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富硒粪肠球菌对大口黑鲈生长性能、肠道菌群稳态与抗病能力的影响
1
作者 张韵 余鹏辉 +3 位作者 苏磊 苏建国 高宇 袁改玲 《水产学报》 北大核心 2026年第2期170-183,共14页
【目的】探究富硒粪肠球菌对养殖大口黑鲈生长性能、抗氧化能力及抗病力的影响。【方法】实验从健康大口黑鲈肠道中分离获得1株粪肠球菌(MSEF22),并利用含亚硒酸钠培养基培养富硒粪肠球菌(EFSe)。实验设置基础日粮对照组、EF组(基础日... 【目的】探究富硒粪肠球菌对养殖大口黑鲈生长性能、抗氧化能力及抗病力的影响。【方法】实验从健康大口黑鲈肠道中分离获得1株粪肠球菌(MSEF22),并利用含亚硒酸钠培养基培养富硒粪肠球菌(EFSe)。实验设置基础日粮对照组、EF组(基础日粮添加1×107 CFU/g粪肠球菌MSEF22)和EFSe组(基础日粮添加1×10^(7) CFU/g富硒粪肠球菌EFSe,硒含量0.76 mg Se/kg),通过42 d的养殖实验,评估其对大口黑鲈生长性能、肝脏抗氧化能力和肠道菌群结构的影响;通过14 d人工感染鰤诺卡氏菌实验评估富硒粪肠球菌对大口黑鲈的保护效应。【结果】EFSe可显著提高大口黑鲈增长率(WGR)、肝脏超氧化物歧化酶(SOD)活性和谷胱甘肽(GSH)含量,显著降低血清天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平。与EF组相比,EFSe组在维持肠道微生物多样性和提高有益菌相对丰度方面表现更优。攻毒实验结果显示,EFSe组存活率(52.22%)高于EF组(50.00%)和对照组(43.33%),EFSe组肝脏结节症状有所改善,促炎因子IL-1β和TNF-α的mRNA表达水平分别较对照组降低76%和23%。【结论】富硒粪肠球菌作为功能性饲料添加剂,能有效提升大口黑鲈生长性能、抗氧化能力和抗病能力,对构建绿色健康、可持续发展的水产养殖模式具有积极意义。 展开更多
关键词 大口黑鲈 粪肠球菌 富硒 肉芽肿 鰤诺卡氏菌
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罗非鱼源无乳链球菌缺失株ΔcrRNA与ΔcpsE的毒力与免疫效力
2
作者 聂蒙 董雨豪 +3 位作者 孙亚茹 徐婷 林世钰 刘永杰 《水产学报》 北大核心 2026年第3期197-206,共10页
【目的】比较无乳链球菌crRNA缺失株(ΔcrRNA)与荚膜形成相关基因cpsE缺失株(ΔcpsE)的毒力和免疫效力,为研发有效的罗非鱼无乳链球菌病弱毒苗提供候选菌株。【方法】基于NCBI数据库中公开的49株罗非鱼源无乳链球菌全基因组序列分析菌... 【目的】比较无乳链球菌crRNA缺失株(ΔcrRNA)与荚膜形成相关基因cpsE缺失株(ΔcpsE)的毒力和免疫效力,为研发有效的罗非鱼无乳链球菌病弱毒苗提供候选菌株。【方法】基于NCBI数据库中公开的49株罗非鱼源无乳链球菌全基因组序列分析菌株流行特征,并针对前期构建的2株弱毒株ΔcrRNA和ΔcpsE进行毒力和免疫效力比较。【结果】中国地区罗非鱼源无乳链球菌的优势流行血清型为Ia,序列型为ST7。相比野生株GD201008-001,ΔcrRNA与ΔcpsE株对罗非鱼的毒力显著下降,其半数致死量(LD_(50))均大于10^(8)CFU/尾,且高剂量感染罗非鱼未引起脑组织和脾脏组织的明显病理变化;免疫保护效力分析表明,无论是注射免疫还是浸泡免疫,缺失株ΔcrRNA均表现出比缺失株ΔcpsE更高的相对保护率,且诱导的免疫相关基因如MHCⅡβ、CD4-1、IFN-γ和IgM等表达呈现更为显著的上调。【结论】通过比较ΔcrRNA和ΔcpsE弱毒株的免疫保护效力,确定ΔcrRNA是更具潜力的弱毒活疫苗候选株,为罗非鱼链球菌病的疫苗研发提供了参考。 展开更多
关键词 尼罗罗非鱼 无乳链球菌 弱毒活疫苗 荚膜多糖 crRNA 免疫效力
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基于RPA-CRISPR/Cas12a的沙氏弧菌可视化检测方法的建立 被引量：1
3
作者 葛辉 巫旗生 +8 位作者 宁岳 冯君雅 陈昊翔 李慧耀 叶军 吴丽云 温凭 徐春燕 任磊 《水产学报》 北大核心 2025年第11期203-215,共13页
【目的】建立基于RPA-CRISPR/Cas12a的沙氏弧菌实时荧光检测法和试纸条检测法,满足牡蛎新发病原沙氏弧菌的快速检测需求。【方法】实验针对沙氏弧菌toxR基因设计特异性片段,优选RPA引物和crRNA序列,确保基因标志物的准确扩增与识别;当CR... 【目的】建立基于RPA-CRISPR/Cas12a的沙氏弧菌实时荧光检测法和试纸条检测法,满足牡蛎新发病原沙氏弧菌的快速检测需求。【方法】实验针对沙氏弧菌toxR基因设计特异性片段,优选RPA引物和crRNA序列,确保基因标志物的准确扩增与识别;当CRISPR/Cas12a系统识别到RPA扩增的病原靶标基因并激活其反式切割活性后,生物素修饰的单链DNA荧光探针作为报告分子被切割,分别依据蓝光下的荧光强度和试纸条的显色情况判定检测结果;实验采用多种弧菌验证检测方法的特异性,并通过不同浓度沙氏弧菌菌液评估2种检测方法的灵敏度;最终将2种检测方法与PCR方法进行真实样本检测对比。【结果】本研究成功建立了RPA-CRISPR/Cas12a荧光检测法和试纸检测法,且均表现出优异的特异性,可准确识别沙氏弧菌,整个检测流程可在1 h内完成;2种方法的检测限均达到100 CFU/mL,检测结果与PCR高度一致(符合率100%)。【结论】本研究开发的基于RPA-CRISPR/Cas12a的荧光检测法和试纸检测法,突破了传统方法的局限,显著缩短检测时间,且无需复杂仪器,操作简便,为沙氏弧菌的现场快速检测提供了可靠的技术支持。本研究为沙氏弧菌的快速检测提供了高效、便捷的新方法,对水产养殖病害防控和食品安全保障具有重要意义。 展开更多
关键词 沙氏弧菌 重组酶聚合酶扩增(RPA) CRISPR/Cas12a 荧光检测 试纸检测
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工程微生物防治研发进展及在水产养殖中开发前景分析
4
作者 艾晓辉 李声平 董靖 《淡水渔业》 北大核心 2025年第4期3-9,共7页
抗生素以其廉价和一定有效性,依然是全球疾病治疗的首选。如今,我国抗生素使用量占亚太地区所有国家使用量的50%以上,其中在水产养殖的用量不容忽视,耐药性问题已给我国水产养殖业造成巨大经济损失。抗生素治疗替代策略在学术界一直颇... 抗生素以其廉价和一定有效性,依然是全球疾病治疗的首选。如今,我国抗生素使用量占亚太地区所有国家使用量的50%以上,其中在水产养殖的用量不容忽视,耐药性问题已给我国水产养殖业造成巨大经济损失。抗生素治疗替代策略在学术界一直颇受关注,然而,天然药物在体内的治疗过程存在稳定性差、特异性低、给药剂量难以把控等一系列问题,导致天然药物开发失败或优化后成本过高。分子生物学和基因组学的快速发展逐步揭示了微生物在分子水平上的执行机制和合成途径,促进了“微生物细胞工厂”的开发。目前,已报道大量工程化微生物被赋予有效的疾病诊断和治疗的性能,本综述回顾了工程微生物在诊断和治疗炎症、病原微生物感染和癌症方面的研究进展,并进一步分析了工程微生物在水产养殖中的开发前景和安全性,为水产疾病防控提供新思路。 展开更多
关键词 合成生物学 水产养殖 工程微生物 疾病治疗 污染控制
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山莨菪碱在杀香鱼假单胞菌灭活疫苗浸泡免疫大黄鱼(Larimichthys crocea)中的应用 被引量：1
5
作者 李姣姣 汪玮 +4 位作者 杨致旭 许文军 谢建军 施慧 何杰 《海洋与湖沼》 北大核心 2025年第2期433-441,共9页
为探究山莨菪碱在浸泡免疫大黄鱼中的应用效果,以添加山莨菪碱佐剂的杀香鱼假单胞菌灭活疫苗浸泡免疫大黄鱼,结果显示,免疫后1~4周,无佐剂疫苗组(FKC组)和山莨菪碱疫苗组(FKCA组)血清抗体水平均显著升高,第2~3周FKCA组血清抗体显著高于... 为探究山莨菪碱在浸泡免疫大黄鱼中的应用效果,以添加山莨菪碱佐剂的杀香鱼假单胞菌灭活疫苗浸泡免疫大黄鱼,结果显示,免疫后1~4周,无佐剂疫苗组(FKC组)和山莨菪碱疫苗组(FKCA组)血清抗体水平均显著升高,第2~3周FKCA组血清抗体显著高于FKC组。rt-PCR结果显示,从免疫后第4天开始,头肾、脾脏中免疫因子IgM、IL-1β、MHC-Iα、MHC-IIβ、CD4、CD8的表达量均出现升高,FKCA组头肾中IgM、IL-1β、MHC-Iα、CD8的表达峰值显著高于FKC组。酶活结果显示,体表黏液中AKP和ACP活力在免疫后第7天达到峰值,血清中AKP和ACP活力分别在第4天和第14天达到峰值,FKCA组AKP活力显著高于FKC组。组织切片观察发现,免疫后第4天,两个免疫组的皮肤均出现表皮层增厚、黏液细胞增多,同时FKCA组初级鳃丝增宽,生理变化趋势更显著。免疫28 d后攻毒,FKCA组相对保护率为61%,显著高于FKC组(14%)。生长指标对比显示,免疫组和对照组的平均增重率、特定生长率在免疫期内无显著差异。研究表明,山莨菪碱作为浸泡疫苗佐剂可显著提高杀香鱼假单胞菌灭活疫苗对大黄鱼的相对保护率,提升血清抗体水平、头肾免疫因子表达水平,提高AKP和ACP活力,增强皮肤和鳃丝对浸泡免疫的生理扩张,同时,山莨菪碱对大黄鱼的生长性能无副作用,是一种具有应用潜力的大黄鱼浸泡疫苗佐剂。 展开更多
关键词 山莨菪碱 灭活疫苗 浸泡免疫 大黄鱼(Larimichthys crocea)
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淡水鱼肠道微生物的功能及其在水产养殖中的应用研究进展 被引量：4
6
作者 侯红霞 李林 +2 位作者 许长峰 李川 唐伟斌 《饲料研究》 北大核心 2025年第2期206-212,共7页
淡水鱼是水生生物多样性的重要组成部分,在生态系统中扮演着重要的角色。淡水鱼肠道微生物是与鱼类肠道共生的微生物群体,在宿主营养代谢、机体健康等过程中发挥重要作用。肠道微生物的多样性与鱼类宿主的健康状况紧密相关。文章探讨了... 淡水鱼是水生生物多样性的重要组成部分,在生态系统中扮演着重要的角色。淡水鱼肠道微生物是与鱼类肠道共生的微生物群体,在宿主营养代谢、机体健康等过程中发挥重要作用。肠道微生物的多样性与鱼类宿主的健康状况紧密相关。文章探讨了淡水鱼肠道微生物的组成特性及其重要意义,描述了肠道微生物在宿主消化吸收、生长发育、免疫调控等方面的重要功能,阐述了肠道微生物益生菌在增强宿主营养、提高免疫力、改善水质、缓解应激等方面的重要作用,突出了肠道微生物在筛选益生菌和开发微生物标志物中的潜在应用,为有效利用肠道微生物资源、促进淡水鱼疾病防控和水产养殖业的可持续发展提供参考。 展开更多
关键词 淡水鱼 肠道微生物 益生菌 生物标志物 疾病防控
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4种消毒剂对仿刺参幼参的急性毒性试验 被引量：3
7
作者 李慧耀 梁一帆 +3 位作者 杨求华 李昭杰 葛辉 吴建绍 《渔业研究》 2025年第1期56-63,共8页
【背景】仿刺参(Apostichopus japonicus)作为重要的海水经济养殖品种,其育苗过程中的水质管理及病害防控尤为重要。预防和控制其疾病的关键手段之一是使用消毒剂对水质和底质进行消毒。消毒剂的选择需兼顾有效性与安全性,以避免对幼参... 【背景】仿刺参(Apostichopus japonicus)作为重要的海水经济养殖品种,其育苗过程中的水质管理及病害防控尤为重要。预防和控制其疾病的关键手段之一是使用消毒剂对水质和底质进行消毒。消毒剂的选择需兼顾有效性与安全性,以避免对幼参造成不可逆的损害。【目的】研究4种常用消毒剂对仿刺参幼参的急性毒性,为仿刺参育苗过程中合理地选择消毒剂提供理论依据。【方法】选取健康、规格一致的仿刺参幼参作为试验对象,采用静水试验法开展4种常用水产消毒剂的急性毒性试验,计算各消毒剂在不同暴露时间下的半致死浓度(LC_(50))及安全浓度,以评估其毒性效应。【结果】当采用二氧化氯处理24、48、72和96 h时,仿刺参的半致死浓度(LC_(50))分别为2.97、2.06、1.56和0.96 mg/L,安全浓度为0.43 mg/L;当采用过硫酸氢钾处理24、48、72和96 h时,仿刺参的半致死浓度(LC_(50))分别为9.66、6.53、5.50和5.07 mg/L,安全浓度为1.32 mg/L;当采用二溴海因处理24、48、72和96 h时,仿刺参的半致死浓度(LC_(50))分别为12.80、7.84、7.01和6.02 mg/L,安全浓度为1.44 mg/L;当采用聚维酮碘处理24、48、72和96 h时,仿刺参的半致死浓度(LC_(50))分别为11.95、9.30、8.51和8.13 mg/L,安全浓度为2.17 mg/L。研究结果表明,二氧化氯表现出最强的急性毒性,其LC_(50)值随时间的延长而显著下降,表明其对仿刺参幼参的毒性作用迅速且强烈。相比之下,过硫酸氢钾、二溴海因及聚维酮碘的毒性依次减弱。【结论】4种消毒剂对仿刺参幼苗的毒性依次为二氧化氯>过硫酸氢钾>二溴海因>聚维酮碘,结合不同消毒剂的抑菌能力,可优先选用过硫酸氢钾作为消毒剂。 展开更多
关键词 仿刺参 消毒剂 急性毒性 半致死浓度 安全浓度
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大菱鲆杀鲑气单胞菌灭活疫苗的研制 被引量：1
8
作者 盛冬 任旭 +6 位作者 李菲 黄璐熹 刘喻晓 于庆华 周维佳 叶仕根 郭志新 《水产科学》 北大核心 2025年第3期457-464,共8页
为预防大菱鲆疖疮病,用体积分数0.05%、0.10%、0.20%、0.30%和0.40%的甲醛灭活病原菌杀鲑气单胞菌,检测其安全性,制备灭活疫苗。随后将体质量(95.5±9.7)g的健康大菱鲆分为4组,每组30尾,分别腹腔注射此灭活疫苗(疫苗组)、等体积生... 为预防大菱鲆疖疮病,用体积分数0.05%、0.10%、0.20%、0.30%和0.40%的甲醛灭活病原菌杀鲑气单胞菌,检测其安全性,制备灭活疫苗。随后将体质量(95.5±9.7)g的健康大菱鲆分为4组,每组30尾,分别腹腔注射此灭活疫苗(疫苗组)、等体积生理盐水(对照组)、壳寡糖和灭活疫苗+壳寡糖,免疫14 d后均注射109 cfu/mL的杀鲑气单胞菌进行攻毒,计算相对免疫保护率,检测大菱鲆血清中免疫球蛋白M含量,实时荧光定量PCR检测肌肉和肝脏组织中免疫相关基因(TLR2、TLR7、MyD88)的表达,测定免疫后大菱鲆血清中免疫球蛋白M含量及溶菌酶、超氧化物歧化酶活性。结果显示:14 d后疫苗组免疫球蛋白M含量显著高于对照组,免疫基因MyD88、TLR2、TLR7的表达量显著上调(P<0.05);壳寡糖组免疫球蛋白M含量和溶菌酶、超氧化物歧化酶活性随时间先增后减,14 d时达到峰值;对照组、疫苗组、壳寡糖组、疫苗+壳寡糖组相对免疫保护率分别为0%、100%、88.89%和88.89%。本试验制备的大菱鲆用杀鲑气单胞菌灭活疫苗,对大菱鲆疖疮病的预防具有重要意义。 展开更多
关键词 大菱鲆 疖疮病 杀鲑气单胞菌 灭活疫苗 疾病预防
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大理州2株核桃优势真菌病原的分离鉴定及生物学特性研究 被引量：1
9
作者 王浩东 张婧怡 +2 位作者 石焱 赵宁 唐绍荣 《西南林业大学学报(自然科学)》 北大核心 2025年第5期179-186,I0002,共9页
对云南核桃主产区大理州的核桃病害开展了调查,从病害中鉴定到2株核桃真菌病害的优势病原菌,对2株优势病原菌进行形态学和分子生物学鉴定。结果表明:引起核桃叶部病害的病原菌HTY-6为甜樱间座壳,引起核桃枝干病害的病原菌HTZ-2为小新壳... 对云南核桃主产区大理州的核桃病害开展了调查,从病害中鉴定到2株核桃真菌病害的优势病原菌,对2株优势病原菌进行形态学和分子生物学鉴定。结果表明:引起核桃叶部病害的病原菌HTY-6为甜樱间座壳,引起核桃枝干病害的病原菌HTZ-2为小新壳梭孢;甜樱间座壳在持续光照条件下生长最快,最适培养基为PDA,最适pH为6,最适碳源和氮源为麦芽糖和蛋白胨;小新壳梭孢在持续光照条件下生长最快,最适培养基为PDA,最适pH为5,最适碳源和氮源为蔗糖和蛋白胨。本研究明确了大理州核桃病害的优势病原菌,为大理州核桃病害的防治提供了依据。 展开更多
关键词 大理州 核桃 病原菌 鉴定 生物学特性
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中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)幼蟹上岸病的免疫学研究 被引量：13
10
作者 宋林生 苏建国 +4 位作者 崔朝霞 方敏 蔡中华 丁茂昌 杨公社 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期657-662,共6页
对患上岸病幼蟹和正常幼蟹体内的超氧化物歧化酶 (SOD)、过氧化氢酶 (CAT)、溶菌酶活性及丙二醛含量等几项免疫学指标的测定和比较 ,探讨幼蟹上岸死亡疾病的病因。结果表明 ,患病幼蟹自由基的代谢出现紊乱 ,清除自由基的能力较正常幼蟹... 对患上岸病幼蟹和正常幼蟹体内的超氧化物歧化酶 (SOD)、过氧化氢酶 (CAT)、溶菌酶活性及丙二醛含量等几项免疫学指标的测定和比较 ,探讨幼蟹上岸死亡疾病的病因。结果表明 ,患病幼蟹自由基的代谢出现紊乱 ,清除自由基的能力较正常幼蟹显著下降 ,其中超氧化物歧化酶及过氧化氢酶的活性极显著低于正常幼蟹 (P <0 .0 1 )。而在反映自由基损伤程度的丙二醛含量上 ,患病幼蟹极显著高于正常幼蟹 (P <0 .0 1 ) ;患病幼蟹的溶菌酶活性显著低于对照组 (P <0 .0 5 )。研究表明 ,大量自由基的积累对幼蟹的组织或器官造成了损伤 ,同时也降低了机体的免疫能力 。 展开更多
关键词 中华绒螯蟹 幼蟹上岸病 超氧化物歧化酶 过氧化氢酶 丙二醛 溶菌酶 养殖
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温度对中华绒螯蟹雌蟹繁殖性能及胚胎质量的影响
11
作者 崔超越 耿智 +5 位作者 冯广朋 张涛 赵峰 杨刚 庄平 黄晓荣 《渔业科学进展》 北大核心 2025年第3期98-107,共10页
为探究温度对中华绒螯蟹(Eiocheir sinensis)雌蟹繁殖性能及所产胚胎质量的影响,开展了不同温度(6℃、9℃、12℃、15℃、18℃和21℃)下亲蟹的繁殖产卵实验,分析了各温度下雌蟹的交配率、产卵率、产卵量和生殖力等繁殖性能以及所产胚胎... 为探究温度对中华绒螯蟹(Eiocheir sinensis)雌蟹繁殖性能及所产胚胎质量的影响,开展了不同温度(6℃、9℃、12℃、15℃、18℃和21℃)下亲蟹的繁殖产卵实验,分析了各温度下雌蟹的交配率、产卵率、产卵量和生殖力等繁殖性能以及所产胚胎卵径、生化成分和脂肪酸组成等胚胎质量。结果显示,随温度的升高,亲蟹的交配率逐渐增加,产卵率、产卵量、生殖力和生殖指数均呈先上升后下降的趋势,其中温度15℃时,雌蟹的产卵率、产卵量、生殖力以及生殖指数均最高,且与其他各温度组均有显著差异(P<0.05)。温度18℃时,所产胚胎卵径最大,平均为(431.17±13.69)μm,15℃时,单个胚胎干重最重,平均为(31.28±4.61)μg,但与18℃组无显著差异(P>0.05)。随温度的升高,胚胎中灰分和磷脂呈逐渐增加的趋势,总脂肪则逐渐下降,甘油三酯和总胆固醇表现为先升高后降低的趋势,粗蛋白和水分的变化不明显;其中18℃时,胚胎中粗蛋白、甘油三酯和总胆固醇含量均最高。中华绒螯蟹胚胎中共检测出21种脂肪酸,其中,饱和脂肪酸(SFA)和单不饱和脂肪酸(MUFA)在温度12℃下总量最高,但与其他各组无显著差异(P>0.05)。6℃下胚胎所含C20:5n3(EPA)、C22:6n3(DHA)、C20:4n6(ARA)和多不饱和脂肪酸(PUFA)的总量均最高。研究表明,温度对中华绒螯蟹所产胚胎的质量有一定影响,15℃时中华绒螯蟹繁殖性能最佳。结果为开展中华绒螯蟹繁育生物学研究提供了基础资料,同时也为长江口中华绒螯蟹渔业资源养护提供了科学支撑。 展开更多
关键词 温度 中华绒螯蟹 繁殖性能 胚胎质量 脂肪酸
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杀香鱼假单胞菌外膜蛋白Tol C的原核表达及其对大黄鱼的免疫保护效果
12
作者 王莹 汪浩 +6 位作者 徐伟 汪玮 施慧 王庚申 谢建军 何杰 许文军 《水产学报》 北大核心 2025年第2期193-203,共11页
【目的】评价大黄鱼杀香鱼假单胞菌外膜蛋白TolC(GenBank:EPB97112.1)的免疫保护效果。【方法】通过原核表达获得重组的Tol C功能域蛋白,命名为B6。用兔抗杀香鱼假单胞菌多抗血清对B6进行免疫原性的初步检测。将B6与明矾佐剂混合制成亚... 【目的】评价大黄鱼杀香鱼假单胞菌外膜蛋白TolC(GenBank:EPB97112.1)的免疫保护效果。【方法】通过原核表达获得重组的Tol C功能域蛋白,命名为B6。用兔抗杀香鱼假单胞菌多抗血清对B6进行免疫原性的初步检测。将B6与明矾佐剂混合制成亚单位疫苗,腹腔注射免疫大黄鱼,免疫4周后攻毒,检测相对保护率(relative percent survival,RPS)。同时,采集免疫后第2、4、6、8周的大黄鱼血清、头肾和脾脏,测定血清抗体效价和免疫相关基因的表达变化。采集健康和攻毒后大黄鱼的头肾和脾脏组织,制成石蜡切片,观察组织病理变化。【结果】B6分子质量为22 ku。Western blot结果显示,杀香鱼假单胞菌兔抗血清与B6具有强结合条带。接种B6亚单位疫苗4周后,RPS达72.22%。ELISA结果显示,免疫后第2周起,血清抗体效价显著升高,第4周时达到峰值(log_(2)8.65),随后略有下降,第8周时降至log_(2)6.98。荧光定量PCR(RT-PCR)结果显示,免疫后第2、4、6、8周,头肾和脾脏中免疫相关基因均有不同程度的表达上调,其中IL-1β和MHCⅠα的上调幅度最大,头肾中分别达到93.33倍和77.02倍,脾脏中分别达到241.13倍和131.95倍。除CD8外,IgM、IL-1β、CD4、MHCⅠα和MHCⅡβ在脾脏中的表达上调幅度均高于头肾。石蜡切片显示,对照组在攻毒后头肾和脾脏组织中出现严重的出血点和结节,并伴随不同程度的铁黄素沉积,B6免疫组在头肾和脾脏组织中仅有少量出血点,无结节和铁黄素沉积。【结论】通过对大黄鱼杀香鱼假单胞菌外膜蛋白Tol C进行原核表达和免疫保护效果评价,发现B6具有良好的免疫原性,免疫后4周RPS达72.22%,具有作为亚单位候选疫苗的潜力。 展开更多
关键词 大黄鱼 杀香鱼假单胞菌 Tol C 免疫保护
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唇形后口虫SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立及其应用
13
作者 郝文悦 王锦锦 +9 位作者 葛建龙 李彬 王印庚 廖梅杰 荣小军 赵宏晶 江敏棋 赵文广 牛立成 潘娇 《渔业科学进展》 北大核心 2025年第3期183-193,共11页
后口虫病是近年来影响刺参(Apostichopus japonicus)养殖效益的重要病害种类之一。唇形后口虫(Boveria labialis)是刺参后口虫病的病原。由于缺乏针对该物种的快速、准确的检测方法,研究人员难以系统解析该病原体的传播途径。本研究以... 后口虫病是近年来影响刺参(Apostichopus japonicus)养殖效益的重要病害种类之一。唇形后口虫(Boveria labialis)是刺参后口虫病的病原。由于缺乏针对该物种的快速、准确的检测方法,研究人员难以系统解析该病原体的传播途径。本研究以测序获得的唇形后口虫部分线粒体基因组序列为基础,根据nad10基因序列设计唇形后口虫引物,建立其SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法,并对刺参不同养殖区和不同养殖模式下养殖系统中唇形后口虫载量进行检测分析。结果显示,设计的唇形后口虫引物在质粒标准品4.05×10^(1)~4.05×10^(9) copies/μL范围内建立的标准曲线具有良好的线性关系,相关系数R^(2)=0.997,熔解曲线呈现单一峰,无引物二聚体或非特异性扩增;灵敏度实验最低检测限为40.5 copies/μL;所设计的引物仅对唇形后口虫出现特异性扩增,对海洋尾丝虫(Uronema marinum)、贪食纤口虫(Chaenea vorax)、僧帽肾形虫(Colpoda cucullus)和多小核草履虫(Paramecium multi-micronuleatum)无交叉反应;重复性实验中各浓度的批内和批间Ct值均一性较高,批内实验变异系数(CV)值为0.32%~0.82%,批间实验CV值为0.40%~0.88%,稳定性较好。利用本方法对4种刺参养殖模式不同养殖区的环境样品和饲料进行检测,结合镜检结果对比分析发现,海水中唇形后口虫DNA载量与刺参体内唇形后口虫量呈中度正相关(R=0.563),底泥、附着物样品中的唇形后口虫DNA载量与刺参体内唇形后口虫量呈高度正相关(R=0.931)。推测,鲜海泥是唇形后口虫传播的重要载体之一。本研究结果可为唇形后口虫的快速检测、传播途径解析和防控提供参考。 展开更多
关键词 刺参 寄生性疾病 唇形后口虫 实时荧光定量PCR检测 传播途径
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小球藻表达LrrG抗原罗非鱼口服疫苗的免疫保护效果
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作者 肖子淳 胡永华 +3 位作者 邓晓东 许殿龙 穆丹 费小雯 《广东海洋大学学报》 北大核心 2025年第6期1-12,共12页
【目的】研制针对罗非鱼(Oreochromis spp.)无乳链球菌病(Streptococcus agalactiae)防治具有高效、安全、无残留且便于推广使用的口服疫苗。【方法】将无乳链球菌外膜蛋白LrrG_epitope(706-756)表面抗原基因构建至表达载体pCAMBIA1302... 【目的】研制针对罗非鱼(Oreochromis spp.)无乳链球菌病(Streptococcus agalactiae)防治具有高效、安全、无残留且便于推广使用的口服疫苗。【方法】将无乳链球菌外膜蛋白LrrG_epitope(706-756)表面抗原基因构建至表达载体pCAMBIA1302,获得重组质粒,并转化至小球藻(Chlorella vulgaris)HOC5,使用抗生素潮霉素筛选阳性藻株,重组藻株经PCR鉴定并大规模培养后,制作成免疫口服饲料(含质量分数50%重组藻株);将驯化后的吉富罗非鱼(GIFT Oreochromis niloticus)免疫饲喂28 d,检测免疫相关基因组织分布、非特异性血清免疫指标、血清抗体效价,验证其免疫原性;测定罗非鱼生长性能;测定无乳链球菌对罗非鱼半致死剂量(LD50);对免疫饲喂28 d后的罗非鱼进行无乳链球菌攻毒试验,统计14 d的死亡率及相对保护率,观察鱼体外表征,以及鳃、中肠的显微特征。【结果】成功构建重组质粒pCAMBIA1302-LrrG_epitope(706-756),经转化获得重组微藻(口服疫苗)。经免疫饲喂,罗非鱼肝脏及中肠中IgM、TNF、IFN、MHCⅠ、MHCⅡ、CD4、CD8、IL-1β、IL-10等9种免疫相关基因的表达量较对照组均显著提高(P<0.05);免疫组血清中过氧化氢酶、碱性磷酸酶在免疫饲喂期间活性始终显著高于对照组,过氧化物酶在免疫饲喂28 d时活性较对照组有所提升(P<0.05);免疫组血清抗体效价较对照组显著升高(P<0.05),28 d时达到峰值1∶4096;免疫0 d及28 d时,免疫组罗非鱼体质量和体长无明显差异(P>0.05),免疫28 d时免疫组罗非鱼增质量率及饲料转化率无明显差异(P>0.05);攻毒14 d内,免疫组死亡率始终低于对照组,存活率明显高于对照组,其相对保护率为80.18%;免疫组体表未出现明显病变,而阳性对照组呈典型的无乳链球菌病症状;显微观察显示,免疫组鳃、中肠组织无明显病变,而阳性对照组鳃组织溃烂、中肠组织呈玻璃样变。【结论】本研究成功研制基于微藻表达系统的罗非鱼口服疫苗,疫苗具有高效免疫保护作用且不影响罗非鱼的生长性能。 展开更多
关键词 吉富罗非鱼 无乳链球菌 小球藻 外膜蛋白 疫苗 口服免疫
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中国花鲈IgM重链(IgMH)和MHCⅡβ基因的克隆及表达分析
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作者 雷丽娜 高谦 +3 位作者 王伟 孙兆盛 罗璋 刘其根 《水产学报》 北大核心 2025年第6期24-41,共18页
【目的】进一步了解中国花鲈适应性免疫机制在病害防治中的作用。【方法】本研究通过荧光定量PCR(RT-PCR)和快速扩增c DNA末端(RACE)技术克隆获得了免疫球蛋白M重链(IgMH)和主要组织兼容性复合体MHC Ⅱβ基因的全长;通过实时荧光定量PCR... 【目的】进一步了解中国花鲈适应性免疫机制在病害防治中的作用。【方法】本研究通过荧光定量PCR(RT-PCR)和快速扩增c DNA末端(RACE)技术克隆获得了免疫球蛋白M重链(IgMH)和主要组织兼容性复合体MHC Ⅱβ基因的全长;通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测其在中国花鲈各组织的分布情况以及LPS、Poly(I:C)刺激及迟缓爱德华氏菌人工感染后其对应mRNA水平的表达变化情况;实验构建了IgMH-pET21d、IgMCH1-2-pET21d和MHCⅡβ-pET21d原核重组表达质粒,进行重组蛋白表达,并通过分子筛层析技术纯化中国花鲈IgMH、IgMCH1-2和MHCⅡβ重组蛋白,进而制备了抗中国花鲈IgMH的多克隆抗体。【结果】中国花鲈IgMH和MHCⅡβ的cDNA全长分别为1977 bp和1242 bp;二者在鳃、脾脏和头肾等免疫相关组织中对应mRNA表达量较高;LPS、Poly(I:C)刺激及迟缓爱德华氏菌人工感染中国花鲈导致鳃、脾脏和头肾中这两个基因的表达水平发生显著变化,表明IgMH和MHCⅡβ均参与了中国花鲈的抗感染免疫反应;此外,抗中国花鲈IgM的多克隆抗体能与中国花鲈全血清发生强烈反应,与鳜全血清弱反应,与大口黑鲈和草鱼血清不发生反应,推测其反应强度反映了物种间亲缘关系的远近。【结论】本研究首次克隆了中国花鲈的IgMH和MHCⅡβ基因全长,表达了IgMH和MHCⅡβ原核重组蛋白,制备了抗中国花鲈IgM的多克隆抗体,揭示了IgMH和MHCⅡβ参与中国花鲈的抗感染免疫应答,为深入研究中国花鲈的免疫调控机制和疾病防控策略奠定了基础。 展开更多
关键词 中国花鲈 IgMH MHCⅡβ 表达调控 蛋白纯化
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中华鳖温和气单胞菌口服缓释微球疫苗的研究:疫苗用菌液培养条件的优化 被引量：4
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作者 孙红祥 李龙 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期567-570,共4页
以中华鳖温和气单胞菌 (Aeromonas sobria,As)口服缓释微球疫苗生产菌株 Z- 1株培养菌液含菌量和胞外产物溶血性为指标 ,考察了培养温度、培养时间、振荡与否、培养基 p H等因素对 As Z- 1株繁殖和产毒的影响 ,并采用正交试验方法 ,对... 以中华鳖温和气单胞菌 (Aeromonas sobria,As)口服缓释微球疫苗生产菌株 Z- 1株培养菌液含菌量和胞外产物溶血性为指标 ,考察了培养温度、培养时间、振荡与否、培养基 p H等因素对 As Z- 1株繁殖和产毒的影响 ,并采用正交试验方法 ,对培养基配方进行了优化试验。结果表明 :不同的培养温度、培养时间、振荡与否、培养基 p H等均会影响As Z- 1株的菌体产量和溶血性 ,其中 2 8℃振荡 (2 0 0 r/ min)培养 36 h菌液的含菌量和溶血价均较高 ;在营养肉汤中添加适量的硫酸铜、磷酸二氢钾、硫酸锰和硫酸铵 ,可显著提高菌液的含菌量和溶血价。 展开更多
关键词 口服缓释微球疫苗 疫苗用菌液 中华鳖 温和气单胞菌 培养条件 优化
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香豆素联合传染性造血器官坏死病毒灭活疫苗对虹鳟的免疫效果
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作者 邓倩 刘哲 +5 位作者 潘玉财 权金强 宋国林 卢军浩 赵桂研 王建福 《水生生物学报》 北大核心 2025年第6期32-41,共10页
为开发安全有效的疫苗以预防虹鳟传染性造血器官坏死病毒(IHNV)暴发。研究重点开发了以香豆素为佐剂的IHNV灭活疫苗,疫苗安全性实验证明IHNV病毒液已被完全灭活。实验分为对照组、疫苗组和香豆素+疫苗组。疫苗注射剂量为150μL,对照组... 为开发安全有效的疫苗以预防虹鳟传染性造血器官坏死病毒(IHNV)暴发。研究重点开发了以香豆素为佐剂的IHNV灭活疫苗,疫苗安全性实验证明IHNV病毒液已被完全灭活。实验分为对照组、疫苗组和香豆素+疫苗组。疫苗注射剂量为150μL,对照组注射同等剂量的磷酸盐缓冲溶液(PBS),在疫苗接种14d(D14)后进行IHNV攻毒实验,并在D7、D14、D15、D21、D30进行虹鳟脾脏和血清的样本采集。IHNV攻毒后显示,香豆素+疫苗的存活率为66%,而单一灭活疫苗和对照组的分别为62%和24%。组织病理学分析显示,IHNV攻毒后香豆素+疫苗组脾脏组织损伤最小,出现轻微的炎症反应,而对照组出现严重的黑色素巨噬细胞中心(MMC)和组织炎症(TI)。此外,在D7—D30,香豆素+疫苗组血清的总超氧化物歧化酶(T-SOD)、过氧化氢酶(CAT)、碱性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)活性水平显著高于疫苗组和对照组(P<0.05)。在D7—D14,香豆素+疫苗组血清中谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)水平被显著升高;而IHNV攻毒后(D15—D30),香豆素+疫苗组GPT和GOT水平显著低于对照组(P<0.05)。在接种疫苗和攻毒后,香豆素+疫苗组中脾脏的MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ和IFN-γ基因被显著上调(P<0.05);同时,香豆素+疫苗组CD4、CD8、IgT、C3、VIG1和Mx1基因表达量显著高于疫苗组和对照组(P<0.05)。结果表明,灭活疫苗联合佐剂香豆素是预防IHNV感染的有效方法,有助于进一步控制虹鳟养殖中的IHNV暴发。 展开更多
关键词 香豆素 疫苗 虹鳟 免疫效果 IHNV
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基于RPA和CRISPR/Cas12a技术构建的VHSV快速检测方法
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作者 王洪升 唐小千 +3 位作者 绳秀珍 邢婧 迟恒 战文斌 《中国海洋大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第7期19-27,共9页
病毒性出血性败血症病毒(Viral hemorrhagic septicemia virus,VHSV)是一种对冷水鱼类具有高致死率的弹状病毒,在世界范围内广泛流行,严重危害水产养殖业安全和水生生物多样性。为了实现该病的便捷、快速、灵敏诊断,本文基于RPA和CRISPR... 病毒性出血性败血症病毒(Viral hemorrhagic septicemia virus,VHSV)是一种对冷水鱼类具有高致死率的弹状病毒,在世界范围内广泛流行,严重危害水产养殖业安全和水生生物多样性。为了实现该病的便捷、快速、灵敏诊断,本文基于RPA和CRISPR/Cas技术,通过RPA引物和crRNA筛选及检测体系优化,结合侧向流层析技术与荧光显色法,构建了VHSV的快速检测体系。研究表明,RT-RPA在39℃下反应30 min可获得最佳扩增效果,通过CRISPR/Cas12a与侧向流层析技术的结合使用可在50 min内完成病毒样本的检测,检测结果可通过肉眼直接判断。该检测方法的检测限为9 copies/μL,与同属的传染性造血器官坏死病毒(IHNV)和牙鲆弹状病毒(HIRRV)之间无交叉反应,表现出较高的灵敏度与特异性。临床样本检测结果显示,本方法与RT-PCR检测结果一致,均表现出较高的准确性与稳定性。本研究构建了一种VHSV的RPA-CRISPR/Cas12a检测方法,为VHSV的便捷、快速诊断提供了重要的技术支撑。 展开更多
关键词 病毒性出血性败血症病毒 重组酶聚合酶扩增 CRISPR/Cas12a 便捷诊断 快速检测 牙鲆
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传染性造血器官坏死病毒-杀鲑气单胞菌载体疫苗的构建及免疫保护效果分析
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作者 高雅彤 王致鹏 +2 位作者 高晔 朱明 李杰 《渔业科学进展》 北大核心 2025年第3期194-201,共8页
传染性造血器官坏死病毒(infectious hematopoietic necrosis virus,IHNV)和杀鲑气单胞菌(Aeromonas salmonicida)都是鲑鳟类养殖过程中的重要病原。为开发这2种病原的疫苗,本研究将IHNV表面抗原糖蛋白G基因片段克隆至表达载体pGEX-4T-1... 传染性造血器官坏死病毒(infectious hematopoietic necrosis virus,IHNV)和杀鲑气单胞菌(Aeromonas salmonicida)都是鲑鳟类养殖过程中的重要病原。为开发这2种病原的疫苗,本研究将IHNV表面抗原糖蛋白G基因片段克隆至表达载体pGEX-4T-1,构建IHNV糖蛋白重组表达质粒pGEX-4T-1-G。以杀鲑气单胞菌SC18032201为载体,通过电击转化,构建IHNV糖蛋白表达载体SC18032201-G。利用IPTG诱导IHNV糖蛋白在SC18032201-G中进行表达,并对IPTG浓度、诱导温度和诱导时间进行了优化,Western Blotting结果显示,经IPTG诱导后G蛋白可以在SC18032201-G中表达,重组蛋白的最佳诱导条件为0.2 mmol/L IPTG、28℃诱导表达8 h。以优化后的条件对SC18032201-G进行培养、诱导、灭活和乳化,腹腔注射免疫虹鳟(Oncorhynchus mykiss)。免疫45 d后,测定虹鳟血清IHNV中和抗体水平,并进行杀鲑气单胞菌攻毒,评价疫苗载体的免疫保护效果。实验结果显示,在免疫第45天后虹鳟血清IHNV中和抗体效价为54.95±6.76,显著高于对照组;免疫45 d后虹鳟对杀鲑气单胞菌的相对免疫保护率为100%。综上所述,本研究以杀鲑气单胞菌作为载体疫苗,构建IHNV糖蛋白的二价疫苗可诱导虹鳟产生针对杀鲑气单胞菌和IHNV的特异性免疫,为虹鳟养殖过程中的病害防控提供了有效手段。 展开更多
关键词 传染性造血器官坏死病毒 杀鲑气单胞菌 疫苗 中和抗体
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乙酰化修饰对马氏珠母贝植核免疫的作用
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作者 卢金昭 张彬 +1 位作者 梁海鹰 梁碧丹 《水产学报》 北大核心 2025年第3期212-221,共10页
【目的】马氏珠母贝植核育珠技术会导致受体贝发生免疫排斥甚至死亡,严重影响了珍珠的质量和品质。本研究通过分析提高蛋白质乙酰化修饰水平对马氏珠母贝植核免疫的影响,从而探究乙酰化修饰在其植核后的作用。【方法】通过注射赖氨酸去... 【目的】马氏珠母贝植核育珠技术会导致受体贝发生免疫排斥甚至死亡,严重影响了珍珠的质量和品质。本研究通过分析提高蛋白质乙酰化修饰水平对马氏珠母贝植核免疫的影响,从而探究乙酰化修饰在其植核后的作用。【方法】通过注射赖氨酸去乙酰化酶抑制剂(lysine deacetylase inhibitor,KDI)混合物,并采用荧光定量PCR(qRT-PCR)、蛋白印迹(western blot,WB)、抗氧化酶活性检测以及养殖指标等多水平综合分析蛋白质乙酰化修饰水平对马氏珠母贝植核免疫的影响。【结果】注射KDI混合物后,首先检测HDAC 6/10(10006221)、Sir2家族成员(10031932和10020349)这3个去乙酰转移酶基因的表达水平,发现均在不同时间出现显著下调,鳃组织总蛋白乙酰化水平在72 h显著提高,表明注射药物后提高了乙酰化水平;其次使用qRT-PCR检测免疫相关因子的时序表达,结果显示,IRAK1、IL-17、NF-κB和CASP2基因的表达在12 h都出现显著上调,IκK在48 h显著上调,而TRAF3从48 h后则出现显著下调,表明经KDI刺激后受体贝机体细胞免疫增强;抗氧化酶GSH-Px、POD和CAT酶活性在12 h和24 h表现出显著上调的趋势,表明受体贝机体体液免疫增强;最后,结合养殖数据分析,发现60 d的存活率和留珠率显著提高。【结论】乙酰化修饰参与了马氏珠母贝的植核免疫反应,KDI可以作为免疫调节剂调节马氏珠母贝的植核免疫应答,为深入探究乙酰化修饰的生物学功能和调控机制奠定基础,为合理控制珍珠贝免疫反应提供理论支撑。 展开更多
关键词 马氏珠母贝 植核 乙酰化修饰 KDI
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