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珍稀濒危植物连香树RAPD反应体系的优化 被引量：4
1
作者 黄绍辉 方炎明 《江苏农业科学》 CSCD 北大核心 2009年第1期42-44,共3页
按照L25(56)的正交试验设计方法,对珍稀濒危植物连香树RAPD反应20μl体系中Mg2+浓度、dNTPs浓度、10×Buffer缓冲液用量、Taq酶用量、模板浓度和引物浓度的不同梯度组合进行了筛选。在此基础上对退火温度、退火时间和循环次数等条... 按照L25(56)的正交试验设计方法,对珍稀濒危植物连香树RAPD反应20μl体系中Mg2+浓度、dNTPs浓度、10×Buffer缓冲液用量、Taq酶用量、模板浓度和引物浓度的不同梯度组合进行了筛选。在此基础上对退火温度、退火时间和循环次数等条件进行了优化。最后得到优化的20μl连香树RAPD反应体系为:25 mmol/L Mg2+2μl,dNTPs 0.4μl,1 U的TaqDNA酶1μl,10×Buffer缓冲液2.5μl,0.5 OD引物0.8μl,约25 ng模板0.6μl。优化的退火温度为37℃,退火时间为15 s,循环次数为40次。 展开更多
关键词 连香树 RAPD 正交试验 体系优化
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建立一个基于报告基因的靶标筛药系统筛选上调ABCA1基因转录的中药提取物
2
作者 胡蔚蓉 连霁虹 +2 位作者 纪伟 郭雷 龚邦强 《华东理工大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期784-787,882,共5页
ATP结合盒转运蛋白A1(ABCA1)具有催化外周细胞过量胆固醇和磷脂外向流出的功能。本实验将ABCA1启动子序列克隆到含有荧光素酶报告基因和新霉素抗性基因的pGL3B-neo载体中,并将得到的重组质粒pGL3B-neo/ABCA1转染入人肝癌细胞(hepG2)。... ATP结合盒转运蛋白A1(ABCA1)具有催化外周细胞过量胆固醇和磷脂外向流出的功能。本实验将ABCA1启动子序列克隆到含有荧光素酶报告基因和新霉素抗性基因的pGL3B-neo载体中,并将得到的重组质粒pGL3B-neo/ABCA1转染入人肝癌细胞(hepG2)。通过稀释培养法最终得到含有重组质粒的稳定细胞系SABCA1。利用这个报告基因为基础的药物筛选系统,筛选了100多种中药提取物。通过荧光素酶活性测试,相对活性达到180%以上的有4种中药提取物,并最终挑选能明显激活ABCA1基因启动子的鬼箭羽水提组分进一步研究,得出半数有效浓度(EC50)为48.06 mg/L。此外,利用基于apoA1基因的药物筛选系统验证得出鬼箭羽水提组分也能促进apoA1基因的表达。 展开更多
关键词 TP结合盒转运子Al 动脉粥样硬化 高密度脂蛋白 胆固醇逆向转运
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不同因素对大肠杆菌转化效率的影响
3
作者 谢恩诚 曹璐 蒋慧慧 《广东化工》 CAS 2019年第7期52-53,57,共3页
在质粒转化过程中存在很多对转化效率有影响的因素。本研究以转化操作中最常用的两种大肠杆菌菌株—BL21和DH5a为研究对象,对冰孵时间、热激时间、保存温度及保藏时间进行了深入研究,总结出获得最佳转化效率的条件。对于E. coli BL21,冰... 在质粒转化过程中存在很多对转化效率有影响的因素。本研究以转化操作中最常用的两种大肠杆菌菌株—BL21和DH5a为研究对象,对冰孵时间、热激时间、保存温度及保藏时间进行了深入研究,总结出获得最佳转化效率的条件。对于E. coli BL21,冰孵60 min、热激90s可以达到最大转化效率,并且在-20℃中保藏可以极大的增加转化效率。对于E. coli DH5a,冰孵30 min,热激120 s可以达到最大转化效率,在-4℃中保存1天就会下降一半,而在-20℃中保存则可以维持其转化效率。 展开更多
关键词 转化效率 冰孵时间 热激时间 保存温度 保存时间
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