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对虾肝肠胞虫LAMP-LFD检测方法的建立及应用
1
作者 李文泽 侯晓勇 +3 位作者 杨世平 黄郁葱 简纪常 蔡双虎 《广东海洋大学学报》 北大核心 2025年第2期52-58,共7页
【目的】采用环介导等温扩增(LAMP)技术联合横向流动试纸条(LFD)快速检测对虾肝肠胞虫(Enterocytozoon hepatopenaei,EHP),为对虾养殖场早期疫病监测提供技术支持。【方法】针对对虾肝肠胞虫18S rDNA保守基因序列设计4条特异性引物(上... 【目的】采用环介导等温扩增(LAMP)技术联合横向流动试纸条(LFD)快速检测对虾肝肠胞虫(Enterocytozoon hepatopenaei,EHP),为对虾养殖场早期疫病监测提供技术支持。【方法】针对对虾肝肠胞虫18S rDNA保守基因序列设计4条特异性引物(上游内引物FIP由生物素标记)和1条异硫氰酸荧光素(FITC)标记的探针,使用引物进行有生物素标记的LAMP反应,产物与FITC标记的探针完成杂交,杂交产物在LFD上进行结果展示。并测试该方法的特异性、灵敏度和临床应用效果。【结果】LAMP最佳反应条件是62℃下运行15 min,加入探针杂交5 min后在LFD试纸条上进行显色反应,能特异直观检测到对虾肝肠胞虫。建立的LAMP-FLD法特异性强且灵敏度高,较普通聚合酶链式反应方法灵敏度高100倍。采用本研究建立的LAMP-LFD方法,对肝肠胞虫、对虾白斑综合征病毒(White spot syndrome virus)、十足目虹彩病毒1(Decapod iridescent virus 1)和副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)人工感染的凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)肝胰腺组织和疑似感染对虾肝肠胞虫的凡纳滨对虾自然样本进行检测,结果显示该LAMP-LFD方法能100%准确检测出肝肠胞虫阳性样本。【结论】本研究建立的LAMP-LFD方法对对虾肝肠胞虫进行可视化检测,特异强、灵敏度高、操作简单、仪器设备要求及检测成本低和耗时短,适用于基层养殖场对虾肝肠胞虫感染早期的即时检测,具有较高推广价值。 展开更多
关键词 对虾肝肠胞虫 环介导等温扩增技术 横向流动试纸条 凡纳滨对虾
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赤潮异弯藻对中国对虾感染白斑综合症病毒的影响 被引量：13
2
作者 李才文 管越强 +2 位作者 于仁诚 张波 俞志明 《海洋学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期132-137,共6页
1 引言 白斑综合症病毒(white spot syndrome virus,WSSV)是近年来危害我国乃至世界对虾养殖业的主要流行病原[1-4].WSSV病毒暴发流行范围广、致病性强,自出现以来给对虾养殖业造成了巨大的损失.对虾病毒病的发生是对虾自身的健康状况... 1 引言 白斑综合症病毒(white spot syndrome virus,WSSV)是近年来危害我国乃至世界对虾养殖业的主要流行病原[1-4].WSSV病毒暴发流行范围广、致病性强,自出现以来给对虾养殖业造成了巨大的损失.对虾病毒病的发生是对虾自身的健康状况、病原生物。 展开更多
关键词 中国对虾 白斑综合症病毒 赤潮异弯藻 温度 PH值 盐度 溶解氧 死亡率
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感染白斑综合症病毒(WSSV)对虾相关免疫因子的研究 被引量：66
3
作者 雷质文 黄倢 +1 位作者 杨冰 俞开康 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期46-51,共6页
12 9尾中国对虾 (Penaeuschinensis)分别捕自未暴发白斑综合症 (WSSV病毒所致 )虾池、WSSV暴发虾池以及曾暴发WSSV虾池。用斑点杂交和组织病理学方法确定各尾对虾的染毒 (WSSV)程度。用 96孔酶标板法测量相应个体血淋巴上清液的抗菌活力... 12 9尾中国对虾 (Penaeuschinensis)分别捕自未暴发白斑综合症 (WSSV病毒所致 )虾池、WSSV暴发虾池以及曾暴发WSSV虾池。用斑点杂交和组织病理学方法确定各尾对虾的染毒 (WSSV)程度。用 96孔酶标板法测量相应个体血淋巴上清液的抗菌活力 (Ua)、溶菌活力 (UL)、酚氧化酶 (PO)活性以及过氧化酶 (POD)相对活性 ;用硝酸纤维膜斑点法测定其碱性磷酸酶 (ALP)相对活性 ;用血凝法测定其凝集效价(HAT)。通过对以上免疫指标进行统计分析 ,结果表明 ,WSSV感染与对虾血淋巴PO活性以及ALP相对活性变化有紧密联系 ;不同虾池各免疫因子差异显著 ,发病虾池虾样各免疫指标平均值均低于其他虾池 ;曾发病虾池的虾样PO活性较强 ;WSSV与HPV感染无统计学意义上的相关性 ;未发病虾池与曾发病虾池实验对虾的Ua与UL 相关性极显著 ,发病虾池实验对虾Ua与UL 呈负相关 ;发病虾池对虾PO与ALP活性相关性显著。 展开更多
关键词 中国对虾 白斑综合症病毒 对虾血淋巴 免疫因子
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Ca^(2+)与Mg^(2+)浓度对凡纳滨对虾糠虾幼体育成仔虾成活率和生长的影响 被引量：13
4
作者 谢达祥 陈晓汉 +2 位作者 黄均 黄进 陈健丽 《西南农业学报》 CSCD 2007年第4期787-794,共8页
采用浓缩海水与自来水调配的基础海水,以凡纳滨对虾Ⅲ期糠虾幼体(M3)作为试验对象,在小范围(0~100 mg/L)内调节育苗用水中Ca2+、Mg2+浓度,以L9(34)正交表设计,研究育苗用水中不同Ca2+、Mg2+浓度对凡纳滨对虾M3育成仔虾(P10)的成活率和... 采用浓缩海水与自来水调配的基础海水,以凡纳滨对虾Ⅲ期糠虾幼体(M3)作为试验对象,在小范围(0~100 mg/L)内调节育苗用水中Ca2+、Mg2+浓度,以L9(34)正交表设计,研究育苗用水中不同Ca2+、Mg2+浓度对凡纳滨对虾M3育成仔虾(P10)的成活率和生长的影响。结果表明,在相同饲养条件下,Ca2+浓度为494 mg/L时,增重效果显著(P<0.05);Mg2+浓度为1185 mg/L的增重效果显著优于1135 mg/L水平;Ca2+浓度为444 mg/L和494 mg/L时,对提高M3育成P1和P10的成活效果均具有显著作用(P<0.01);Mg2+浓度为1185 mg/L、Ca2+浓度为494 mg/L(镁钙比值R=2.40)的交互作用对提高M3育成P10的成活效果最佳(P<0.01);Ca2+浓度分别为444、494 mg/L时,其R值可适范围分别为2.67~2.78和2.30~2.50。同时育苗水体中Ca2+与Mg2+浓度及Mg2+/Ca2+均应达到合适的值,方能满足凡纳滨对虾幼体生长发育的需要。在试验浓度梯度范围内,Ca2+是影响凡纳滨对虾增重和成活的主要因子,但对增长无显著影响(P>0.05),其可适范围为444~494 mg/L;Mg2+对凡纳滨对虾生长的影响均不显著;Ca2+与Mg2+浓度的交互作用显著影响M3育成P10的成活率。 展开更多
关键词 凡纳滨对虾 糠虾 仔虾 镁离子 钙离子 镁钙比值(R) 成活率 生长
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白斑综合症病毒(WSSV)囊膜蛋白VP28基因的克隆及在蓝藻中表达载体的构建 被引量：14
5
作者 张春莉 施定基 +2 位作者 黄倢 张海霞 彭国宏 《海洋科学》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期72-76,共5页
用蔗糖密度梯度离心法分离纯化白斑综合症病毒(WSSV)。设计并合成引物 ,提取WSSV中国株的基因组DNA作为模板 ,通过PCR ,扩增克隆出VP28基因 ,利用BamHI和EcoRI切点将VP28基因插入克隆载体 pUC19的多克隆位点上 ,得到VP28基因的重组克隆... 用蔗糖密度梯度离心法分离纯化白斑综合症病毒(WSSV)。设计并合成引物 ,提取WSSV中国株的基因组DNA作为模板 ,通过PCR ,扩增克隆出VP28基因 ,利用BamHI和EcoRI切点将VP28基因插入克隆载体 pUC19的多克隆位点上 ,得到VP28基因的重组克隆质粒,对其进行双向DNA测序。测序结果表明,该基因含有615个核苷酸 ,与GenBank中已有不同来源的WSSV的序列片段同源性为100 %。利用BamHI切点将VP28的基因插入到穿梭表达载体启动子PpsbA的下游 ,EcoRI酶切鉴定 ,得到正向连接的可在蓝藻表达的重组穿梭表达载体 ,命名为 pRL VP28。 展开更多
关键词 白斑综合症病毒 囊膜蛋白VP28 蓝藻 表达载体 构建 对虾 基因克隆
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用DNA斑点杂交法检测对虾及其饵料和环境生物携带白斑综合症病毒状况的调查 被引量：14
6
作者 宋晓玲 史成银 +1 位作者 黄倢 张立敬 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期36-40,共5页
于 1996～ 1998年采用DNA斑点杂交法 ,完成了共计 836份养殖对虾 ,2 13份对虾饵料和环境生物样品的检测。结果显示 ,对虾在每年的 4～ 10月都可检测出白斑综合症病毒 (WSSV) ,6月出现最高峰 ,阳性检出率达到 4 2 .6 % ;其次 ,为 7月和 5... 于 1996～ 1998年采用DNA斑点杂交法 ,完成了共计 836份养殖对虾 ,2 13份对虾饵料和环境生物样品的检测。结果显示 ,对虾在每年的 4～ 10月都可检测出白斑综合症病毒 (WSSV) ,6月出现最高峰 ,阳性检出率达到 4 2 .6 % ;其次 ,为 7月和 5月 ,分别达 31.6 %和 2 4 .5 %。在对虾不同生长阶段 (包括亲虾、各期幼体、仔虾、幼虾及成虾 )均可检出WSSV ,其中以仔虾的带毒率最高 ,达 36 .4 % ,其次为糠虾幼体 ,达 34.6 %。体长范围 1.1～ 2 .0cm的仔虾阳性率最高 ,其次体长为 5 .1～ 6 .0cm的幼虾样品。检测的中国对虾样品(6 2 5份 )带毒率为 16 .8% ,日本对虾样品 (2 11份 )带毒率为 4 5 .0 %。对虾主要饵料及环境生物类群包括鱼类、虾类、蟹类、桡足类、端足类、沙蚕、卤虫均可检出WSSV ,其中小型虾类、端足类、桡足类、蟹类样品的WSSV检出率均高于 2 0 %。 展开更多
关键词 中国对虾 日本对虾 铒料 环境生物 白斑综合症病毒 DNA斑点杂交
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WSSV和IHHNV二重实时荧光PCR检测方法的建立 被引量：16
7
作者 谢芝勋 谢丽基 +6 位作者 庞耀珊 卢兆发 谢志勤 孙建华 邓显文 刘加波 唐小飞 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期22-27,共6页
根据基因库中对虾白斑综合症病毒W SSV(AF369029)和传染性皮下及造血器官坏死病毒IHHNV(AF218226)基因序列,设计了W SSV和IHHNV的两对特异性引物和两条用不同荧光基团标记的TaqM an探针。对反应条件和试剂浓度进行优化,建立了能够同时检... 根据基因库中对虾白斑综合症病毒W SSV(AF369029)和传染性皮下及造血器官坏死病毒IHHNV(AF218226)基因序列,设计了W SSV和IHHNV的两对特异性引物和两条用不同荧光基团标记的TaqM an探针。对反应条件和试剂浓度进行优化,建立了能够同时检测W SSV和IHHNV的二重实时荧光PCR方法。该方法特异性好,对W SSV和IHHNV的检测敏感性分别达到2和20个模板拷贝数;此外抗干扰能力强,对W SSV和IHHNV不同模板浓度进行组合,仍可有效地同时检测这二个病毒。对保存的30份经常规PCR检测仅为W SSV或IHHNV阳性的样品进行二重实时荧光PCR检测,结果都为阳性,其中1份为W SSV和IHHNV混合感染。本研究建立的二重实时荧光PCR方法用于W SSV和IHHNV的检测具有特异、敏感、快速、定量等优点。 展开更多
关键词 白斑综合征病毒 对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒 多重实时荧光PCR
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β-葡聚糖在中国对虾（Penaeus chinensis）育苗中的应用 被引量：8
8
作者 王新霞 谭北平 +5 位作者 麦康森 徐玮 张文兵 马洪明 刘付志国 艾庆辉 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2004年第4期71-75,共5页
分别用5种不同浓度(O，O．1，O．3，O．5，1mg/ml)的β-葡聚糖溶液对中国对虾蚤状、糠虾幼体进行3h浸浴，48h后用浓度为5．9×10^6cfu／ml的副溶血弧菌(Vibrio para-haemolyticus)进行攻毒。攻毒后再养殖48h。结果显示，0．1、0．3... 分别用5种不同浓度(O，O．1，O．3，O．5，1mg/ml)的β-葡聚糖溶液对中国对虾蚤状、糠虾幼体进行3h浸浴，48h后用浓度为5．9×10^6cfu／ml的副溶血弧菌(Vibrio para-haemolyticus)进行攻毒。攻毒后再养殖48h。结果显示，0．1、0．3和0．5mg/ml处理组均显著提高(P<0．05)蚤状和糠虾幼体攻毒后的存活率，其中，0．3和0．5mg/ml的处理组还显著提高(P<0．05)蚤状幼体的变态率和生长，但对糠虾幼体生长的影响不显著(P>0．05)。本研究结果表明，p一葡聚糖可以作为免疫增强剂在中国对虾育苗阶段使用，建议浸浴使用的浓度为0．3～0．5mg/ml。 展开更多
关键词 Β-葡聚糖 中国对虾 育苗 糠虾幼体 变态率 生长 蚤状幼体 水产动物养殖
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中国明对虾2个群体的杂交子一代早期分析 被引量：9
9
作者 田燚 孔杰 +2 位作者 杨翠华 张天时 罗坤 《海洋学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期157-161,共5页
关键词 中国明对虾 种群 生长发育 杂种优势
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中国对虾血淋巴抗凝剂的筛选 被引量：27
10
作者 蒋琼 王雷 罗日祥 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期359-362,T001,共5页
依据中国对虾血细胞电镜照片中血细胞整体形态和细胞器、细胞核的变化 ,研究对虾抗凝剂成分配比。初步确认了一种理想的抗凝剂配方NaCl45 0mM、KCl10mM、EDTA .Na2 10mM、HEPES 10mM (pH 7.45 )。它能够良好的保持细胞的整体形态以及细... 依据中国对虾血细胞电镜照片中血细胞整体形态和细胞器、细胞核的变化 ,研究对虾抗凝剂成分配比。初步确认了一种理想的抗凝剂配方NaCl45 0mM、KCl10mM、EDTA .Na2 10mM、HEPES 10mM (pH 7.45 )。它能够良好的保持细胞的整体形态以及细胞器、细胞核的形态。 展开更多
关键词 中国对虾 血细胞 抗凝剂 筛选
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海水养殖与低盐养殖凡纳滨对虾生长性能、酶活及RNA／DNA比值的差异 被引量：26
11
作者 梁萌青 王士稳 +1 位作者 王家林 常青 《海洋水产研究》 CSCD 北大核心 2008年第4期69-73,共5页
以初始体重为4.04±0.14 g的凡纳滨对虾为研究对象,分别在盐度1.5和30的水体中用同一种配合饲料喂养50d,探讨海水养殖和低盐养殖对凡纳滨对虾生长性能、碱性磷酸酶及酸性磷酸酶和RNA/DNA比值的影响。结果显示,海水养殖凡纳滨对虾的... 以初始体重为4.04±0.14 g的凡纳滨对虾为研究对象,分别在盐度1.5和30的水体中用同一种配合饲料喂养50d,探讨海水养殖和低盐养殖对凡纳滨对虾生长性能、碱性磷酸酶及酸性磷酸酶和RNA/DNA比值的影响。结果显示,海水养殖凡纳滨对虾的成活率、特殊增长率(SGR)高于低盐养殖对虾(P<0.05);海水养殖凡纳滨对虾的饲料系数(FCR)明显低于低盐养殖对虾(P<0.05);海水养殖凡纳滨对虾肝胰脏碱性磷酸酶和酸性磷酸酶活性均明显高于低盐养殖对虾(P<0.05);海水养殖凡纳滨对虾肌肉RNA/DNA比值明显高于低盐养殖凡纳滨对虾(P<0.05)。 展开更多
关键词 凡纳滨对虾 生长 盐度 RNA/DNA
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中国对虾(Fenneropenaeus Chinensis)自然感染与人工感染WSSV抗病力的比较 被引量：7
12
作者 张天时 李素红 +3 位作者 孔杰 王清印 孟宪红 罗坤 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期763-768,共6页
取30个通过人工授精和自然交尾建立的中国对虾家系,分别进行人工感染和自然感染实验。实验过程中,两实验组样本总体存活率在35%左右时统计各家系的存活率,以分析其抗白斑综合征病毒情况。用四格表的卡方检验分析中国对虾各家系存活率,... 取30个通过人工授精和自然交尾建立的中国对虾家系,分别进行人工感染和自然感染实验。实验过程中,两实验组样本总体存活率在35%左右时统计各家系的存活率,以分析其抗白斑综合征病毒情况。用四格表的卡方检验分析中国对虾各家系存活率,结果发现23个家系的存活率在两种感染方式实验间差异不显著(P>0.05),两种感染方式实验间家系存活率一致性为77%。用独立样本T检验对两种感染方式实验中4个杂交组合的存活率进行比较,结果发现4个杂交组合的存活率在两种感染方式实验间差异不显著(P>0.05),说明人工感染和自然感染实验对中国对虾抗病力的反映情况基本是一致的。另外,对两个实验中各家系的抗病力进行分析,综合结果表明有5个家系对WSSV可能有较强的抗病力。 展开更多
关键词 人工感染 自然感染 存活率 抗白斑综合征病毒
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马尾藻多糖对南美白对虾免疫调节作用 被引量：14
13
作者 何颖 陈忠伟 +7 位作者 高建峰 胡庭俊 刘伟 赵武 胡帅 关忠谊 李斌 梁家幸 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第31期13664-13665,13680,共3页
[目的]研究马尾藻多糖对南美白对虾免疫功能的影响。[方法]用含不同比例(0、0.10%、0.15%和0.20%)马尾藻多糖的虾饲料喂养对虾14 d,测定虾血淋巴液中溶菌酶、超氧化物歧化酶、酚氧化物酶和酸性磷酸酶的活性,计算攻毒感染后不同处理对虾... [目的]研究马尾藻多糖对南美白对虾免疫功能的影响。[方法]用含不同比例(0、0.10%、0.15%和0.20%)马尾藻多糖的虾饲料喂养对虾14 d,测定虾血淋巴液中溶菌酶、超氧化物歧化酶、酚氧化物酶和酸性磷酸酶的活性,计算攻毒感染后不同处理对虾存活率。[结果]含马尾藻多糖0.20%的虾饲料能极显著提高溶菌酶和酚氧化物酶活性,显著提高超氧化物歧化酶、酸性磷酸酶活性和攻毒虾存活率,溶菌酶和酚氧化物酶含量分别达到(0.209±0.076)(、258.800±203.080)U/ml;含马尾藻多糖0.15%的虾饲料能极显著提高酚氧化物酶和超氧化物歧化酶活性,显著提高溶菌酶活性和攻毒虾存活率,酚氧化物酶和超氧化物歧化酶含量分别达到(321.267±218.406)和(0.453±0.190)U/ml。[结论]马尾藻多糖能显著增强南美白对虾的免疫功能,其加入量为0.20%时效果最好。 展开更多
关键词 马尾藻多糖 酶活性 存活率 免疫调节
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同时检测两种对虾病毒和4种弧菌的同步PCR方法的建立 被引量：16
14
作者 许拉 黄健 +1 位作者 戈蕾 杨冰 《海洋水产研究》 CSCD 北大核心 2008年第4期39-45,共7页
通过检索、多重比对、分析和筛选GenBank中对虾白斑综合征病毒(WSSV)、传染性皮下和造血器官坏死病毒(IHHNV)、副溶血弧菌、创伤弧菌、哈维氏弧菌和溶藻胶弧菌的基因序列,设计了10对特异性引物,以已知毒株和菌株的DNA为模板进行PCR,均... 通过检索、多重比对、分析和筛选GenBank中对虾白斑综合征病毒(WSSV)、传染性皮下和造血器官坏死病毒(IHHNV)、副溶血弧菌、创伤弧菌、哈维氏弧菌和溶藻胶弧菌的基因序列,设计了10对特异性引物,以已知毒株和菌株的DNA为模板进行PCR,均能扩增出与实验设计相符合的DNA片段,对PCR扩增条件进行优化,建立了可同时检测鉴别WSSV、IHHNV、副溶血弧菌、创伤弧菌、哈维氏弧菌和溶藻胶弧菌,并且能同时区分WSSV不同地理毒株的同步PCR方法。研究结果表明,该方法检测特异性好,检测通量大,适合于对虾多种病原的同时检测。 展开更多
关键词 对虾 PCR 检测 病毒 弧菌
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噬菌蛭弧菌和粘红酵母对中国对虾生长及非特异免疫因子的影响 被引量：20
15
作者 徐琴 李健 +1 位作者 刘淇 王群 《海洋水产研究》 CSCD 北大核心 2007年第5期42-47,共6页
将噬菌蛭弧菌(Bd)、粘红酵母(Rh)及二者混合物分别以1%的比例添加到中国对虾基础饲料里,同时以基础饲料为对照。采用连续投喂的方法,饲喂1.5cm左右的稚虾25d,分别测定第5、10、15、20和25天的酚氧化酶、超氧化物歧化酶、溶菌活力等免疫... 将噬菌蛭弧菌(Bd)、粘红酵母(Rh)及二者混合物分别以1%的比例添加到中国对虾基础饲料里,同时以基础饲料为对照。采用连续投喂的方法,饲喂1.5cm左右的稚虾25d,分别测定第5、10、15、20和25天的酚氧化酶、超氧化物歧化酶、溶菌活力等免疫因子活性。试验结束后,试验组中Rh组存活率达到63%,Bd组和Bd+Rh组分别为45%和40%,二者间无显著差异(P>0.05)。投喂Rh组的增长率、增重率至少高于其他组10.72%和105.05%,比对照组高出36.37%和320.22%。试验组酚氧化酶活力、超氧化物歧化酶活力、溶菌活力从第10天起均高于对照组两倍左右。试验结果表明,饲养实验结束7d后,用鳗弧菌攻毒,在8d内,对照组的死亡率显著高于试验组(P<0.05),试验组免疫保护率为50%～65%,以Rh组最为显著。试验结果表明,微生态制剂能有效促进对虾的生长及提高免疫因子的活性;从免疫水平和生长水平综合考虑,建议单独使用粘红酵母,添加量为1%左右为宜。 展开更多
关键词 中国对虾 噬菌蛭弧菌 粘红酵母 非特异免疫因子
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对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)PCR检测方法的建立 被引量：17
16
作者 杨冰 宋晓玲 +4 位作者 黄倢 史成银 刘莉 刘庆慧 宋微波 《海洋水产研究》 CSCD 北大核心 2005年第2期1-5,共5页
对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)病是国际兽疫局(OIE)划定的甲壳类其他重要疾病之一,它分布较广,危害严重,对世界对虾养殖业发展影响重大。本文根据Genbank登录的IHHNV基因序列(AF218266),设计了1对特异性引物,从纯化的IHHNV ... 对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)病是国际兽疫局(OIE)划定的甲壳类其他重要疾病之一,它分布较广,危害严重,对世界对虾养殖业发展影响重大。本文根据Genbank登录的IHHNV基因序列(AF218266),设计了1对特异性引物,从纯化的IHHNV DNA和感染IHHNV凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)组织DNA中成功地扩增出产物大小为703bp的DNA片段,该对引物对IHHNV DNA的检测灵敏度为19. 85fg(8. 83×103 病毒拷贝),与健康对虾组织DNA、对虾白斑综合征病毒(WSSV) DNA及对虾肝胰腺细小病毒(HPV) DNA无交叉反应。本方法可快速、灵敏、特异地检测出对虾感染和携带IHHNV状况,为对虾健康养殖、无特定病原(SPF)种群选育及流行病调查提供了有效的检测手段。 展开更多
关键词 传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV) 聚合酶链式反应(PCR) 检测
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基于Histone H3、EF-1α和β-tubulin基因部分序列的芒果畸形病菌鉴定与系统发育研究 被引量：4
17
作者 张贺 韦运谢 +4 位作者 刘晓妹 谢艺贤 喻群芳 梅志栋 蒲金基 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期710-715,共6页
芒果畸形病是芒果生产中重要的病害之一,主要表现为花畸形和芽畸形,受害果园常因畸形花絮无法挂果而造成减产,我国攀西地区的部分果园株发病率高达100%,给当地的芒果产业带来严重经济损失。该病自1891年首次在印度发现后,陆续在世界芒... 芒果畸形病是芒果生产中重要的病害之一,主要表现为花畸形和芽畸形,受害果园常因畸形花絮无法挂果而造成减产,我国攀西地区的部分果园株发病率高达100%,给当地的芒果产业带来严重经济损失。该病自1891年首次在印度发现后,陆续在世界芒果产区发生危害。 展开更多
关键词 畸形病 HISTONE H3 TUBULIN EF-1 系统发育研究 病原菌鉴定 基因片段 菌株鉴定 发病区域 系统发育树
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对虾白斑综合征病毒LAMP检测方法的建立 被引量：6
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作者 冯华 张改平 +4 位作者 郭军庆 王爱萍 赵丽娜 杜晓明 王林林 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期707-711,共5页
根据对虾白斑综合征病毒(WSSV)囊膜蛋白VP28的基因序列设计合成4条特异性引物,以pMDT-VP28重组质粒为标准模板,通过优化反应体系和反应条件,建立了WSSV的环介导等温扩增(LAMP)检测方法,测定LAMP对WSSV-DNA的最低检测限,并与巢式PCR进行... 根据对虾白斑综合征病毒(WSSV)囊膜蛋白VP28的基因序列设计合成4条特异性引物,以pMDT-VP28重组质粒为标准模板,通过优化反应体系和反应条件,建立了WSSV的环介导等温扩增(LAMP)检测方法,测定LAMP对WSSV-DNA的最低检测限,并与巢式PCR进行了比较。结果显示,该LAMP方法的最佳反应温度为65℃,反应时间为60min;LAMP对WSSV的最低检测限为10copies/μL,而巢式PCR为100copies/μL,表明该LAMP方法的敏感性显著高于巢式PCR检测方法。因此,WSSV的LAMP检测方法比PCR更为简便、快速、灵敏,且无需昂贵的变温仪器,更适应水产养殖的现地检测,本研究为WSSV早期感染的快速检测提供了新方法。 展开更多
关键词 对虾白斑综合征病毒 环介导等温扩增 巢式聚合酶链反应 VP28基因
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不同低温持续胁迫对凡纳滨对虾存活的影响 被引量：5
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作者 程光平 桑明远 +5 位作者 黄国强 李文红 姬永杰 童万平 陈承锋 许明珠 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期333-337,共5页
【目的】了解凡纳滨对虾对低温持续胁迫的耐受力,为评估低温对凡纳滨对虾养殖业可能造成的风险及有效应对寒灾提供科学依据。【方法】设7、8、9、10和11℃5个低温持续胁迫试验组和一个空白对照组(室内自然水温20℃),通过观察凡纳滨对虾... 【目的】了解凡纳滨对虾对低温持续胁迫的耐受力,为评估低温对凡纳滨对虾养殖业可能造成的风险及有效应对寒灾提供科学依据。【方法】设7、8、9、10和11℃5个低温持续胁迫试验组和一个空白对照组(室内自然水温20℃),通过观察凡纳滨对虾对不同低温胁迫的行为反应并分别记录死亡历时,应用统计学方法拟合死亡率与死亡历时的关系模型。【结果】试验期间对照组凡纳滨对虾未出现死亡,存活率为100%。凡纳滨对虾在低温持续胁迫下,首尾死亡及100%死亡历时均随胁迫温度的升高而延长,7和11℃低温胁迫时,首尾死亡及100%死亡历时分别为2.6和13.3h、27.0和158.4h。凡纳滨对虾对低温反应敏感,7～11℃的持续胁迫均能导致其死亡,但死亡历时时域不一,7和11℃持续胁迫下,其死亡历时时域分别为24.4和145.1h,即死亡历时随胁迫温度的降低而缩短。5个低温持续期内凡纳滨对虾的死亡率与死亡历时回归方程R2的置信度均高于0.9500,在7、9、11℃持续胁迫下,凡纳滨对虾死亡率与死亡历时的关系均符合幂函数方程,其幂函数指数分别为1.2751、1.0508和1.1173;而8和10℃持续胁迫下,死亡率与死亡历时的关系曲线更符合多项式。【结论】凡纳滨对虾不耐低温,低温胁迫致死过程有一定持续期,但死亡速度随胁迫温度的降低而加快,因此养殖过程遇低温季节应加强应急管理,最大限度规避寒害风险:胁迫温度较低(7℃)时,须在短时间内完成应急管理,最长应急处理时间为1d;胁迫温度较高(11℃)时,可适当延长应急管理,但最长应急处理时间不宜超过6d。 展开更多
关键词 凡纳滨对虾 低温胁迫 死亡历时 耐受力 回归方程
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碱度调节对南美白对虾室内高密度养殖水质及生长性状的影响 被引量：4
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作者 王大鹏 谢达祥 +2 位作者 张彬 赵永贞 陈晓汉 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期511-515,共5页
【目的】研究碱度调节对南美白对虾养殖水质和生长性状的影响，为零换水有氧异氧养殖系统（ZEAH）适宜碱度的选择提供参考。【方法】采用ZEAH养殖理念，通过泼洒碳酸氢钠（NaHCO3）将12个南美白对虾室内高密度养殖池的碱度分别控制在：T... 【目的】研究碱度调节对南美白对虾养殖水质和生长性状的影响，为零换水有氧异氧养殖系统（ZEAH）适宜碱度的选择提供参考。【方法】采用ZEAH养殖理念，通过泼洒碳酸氢钠（NaHCO3）将12个南美白对虾室内高密度养殖池的碱度分别控制在：T1碱度130mg／LCaCO3；T2碱度100mg／LCaCO3；T3碱度70mg／LCaCO3；T4不调节碱度，每处理设3个重复。在63d的养殖周期内，定期测量养殖水体理化参数和对虾生长性状参数。【结果】T1和T2处理的养殖水体主要理化参数显著优于T3和T4处理（P〈0．05），但T1和T2处理间差异不显著（P〉0.05）；各处理的氨氮、亚硝酸盐、硝酸盐、磷酸盐、悬浮物和溶解CO：均随养殖时间的增加不断上升，但高碱度处理上升速率较慢。除成活率和饵料转化率外，T1和T2处理的对虾生长性状参数也显著优于T3和T4处理（P〈0．05）。从维持碱度水平来看，也是以T1（碱度调节间隔时间6～9d）和T2（碱度调节间隔时间9～12d）处理的效果较优。【结论】在高密度养殖系统中，使用碱性化合物增加碱度及提高水体缓冲能力是十分有必要的。综合考虑养殖成本和生态效益，以养殖水体碱度维持在100mg／LCaCO3为宜。 展开更多
关键词 南美白对虾 碱度调节 水质 生长性状 零换水有氧异氧养殖系统(ZEAH) 碳酸氢钠(NaHCO3)
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