库尔勒香梨上ACLSV的RT—PCR检测 被引量：13

1

作者 牛建新 刘连科 +3 位作者 朱军 覃伟铭 吴忠华 王小兵 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期243-246,共4页

以库尔勒香梨叶片和皮层为材料通过改进提取方法提取总RNA,获得了较完整的RNA,在此基础上进行了反转录和PCR扩增。并进行了库尔勒香梨上ACLSV(Apple chlorotic leaf sopt virus)的RT-PCR检测,建立了该病毒的RT-PCR检测体系。用此体系扩... 以库尔勒香梨叶片和皮层为材料通过改进提取方法提取总RNA,获得了较完整的RNA,在此基础上进行了反转录和PCR扩增。并进行了库尔勒香梨上ACLSV(Apple chlorotic leaf sopt virus)的RT-PCR检测,建立了该病毒的RT-PCR检测体系。用此体系扩增得到了ACLSV一个长约为358bp的片段。 展开更多

关键词 库尔勒香梨 aclsv RT-PCR

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ACLSV山东苹果分离物基因重组及CP序列多样性分析 被引量：4

2

作者 李科 时洪伟 +3 位作者 荆陈沉 孙现超 周常勇 青玲 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第14期2857-2867,共11页

【目的】明确苹果褪绿叶斑病毒(Apple chlorotic leaf spot virus,ACLSV)山东苹果分离物全基因组的分子特征、潜在重组事件及CP基因的多样性。【方法】采用RT-PCR分段扩增、克隆、拼接获得ACLSV全基因组序列,对其进行分子特征描述,并与... 【目的】明确苹果褪绿叶斑病毒(Apple chlorotic leaf spot virus,ACLSV)山东苹果分离物全基因组的分子特征、潜在重组事件及CP基因的多样性。【方法】采用RT-PCR分段扩增、克隆、拼接获得ACLSV全基因组序列,对其进行分子特征描述,并与已报道的16条全长基因组或近全长基因组序列进行比较和系统发育分析,同时扩增其CP进行多样性分析。【结果】扩增得到ACLSV山东苹果分离物QD-13全基因组序列(Gen Bank登录号KJ522693),QD-13全长7 557 nt,包含3个ORF。构建进化树分析表明,QD-13与日本苹果分离物B6聚为一簇,二者相似性最高,为85.9%。17条ACLSV分离物基因组分段比较表明,5′端和3′端差异较大;ORF3保守性相对较高,除分离物Ta Tao 5和MS外,其推导的氨基酸序列相似性均在91.2%以上。ORF1编码区527—665 aa区域保守性差,所比较的17条序列在该区域的相似性为15.4%—59.7%。基因组重组分析以P≤0.05为标准,3种以上算法同时检测到则为有意义重组事件,结果显示,QD-13存在3个重组事件,它们分别发生在6 507—6 247、6 397-6 497和3 851—4 760 nt。扩增QD-15、QD-20和YT-24分离物ACLSV的CP,共获得22条序列,可分为3种类型。对CP氨基酸序列进行比对分析表明,3种类型为不同氨基酸保守位点的组合,分别是Met60-Ser73-Ser79-Asp82-Asn97-Gly98、Leu59-Met83-Ile193和Ala40-Leu60-Ala72-Phe75-Ile86-Arg88-Ser130-Gly137-Met184。【结论】报道了中国ACLSV苹果分离物的完整基因组序列;明确了其基因组分子特点并发现了3个主要的潜在重组事件;ACLSV山东苹果分离物CP存在3种序列类型,具有丰富的多样性。 展开更多

关键词 苹果褪绿叶斑病毒 基因组 外壳蛋白 多样性 重组分析

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侵染云南苹果的苹果褪绿叶斑病毒的RT-PCR检测和序列分析 被引量：5

3

作者 姬盼 王连春 +3 位作者 孔宝华 李晓鹏 曹克强 马钧 《云南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期458-464,共7页

以云南昭通、昆明、曲靖等地采集的苹果病毒病样品为试材,对其是否携带苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)进行RT-PCR检测,将本试验获得3个云南ACLSV分离物(ZT,ML,TJX)和GenBank上已登录的24个分离物进行序列比对分析。所有的ACLSV分离物的核苷酸... 以云南昭通、昆明、曲靖等地采集的苹果病毒病样品为试材,对其是否携带苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)进行RT-PCR检测,将本试验获得3个云南ACLSV分离物(ZT,ML,TJX)和GenBank上已登录的24个分离物进行序列比对分析。所有的ACLSV分离物的核苷酸序列相似性为81.3%～99.7%,它们可以被分成两大组群,组群A,包括了大部分不同寄主、地理来源的分离物,所有的ACLSV苹果分离物位于组A;组群B,包括了ACLSV全部的寄主为桃的分离物。本研究获得的3个苹果云南分离物属于组群A,组群A可分成两个亚组,其中,分离物ML和TJX位于同一个亚组,而分离物ZT位于另一个亚组。结果表明ACLSV苹果分离物与寄主种类存在一定的相关性,该研究为株系划分、分子流行和寄主抗性分析提供依据。 展开更多

关键词 苹果褪绿叶斑病毒(aclsv) RT-PCR CP外壳蛋白 克隆 序列分析

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几种苹果实生砧木种子传毒潜力检测 被引量：6

4

作者 梁成林 赵玲玲 +1 位作者 宋来庆 姜中武 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期1164-1169,共6页

【目的】明确不同苹果实生砧木种子传毒的情况及各病毒的种传潜力。【方法】以八棱海棠、沙果、平邑甜茶、楸子和山定子5种苹果砧木母株和实生苗为试材,运用RT-PCR技术对母株和实生苗的苹果茎沟病毒(Apple stem grooving virus,ASGV)、... 【目的】明确不同苹果实生砧木种子传毒的情况及各病毒的种传潜力。【方法】以八棱海棠、沙果、平邑甜茶、楸子和山定子5种苹果砧木母株和实生苗为试材,运用RT-PCR技术对母株和实生苗的苹果茎沟病毒(Apple stem grooving virus,ASGV)、苹果褪绿叶斑病毒(Apple chlorotic leaf spot virus,ACLSV)、苹果茎痘病毒(Apple stem pitting virus,ASPV)和苹果锈果类病毒(Apple scar skin viroid,ASSVd)的携带情况进行检测。【结果】八棱海棠母株携带ASGV、ACLSV和ASSVd,侵染率均为100%,其实生苗带ASGV和ASSVd,侵染率分别为3.3%和26.7%;沙果母株同时被4种病毒侵染,其中ASGV侵染率为40%,ACLSV为80%,ASPV和ASSVd侵染率均为100%,实生苗仅携带ASSVd,携带率为100%;平邑甜茶母株被ACLSV、ASPV和ASSVd复合侵染,实生苗被ASSVd侵染,侵染率均为100%;楸子母株同时携带ASGV、ACLSV和ASSVd,3种病毒携带率分别为60%、100%、100%,实生苗携带ACLSV、ASPV和ASSVd,侵染率分别为43.3%、70%、23.3%;山定子母株同时携带ACLSV和ASSVd,带毒率均达100%,实生苗仅检出ASSVd,带毒率为30%。【结论】苹果锈果类病毒可以通过种子传毒,而苹果褪绿叶斑病毒和苹果茎痘病毒不通过种子进行传播。 展开更多

关键词 苹果实生砧木 种子传毒 RT-PCR ASGV aclsv ASPV ASSVd

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检测砂梨潜隐病毒的IC-RT-PCR和TC-RT-PCR的研究 被引量：7

5

作者 邓晓云 洪霓 +1 位作者 胡红菊 王国平 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期569-572,共4页

以砂梨为试材,在生物学和血清学检测的基础上,采用免疫捕作RT-PCR穴IC-RT-PCR雪和试管捕作RT-PCR穴TC-RT-PCR雪技术,对苹果褪绿叶斑病毒(Applechloroticleafspotvirus,ACLSV)和苹果茎沟病毒(Applestemgroovingvirus,ASGV)进行了检测分... 以砂梨为试材,在生物学和血清学检测的基础上,采用免疫捕作RT-PCR穴IC-RT-PCR雪和试管捕作RT-PCR穴TC-RT-PCR雪技术,对苹果褪绿叶斑病毒(Applechloroticleafspotvirus,ACLSV)和苹果茎沟病毒(Applestemgroovingvirus,ASGV)进行了检测分析。结果表明,TC/IC-RT-PCR均能有效检测梨粗提液中的ACLSV和ASGV,分别获得了大小约358bp和499bp的目标扩增片段;但IC-RT-PCR检测ACLSV的效果受到病毒分离株间血清学关系影响。与传统的RT-PCR相比,IC/TC-RT-PCR不仅灵敏度更高,而且不需提取总RNA,可以简化操作程序和减少苯酚、氯仿类有机试剂对人体的伤害和对环境的污染,适合于大量梨样品的病毒快速灵敏检测。 展开更多

关键词 砂梨 aclsv ASGV IC—RT—PCR TC—RT—PCR

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库尔勒香梨病毒病多重RT-PCR检测技术研究 被引量：3

6

作者 牛建新 刘连科 +3 位作者 马兵钢 朱军 李海生 何梅 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 2004年第2期93-96,共4页

在建立PVYV和ACLSVRT PCR优化体系的基础上,主要研究了多重PCR中2套引物的浓度和退火温度的影响,研究表明:多重PCR体系中引物Tm值越高、长度越长浓度就需越高;如果Tm值相差不大,退火温度的确定要以Tm值高的引物为准。应用该体系可以节... 在建立PVYV和ACLSVRT PCR优化体系的基础上,主要研究了多重PCR中2套引物的浓度和退火温度的影响,研究表明:多重PCR体系中引物Tm值越高、长度越长浓度就需越高;如果Tm值相差不大,退火温度的确定要以Tm值高的引物为准。应用该体系可以节约成本、缩短时间。 展开更多

关键词 梨脉黄病毒(PVYV) 苹果褪绿叶斑病毒(aclsv) 多重RT-PCR

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苹果褪绿叶斑病毒一步法RT-PCR检测 被引量：5

7

作者 张强 牛建新 李西萍 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期67-69,共3页

RT-PCR技术在植物病毒检测方面有着快速、灵敏、特异性强等优点。然而传统的RT-PCR是在两个酶(逆转录酶和Taq酶)分别催化下在两个体系中的两步反应,即由RNA逆转录为cDNA,再以模板cDNA进行PCR扩增,操作步骤比较繁琐,而且很容易造成交叉... RT-PCR技术在植物病毒检测方面有着快速、灵敏、特异性强等优点。然而传统的RT-PCR是在两个酶(逆转录酶和Taq酶)分别催化下在两个体系中的两步反应,即由RNA逆转录为cDNA,再以模板cDNA进行PCR扩增,操作步骤比较繁琐,而且很容易造成交叉污染。笔者建立的一步法RT-PCR是在逆转录酶(M-MLV)和Taq DNA聚合酶共同作用下,只需在一个反应管中就可以完成反转录和cDNA扩增的全过程,两个步骤一步完成,以达到对苹果褪绿叶斑病毒快速、简便、敏感的检测。 展开更多

关键词 一步法RT-PCR 检测 苹果褪绿叶斑病毒(aclsv)

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苹果褪绿叶斑病毒检测:PCR技术与ELISA技术灵敏度比较 被引量：4

8

作者 侯义龙 张开春 +1 位作者 吴雅琴 李春敏 《大连大学学报》 2001年第6期19-22,共4页

苹果褪绿叶斑病毒（ＡＣＬＳＶ）是感染仁果类和核果类果树的重要病毒．作者应用ＲＴ－ＰＣＲ技术和ＰＡＳ－ＥＬＩＳＡ技术成功地检测了该病毒，并对指示植物中感染该病毒的检测结果进行了报道．试验结果表明，ＲＴ－ＰＣＲ技术的检测... 苹果褪绿叶斑病毒（ＡＣＬＳＶ）是感染仁果类和核果类果树的重要病毒．作者应用ＲＴ－ＰＣＲ技术和ＰＡＳ－ＥＬＩＳＡ技术成功地检测了该病毒，并对指示植物中感染该病毒的检测结果进行了报道．试验结果表明，ＲＴ－ＰＣＲ技术的检测灵敏度是ＰＡＳ－ＥＬＩＳＡ技术的８０００倍． 展开更多

关键词 苹果褪绿叶斑病毒 病毒检测 PCR技术 ELISA技术 aclsv 灵敏度

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来源于砂梨和桃的苹果褪绿叶斑病毒分离物部分CP基因和3'端非翻译区的序列分析 被引量：1

9

作者 王利平 洪霓 +4 位作者 宋艳苏 王俊珍 马小方 胡国君 王国平 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期104-109,共6页

苹果褪绿叶斑病毒（Apple chlorotic leaf spot virus，ACLSV）是引起果树病害的一种重要病毒。ACLSV寄主范围广、发生较普遍，可侵染苹果、梨等仁果类果树和桃、扁桃、李、樱桃、杏等核果类果树，据报道我国梨产区感染ACLSV达80％以上。

关键词 苹果褪绿叶斑病毒 序列分析 非翻译区 CP基因 砂梨 分离物 aclsv 核果类果树

原文传递

利用酵母双杂交技术筛选与苹果褪绿叶斑病毒运动蛋白互作的西方烟蛋白 被引量：1

10

作者 张磊 李文琦 +2 位作者 孙平平 张斌 李正男 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期1141-1147,共7页

苹果褪绿叶斑病毒(apple chlorotic leaf spot virus,ACLSV)是蔷薇科果树上的一种重要病毒,其致病机制尚不清楚。以具有基因沉默抑制子功能的运动蛋白(movement protein,MP)为诱饵,利用酵母双杂交技术筛选与其互作的西方烟37B(Nicotiana... 苹果褪绿叶斑病毒(apple chlorotic leaf spot virus,ACLSV)是蔷薇科果树上的一种重要病毒,其致病机制尚不清楚。以具有基因沉默抑制子功能的运动蛋白(movement protein,MP)为诱饵,利用酵母双杂交技术筛选与其互作的西方烟37B(Nicotiana occidentalis 37B)蛋白。构建了库容量为9.6×10^(6)CFU、平均插入片段>1 kb的西方烟cDNA文库,从中筛选到15种蛋白,涉及植物光合作用、ATP合成代谢、过氧化物代谢、氨基酸代谢、抗逆等过程,可为解析ACLSV的致病机制提供依据和方向。 展开更多

关键词 aclsv 西方烟37B 酵母双杂交 互作蛋白

原文传递

苹果褪绿叶斑病毒PBM1（李假痘）毒株的提纯、抗血清制备及ELISA检测 被引量：2

11

作者 姜中武 W.Jelkmann 《植物病理学报》 CSCD 北大核心 1996年第4期337-340,共4页

从木本植物分离的苹果褪绿叶斑病毒（ａｐｐｌｅｃｈｌｏｒｏｔｉｃｌｅａｆｓｐｏｔｖｉｒｕｓ，Ｔｒｉｃｈｏｖｉｒｕｓ组）的ＰＢＭ１毒株能引起李品种“Ｈａｕｓｚｗｅｔｓｈｅ”的假痘病，将其繁殖在昆诺藜（Ｃｈｅｎｏｐｏｄｉｕ... 从木本植物分离的苹果褪绿叶斑病毒（ａｐｐｌｅｃｈｌｏｒｏｔｉｃｌｅａｆｓｐｏｔｖｉｒｕｓ，Ｔｒｉｃｈｏｖｉｒｕｓ组）的ＰＢＭ１毒株能引起李品种“Ｈａｕｓｚｗｅｔｓｈｅ”的假痘病，将其繁殖在昆诺藜（Ｃｈｅｎｏｐｏｄｉｕｍｑｕｉｎｏａ）上。感染ＰＢＭ１毒株的昆诺藜叶组织用两次蔗糖梯度离心提纯。每１００ｇ叶组织的病毒产量平均为１．６８ｍｇ。在电镜下可观察到弯曲状病毒颗粒上的螺纹结构。通过ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳分析，病毒外壳蛋白的分子量为２１．５ｋＤａ。用提纯的病毒免疫家兔制备的抗血清和ＥＬＩＳＡ法，对感染ＰＢＭ１的昆诺藜叶片和桃花进行了灵敏的检测。 展开更多

关键词 李假痘 ELISA 提纯 抗血清 病毒 aclsv

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苹果褪绿叶斑病毒辽宁分离物生物学和基因组研究 被引量：3

12

作者 张双纳 李正男 +4 位作者 张尊平 范旭东 任芳 胡国君 董雅凤 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期716-720,共5页

苹果褪绿叶斑病毒（Apple chlorotic leaf spotvirus，ACLSV）属于乙型线形病毒科（Betaflexiviridae）纤毛病毒属（Trichovirus），基因组为正义单链RNA。含有约7500个核苷酸。编码3个部分重叠的开放阅读框。目前从GenBank数据库可以... 苹果褪绿叶斑病毒（Apple chlorotic leaf spotvirus，ACLSV）属于乙型线形病毒科（Betaflexiviridae）纤毛病毒属（Trichovirus），基因组为正义单链RNA。含有约7500个核苷酸。编码3个部分重叠的开放阅读框。目前从GenBank数据库可以检索到19个ACLSV分离物的基因组序列。 展开更多

关键词 苹果褪绿叶斑病毒 基因组序列 分离物 GENBANK数据库 生物学 辽宁 开放阅读框 aclsv

原文传递

苹果茎尖超低温脱毒体系的建立 被引量：4

13

作者 李艳林 渠慎春 +1 位作者 栾雨婷 高志红 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期2982-2995,共14页

病毒病是苹果栽培亟待解决的问题,不仅严重损坏苹果品质,还给树体带来毁灭性灾害。超低温脱毒技术的诞生和发展对果树脱毒苗的培育产生了重要影响。本试验研究出新型茎尖超低温脱毒技术体系并成功脱除苹果病毒ACLSV和ApMV。试验选取‘烟... 病毒病是苹果栽培亟待解决的问题,不仅严重损坏苹果品质,还给树体带来毁灭性灾害。超低温脱毒技术的诞生和发展对果树脱毒苗的培育产生了重要影响。本试验研究出新型茎尖超低温脱毒技术体系并成功脱除苹果病毒ACLSV和ApMV。试验选取‘烟富3号’、‘烟富10号’、‘M9’、‘M9T337’四种苹果及砧木材料,提取总RNA进行RT-PCR病毒检测,发现‘烟富3号’携带ACLSV和ApMV,苹果砧木‘M9’和‘M9T337’携带ACLSV。对携带病毒材料进行初代、继代扩繁培养,然后取2 mm茎尖进行超低温处理,并用多重RT-PCR检测再生植株,获取脱毒苗后进行生根培养与炼苗移栽。结果表明,最佳玻璃化超低温处理为:预培养采用0.5 mol/L蔗糖浓度处理2 d,25℃下装载60 min,0℃下PVS2溶液处理90 min,液氮冷冻1 h,40℃水浴2 min解冻,苹果茎尖的存活率为78.33%,脱毒率可达95.74%。玻璃化超低温处理是产生脱毒效果的直接原因,运用超低温处理可以有效脱除苹果病毒ACLSV和ApMV。 展开更多

关键词 苹果 超低温脱毒 aclsv ApMV 脱毒体系

原文传递

两步多重RT-PCR快速检测苹果潜隐性病毒 被引量：11

14

作者 陈红霞 邵建柱 +2 位作者 孙建设 曹晓凤 乔雪华 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期695-701,共7页

【目的】为建立检测3种苹果潜隐性病毒更为快速准确的方法，【方法】以携带苹果茎沟病毒（ASGV）、苹果褪绿叶斑病毒（ACLSV）和苹果茎痘病毒（ASPV）的成龄苹果树韧皮部为试材，根据基因库中苹果茎痘病毒（Apple stempitting virus，A... 【目的】为建立检测3种苹果潜隐性病毒更为快速准确的方法，【方法】以携带苹果茎沟病毒（ASGV）、苹果褪绿叶斑病毒（ACLSV）和苹果茎痘病毒（ASPV）的成龄苹果树韧皮部为试材，根据基因库中苹果茎痘病毒（Apple stempitting virus，ASPV）的外壳蛋白基因序列，设计合成了2对特异性引物，分别与合成的苹果茎沟病毒（ASGV）引物和苹果褪绿叶斑病毒（ACLSV）的引物组合配伍，筛选出最佳的引物对组合。对eDNA的合成所用引物和总RNA模板进行遴选和量化，对PCR过程中eDNA的用量、引物对的终浓度、退火温度等主要影响因素进行优化。【结果】结果表明，反转录引物为Oligo（dT）18、总RNA0．1～3．0μL时，可以得到较好的eDNA；ASPV—FR与ASGV—Pch、ACLSV—Pch引物组合优于ASPV—Pch，并且筛选出4组最佳的终浓度处理组合；eDNA用量为2．0-4．0μL、退火温度为50．0～52．9℃、循环数为35时，扩增效果较好。采用优化的多重RT—PCR体系对采自陕西和山东两省的样品进行检测，并用3种病毒的单重RT—PCR体系进行验证。【结论】结果呈现高度一致性，充分印证了该多重RT—PCR体系的准确性，适用于大量样品的快速检测。 展开更多

关键词 苹果病毒 苹果茎沟病毒 苹果茎痘病毒 苹果褪绿叶斑病毒 两步多重RT—PCR

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来源于桃和苹果的苹果褪绿叶斑病毒的部分分子生物学特性和cp基因的原核表达 被引量：5

15

作者 郑银英 王国平 +2 位作者 洪霓 宋艳苏 游红 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期356-361,共6页

从桃和苹果上分离得到苹果褪绿叶斑病毒ACLSV-HBP和ACLSV-C2个分离物,采用RT-PCR法进行扩增,所获扩增片段经序列测定,其全长分别为1768nt(ACLSV-HBP)和1751nt(ACLSV-C)。这2个分离物扩增片段全长的同源性为83%,mp基因片段核苷酸和推导... 从桃和苹果上分离得到苹果褪绿叶斑病毒ACLSV-HBP和ACLSV-C2个分离物,采用RT-PCR法进行扩增,所获扩增片段经序列测定,其全长分别为1768nt(ACLSV-HBP)和1751nt(ACLSV-C)。这2个分离物扩增片段全长的同源性为83%,mp基因片段核苷酸和推导编码氨基酸序列同源性分别为82.6%和87.1%;cp基因均由582nt组成,其核苷酸和推导编码氨基酸序列同源性分别为87.8%和95.9%。将2个分离物的cp基因与已报道ACLSV分离物进行序列同源性比较,结果显示ACLSV-HBP与SX/2的cp基因核苷酸序列及推导编码氨基酸序列同源性最高,分别为94.0%和96.4%。将ACLSV-HBP分离物的cp基因克隆到原核表达载体pGEX-KG,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,SDS-PAGE分析表明,融合蛋白大小约为46kDa。Western-blot分析表明,该基因在大肠杆菌内得到高效表达,融合蛋白具有抗原性。 展开更多

关键词 苹果褪绿叶斑病毒 原核表达载体 CP基因 分子生物学特性 SDS-PAGE分析 序列同源性 核苷酸序列 RT-PCR法

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苹果褪绿叶斑病毒外壳蛋白基因的原核表达及抗血清制备 被引量：3

16

作者 耿超 牟安丽 +2 位作者 刘志强 李向东 周涛 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期755-758,I0002,共5页

【目的】为了制备苹果褪绿叶斑病毒(Apple chlorotic leaf spot virus,ACLSV)的抗血清,【方法】将ACLSV外壳蛋白(Coat protein,CP)基因克隆到原核表达载体pEHISTEV和pEHISEGFPTEV,转化大肠杆菌Rosetta,切胶回收诱导表达的CP融合蛋白免... 【目的】为了制备苹果褪绿叶斑病毒(Apple chlorotic leaf spot virus,ACLSV)的抗血清,【方法】将ACLSV外壳蛋白(Coat protein,CP)基因克隆到原核表达载体pEHISTEV和pEHISEGFPTEV,转化大肠杆菌Rosetta,切胶回收诱导表达的CP融合蛋白免疫新西兰长耳兔,制备ACLSV的抗血清。【结果】利用原核表达载体pEHISTEV和pE-HISEGFPTEV在Rosetta中分别表达出了分子质量为25 ku和55 ku的ACLSV CP融合蛋白。切胶回收25 ku的融合蛋白免疫新西兰长耳兔。经ELISA测定,所制备的抗血清效价为1∶1 024,Western blot及组织印迹分析表明抗血清能与ACLSV CP发生特异性的免疫反应。【结论】该血清特异性强,效价高,可用于苹果叶片、果实和枝条等样品中A-CLSV的检测。 展开更多

关键词 苹果褪绿叶斑病毒 外壳蛋白基因 原核表达 抗血清 组织印迹分析

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苹果褪绿叶斑病毒库尔勒香梨分离物外壳蛋白基因的序列分析 被引量：2

17

作者 蔡瑜 向本春 +2 位作者 席德慧 都业娟 刘升学 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 2004年第3期197-200,共4页

利用RT-PCR,获得苹果褪绿叶斑病毒库尔勒香梨分离物外壳蛋白基因的cDNA克隆。序列分析结果表明,库尔勒香梨分离物外壳蛋白基因由582个核苷酸组成,编码一个由193个氨基酸组成的蛋白质。与已报道的P863、P205、A-Ball分离物序列比较,核苷... 利用RT-PCR,获得苹果褪绿叶斑病毒库尔勒香梨分离物外壳蛋白基因的cDNA克隆。序列分析结果表明,库尔勒香梨分离物外壳蛋白基因由582个核苷酸组成,编码一个由193个氨基酸组成的蛋白质。与已报道的P863、P205、A-Ball分离物序列比较,核苷酸序列同源性为80.0％～86.1％,推导的氨基酸序列同源性为84.9％～89.6％。 展开更多

关键词 苹果褪绿叶斑病毒 库尔勒香梨分离物 外壳蛋白基因 CDNA克隆 序列分析 核苷酸 氨基酸

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三种DNA片段回收纯化方法的比较 被引量：2

18

作者 侯义龙 姜国斌 +2 位作者 周其兴 张立娟 于亚军 《大连大学学报》 2003年第2期63-65,共3页

本文采用三种方法对苹果褪绿叶斑病毒RT-PCR的特异DNA片段进行了回收纯化。结果表明:用普通琼脂糖替代低融点琼脂糖,回收纯化后产物的浓度及纯度与低融点琼脂糖法基本一致,完全可以用普通琼脂糖替代低融点琼脂糖进行DNA片段的回收纯化,... 本文采用三种方法对苹果褪绿叶斑病毒RT-PCR的特异DNA片段进行了回收纯化。结果表明:用普通琼脂糖替代低融点琼脂糖,回收纯化后产物的浓度及纯度与低融点琼脂糖法基本一致,完全可以用普通琼脂糖替代低融点琼脂糖进行DNA片段的回收纯化,从而降低成本,简化操作.玻璃奶法的回收纯度明显高于低融点琼脂糖法和普通琼脂糖法,且更快速安全. 展开更多

关键词 DNA片段 回收 纯化 苹果褪绿叶斑病毒 RT-PCR 基因克隆 转基因

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苹果褪绿叶斑病毒库尔勒香梨分离物外壳蛋白基因在大肠杆菌中的表达 被引量：1

19

作者 蔡瑜 向本春 +2 位作者 席德慧 都业娟 刘升学 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 2004年第4期295-297,共3页

将ACLSVCP基因克隆到表达载体pET 28a(+)中,转化大肠杆菌BL21,筛选得到阳性克隆pET ACP,用IPTG诱导使其表达,SDS PAGE电泳分析表明,预期的22kD外壳蛋白在大肠杆菌中得到大量表达,并加以纯化,用于制备抗血清。

关键词 苹果褪绿叶斑病毒 库尔勒香梨 外壳蛋白 基因表达 大肠杆菌

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桃上苹果褪绿叶斑病毒的发生与检测 被引量：2

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作者 王海荣 刘伟 +2 位作者 安淼 董晓民 余贤美 《山东农业科学》 2016年第4期109-110,128,共3页

对山东省果树研究所试验基地‘玉妃’、‘超红’、‘岱妃’三个桃品种的苹果褪绿叶斑病毒病的发生情况进行调查,采集22份样品,利用ACLSV特异性引物进行RT-PCR检测。结果表明,在‘玉妃’桃的叶片中扩增出与苹果褪绿叶斑病毒(Apple chloro... 对山东省果树研究所试验基地‘玉妃’、‘超红’、‘岱妃’三个桃品种的苹果褪绿叶斑病毒病的发生情况进行调查,采集22份样品,利用ACLSV特异性引物进行RT-PCR检测。结果表明,在‘玉妃’桃的叶片中扩增出与苹果褪绿叶斑病毒(Apple chlorotic leaf spot virus,ACLSV)预期大小一致的目的片段,并与GenBank登录的病毒核苷酸序列具有较高的一致性,而在‘超红’和‘岱妃’桃中均未检测到该病毒。 展开更多

关键词 桃 苹果褪绿叶斑病毒 病原检测

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