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西方蜜蜂ATG5基因的克隆、分析及时空表达谱测定
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作者 吴伯文 范小雪 +4 位作者 刘彩珍 冯睿蓉 付志英 吴杨 郭睿 《应用昆虫学报》 北大核心 2025年第2期371-380,共10页
【目的】对西方蜜蜂Apis mellifera自噬相关基因5(Autophagy related gene 5,AmATG5)进行分子克隆和生物信息学分析,并检测AmATG5在工蜂7个组织和7个发育时间的表达谱,为进一步探究AmATG5的功能提供详实的参考依据。【方法】通过PCR扩增... 【目的】对西方蜜蜂Apis mellifera自噬相关基因5(Autophagy related gene 5,AmATG5)进行分子克隆和生物信息学分析,并检测AmATG5在工蜂7个组织和7个发育时间的表达谱,为进一步探究AmATG5的功能提供详实的参考依据。【方法】通过PCR扩增AmATG5的编码序列(Coding sequence,CDS)并进行Sanger测序验证。使用相关软件预测和分析AmATG5蛋白的理化性质、分子特征、保守基序、高级结构和蛋白互作网络。通过核质分离与RT-qPCR验证AmATG5的亚细胞定位。采用RT-qPCR检测AmATG5的相对表达水平。【结果】成功克隆到AmATG5的CDS;AmATG5含265个氨基酸,相对分子量约为31.41 kD,分子式为C_(1428)H_(2168)N_(372)O_(403)S_(13),含31个磷酸化位点和7个保守基序,不含跨膜结构域和信号肽;AmATG5 mRNA主要分布于细胞质;AmATG5与小蜜蜂Apis florea的ATG5在进化树上聚为一支;AmATG5包含110个无规则卷曲,93个α-螺旋,48条延伸链和14个β-转角;AmATG5与自噬相关蛋白1和自噬相关蛋白6等9个蛋白构成1个互作网络;AmATG5在工蜂的毒腺、中肠、咽下腺、脂肪体、脑、触角和表皮7个组织中差异表达,在脑中的表达量最高,而在表皮中的表达量最低;AmATG5的表达量在卵、1、3和5日龄幼虫阶段持续下降,在8日龄预蛹、11和16日龄蛹阶段持续上升,至16日龄蛹时达到最高。【结论】AmATG5为疏水性蛋白和胞内蛋白,通过与ATG6等9个蛋白潜在互作发挥作用;AmATG5在西方蜜蜂工蜂的不同组织和不同发育阶段动态差异表达,在脑和16日龄蛹中特异性高表达。 展开更多
关键词 西方蜜蜂 自噬 自噬相关基因5 分子特征 系统进化 表达谱
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过表达ace-miR-14-y对中华蜜蜂工蜂幼虫靶基因表达及个体和肠道重量的影响
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作者 徐国钧 刘小玉 +7 位作者 刘治滩 任亚萍 康婧 宓诗雨 胡艳雯 刘彩珍 陈大福 郭睿 《应用昆虫学报》 北大核心 2025年第1期114-122,共9页
【目的】探究过表达ace-miR-14-y对中华蜜蜂Apis cerana cerana工蜂幼虫靶基因表达及个体和肠道重量的影响,进而揭示ace-miR-14-y的潜在调控作用。【方法】使用茎环RT-PCR和Sanger测序验证ace-miR-14-y的表达和序列。采用相关软件预测... 【目的】探究过表达ace-miR-14-y对中华蜜蜂Apis cerana cerana工蜂幼虫靶基因表达及个体和肠道重量的影响,进而揭示ace-miR-14-y的潜在调控作用。【方法】使用茎环RT-PCR和Sanger测序验证ace-miR-14-y的表达和序列。采用相关软件预测和分析ace-miR-14-y的靶基因。通过饲喂模拟物(Mimic)进行幼虫肠道中ace-miR-14-y的过表达。利用RT-qPCR检测ace-miR-14-y的过表达效果及过表达ace-miR-14-y后靶基因的相对表达量。使用电子天平对幼虫个体和肠道进行称重。【结果】ace-miR-14-y在工蜂幼虫肠道中存在和表达;ace-miR-14-y共靶向265个基因,涉及33个GO条目与180条KEGG通路;mimic-miR-14组ace-miR-14-y的表达量显著高于mimic-NC组(P<0.05);过表达ace-miR-14-y后,靶基因Wg和AP-1的表达量均显著下调(P<0.05),幼虫个体和肠道的重量均极显著上升(P<0.01)。【结论】过表达ace-miR-14-y显著影响中华蜜蜂工蜂幼虫肠道中靶基因Wg和AP-1的表达及幼虫个体和肠道的重量,ace-miR-14-y通过调节Wg和AP-1表达发挥潜在的调控作用。 展开更多
关键词 中华蜜蜂 幼虫 ace-miR-14-y 过表达 靶基因
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银腺杨转Cry I Ac和API双价抗虫基因的研究 被引量:10
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作者 李科友 樊军锋 +2 位作者 赵忠 李玲 朱海兰 《林业科学研究》 CSCD 北大核心 2007年第5期699-704,共6页
在建立以银腺杨(84K)叶片为外植体的再生系统基础上,通过农杆菌介导法把CryⅠ4c和API双价抗虫基因导人银腺杨(84K)基因组中。转化杨树叶片,在含有卡那霉素的培养基上诱导不定芽和诱导生根,获得了400株卡那霉素抗性转化再生植株... 在建立以银腺杨(84K)叶片为外植体的再生系统基础上,通过农杆菌介导法把CryⅠ4c和API双价抗虫基因导人银腺杨(84K)基因组中。转化杨树叶片,在含有卡那霉素的培养基上诱导不定芽和诱导生根,获得了400株卡那霉素抗性转化再生植株。抗性植株经PCR检测,有70株呈阳性。通过Southern杂交和ELISA检测进一步证明CryⅠ4c和API双价抗虫基因已整合到银腺杨(84K)基因组中,拷贝数1~2个,并得到了表达。转化植株用杨扇舟蛾幼虫进行饲虫试验,结果表明昆虫幼虫的死亡率高达60.0%~80.0%。同时,存活幼虫的生长发育也受到了明显抑制。本研究结果为杨树抗虫育种提供了新的种质资源。 展开更多
关键词 银腺杨(84K) CryⅠ 4c和api基因 转化 抗虫性
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用花粉管通道法将慈姑蛋白酶抑制剂基因(API)导入水稻获得转基因植株 被引量:5
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作者 王才林 朱镇 +8 位作者 赵凌 张亚东 林静 张所兵 陈涛 刘贤进 王冬兰 黄骏麒 龚蓁蓁 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2005年第4期245-248,共4页
采用花粉管通道法遗传转化技术,将慈姑蛋白酶抑制剂基因(API)导入水稻品系9311中,获得了转基因植株。抗虫性鉴定结果表明:部分转基因植株对水稻螟虫的抗性比对照明显提高;PCR扩增获得了与引物扩增片段长度相同的DNA片段,证实API基因已... 采用花粉管通道法遗传转化技术,将慈姑蛋白酶抑制剂基因(API)导入水稻品系9311中,获得了转基因植株。抗虫性鉴定结果表明:部分转基因植株对水稻螟虫的抗性比对照明显提高;PCR扩增获得了与引物扩增片段长度相同的DNA片段,证实API基因已整合到受体植株的基因组中。遗传分析表明,API基因能在有性生殖过程中传递给后代,并于T4代分离出抗性纯合的株系。 展开更多
关键词 水稻 抗虫 慈姑蛋白酶抑制剂基因 转基因植株 花粉管通道法
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慈姑蛋白酶抑制剂(API)基因导入棉花获得转基因植株 被引量:4
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作者 黄骏麒 龚蓁蓁 +5 位作者 吴敬音 陈松 束春娥 谢伟军 周宝良 沈新莲 《江苏农业学报》 CSCD 2001年第2期65-68,共4页
通过花粉管通道技术将慈姑蛋白酶抑制剂API(ArrowheadProteinaseInhibitor)基因转入棉花 ,获得了转基因植株。经对棉铃虫抗虫性鉴定和PCR、RT PCR、Southernblotting分析 。
关键词 慈姑蛋白酶抑制剂 api基因 棉花 转基因植株
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芹菜过敏原蛋白Api g 1基因的克隆与表达分析 被引量:9
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作者 李梦瑶 王枫 +4 位作者 侯喜林 蒋倩 王镇 马静 熊爱生 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期13-19,共7页
以2个芹菜(Apium graveolens)品种‘津南实芹’和‘美国西芹’为试验材料,分别克隆出过敏原蛋白Api g 1基因。序列分析表明,‘津南实芹’和‘美国西芹’中的过敏原蛋白基因Api g 1均含有1个480 bp的开放阅读框及1个148 bp的内含子,分别... 以2个芹菜(Apium graveolens)品种‘津南实芹’和‘美国西芹’为试验材料,分别克隆出过敏原蛋白Api g 1基因。序列分析表明,‘津南实芹’和‘美国西芹’中的过敏原蛋白基因Api g 1均含有1个480 bp的开放阅读框及1个148 bp的内含子,分别编码159个氨基酸,二者有2个核苷酸位点的差异,编码的氨基酸有1个位点差异。‘津南实芹’和‘美国西芹’的过敏原蛋白Api g 1与胡萝卜、欧芹等植物的过敏原蛋白相似度较高,在保守区域有7个甘氨酸残基,空间结构上由3个螺旋和7个折叠组成。实时定量PCR表达分析显示,该基因在主根中表达较高,茎其次,其他部位表达较弱,具有明显的组织特异性。 展开更多
关键词 芹菜 过敏原蛋白 api g 1基因 克隆 实时定量PCR 基因表达
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西方蜜蜂caspase-3基因克隆、分析与表达模式
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作者 张天泽 李婧娴 +7 位作者 王梦怡 范小雪 邱剑丰 骆庆明 卢兆辉 陈大福 严提珍 郭睿 《应用昆虫学报》 北大核心 2025年第4期933-944,共12页
【目的】本研究旨在为深入开展西方蜜蜂Apis mellifera caspase-3基因(Am-caspase-3)的功能研究提供参考和依据。【方法】通过PCR扩增Am-caspase-3的编码序列(Coding sequences,CDS)后进行Sanger测序验证,并利用生物信息学工具预测Am-ca... 【目的】本研究旨在为深入开展西方蜜蜂Apis mellifera caspase-3基因(Am-caspase-3)的功能研究提供参考和依据。【方法】通过PCR扩增Am-caspase-3的编码序列(Coding sequences,CDS)后进行Sanger测序验证,并利用生物信息学工具预测Am-caspase-3蛋白的理化性质、分子特征及蛋白互作网络。利用MEGA软件进行西方蜜蜂和其他物种caspase-3系统进化分析。采用RT-qPCR检测Am-caspase-3在不同组织和发育阶段,工蜂成虫应答东方蜜蜂微孢子虫Nosema ceranae侵染过程以及工蜂幼虫应答蜜蜂球囊菌Ascosphaera apis侵染过程中的相对表达量。【结果】Am-caspase-3的CDS长度为1 023 bp,编码340个氨基酸。Am-caspase-3的分子式为C_(1760)H_(2703)N_(459)O_(539)S_(23),相对分子量为39 kD,不含跨膜结构域和信号肽区,但包含44个磷酸化位点,主要分布于细胞质。Am-caspase-3的二级结构包括184条无规则卷曲,90个α-螺旋,46条延伸链和20个β-转角。在Am-caspase-3中鉴定到1个结构域和3个保守基序;Am-caspase-3与其模版1m72.1.A之间的同源性达73.00%。Am-caspase-3与CytC等12个蛋白构成1个互作网络。西方蜜蜂与东方蜜蜂Apis cerana的caspase-3之间同源性达81.23%,在进化树上聚为一支。Am-caspase-3在西方蜜蜂工蜂不同组织中差异表达,在中肠中的表达量最高且极显著高于其他6个组织(P<0.01)。Am-caspase-3在3日龄幼虫中的表达量达峰值且极显著高于卵、7-8日龄预蛹及12日龄蛹(P<0.01)。Am-caspase-3在2、6、15和18日龄成虫体内的表达量显著高于1日龄成虫体内的表达量(P<0.05)。Am-caspase-3在工蜂成虫应答东方蜜蜂微孢子虫侵染的1、4、7、10和13 d皆显著下调(P<0.05),Am-caspase-3在工蜂幼虫应答蜜蜂球囊菌侵染的1、2和3 d均显著上调(P<0.05)。【结论】成功克隆到Am-caspase-3的CDS;Am-caspase-3是潜在的酸性蛋白、亲水性蛋白和胞内蛋白,与CytC等11个蛋白之间存在互作关系;西方蜜蜂与东方蜜蜂的caspase-3之间同源性最高;Am-caspase-3潜在参与西方蜜蜂工蜂不同组织和虫态的发育过程及宿主应答病原真菌侵染的过程。 展开更多
关键词 西方蜜蜂 CASPASE-3基因 细胞凋亡 东方蜜蜂微孢子虫 蜜蜂球囊菌
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2个芹菜品种泛变应原Api g 4基因的克隆与分析 被引量:3
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作者 李梦瑶 王枫 +3 位作者 侯喜林 蒋倩 马静 熊爱生 《植物资源与环境学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期1-7,共7页
从芹菜(Apium graveolens Linn.)品种‘津南实芹’(‘Jinnanshiqin’)和‘美国西芹’(‘Meiguoxiqin’)中分别克隆获得泛变应原基因Api g 4;2个品种的Api g 4基因均包含1个长度为405 bp的开放阅读框,二者间有3个核苷酸位点的差异。2个... 从芹菜(Apium graveolens Linn.)品种‘津南实芹’(‘Jinnanshiqin’)和‘美国西芹’(‘Meiguoxiqin’)中分别克隆获得泛变应原基因Api g 4;2个品种的Api g 4基因均包含1个长度为405 bp的开放阅读框,二者间有3个核苷酸位点的差异。2个品种的Api g 4基因均能编码134个氨基酸,但二者编码的氨基酸序列有2个位点的差异。多重比对以及进化树分析结果均表明:2个芹菜品种Api g 4基因编码的氨基酸序列与其他植物的泛变应原氨基酸序列同源性较高,氨基酸序列高度保守;与同科植物欧芹〔Petroselinum crispum(Miller)Nyman ex A.W.Hill〕和胡萝卜(Daucus carota Linn.)的泛变应原氨基酸序列的同源性均达到90%以上,在进化树上也归为同一支。2个品种的泛变应原Api g 4均为疏水性蛋白,具有相似的三维空间结构,均包含3个α螺旋和7个β折叠。实时定量PCR分析结果显示:Api g 4基因在‘津南实芹’和‘美国西芹’根中的表达水平均最高,在茎和茎尖分生组织中的表达水平相对较低,在叶中的表达水平很弱,且2个品种间同一组织的Api g 4基因表达水平也有差异,表明Api g 4基因的表达具有明显的组织特异性。 展开更多
关键词 芹菜 泛变应原 api g4基因 克隆 同源性 基因表达
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蜜蜂表皮蛋白apidermin(apd)基因家族3个新成员的特性鉴定及昆虫APD家族序列特征的分析 被引量:5
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作者 孙亮先 黄周英 +3 位作者 郑华军 葛清秀 龚丽萍 陈怀宇 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期12-23,共12页
Apidermin(APD)蛋白家族是一个新的昆虫结构性表皮蛋白家族。本研究结合生物信息学和RT-PCR扩增,对意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica(简称"意蜂")的apd-1-like,apd-3-like和中华蜜蜂Apis cerena cerena(简称"中蜂&quo... Apidermin(APD)蛋白家族是一个新的昆虫结构性表皮蛋白家族。本研究结合生物信息学和RT-PCR扩增,对意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica(简称"意蜂")的apd-1-like,apd-3-like和中华蜜蜂Apis cerena cerena(简称"中蜂")的apd-2等3个新的apd基因的结构特征和表达进行了分析,并分析了昆虫APD蛋白家族的序列特征。结果显示,在西方蜜蜂Apis mellifera(简称"西蜂")中,apd基因家族的6个成员串联排列在基因组序列第4号连锁群上,它们在A.m.ligustica雄蜂头部中的转录水平差异明显,且其启动子序列所含顺式元件也不同。中蜂apd-2和意蜂apd-1-like都含有3个外显子和2个内含子,而意蜂apd-3-like则由4个外显子和3个内含子组成。蛋白序列分析结果显示,目前已知的10条APD蛋白序列N末端均具有相似的信号肽序列,其成熟蛋白分子量为6.0~37.0kD,pI为6.2~10.8。其中西蜂的APD1-3、APD-like和东方蜜蜂Apiscerena的APD-2等5条较短的多肽中疏水氨基酸残基达52%~67%,且Ala含量最为丰富(占25%~34%);而丽蝇蛹集金小蜂Nasonia vitripennis的APD1-3和西蜂APD-1-like,APD-3-like等另外5条APD多肽富含Gly(21%~30%),其序列中疏水氨基酸残基含量为35%~41%。多肽序列多重比对和系统进化分析结果显示,APD家族可划分为2个亚家族。亚家族Ⅰ含有西蜂APD1-3和东方蜜蜂APD-2等4条较短的多肽序列,其N末端为一个长33aa的保守基序;亚家族Ⅱ由另外6条相对较长的多肽序列组成,其N末端保守基序长50aa,C末端保守基序长16aa。本文所描述的APD蛋白家族序列特征有助于以后从其他昆虫中鉴定新的apd基因。 展开更多
关键词 西方蜜蜂 东方蜜蜂 表皮蛋白 apidermin基因 APD家族 序列分析 生物信息学分析
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意大利蜜蜂去甲基化酶ALKBH基因家族的生物信息学分析、表达模式及功能验证
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作者 李一平 孙长露 +2 位作者 张伟 王妙 黄少康 《昆虫学报》 北大核心 2025年第4期407-420,共14页
【目的】本研究旨在探究意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica去甲基化酶AmALKBH基因对生长发育过程和mRNA甲基化的潜在调控作用,为深入开展AmALKBH的功能研究提供新理论基础和参考。【方法】使用多种软件对5个AmALKBH基因(AmALKBH1,AmAL... 【目的】本研究旨在探究意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica去甲基化酶AmALKBH基因对生长发育过程和mRNA甲基化的潜在调控作用,为深入开展AmALKBH的功能研究提供新理论基础和参考。【方法】使用多种软件对5个AmALKBH基因(AmALKBH1,AmALKBH4,AmALKBH6,AmALKBH 7及AmALKBH 8)进行生物信息学分析,并进行多物种间的同源序列比对和系统进化树构建。利用qRT-PCR检测5个AmALKBH基因(AmALKBH1,AmALKBH4,AmALKBH6,AmALKBH 7及AmALKBH 8)在意大利蜜蜂不同发育阶段(卵、幼虫和蛹),1,7和18日龄成年工蜂脑中以及1日龄成年工蜂不同组织(触角、脑、咽下腺、蜜囊、中肠、回肠、直肠、脂肪体和毒腺)中的表达量。同时利用高效液相色谱三重四级杆串联质谱(high performance liquid chromatography tandem triple quadrupole mass spectrometry,HPLC-QqQ-MS/MS)检测意大利蜜蜂以上不同发育阶段以及1,7和18日龄成年工蜂脑样品中mRNA m^(6)A甲基化的水平。【结果】意大利蜜蜂的5个AmALKBH基因(AmALKBH1,AmALKBH4,AmALKBH6,AmALKBH 7和AmALKBH 8)分别编码311,297,229,228和585个氨基酸,具有共同的保守基序和结构域,均为亲水性的球形蛋白,5个AmALKBH蛋白之间的理化性质存在差异。意大利蜜蜂的5个AmALKBHs与黑腹果蝇Drosophila melanogaster、智人Homo sapiens、家鼠Mus musculus、拟南芥Arabidopsis thaliana以及大肠杆菌Escherichia coli的ALKBH氨基酸序列一致性为12.92%~46.46%,与东方蜜蜂A.cerana、黄脚胡蜂Vespa velutina和欧洲熊蜂Bombus terrestris的ALKBH亲缘关系最紧密。随着卵期的胚胎发育进程,AmALKBH4和AmALKBH7的表达量逐渐降低,而AmALKBH6的表达量逐渐增高,AmALKBH8的表达量在卵中期(产卵后36 h)最高而后下降,AmALKBH1不表达;在幼虫期和蛹期,5个AmALKBH基因的表达量随发育进程逐渐提高,在褐眼白蛹和褐眼浅色蛹时达到峰值,在羽化出房前有所下降;5个AmALKBH基因均显示出在意大利蜜蜂1日龄成年工蜂触角和脑中高表达;1日龄成年工蜂脑中AmALKBH6,AmALKBH 7和AmALKBH 8的表达量均显著低于7和18日龄成年工蜂中的。mRNA m^(6)A甲基化水平从卵前期到卵中期明显降低,在卵后期(产卵后60 h)显著提高;幼虫和蛹期mRNA m^(6)A甲基化水平呈现与基因表达量相似的变化趋势,不同的是在粉眼白蛹时就较早地出现峰值,而mRNA m^(6)A甲基化水平在1日龄成年工蜂脑中最高,在7和18日龄成虫年工蜂脑中降低。【结论】研究结果显示出ALKBH基因家族在各物种间的高度保守性,意大利蜜蜂的5个AmALKBH基因之间在序列特征、蛋白结构和表达模式上均存在差异,预示其各自具有功能特点。AmALKBH基因表达量和mRNA m^(6)A甲基化水平均随发育阶段出现动态变化,且二者之间存在一定关联,表明AmALKBH基因对意大利蜜蜂生长发育具有潜在调控作用。以上研究结果为揭示AmALKBH基因调控生长发育的分子机制打下良好基础,为进一步提升蜜蜂在基础研究和授粉应用中的价值提供全新理论依据。 展开更多
关键词 意大利蜜蜂 ALKBH基因家族 去甲基化酶 mRNA m^(6)A甲基化 发育阶段
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中华蜜蜂幼虫肠道体液免疫通路相关基因及其剪接异构体鉴定 被引量:1
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作者 李坤泽 杜丽婷 +8 位作者 王梦怡 胡艳雯 吴函雨 邱剑丰 严提珍 卢兆辉 陈大福 骆庆明 郭睿 《昆虫学报》 北大核心 2025年第3期271-281,共11页
【目的】本研究旨在鉴定中华蜜蜂Apis cerana cerana幼虫肠道中体液免疫通路相关基因及其剪接异构体,为持续开展中华蜜蜂体液免疫通路相关基因和剪接异构体的分子克隆与功能研究提供资源和基础。【方法】通过Blast将前期基于中华蜜蜂工... 【目的】本研究旨在鉴定中华蜜蜂Apis cerana cerana幼虫肠道中体液免疫通路相关基因及其剪接异构体,为持续开展中华蜜蜂体液免疫通路相关基因和剪接异构体的分子克隆与功能研究提供资源和基础。【方法】通过Blast将前期基于中华蜜蜂工蜂幼虫肠道转录组的纳米孔(nanopore)测序数据鉴定到的所有全长转录本分别比对到KEGG和Nr数据库,筛选出体液免疫信号通路相关基因及其剪接异构体。利用GffCompare软件将鉴定到的体液免疫信号通路相关基因比对到东方蜜峰A.cerana参考基因组(版本号:ACSNU-2.0),以优化已注释基因的结构。使用Astalavista软件鉴定体液免疫信号通路相关基因的可变剪接(alternative splicing,AS)事件类型,再统计不同类型的AS事件数目;采用RT-PCR验证AS事件的真实性。利用TAPIS pipeline软件预测体液免疫信号通路相关基因所含可变多聚腺苷酸化(alternative polyadenylation,APA)位点,并通过MEME软件鉴定APA位点上游50 bp的基序(motif);通过3′RACE验证APA位点的真实性。【结果】共鉴定到JNK-p38-MAPK信号通路相关的23个基因及135条剪接异构体,Toll信号通路相关的21个基因和130条剪接异构体,JAK/STAT信号通路相关12个基因和53条剪接异构体,IMD信号通路相关10个基因和46条剪接异构体。注释到东方蜜蜂参考基因组上体液免疫通路相关的18个基因的5′UTR被延长,19个基因的3′UTR被延长,8个基因的5′UTR和3′UTR同时被延长。共鉴定到体液免疫信号通路相关的16个基因的60次AS事件,其中最丰富的类型是可变5′端剪接(alternative 5′splice site,A5SS)(26次)。通过RT-PCR证实了随机选择的3个基因的AS事件的真实性。共鉴定到体液免疫信号通路相关的47个基因含有1个及以上的APA位点,其中含有1个APA位点的基因最多。在APA位点上游鉴定到3条一致性序列:ATATAWAWWTATATRWATNYD,HVVN VNNDBDNBHNDDDNWNNNNNWNNH和BSHDVWDRDBDDDKKNVWDRDKHHVKHDVNNVWDND BHWHB。3′RACE结果证实了随机选择的2个基因所含APA位点的真实性。【结论】首次鉴定到中华蜜蜂幼虫肠道体液免疫信号通路相关的66个基因和364条剪接异构体,优化了东方蜜蜂参考基因组上注释到体液免疫通路的29个基因结构,挖掘出体液免疫相关的60次AS事件和139个APA位点,并证实了体液免疫相关基因的AS事件和APA位点的真实性。 展开更多
关键词 中华蜜蜂 纳米孔测序 体液免疫通路 基因结构优化 可变剪接 可变多聚腺苷酸化
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生长激素诱导的跨膜蛋白基因(GHITM)在东方蜜蜂(Apis cerana)幼虫不同发育阶段的相对表达分析 被引量:1
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作者 龚志文 樊莹 +2 位作者 杨明华 董霞 李亚辉 《云南农业大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2016年第1期81-86,共6页
蜜蜂社会中,工蜂与蜂王基因型相同但由于基因的表达差异、表观遗传差异及营养控制等因素造成工蜂和蜂王表型有很大的不同。GHITM基因是参与家蚕蜕皮与变态发育的pgdr基因的直系同源物,但关于其在蜜蜂中的研究目前未见报道。本研究利用... 蜜蜂社会中,工蜂与蜂王基因型相同但由于基因的表达差异、表观遗传差异及营养控制等因素造成工蜂和蜂王表型有很大的不同。GHITM基因是参与家蚕蜕皮与变态发育的pgdr基因的直系同源物,但关于其在蜜蜂中的研究目前未见报道。本研究利用实时荧光定量PCR技术研究了此基因在东方蜜蜂工蜂蛹和幼年工蜂以及蜂王蛹期的mRNA相对表达量,目的是为了探究GHITM基因在东方蜜蜂级型分化分子机理及预测可能由该基因产生的蜜蜂成虫的行为。结果表明:在工蜂蛹及工蜂成虫中GHITM基因表达量随日龄而增加;在蜂王蛹中GHITM的表达量从封盖蛹到2日龄蛹中呈下降趋势,2日龄后表达量随日龄增加。本研究结果可为东西方蜜蜂基因表达差异及级型分化分子水平的研究和GHITM基因功能的研究提供一定的理论依据。 展开更多
关键词 东方蜜蜂 实时荧光定量PCR 基因相对表达 功能预测
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酸性饲粮对东方蜜蜂微孢子虫繁殖与蜜蜂免疫力的影响
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作者 魏秀秀 陈雅 黄强 《福建农林大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2025年第1期117-124,共8页
【目的】研究酸性饲粮对东方蜜蜂微孢子虫繁殖和意大利蜜蜂免疫力的影响,验证酸性饲粮是否能够防治蜜蜂微孢子虫疾病,为在养蜂中合理使用酸性饲料提供科学依据。【方法】以意大利蜜蜂为研究对象,选取400只新出房蜜蜂,随机分为4组,分别... 【目的】研究酸性饲粮对东方蜜蜂微孢子虫繁殖和意大利蜜蜂免疫力的影响,验证酸性饲粮是否能够防治蜜蜂微孢子虫疾病,为在养蜂中合理使用酸性饲料提供科学依据。【方法】以意大利蜜蜂为研究对象,选取400只新出房蜜蜂,随机分为4组,分别为对照组、微孢子虫组、微孢子虫+柠檬酸组(含50 g·L^(-1)柠檬酸)和微孢子虫+醋酸组(含400 mL·L^(-1)醋酸),每组100只,检测并分析感染后第1天和第3天免疫基因的相对表达量,统计分析感染7 d后蜜蜂体内微孢子虫数量和蜜蜂存活率。【结果】4个试验组之间的存活率差异极显著(P<0.01),微孢子虫+柠檬酸组的蜜蜂死亡率显著高于微孢子虫组(P<0.05)。与微孢子虫组和对照组相比,酸性饲粮处理组(微孢子虫+柠檬酸组和微孢子虫+醋酸组)的蜜蜂中肠内微孢子虫感染数量无显著差异(P>0.05)。在微孢子虫组中,蜜蜂感染3 d内检测到11个免疫基因的相对表达量未显著下降(P>0.05),但酸性饲粮处理组中的部分免疫基因PGRPSC4300和Abaecin的表达量显著下降(P<0.05)。【结论】含有50 g·L^(-1)柠檬酸和400 mL·L^(-1)醋酸的饲粮无法抑制微孢子虫繁殖,也不能提高蜜蜂免疫力和存活率,不适用于治疗蜜蜂微孢子虫病。 展开更多
关键词 东方蜜蜂微孢子虫 意大利蜜蜂 酸性饲粮 免疫基因 存活率
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意大利蜜蜂piR-ame-1128833的靶mRNA和功能分析 被引量:1
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作者 张艺琼 李琪明 +7 位作者 董舒楠 王宁 康婧 宓诗雨 吴鹰 蒋海宾 陈大福 郭睿 《昆虫学报》 北大核心 2025年第1期49-60,共12页
【目的】本研究旨在揭示意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica成年工蜂中肠中piR-ame-1128833的调控网络和功能,为探明其作用机制提供基础。【方法】通过stem-loop RT-PCR和Sanger测序验证piR-ame-1128833在意大利蜜蜂6日龄工蜂成虫中肠... 【目的】本研究旨在揭示意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica成年工蜂中肠中piR-ame-1128833的调控网络和功能,为探明其作用机制提供基础。【方法】通过stem-loop RT-PCR和Sanger测序验证piR-ame-1128833在意大利蜜蜂6日龄工蜂成虫中肠、7日龄蜂王成虫卵巢和12日龄雄蜂成虫精巢中的表达和序列真实性。使用相关生物信息学软件预测piR-ame-1128833的靶mRNA并进行GO和KEGG数据库注释。通过RT-PCR和Sanger测序对piR-ame-1128833的关键靶基因Wnt-1和LAMP-1在6日龄工蜂成虫中肠、7日龄蜂王成虫卵巢和12日龄雄蜂成虫精巢中的表达进行验证。通过双荧光素酶报告基因试验验证piR-ame-1128833与关键靶基因Wnt-1和LAMP-1的结合关系。饲喂刚出房的1日龄工蜂成虫piR-ame-1128833的模拟物(mimic-piR)和阴性对照(mimic-NC)后,采用RT-qPCR检测工蜂成虫中肠中piR-ame-1128833的相对表达量及过表达piR-ame-1128833后关键靶基因Wnt-1和LAMP-1的相对表达量。【结果】piR-ame-1128833在6日龄工蜂成虫中肠、7日龄蜂王成虫卵巢和12日龄雄蜂成虫精巢中存在和表达;piR-ame-1128833靶向3021条mRNA,可注释到代谢进程和催化活性等45条GO条目及溶酶体和MAPK信号通路等318条KEGG通路;有51条靶mRNA涉及Wnt,mTOR,Hippo,AMPK,Hedgehog,MAPK和JAK-STAT等7条生长发育相关信号通路,有53条靶mRNA涉及2条体液免疫通路(MAPK和JAK-STAT信号通路)与3条细胞免疫通路(内吞作用、溶酶体和吞噬体);靶基因Wnt-1和LAMP-1在6日龄工蜂成虫中肠、7日龄蜂王成虫卵巢和12日龄雄蜂成虫精巢中表达;piR-ame-1128833与靶基因Wnt-1和LAMP-1之间存在结合关系;相较于mimic-NC饲喂组,piR-ame-1128833的表达量在mimic-piR饲喂组2和5日龄成年工蜂中肠中极显著上调,在3和4日龄成年工蜂中肠中显著上调;过表达piR-ame-1128833后,Wnt-1的表达量在3日龄成年工蜂中肠中极显著下调,在2,4和5日龄成年工蜂中肠中显著下调;LAMP-1的表达量在3,4和5日龄成年工蜂中肠中极显著下调,在2日龄成年工蜂中肠中显著下调。【结论】piR-ame-1128833在意大利蜜蜂成年工蜂中肠、成年蜂王卵巢和成年雄蜂精巢中表达,通过饲喂mimic-piR能实现成年工蜂中肠中piR-ame-1128833的高效过表达,成年工蜂中肠中piR-ame-1128833通过负调控Wnt-1和LAMP-1的表达发挥潜在作用。 展开更多
关键词 意大利蜜蜂 PIRNA piR-ame-1128833 中肠 卵巢 精巢 靶基因
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采集不同花蜜源植物花粉的意大利蜜蜂工蜂喙转录组及味觉受体基因的分析
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作者 张宇 武敏 +1 位作者 郭丽娜 郭媛 《昆虫学报》 北大核心 2025年第4期421-431,共11页
【目的】建立意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica工蜂喙转录组数据库,通过功能注释鉴定味觉受体(gustatory receptor,GR)基因信息,探究GR基因与意大利蜜蜂采集偏好性的相关性。【方法】采用Illumina HiSeq高通量测序平台对采集梨花粉... 【目的】建立意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica工蜂喙转录组数据库,通过功能注释鉴定味觉受体(gustatory receptor,GR)基因信息,探究GR基因与意大利蜜蜂采集偏好性的相关性。【方法】采用Illumina HiSeq高通量测序平台对采集梨花粉、采集油菜花粉和不采集花粉的意大利蜜蜂工蜂喙进行转录组测序,筛选差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs)并进行GO功能注释和KEGG代谢通路分类以及筛选GR基因并构建系统进化树;用qRT-PCR验证9个DEGs的表达。【结果】共筛选得到342个DEGs,其中上调表达基因157个,下调表达基因185个。GO功能注释结果显示,DEGs在GO注释中主要参与细胞过程、细胞解剖实体和结合。KEGG代谢通路分析结果显示,DEGs在氧化磷酸化通路中富集最多,酪氨酸代谢通路次之。在意大利蜜蜂喙转录组共鉴定出9种GR基因,其中4种为已知的GR基因,其余5种为本研究鉴定的未知GR基因,均具有完整的阅读开放框,且都有昆虫GR基因家族所具有的7个跨膜结构域。基于氨基酸序列构建的意大利蜜蜂AmelGRs与黑腹果蝇Drosophila melanogaster GRs的系统进化树,推测AmelGR4和AmelGR6可能属于苦味家族受体,AmelGR9可能属于甜味家族受体。qRT-PCR验证结果表明,筛选的9个DEGs在采集梨花粉的工蜂喙中有8个基因的表达趋势与RNA-seq结果相一致,在采集油菜花粉的工蜂喙中9个DEGs的表达趋势都与RNA-seq结果相一致。【结论】本研究获得了意大利蜜蜂工蜂喙转录组数据,筛选得到了GR基因,通过系统进化分析推测AmelGR4和AmelGR6可能属于苦味家族受体,AmelGR9可能属于甜味家族受体,推测意大利蜜蜂采集偏好性可能与GR基因相关。研究结果有助于在分子水平上加深对昆虫味觉感知系统的理解,为意大利蜜蜂在授粉过程中的采集偏好行为调控机制的研究奠定基础。 展开更多
关键词 意大利蜜蜂 转录组测序 基因功能注释 味觉受体基因
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Effects of H_2O_2 and NO on Flower Development and AP1 Gene Expression of Off-season Longan
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作者 Songgang LI Xinjun ZHANG +2 位作者 Lei ZHANG Jiwang HONG Yeyuan CHEN 《Agricultural Biotechnology》 CAS 2016年第4期23-25,30,共4页
[Objective] This study aimed to investigate the effects of H2O2 and NO on flower development and 4P1 gene expression of off-season longan. [Meth-od ]Nine-year-old off-season Chuliang longan was sprayed wit... [Objective] This study aimed to investigate the effects of H2O2 and NO on flower development and 4P1 gene expression of off-season longan. [Meth-od ]Nine-year-old off-season Chuliang longan was sprayed with enhancers and blockers of H2O2 and NO to analyze dynamic changes of flower development and API expression. [ Result] The expression level of API gene in off-season longan was improved during flower development. SNP and MV treatments up-regulated the expression level of API gene in leaves and terminal buds to varying degrees during lateral primordium formation. Especially, SNP treatment exhibited the most remark-able effect. DMTU treatment significantly inhibited the expression of AP1 gene in leaves and terminal buds during lateral primordium formation. L-NNA treatment slightly inhibited the expression of API gene in leaves and exerted no significant effect on expression of AP1 gene in terminal buds. [ Conclusion] It can be specu-lated that the enhancement of NO and H2O2 signals is conducive to flower development of off-season longan, while blocking H2O2 signals may inhibit flower develop-ment of off-season longan. 展开更多
关键词 LONGAN Flower development Hydrogen peroxide (H2O2) Nitric oxide (NO) api gene
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中华蜜蜂和意大利蜜蜂工蜂幼虫肠道中蜜蜂球囊菌ass-milR0037-3p的调控作用与表达模式
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作者 叶道有 臧贺 +9 位作者 王梦怡 樊念 吴陶 郑可心 严提珍 卢兆辉 谢润桂 陈大福 郭睿 邱剑丰 《昆虫学报》 北大核心 2025年第9期1251-1260,共10页
【目的】本研究旨在检测ass-milR0037-3p及其关键靶基因在蜜蜂球囊菌Ascosphaera apis侵染中华蜜蜂Apis cerana cerana和意大利蜜蜂A.mellifera ligustica工蜂幼虫过程中的表达模式,为深入探究ass-milR0037-3p调控蜜蜂球囊菌侵染机制提... 【目的】本研究旨在检测ass-milR0037-3p及其关键靶基因在蜜蜂球囊菌Ascosphaera apis侵染中华蜜蜂Apis cerana cerana和意大利蜜蜂A.mellifera ligustica工蜂幼虫过程中的表达模式,为深入探究ass-milR0037-3p调控蜜蜂球囊菌侵染机制提供基础。【方法】使用相关软件预测蜜蜂球囊菌ass-milR0037-3p的靶基因并进行GO和KEGG数据库注释。中华蜜蜂和意大利蜜蜂3日龄工蜂幼虫饲喂含1×10^(7)孢子/mL蜜蜂球囊菌的饲料后采用stem-loop RT-PCR和RT-qPCR分别验证中华蜜蜂和意大利蜜蜂工蜂6日龄幼虫肠道中ass-milR0037-3p的表达和检测中华蜜蜂和意大利蜜蜂工蜂4-6日龄幼虫肠道中ass-milR0037-3p及其2个关键靶基因组蛋白乙酰转移酶(histone acetyltransferase)基因ESA1和黄素胺氧化还原酶(flavin containing amine oxidase)基因FAO的表达量。【结果】ass-milR0037-3p靶向225个基因,可注释到繁殖、结合和细胞等28个GO条目以及剪接体、次生代谢产物的生物合成及氨基糖和核苷酸糖代谢等105条KEGG通路。蜜蜂球囊菌接种后,中华蜜蜂和意大利蜜蜂工蜂6日龄幼虫肠道中均扩增出ass-milR0037-3p的目的片段;相较于中华蜜蜂4日龄工蜂幼虫,5和6日龄工蜂幼虫肠道中ass-milR0037-3p的表达量均显著上调并且ESA1和FAO的表达量均显著下调;意大利蜜蜂5日龄工蜂幼虫肠道中ass-milR0037-3p的表达量比4日龄工蜂幼虫肠道中的上调,6日龄工蜂幼虫肠道中的比4日龄工蜂幼虫肠道中的显著上调;靶基因ESA1和FAO的表达量在意大利蜜蜂5日龄工蜂幼虫肠道中均比4日龄工蜂幼虫肠道中的上调,在6日龄工蜂幼虫肠道中比4日龄工蜂幼虫肠道中的显著上调。【结论】ass-milR0037-3p通过负调控FAO表达潜在调节蜜蜂球囊菌侵染中华蜜蜂工蜂幼虫的过程,通过正调控ESA1表达潜在影响蜜蜂球囊菌侵染意大利蜜蜂工蜂幼虫的过程。研究结果为阐明milRNA通过调控靶基因的表达来响应蜜蜂球囊菌侵染蜜蜂幼虫肠道的机制提供了基础。 展开更多
关键词 中华蜜蜂 意大利蜜蜂 微小RNA 类微小RNA的RNA 组蛋白乙酰转移酶基因 黄素胺氧化还原酶基因
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猪囊尾蚴API基因原核表达条件的优化 被引量:1
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作者 苏文强 胡鑫宇 +11 位作者 王秋霞 欧长波 郭爱疆 李辉 骆学农 余燕 张艳红 姜金庆 刘兴友 马金友 王松 才学鹏 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2017年第8期1-6,共6页
【目的】获得猪囊尾蚴凋亡蛋白酶抑制剂(API)基因在大肠杆菌中的最佳表达条件,为API功能研究奠定基础。【方法】以表达载体pEGX-4T-1、pET-30a及猪囊尾蚴API基因的原核表达载体pEGX-4T-1/API-Flag、pET-30a/API为材料,对影响API蛋白表... 【目的】获得猪囊尾蚴凋亡蛋白酶抑制剂(API)基因在大肠杆菌中的最佳表达条件,为API功能研究奠定基础。【方法】以表达载体pEGX-4T-1、pET-30a及猪囊尾蚴API基因的原核表达载体pEGX-4T-1/API-Flag、pET-30a/API为材料,对影响API蛋白表达的载体(pEGX-4T-1、pET-30a)、温度(25,30,37℃)、诱导时间(2,4,6,8h)、IPTG终浓度(0.2,0.4,0.6,0.8,1.0mmol/L)和卡那霉素终浓度(100,200,300,400mmol/L)等条件进行优化,筛选重组蛋白最佳的表达条件。对在最佳条件下获取的目的蛋白进行超声处理,4℃、10 000r/min离心分别收集上清液和沉淀,对目的蛋白进行可溶性分析;SDS-PAGE后,将目的蛋白条带转印至硝酸纤维素膜上,与抗His标签抗体共孵育,检测目的蛋白的反应原性。【结果】当选择pET系列载体(pET-30a)时,API表达量高于其在pGEX系列(pGEX-4T-1)中的表达量。API融合蛋白最佳表达条件为:在含200mmol/L卡那霉素的LB培养基上于37℃培养3h后,加入终浓度为0.4mmol/L的IPTG,再于30℃诱导培养6h。SDS-PAGE结果表明,pET-30a/API融合蛋白分子质量约为53ku,与预期蛋白分子质量一致。Western-blot检测结果显示,重组蛋白pET-30a/API能够识别特异性抗体,显示获得了大量表达正确的目的蛋白。【结论】确定了API基因的最佳表达条件,获得了较大表达量的API融合蛋白。 展开更多
关键词 猪囊尾蚴 凋亡蛋白酶抑制基因 api蛋白 原核表达
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The Influence of Bt-Transgenic Maize Pollen on the Bacterial Diversity in the Midgut of Chinese Honeybees, Apis cerana cerana 被引量:5
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作者 JIANG Wei-yu GENG Li-li +6 位作者 DAI Ping-li LANG Zhi-hong SHU Chang-long LIN Yi ZHOU Ting SONG Fu-ping ZHANG Jie 《Journal of Integrative Agriculture》 SCIE CAS CSCD 2013年第3期474-482,共9页
Using culture-independent technique polymerase chain reaction-denaturing gradient gel electrophoresis (PCR-DGGE) and conventional culture techniques, ecological risk of transgenic maize pollen on gut bacteria of the... Using culture-independent technique polymerase chain reaction-denaturing gradient gel electrophoresis (PCR-DGGE) and conventional culture techniques, ecological risk of transgenic maize pollen on gut bacteria of the Chinese honeybee, Apis cerana cerana, was assessed. Honeybees were fed with Bt-transgenic maize pollen, non-transgenic near isoline pollen, linear crylAh gene (800 ng mL^-1) and supercoiled plasmid DNA (800 ng mL^-1) under laboratory conditions. The DGGE profile showed that the number of DGGE bands varied from 10.7 to 14.7 per sample, and the Shannon's index ranged from 0.85 to 1.00. The similarity calculated by PAST was mostly above 92%, indicating no obvious changes among treatments or within replicates. 14 bacterial strains affiliated with Alphaproteobacteria, Gammaproteobacteria, Firmicutes, and Actinobacteria were isolated and characterized on media under aerobic and anaerobic conditions. These results demonstrated that transgenic crylAh maize pollen did not induce significant changes of the honeybee gut bacterial community composition under laboratory conditions. 展开更多
关键词 Bacillus thuringiensis intestinal bacteria horizontal gene transfer transgenic maize apis cerana BIOSAFETY
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Cloning and Sequence Analysis of cDNA Encoding MRJP3 of Apis cerana cerana
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作者 SU Song-kun ZHNEG Huo-qing +2 位作者 CHEN Sheng-lu ZHONG Bo-xiong Stefan Albert 《Agricultural Sciences in China》 CAS CSCD 2005年第9期707-713,共7页
By screening the worker (Apis cerana cerana) heads cDNA library using a fragment of the mrjp3 gene of Apis cerana as probe, 120 positive clones were obtained. The clone containing A. cerana cerana MRJP3 (AccMRJP3)... By screening the worker (Apis cerana cerana) heads cDNA library using a fragment of the mrjp3 gene of Apis cerana as probe, 120 positive clones were obtained. The clone containing A. cerana cerana MRJP3 (AccMRJP3) cDNA was selected. Based on the sequencing of the inserts of the positive clone, a sequence of AccMRJP3 cDNA which is 1 887 bp long including a poly (A) tail was obtained. The AccMRJP3 cDNA encompassed an open-reading frame (ORF) with 1 779 bp encoding 593 amino acids. The un-translated regions (UTR) of the 5′ end and 3′end are 46 bp and 160 bp in length, respectively. Similar to AmMRJP3 and AdMRJP3, the putative AccMRJP3 also has a repetitive region. The comparison of the repetitive region of AccMRJP3, AmMRJP3 and AdMRJP3 shows some differences between them. 展开更多
关键词 apis cerana cerana MRJP3 gene cloning Sequence analysis
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