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基于杆状病毒Bac-to-Bac系统的VLP递送mRNA疫苗平台的建立
1
作者 马莉莉 王琼娴 +5 位作者 王晓丽 马孙婷 吕立新 徐彬 冯志新 欧阳伟 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第5期41-50,共10页
噬菌体MS2 VLP(噬菌体病毒样颗粒)是不含病毒遗传物质的纳米颗粒,可以自组装成一个二十面体衣壳,适合靶向传递RNA。本研究利用Bac-to-Bac系统(杆状病毒表达系统)生产MS2 VLP包裹的eGFP mRNA。分别设计、合成MS2 VLP的表达框和eGFP mRNA... 噬菌体MS2 VLP(噬菌体病毒样颗粒)是不含病毒遗传物质的纳米颗粒,可以自组装成一个二十面体衣壳,适合靶向传递RNA。本研究利用Bac-to-Bac系统(杆状病毒表达系统)生产MS2 VLP包裹的eGFP mRNA。分别设计、合成MS2 VLP的表达框和eGFP mRNA的表达框,将MS2 VLP的表达框和eGFP mRNA的表达框同时插入pFastBac Dual载体中,获得重组供体质粒pFastBacDual-MS2-eGFP mRNA。转化DH10Bac感受态,通过三抗和蓝白斑(卡拉霉素/庆大霉素/四环素/IPTG/X-Gal)筛选以及PCR鉴定,获得重组的rBacmid-MS2-eGFP mRNA。将rBacmid-MS2-eGFP mRNA转染sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒vBacmid-MS2-eGFP mRNA。通过倒置荧光显微镜观察及Western blot检测表明eGFP获得表达。用vBacmid-MS2-eGFP mRNA感染High 5悬浮细胞进行MS2-eGFP mRNA的大量表达,经超速离心纯化,电镜观察可见大量的直径约30 nm的病毒样颗粒(VLP)。提取纯化的MS2 VLP中包裹的mRNA,通过RT-PCR及测序鉴定,结果表明MS2 VLP中包裹的mRNA为eGFP mRNA。将MS2-eGFP mRNA免疫BALB/c小鼠,进行免疫原性研究,通过ELISA测得的抗体效价为1∶819200,表明MS2-eGFP mRNA可以刺激小鼠产生较强的抗原特异性抗体应答。以上结果表明,利用杆状病毒Bac-to-Bac表达系统生产的MS2 VLP可以包裹外源mRNA,并可将外源mRNA递送到小鼠体内产生特异性体液免疫反应。本研究建立了基于杆状病毒Bac-to-Bac表达系统的VLP递送mRNA疫苗研究平台,为今后动物传染病的mRNA疫苗研发提供新的参考。 展开更多
关键词 BAC-TO-BAC MS2 vlp 递送系统 mRNA疫苗
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O型口蹄疫病毒VLPs疫苗抗体竞争ELISA检测方法的建立 被引量：2
2
作者 刘玲 戴伶俐 +7 位作者 李晓艳 付玲芳 康斌 董鹏 武玉梅 尹忠良 吴蒙 李雪峰 《中国兽医杂志》 北大核心 2025年第6期60-66,共7页
为实现对口蹄疫病毒(FMDV)类病毒颗粒(VLPs)疫苗免疫效果的有效评估,建立一种O型FMDV VLPs疫苗抗体竞争酶联免疫吸附测定(ELISA)检测方法。本试验以O型FMDV VLPs作为免疫原免疫小鼠制备单克隆抗体,通过O型FMDV VLPs和O型FMDV灭活疫苗抗... 为实现对口蹄疫病毒(FMDV)类病毒颗粒(VLPs)疫苗免疫效果的有效评估,建立一种O型FMDV VLPs疫苗抗体竞争酶联免疫吸附测定(ELISA)检测方法。本试验以O型FMDV VLPs作为免疫原免疫小鼠制备单克隆抗体,通过O型FMDV VLPs和O型FMDV灭活疫苗抗原筛选,ELISA四参数拟合曲线判定,确定最佳单抗。将O型FMDV VLPs作为包被抗原,辣根过氧化物酶(HRP)标记特异性单抗与被检血清竞争结合,通过优化确定O型FMDV VLPs最佳包被浓度、HRP标记特异性单抗最佳工作浓度和最适封闭液,经计算确定判定标准,并进一步分析该竞争ELISA方法的敏感性和特异性;采用建立的方法检测90份O型FMDV VLPs疫苗免疫猪血清样品,验证其实用性。结果显示,O型FMDV VLPs特异性单抗为1D3单抗,该竞争ELISA检测方法的最佳工作条件为:O型FMDV VLPs最佳包被浓度为0.2μg/mL,HRP标记1D3单抗最佳工作浓度为1∶1000,最适封闭液为1%明胶。竞争ELISA判定标准为:被检血清阻断率≥40%,判为阳性;被检血清阻断率≤32%,判为阴性;被检血清阻断率介于32%~40%,则应在14 d后对动物进行重新检测。敏感性和特异性试验结果显示,建立方法的最低检测限为血清效价1∶1000,仅有O型FMDV VLPs疫苗免疫阳性血清能发生竞争性结合,O型和A型FMDV灭活疫苗免疫猪阳性血清无竞争性结合。90份O型FMDV VLPs疫苗免疫猪血清样品的阻断率结果符合体液免疫应答的一般规律,证明该方法可以有效评估O型FMDV VLPs疫苗免疫后血清抗体水平。本试验建立的FMDV VLPs疫苗抗体竞争ELISA检测方法可为开发更多VLPs疫苗检测技术提供技术支撑。 展开更多
关键词 O型口蹄疫 类病毒颗粒(vlps) 竞争ELISA
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H3N8亚型马流感病毒VLPs的构建及其生物学特性分析 被引量：3
3
作者 刘春国 王伟 +5 位作者 刘飞 刘彦云 王丹 吕让 刘明 相文华 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期240-244,共5页
为了构建含H3N8亚型马流感病毒HA蛋白和M1蛋白的病毒样颗粒疫苗,把A/equine/Xinjiang/3/2007(H3N8)的HA基因和M1基因克隆到杆状病毒穿梭载体pFastBac Dual中,将得到的重组穿梭质粒pFBD-XJ3HA-M1转化至DH10Bac感受态细胞,与杆状病毒骨架... 为了构建含H3N8亚型马流感病毒HA蛋白和M1蛋白的病毒样颗粒疫苗,把A/equine/Xinjiang/3/2007(H3N8)的HA基因和M1基因克隆到杆状病毒穿梭载体pFastBac Dual中,将得到的重组穿梭质粒pFBD-XJ3HA-M1转化至DH10Bac感受态细胞,与杆状病毒骨架质粒Bacmid进行重组从而获得重组杆状病毒转座子rBac-XJ3HA-M1,然后将其转染Sf9昆虫细胞,包装重组杆状病毒rBV-XJ3HA-M1。通过PCR鉴定、细胞免疫组织化学试验、Western-blot分析以及血凝试验证明,HA蛋白和M1蛋白在昆虫细胞中能够有效表达,且表达产物具有良好的反应活性,表达的HA蛋白具有血凝活性。电镜观察发现,HA蛋白和M1蛋白能够稳定形成病毒样颗粒。上述研究结果为研制马流感亚单位疫苗提供了技术储备,也为马流感病毒蛋白的功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 马流感病毒 H3N8亚型 HA基因 M1基因 杆状病毒双表达 病毒样颗粒
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生长温度对Si基Ge量子点VLP-CVD自组织生长的影响 被引量：2
4
作者 吴军 顾书林 +6 位作者 施毅 江宁 朱顺明 郑有炓 王牧 刘晓勇 闵乃本 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2000年第4期34-37,共4页
对利用超低压化学气相淀积 (VLP CVD)技术在Si上自组织生长Ge量子点的特征进行了研究 ,发现生长温度对Ge量子点尺寸分布和密度的影响不同于分子束外延 (MBE)的结果 ,这种现象与VLP CVD表面控制反应模式有关。实验表明 。
关键词 GE量子点 化学气相淀积 自组织生长 锗
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VLP/CVD低温硅外延 被引量：3
5
作者 谢自力 陈桂章 +1 位作者 洛红 严军 《微电子学》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期357-359,共3页
研究了 VLP/ CVD低温硅外延生长技术。利用自制的 VLP/ CVD设备 ,在低温条件下 ,成功地研制出晶格结构完好的硅同质结外延材料。扩展电阻、X射线衍射谱和电化学分布研究表明 ,在低温下 (T<80 0°C)应用 VLP/ CVD技术 ,可以生长... 研究了 VLP/ CVD低温硅外延生长技术。利用自制的 VLP/ CVD设备 ,在低温条件下 ,成功地研制出晶格结构完好的硅同质结外延材料。扩展电阻、X射线衍射谱和电化学分布研究表明 ,在低温下 (T<80 0°C)应用 VLP/ CVD技术 ,可以生长结构完好的硅外延材料 ; 展开更多
关键词 低温外延 vlp/CVD 杂质分布 硅 半导体技术
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利用重组HPV16L1抗原检测宫颈癌抗L1或VLP抗体的对比 被引量：3
6
作者 栾怡 于修平 +5 位作者 宋长芹 卞继峰 赵蔚明 贾继辉 周亚滨 齐眉 《中国病毒学》 CSCD 2002年第4期308-311,共4页
为了评价重组大肠杆菌表达的HPV16L1蛋白和重组腺病毒表达的HPV16L1 VLP两种抗原在检测宫颈癌抗 16L1或VLP抗体及在宫颈癌血清学诊断意义上的差别 ,应用PCR技术从宫颈癌组织的DNA中扩增出全长15 35bp的HPV16L1基因片段 ,克隆至 pUC18 T... 为了评价重组大肠杆菌表达的HPV16L1蛋白和重组腺病毒表达的HPV16L1 VLP两种抗原在检测宫颈癌抗 16L1或VLP抗体及在宫颈癌血清学诊断意义上的差别 ,应用PCR技术从宫颈癌组织的DNA中扩增出全长15 35bp的HPV16L1基因片段 ,克隆至 pUC18 T载体中 ,进行DNA测序鉴定。然后 ,将HPV16L1基因克隆至pGEX 2T表达载体中 ,并诱导表达HPV16L1融合蛋白 ,分子量为 83kD ,能被HPV16L1单克隆抗体所识别。经GST柱层析法纯化后 ,与重组腺病毒表达的HPV16L1 VLP分别经酶联免疫吸附 (ELISA)法检测 12份宫颈癌患者和 35份献血员血清。 12例宫颈癌血清标本中 ,抗HPV16L1蛋白的抗体阳性率为 7例 (占 5 8.3% ) ;抗HPV16L1 VLP的抗体阳性率为 8例 (占 6 6 .7% )。经大肠杆菌表达的重组抗原HPV16L1检测为HPV16抗体IgG(+)的 7份患者血清 ,利用HPV16L1 VLP试剂盒检测均阳性 ;经大肠杆菌表达的重组抗原检测为HPV16抗体IgG( )的 5份患者血清 ,利用HPV16L1 VLP试剂盒检测有 1份阳性。两者对HPV16抗体的阳性检出率并无显著差异 (P >0 .0 5 )。本实验结果说明HPV16与宫颈癌高度相关 ,利用大肠杆菌表达的重组抗原HPV16L1和HPV16L1 VLP重组抗原检测抗体的敏感性并不受影响。利用重组抗原HPV16L1对宫颈癌的抗体进行定性。 展开更多
关键词 重组HPV16L1抗原 检测 宫颈癌 抗L1 vlp抗体 对比 人乳头瘤病毒
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铝佐剂对HBoV1 VP2 VLPs诱导小鼠免疫应答的影响 被引量：2
7
作者 邓中华 段招军 +3 位作者 谢志萍 谢乐云 张兵 曹友德 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期56-58,64,共4页
目的:探讨铝佐剂对HBoV1 VP2 VLPs诱导小鼠免疫应答的影响。方法:BABL/c小鼠随机分为VLPs实验组、明矾佐剂实验组、PBS对照组和明矾佐剂对照组。实验组小鼠分别采用HBoV1 VP2 VLPs和HBoV1 VP2 VLPs加明矾佐剂肌肉注射免疫,对照组小鼠同... 目的:探讨铝佐剂对HBoV1 VP2 VLPs诱导小鼠免疫应答的影响。方法:BABL/c小鼠随机分为VLPs实验组、明矾佐剂实验组、PBS对照组和明矾佐剂对照组。实验组小鼠分别采用HBoV1 VP2 VLPs和HBoV1 VP2 VLPs加明矾佐剂肌肉注射免疫,对照组小鼠同期注射等量明矾佐剂或PBS缓冲液;实验8周后ELISA检测两实验组特异性Ig G抗体效价和活性,ELIspot检测两实验组特异性细胞免疫反应强度,从细胞免疫和体液免疫强度探讨铝佐剂对HBoV1 VP2 VLPs诱导小鼠免疫应答的影响。结果:明矾佐剂降低HBoV1 VP2 VLPs诱导细胞免疫反应强度(P<0.001),增强HBoV1 VP2 VLPs诱导的血清Ig G效价(P<0.01)和Ig G活性(P<0.05)。结论:明矾佐剂使HBoV1 VP2 VLPs诱导的体液免疫反应增强而细胞免疫反应减弱。HBoV1 VP2 VLPs作为预防性疫苗使用时应添加明矾佐剂,作为治疗性疫苗使用时应不加明矾佐剂。 展开更多
关键词 铝佐剂 人博卡病毒1(HBoV1) 病毒蛋白2(VP2) 病毒样颗粒(vlps)
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RHDV VLPs单克隆抗体的制备及其识别表位的初步定位 被引量：1
8
作者 宋艳华 胡波 +5 位作者 范志宇 彭伟 魏后军 薛家宾 徐为中 王芳 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2015年第5期65-70,共6页
为了筛选兔出血症病毒(RHDV)衣壳蛋白(VP60)的特异性单抗,并进一步分析单抗识别表位的分布情况,将重组杆状病毒r Ac V-Bac-VP60接种Sf9昆虫细胞,收获细胞培养物,电镜观察显示重组VP60蛋白获得有效表达,并可组装成病毒样粒子(VLPs)。将RH... 为了筛选兔出血症病毒(RHDV)衣壳蛋白(VP60)的特异性单抗,并进一步分析单抗识别表位的分布情况,将重组杆状病毒r Ac V-Bac-VP60接种Sf9昆虫细胞,收获细胞培养物,电镜观察显示重组VP60蛋白获得有效表达,并可组装成病毒样粒子(VLPs)。将RHDV VLPs作为免疫原与等量弗氏佐剂乳化,免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经3次亚克隆后,获得11株能稳定分泌抗RHDV VLPs抗体的阳性杂交瘤细胞株。间接ELISA、IFA和Western Blot鉴定结果表明,这11株单克隆抗体均能够特异地识别RHDV VLPs和天然RHDV。11株单抗均为Ig G1,其中1D4和3F7的轻链为Lambda型,其余均为Kappa型。截短表达结果显示,单抗5A3针对RHDV VP60的NTA区,5F3针对RHDV VP60的S区,单抗1B8、1D4、3D11、3F7、4C2、4G2、5G2、5H3和6B2针对RHDV VP60的P区。研究为RHDV VLPs抗原表位的鉴定和RHDV结构功能的研究奠定了基础,同时为RHDV的检测和新型疫苗研究提供物质基础。 展开更多
关键词 RHDV vlpS 单克隆抗体 表位 初步定位
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VP2蛋白Cys-402、Cys-214对猪细小病毒VLPs影响的初步研究 被引量：1
9
作者 徐志文 胡秋炅 +4 位作者 郭万柱 朱玲 王印 石恬 王小玉 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第7期17-19,共3页
试验以猪细小病毒VP2 Cys-402（A）、Cys-214（B）定点突变体为基础，将突变体真核表达载体转染COS-7细胞及核酸免疫猪细小病毒抗体阴性的小白鼠，通过电镜技术和流式细胞仪技术探讨突变Cys-402、Cys-214对猪细小病毒病毒样颗粒的影响... 试验以猪细小病毒VP2 Cys-402（A）、Cys-214（B）定点突变体为基础，将突变体真核表达载体转染COS-7细胞及核酸免疫猪细小病毒抗体阴性的小白鼠，通过电镜技术和流式细胞仪技术探讨突变Cys-402、Cys-214对猪细小病毒病毒样颗粒的影响，旨在寻找利于外源基因插入的病毒样颗粒内部位点。电镜和小白鼠核酸免疫试验结果表明：Cys-214对病毒样颗粒的组装和免疫原性的发挥是必需的，其突变后不能促使VP2形成病毒样颗粒，更不能在免疫后的小白鼠血清中监测出相应抗体的存在；而Cys-402的突变并不干扰病毒样颗粒的形成和免疫原性的发挥。由此可以推测Cys-402及其附近可能存在利于外源基因插入的位点。 展开更多
关键词 猪细小病毒 VP2 病毒样颗粒 定点突变
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Her2/ECD-sf162/TM嵌合VLPs的制备及抗肿瘤免疫效果研究 被引量：1
10
作者 龙敏 董柯 +3 位作者 王希 林芳 刘冲 张惠中 《现代肿瘤医学》 CAS 2016年第21期3355-3359,共5页
目的:成功制备Her2胞外段基因与猴免疫缺陷病毒(simian immunodeficiency virus,SIV)包膜蛋白sf162跨膜区基因融合的Her2/ECD-sf162/TM病毒样颗粒(VLPs),并在小鼠体内进行初步的抗肿瘤免疫效果研究。方法:利用前期构建好的Her2/neu与SIV... 目的:成功制备Her2胞外段基因与猴免疫缺陷病毒(simian immunodeficiency virus,SIV)包膜蛋白sf162跨膜区基因融合的Her2/ECD-sf162/TM病毒样颗粒(VLPs),并在小鼠体内进行初步的抗肿瘤免疫效果研究。方法:利用前期构建好的Her2/neu与SIV-gag嵌合的表达载体Her2/ECD-sf162/TM,制备Her2/neu与SIV-gag嵌合型VLPs疫苗,并用该疫苗免疫小鼠。结果:VLPs可成功激发小鼠体内免疫应答反应,产生血清抗VLPs的抗体;VLP免疫后接种Her2/neu+小鼠乳腺癌细胞EMT6,结果显示该疫苗可有效抑制肿瘤生长;同时,VLP对荷瘤鼠治疗结果也显示,该疫苗可在一定程度上抑制肿瘤生长。结论:VLPs疫苗具有良好的免疫原性,且免疫后对肿瘤攻击具有保护作用。 展开更多
关键词 HER2/NEU 肿瘤疫苗 vlpS 免疫
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肠道病毒EV71新型VLPs疫苗的制备及鉴定 被引量：1
11
作者 董轲 王希 +2 位作者 龙敏 王琳 张惠中 《中国妇幼健康研究》 2015年第6期1125-1127,共3页
目的制备肠道病毒71型(EV71)的新型病毒样颗粒(VLPs)疫苗,为手足口病防治奠定基础。方法应用分子克隆技术构建外壳蛋白VP1融合基因cVP1,免疫细胞化学及Western Blot测定该融合基因在HeLa细胞表达情况;将cVP1克隆于杆状病毒表达载体pFast... 目的制备肠道病毒71型(EV71)的新型病毒样颗粒(VLPs)疫苗,为手足口病防治奠定基础。方法应用分子克隆技术构建外壳蛋白VP1融合基因cVP1,免疫细胞化学及Western Blot测定该融合基因在HeLa细胞表达情况;将cVP1克隆于杆状病毒表达载体pFastbac1,应用昆虫细胞TN5制备重组杆状病毒cVP1 rBV,再将此重组病毒与本室保存的gag rBV以不同MOI比例共感染昆虫细胞TN5,得到含有VP1的重组嵌合病毒样颗粒cVP1 VLPs,最后以Westem Blot及电镜进行鉴定。结果免疫细胞化学及Western Blot结果显示构建的融合基因cVP1可在真核细胞内表达,并成功制备成cVP1 rBV,该重组杆状病毒和gag rBV共感染昆虫细胞制备的VLPs结构完整。结论成功制备了EV71的新型VLPs疫苗,为后续研究打下了基础。 展开更多
关键词 手足口病 肠道病毒71型 病毒样颗粒 制备及鉴定
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人乳头瘤病毒16型L1蛋白VLP的原核表达及纯化
12
作者 张万菊 郑丽舒 +4 位作者 张骞 谢志萍 张钫 麻粉莲 刘斌 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2009年第6期567-570,共4页
目的在大肠杆菌中表达人乳头瘤病毒16型(HPV16)L1蛋白病毒样颗粒(VLP),并进行纯化,为研制宫颈癌疫苗提供新的思路。方法以HPV16基因组DNA为模板,PCR扩增HPV16L1基因的编码区,定向克隆至原核表达载体pGEX-4T-1中谷胱甘肽转移酶(GST)编码... 目的在大肠杆菌中表达人乳头瘤病毒16型(HPV16)L1蛋白病毒样颗粒(VLP),并进行纯化,为研制宫颈癌疫苗提供新的思路。方法以HPV16基因组DNA为模板,PCR扩增HPV16L1基因的编码区,定向克隆至原核表达载体pGEX-4T-1中谷胱甘肽转移酶(GST)编码区下游,构建重组表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达产物经SDS-PAGE和Western blot鉴定后,采用GST纯化柱纯化重组融合蛋白,并用凝血酶切去GST标签,再经S100分子筛纯化,浓缩后,电镜观察纯化蛋白的VLP形态。结果重组表达质粒经双酶切和测序,证明构建正确。表达产物的相对分子质量约为80000,主要以可溶性形式存在。Western blot显示,目的蛋白可与小鼠抗HPV16L1抗体发生特异性反应。纯化蛋白的纯度约为95%,在电镜下可见直径约为50～60nm的VLP。结论已成功地在大肠杆菌中表达了可溶性的HPV16L1蛋白VLP,并进行了纯化,为宫颈癌疫苗及血清学诊断试剂的研制奠定了基础。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒16型 主要结构蛋白 病毒样颗粒 原核表达 纯化
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T7噬菌体p10融合蛋白表达及自组装VLP观察
13
作者 徐悦 徐海 +3 位作者 鲍熹 王义伟 卢宇 侯继波 《江西农业学报》 CAS 2017年第2期14-17,共4页
原核表达T7噬菌体p10融合蛋白,PCR扩增p10基因并在基因下游连接口蹄疫病毒(FMDV)VP1抗原表位基因;将融合基因插入p ET-28a载体,构建重组质粒;用IPTG诱导重组菌表达目标蛋白,通过电镜观察病毒样颗粒(VLP)的形成。结果成功构建了p ET-p10-... 原核表达T7噬菌体p10融合蛋白,PCR扩增p10基因并在基因下游连接口蹄疫病毒(FMDV)VP1抗原表位基因;将融合基因插入p ET-28a载体,构建重组质粒;用IPTG诱导重组菌表达目标蛋白,通过电镜观察病毒样颗粒(VLP)的形成。结果成功构建了p ET-p10-VP1表达菌株。SDS-PAGE、Western-blot检测显示目标蛋白高效表达并与VP1特异性抗体产生免疫反应。回收p10-VP1蛋白样品经透射电镜观察,有40 nm VLP生成。表明T7噬菌体p10蛋白具有良好的VLP自组装功能,并可用于抗原表位的表面展示。 展开更多
关键词 T7噬菌体 口蹄疫 表达 vlp
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CDSN网月带VLP地震数据解调
14
作者 高原 牟其铎 +1 位作者 郑斯华 余学军 《中国地震》 CSCD 北大核心 1995年第3期266-271,共6页
中国数字地震台网（即ＣＤＳＮ）自１９８６年１０月起，记录了大量的超长周期（ＶＬＰ）地震数据，这些ＶＬＰ地震数据以同月带记录形式存放。网月带中，数据格式有ＡＳＣⅡ码、ＢＣＤ码和二进制数据３种形式。本文提出了ＣＤＳＮ同月... 中国数字地震台网（即ＣＤＳＮ）自１９８６年１０月起，记录了大量的超长周期（ＶＬＰ）地震数据，这些ＶＬＰ地震数据以同月带记录形式存放。网月带中，数据格式有ＡＳＣⅡ码、ＢＣＤ码和二进制数据３种形式。本文提出了ＣＤＳＮ同月带ＶＬＰ地震数据的解调方法，分析了网月带的数据结构，输出ＶＬＰ地震数据文件。同时，编制了配套的《ＣＤＳＮ超长周期地震记录处理软件》。《软件》使用ＴｕｒｂｏＣ和ＱｕｉｃｋＢＡＳＩＣ两种语言编制，其中数据解调和图形回放等功能模块由ＴｕｒｂｏＣ语言完成，管理程序由ＱｕｉｃｋＢＡＳＩＣ语言实现。 展开更多
关键词 地震数据 数字式地震台 vlp 数据块
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RNA疫苗的设计与递送
15
作者 杨璐 张镜明 +1 位作者 徐杉 童贻刚 《合成生物学》 北大核心 2026年第1期129-151,共23页
RNA疫苗因其快速开发和高效免疫原性成为疫苗领域的革命性技术。本文综述了RNA疫苗的设计优化与递送策略,聚焦线性mRNA、环状RNA(circular RNA,circRNA)和自扩增RNA(self-amplifying RNA,saRNA)三大类型的分子特征与应用潜力。在设计优... RNA疫苗因其快速开发和高效免疫原性成为疫苗领域的革命性技术。本文综述了RNA疫苗的设计优化与递送策略,聚焦线性mRNA、环状RNA(circular RNA,circRNA)和自扩增RNA(self-amplifying RNA,saRNA)三大类型的分子特征与应用潜力。在设计优化方面,线性mRNA通过5′帽结构、UTR(untranslated region,UTR)优化、密码子选择和poly(A)尾延长提升稳定性和翻译效率;circRNA凭借共价闭合结构抵抗核酸酶降解,实现长效表达;saRNA利用病毒复制机制扩增抗原产量,降低剂量需求。在递送系统中,脂质纳米颗粒(lipid nanoparticle,LNP)仍占据主导地位,但其可电离脂质设计和靶向配体修饰正不断优化递送效率。此外,病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)作为新型递送载体,凭借天然的空心结构和自组装特性,兼具高生物相容性与高效mRNA装载能力,同时可模拟天然病毒入侵途径,增强细胞摄取。最后展望了其在个性化肿瘤疫苗和通用型传染病预防中的应用前景,通过整合创新递送系统(如VLP)与智能化设计,mRNA疫苗技术将迈向更精准、安全的下一代平台。 展开更多
关键词 RNA疫苗 环状mRNA(circRNA) 自扩增mRNA(saRNA) 疫苗设计 递送系统 脂质纳米颗粒 病毒样颗粒
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基因治疗药物质量控制的研究进展与趋势
16
作者 张健萍 张洋洋 张孝兵 《中国细胞生物学学报》 2026年第1期146-165,共20页
该综述聚焦基因治疗(gene therapy,GT)从研发到临床的全流程质量控制(quality control,QC)体系构建。其中,围绕腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)和慢病毒(lentiviral vector,LV)两大主流载体,系统梳理了AAV载体在生产中的空壳率... 该综述聚焦基因治疗(gene therapy,GT)从研发到临床的全流程质量控制(quality control,QC)体系构建。其中,围绕腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)和慢病毒(lentiviral vector,LV)两大主流载体,系统梳理了AAV载体在生产中的空壳率、载体基因组完整性、反向末端重复序列(inverted terminal repeat,ITR)异常以及外源DNA杂质等关键质量属性(critical quality attributes,CQAs),以及LV载体在体外基因治疗应用中涉及的整合位点分布、整合体全长结构和克隆动力学等安全性考量。在基因编辑部分,基于第一代CRISPR-Cas9的临床经验,讨论其脱靶效应和大片段缺失的检测方法与缓解策略,并延伸至新一代基因编辑工具—碱基编辑(base editing,BE)和引导编辑(prime editing,PE)的精确性评估与递送策略。在方法学上,提出以第三代测序(长读长测序)为核心支柱,联合液滴数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)、无动物致热源检测[如重组因子C法(recombinant factor C assay,rFC)和单核细胞致热源试验(monocyte activation test,MAT)等]以及功能学与免疫学/组织分布评估,构建“方法–指标–工艺–临床结局”相闭合的证据链。在监管层面,归纳了美国FDA、欧盟EMA和中国CDE对于深度分子表征和长期随访的共识要点。在未来展望中,指出了三大关键趋势:一是靶向脂质纳米颗粒(lipid nanoparticle,LNP)/病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)的体内递送策略,二是基于长读长测序和数据智能的QC常态化,三是连续化制造与过程分析技术(process analytical technology,PAT)的融合。这些进展有望为基因治疗提供更加安全、可审计、可规模化的实践路径。 展开更多
关键词 基因治疗 AAV 慢病毒 CRISPR/BE/PE 长读长测序 质量控制 LNP/vlp
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人GⅡ.14诺如病毒VLP抗原性及组织血型抗原结合特征 被引量：3
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作者 欧阳瑄泽 柴鹏弟 +5 位作者 宋敬东 靳淼 李利利 李金松 孙晓曼 段招军 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期705-715,共11页
本研究旨在制备人GⅡ.14诺如病毒的(Norovirus,NoV)病毒样颗粒(Virus⁃like particle,VLP),探索其抗原性与组织血型抗原结合的特征。利用杆状病毒系统表达人GⅡ.14 NoV VP1蛋白,通过超速离心和分子筛层析纯化VLP;将VLP免疫动物制备兔多... 本研究旨在制备人GⅡ.14诺如病毒的(Norovirus,NoV)病毒样颗粒(Virus⁃like particle,VLP),探索其抗原性与组织血型抗原结合的特征。利用杆状病毒系统表达人GⅡ.14 NoV VP1蛋白,通过超速离心和分子筛层析纯化VLP;将VLP免疫动物制备兔多抗血清,通过免疫印迹(Western blot,WB)、酶联免疫吸附(ELISA)进行抗原性评价及多抗功能验证;利用唾液结合实验检测人GⅡ.14 VLP的糖结合特征;通过蛋白序列及结构比较分析GⅡ.14 P蛋白潜在的糖结合位。纯化获得人GⅡ.14 VP1蛋白,电镜观察显示可以形成结构较为均一的VLP;制备的兔多抗能与GⅡ.14 VLP特异性结合,与检测的其他基因型VLP没有交叉反应;唾液结合实验表明GⅡ.14 VLP与人A/B/O/AB型别唾液都有较好的结合;序列和结构分析显示GⅡ.14 P蛋白模拟结构与GⅡ.9最为接近,具有与GⅡ.9以及流行株GⅡ.4等相似的潜在糖结合区。本研究表明GⅡ.14具有较为广泛的唾液结合特性,通过序列比对和结构学方法分析了GⅡ.14潜在的受体结合机制,为不同型别NoVs的流行监测提供了更多依据。 展开更多
关键词 诺如病毒 病毒样颗粒 组织血型抗原
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基于PAT的PCV2 VLPs生产过程优化与控制研究 被引量：2
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作者 化磊召 易小萍 +2 位作者 储炬 庄英萍 张嗣良 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期50-58,共9页
昆虫细胞-杆状病毒载体表达系统（baculovirus expression vector system,BEVS）是病毒样颗粒亚单位疫苗（virus like particles,VLPs）的理想生产平台。动物细胞培养过程分析技术（process analytical technology,PAT）研究的重点在于... 昆虫细胞-杆状病毒载体表达系统（baculovirus expression vector system,BEVS）是病毒样颗粒亚单位疫苗（virus like particles,VLPs）的理想生产平台。动物细胞培养过程分析技术（process analytical technology,PAT）研究的重点在于更多地获取与细胞生理状态相关的过程参数,以及实现过程敏感参数的在线表征和过程控制关键时间节点的在线判定,从而指导过程优化和控制。通过昆虫Sf9细胞的分批和补料悬浮培养,发现细胞代谢活性与在线特征频率（fc）之间存在相关性。以fc作为细胞代谢活性的在线指征,在细胞代谢活性下降之前补料,使得Sf9细胞在代谢活性明显增强的基础上,最高活细胞密度提高1.75倍。通过分批培养与补料分批培养过程细胞生理特性参数的相关性分析,发现比电容增长速率（με）与培养体系S-期细胞比例之间存在相关性,με作为细胞增殖活性状态的在线指征参数,可以作为最佳接毒时间的判定依据。此外,研究还发现在线检测参数电容（ε）与最高疫苗产量之间存在相关性,可以作为疫苗最佳收获时间的在线表征参数。以在线fc值作为补料时间指征,以在线με值作为病毒感染时间指征,以在线ε值作为病毒收获时间指征,实现了猪圆环病毒2型（PCV2）VLPs的高效生产。相比于批培养,基于PAT的生产工艺疫苗单位体积产量提高76%,生产周期缩短了24h,为PCV2病毒样颗粒亚单位疫苗大规模生产提供了一种新的高效生产模式。 展开更多
关键词 vlpS 昆虫细胞-杆状病毒载体表达系统 PAT
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BVDV-1 VLPs的构建及免疫原性研究 被引量：2
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作者 杨霞 李雅茹 +11 位作者 丛佳南 李一权 李善智 韩继成 房金波 白冰 宋高杰 修智儒 程成 葛晨晨 孙福亮 朱羿龙 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2022年第1期43-48,共6页
目的利用C、E0、E1和E2蛋白构建BVDV病毒样颗粒,并评价BVDV-1 VLPs的免疫原性。方法以BVDV-BA株为模板通过反转录得到C、E0、E1和E2基因,再将C、E0、E1和E2基因分别克隆至PEASY-Blunt Simple克隆载体上。提取质粒摇菌扩大培养,将得到的C... 目的利用C、E0、E1和E2蛋白构建BVDV病毒样颗粒,并评价BVDV-1 VLPs的免疫原性。方法以BVDV-BA株为模板通过反转录得到C、E0、E1和E2基因,再将C、E0、E1和E2基因分别克隆至PEASY-Blunt Simple克隆载体上。提取质粒摇菌扩大培养,将得到的C、E0、E1和E2基因克隆至杆状病毒穿梭载体pFast Bac HTA中,采用热激法将重组穿梭质粒转化至DH10.Bac大肠埃希菌感受态细胞,通过蓝白斑筛选技术获得重组杆粒rB-C、rB-E0、rB-E1和rB-E2。将重组杆粒转染至SF9细胞,获得重组杆状病毒;再用构建的4种重组杆状病毒同时感染SF9悬浮细胞,72 h后收集细胞沉淀进行超声破碎,利用蔗糖垫超速离心和蔗糖密度梯度离心进行纯化,通过Western blot和透射电镜进行鉴定。将获得的BVDV-1 VLPs联合氢氧化铝佐剂免疫BALB/c小鼠,通过ELISA检测免疫小鼠的特异性抗体水平评价VLPs的免疫原性。结果成功克隆出C、E0、E1和E2基因,并构建C、E0、E1和E2蛋白的杆状病毒。通过纯化和鉴定,在20%~30%蔗糖层获得由C、E0、E1和E2蛋白组成结构完整的病毒样颗粒BVDV-1 VLPs。BVDV-1 VLPs能够显著增加免疫小鼠的特异性抗体表达水平。结论构建并获得了由C、E0、E1和E2蛋白组成,并具备良好免疫原性的病毒样颗粒BVDV-1 VLPs。 展开更多
关键词 vlp C、E0、E1和E2蛋白 BVDV-1 vlps 免疫原性
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PCV2-VLP和SVV全病毒灭活的组合物对小鼠的免疫原性研究 被引量：1
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作者 段卫同 王海伟 +5 位作者 孙明霞 王尚辉 王刚 于力 蔡雪辉 涂亚斌 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第10期1080-1084,1107,共6页
为评价猪圆环病毒2型病毒样颗粒(PCV2-VLP)和塞内卡病毒(SVV)全病毒灭活组合物的免疫效果。本研究首先通过透射电镜对PCV2-VLP的完整性进行鉴定,结果显示,PCV2-VLP颗粒完整,大小均一,直径为17 nm~20 nm。表明PCV2-VLP完整性良好,可以用... 为评价猪圆环病毒2型病毒样颗粒(PCV2-VLP)和塞内卡病毒(SVV)全病毒灭活组合物的免疫效果。本研究首先通过透射电镜对PCV2-VLP的完整性进行鉴定,结果显示,PCV2-VLP颗粒完整,大小均一,直径为17 nm~20 nm。表明PCV2-VLP完整性良好,可以用于后续研究。然后将PCV2-VLP与SVV全病毒灭活病毒液等体积混合,制备二联组合物。将二联组合物、PCV2-VLP和SVV全病毒灭活病毒液分别以603和卡波姆作为佐剂两次免疫小鼠,并设立对照组。初免后每周采血,通过ELISA检测PCV2特异性抗体水平及IL-4和IFN-γ的分泌水平,通过中和试验检测小鼠血清针对PCV2和SVV的中和抗体。结果显示,相比卡波姆佐剂,二联组合物、PCV2-VLP和SVV全病毒灭活病毒液配合603佐剂免疫均能够诱导小鼠产生更高的特异性抗体及中和抗体。在相同佐剂下,二联组合物免疫小鼠产生的PCV2抗体与PCV2-VLP组相当,产生的SVV中和抗体则高于SVV单独免疫组(p<0.05)。各免疫组小鼠产生的细胞因子含量相当。表明,603佐剂优于卡波姆佐剂;二联组合物可以刺激小鼠产生针对PCV2和SVV的高水平中和抗体,具有良好的免疫原性。本研究首次将PCV2-VLP与SVV全病毒灭活病毒液进行联合免疫,在小鼠上证明具有良好的免疫原性,具有很大的参考价值,为进一步猪的免疫实验提供参考依据。 展开更多
关键词 PCV2-vlp SVV 佐剂 免疫原性
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