Am-caspase-3中鉴定到1个结构域和3个保守基序;Am-caspase-3与其模版1m72.1.A之间的同源性达73.00%。Am-caspase-3与CytC等12个蛋白构成1个互作网络。西方蜜蜂与东方蜜蜂Apis cerana的caspase-3之间同源性达81.23%,在进化树上聚为一支。Am-caspase-3在西方蜜蜂工蜂不同组织中差异表达,在中肠中的表达量最高且极显著高于其他6个组织(P<0.01)。Am-caspase-3在3日龄幼虫中的表达量达峰值且极显著高于卵、7-8日龄预蛹及12日龄蛹(P<0.01)。Am-caspase-3在2、6、15和18日龄成虫体内的表达量显著高于1日龄成虫体内的表达量(P<0.05)。Am-caspase-3在工蜂成虫应答东方蜜蜂微孢子虫侵染的1、4、7、10和13 d皆显著下调(P<0.05),Am-caspase-3在工蜂幼虫应答蜜蜂球囊菌侵染的1、2和3 d均显著上调(P<0.05)。【结论】成功克隆到Am-caspase-3的CDS;Am-caspase-3是潜在的酸性蛋白、亲水性蛋白和胞内蛋白,与CytC等11个蛋白之间存在互作关系;西方蜜蜂与东方蜜蜂的caspase-3之间同源性最高;Am-caspase-3潜在参与西方蜜蜂工蜂不同组织和虫态的发育过程及宿主应答病原真菌侵染的过程。 展开更多
关键词 西方蜜蜂 CASPASE-3基因 细胞凋亡 东方蜜蜂微孢子虫 蜜蜂球囊菌
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