目的分析沉默泡膜蛋白1(vacuole membrane protein 1,VMP1)与结肠癌细胞对药物敏感性的关系及其机制。方法应用MTT法检测结肠癌细胞的药物敏感性;构建沉默VMP1慢病毒载体,感染SW620细胞沉默其VMP1表达;软琼脂克隆形成实验检测沉默VMP1...目的分析沉默泡膜蛋白1(vacuole membrane protein 1,VMP1)与结肠癌细胞对药物敏感性的关系及其机制。方法应用MTT法检测结肠癌细胞的药物敏感性;构建沉默VMP1慢病毒载体,感染SW620细胞沉默其VMP1表达;软琼脂克隆形成实验检测沉默VMP1后细胞在5-氟尿嘧啶作用下的单克隆形成及增殖能力;Western blot检测耐药基因ABCC1蛋白表达水平。结果SW620细胞对5-氟尿嘧啶的敏感性要显著低于铂类;沉默VMP1后,SW620细胞对5-氟尿嘧啶的敏感性显著增加,5-氟尿嘧啶作用下的单细胞克隆形成能力被显著抑制,ABCC1表达水平显著降低。结论抑制VMP1表达可能通过降低耐药基因ABCC1的表达提高其对5-氟尿嘧啶的敏感性。展开更多
[目的]探讨宫颈癌紫杉醇抗性形成的潜在机制。[方法]紫杉醇浓度从0.001μmol/L逐渐递增至0.1μmol/L处理Hela细胞超过12个月进行Hela紫杉醇抗性细胞(Hela/TR)的筛选。检测Hela与Hela/TR细胞的细胞活力、凋亡水平、细胞周期和肿瘤干细胞...[目的]探讨宫颈癌紫杉醇抗性形成的潜在机制。[方法]紫杉醇浓度从0.001μmol/L逐渐递增至0.1μmol/L处理Hela细胞超过12个月进行Hela紫杉醇抗性细胞(Hela/TR)的筛选。检测Hela与Hela/TR细胞的细胞活力、凋亡水平、细胞周期和肿瘤干细胞水平。紫杉醇处理后,检测Hela与Hela/TR细胞内紫杉醇浓度。[结果]紫杉醇处理可以显著抑制Hela细胞的增殖并且诱导细胞凋亡。与Hela细胞相比,Hela/TR细胞中CD44^(+)细胞的比例显著增加,并且Hela/TR细胞中肿瘤干细胞标志物SOX2和ALDH1的表达水平高于Hela细胞。与Hela细胞相比,Hela/TR细胞的细胞内紫杉醇浓度明显降低(0.0759±0.0130 vs 0.0031±0.0004,t=12.52,P<0.05)。与Hela细胞相比,Hela/TR细胞中ABCC5的表达水平显著上升(0.15±0.04 vs 0.72±0.04,t=22.53,P<0.05)。敲低ABCC5后,Hela/TR细胞的细胞内紫杉醇浓度明显升高。与Hela细胞相比,Hela/TR细胞中FOXM1的表达水平上升。敲低FOXM1后,Hela/TR细胞中ABCC5的表达水平下降(0.13±0.07 vs 0.64±0.03,t=14.97,P<0.05),细胞内紫杉醇浓度明显上升。过表达miR-548o-3p后,Hela/TR细胞中FOXM1和ABCC5的水平表达下降,细胞内紫杉醇浓度明显上升(0.003±0.000 vs 0.072±0.010,t=15.43,P<0.05)。miR-548o-3p靶向FOXM1 mRNA的3′端非翻译区。过表达miR-548o-3p后,Hela/TR细胞对紫杉醇的抵抗显著下降(0.51±0.05 vs 0.10±0.01,t=17.98,P<0.05)。[结论]宫颈癌紫杉醇抗性细胞中miR-548o-3p负反馈失调导致FOXM1/ABCC5轴过度激活,提升了紫杉醇从宫颈癌细胞内的排除效率,增强了宫颈癌细胞的活力。展开更多
文摘目的分析沉默泡膜蛋白1(vacuole membrane protein 1,VMP1)与结肠癌细胞对药物敏感性的关系及其机制。方法应用MTT法检测结肠癌细胞的药物敏感性;构建沉默VMP1慢病毒载体,感染SW620细胞沉默其VMP1表达;软琼脂克隆形成实验检测沉默VMP1后细胞在5-氟尿嘧啶作用下的单克隆形成及增殖能力;Western blot检测耐药基因ABCC1蛋白表达水平。结果SW620细胞对5-氟尿嘧啶的敏感性要显著低于铂类;沉默VMP1后,SW620细胞对5-氟尿嘧啶的敏感性显著增加,5-氟尿嘧啶作用下的单细胞克隆形成能力被显著抑制,ABCC1表达水平显著降低。结论抑制VMP1表达可能通过降低耐药基因ABCC1的表达提高其对5-氟尿嘧啶的敏感性。
文摘[目的]探讨宫颈癌紫杉醇抗性形成的潜在机制。[方法]紫杉醇浓度从0.001μmol/L逐渐递增至0.1μmol/L处理Hela细胞超过12个月进行Hela紫杉醇抗性细胞(Hela/TR)的筛选。检测Hela与Hela/TR细胞的细胞活力、凋亡水平、细胞周期和肿瘤干细胞水平。紫杉醇处理后,检测Hela与Hela/TR细胞内紫杉醇浓度。[结果]紫杉醇处理可以显著抑制Hela细胞的增殖并且诱导细胞凋亡。与Hela细胞相比,Hela/TR细胞中CD44^(+)细胞的比例显著增加,并且Hela/TR细胞中肿瘤干细胞标志物SOX2和ALDH1的表达水平高于Hela细胞。与Hela细胞相比,Hela/TR细胞的细胞内紫杉醇浓度明显降低(0.0759±0.0130 vs 0.0031±0.0004,t=12.52,P<0.05)。与Hela细胞相比,Hela/TR细胞中ABCC5的表达水平显著上升(0.15±0.04 vs 0.72±0.04,t=22.53,P<0.05)。敲低ABCC5后,Hela/TR细胞的细胞内紫杉醇浓度明显升高。与Hela细胞相比,Hela/TR细胞中FOXM1的表达水平上升。敲低FOXM1后,Hela/TR细胞中ABCC5的表达水平下降(0.13±0.07 vs 0.64±0.03,t=14.97,P<0.05),细胞内紫杉醇浓度明显上升。过表达miR-548o-3p后,Hela/TR细胞中FOXM1和ABCC5的水平表达下降,细胞内紫杉醇浓度明显上升(0.003±0.000 vs 0.072±0.010,t=15.43,P<0.05)。miR-548o-3p靶向FOXM1 mRNA的3′端非翻译区。过表达miR-548o-3p后,Hela/TR细胞对紫杉醇的抵抗显著下降(0.51±0.05 vs 0.10±0.01,t=17.98,P<0.05)。[结论]宫颈癌紫杉醇抗性细胞中miR-548o-3p负反馈失调导致FOXM1/ABCC5轴过度激活,提升了紫杉醇从宫颈癌细胞内的排除效率,增强了宫颈癌细胞的活力。
