四川地区1株鲤春病毒血症病毒的分离鉴定与全基因组分析

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作者 祁英吉 刘舒亚 +8 位作者 兰寒韵 王雪梅 孙甜甜 李书含 黎秋男 黄小丽 耿毅 陈德芳 欧阳萍 《浙江农业学报》 北大核心 2025年第7期1430-1440,共11页

2022年3月四川省乐山市某养殖场的鲤出现大面积死亡,累计死亡率80%。为研究此次疾病的病因和流行规律,将病料解剖,进行病理学检查、细菌学检查、PCR鉴定,以及病毒分离鉴定与系统进化分析。结果显示,病理学病变主要在鳃和肠道,肠道充血... 2022年3月四川省乐山市某养殖场的鲤出现大面积死亡,累计死亡率80%。为研究此次疾病的病因和流行规律,将病料解剖,进行病理学检查、细菌学检查、PCR鉴定,以及病毒分离鉴定与系统进化分析。结果显示,病理学病变主要在鳃和肠道,肠道充血、出血,上皮细胞坏死脱落;鳃小片上皮细胞增生、坏死、脱落。根据病理学诊断初步判断患病鱼为鲤春病毒血症病毒(Spring viremia of carp virus,SVCV)感染。RT-PCR检测结果显示,在自然发病鲤、人工感染发病鲤的内脏组织和细胞培养病毒液中均扩增出SVCV的G蛋白基因序列。细胞培养病毒液的超薄切片电镜观察结果显示,病毒粒子长80~150 nm,宽40~60 nm,呈子弹状。人工感染细胞培养病毒液的健康鲤出现与自然发病鲤相似的临床症状,感染组累计死亡率为65%。通过鲤上皮瘤细胞(epithelioma papulosum cyprini cell,EPC细胞)培养分离得到1株病毒,全基因组测序与系统进化分析结果表明,该分离株与SVCV的同源性最高,将该分离株命名为SVCV-2022。结合本次疾病的流行特点与病理诊断、病毒分离鉴定和人工感染试验,确定此次传染病的病原为SVCV。 展开更多

关键词 鲤春病毒血症病毒 鲤 累计死亡率 系统进化分析

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用RT-PCR法快速检测鲤春病毒血症病毒基因 被引量：30

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作者 高隆英 史秀杰 +1 位作者 刘荭 江育林 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期452-456,共5页

用逆转录多聚酶链式反应 (RT PCR)方法快速、灵敏、特异地检测鲤春病毒血症病毒(SVCV) ,根据SVC病毒糖蛋白基因序列设计的引物经过RT PCR和半嵌套PCR(semi nested PCR)可扩增出SVC病毒核酸中的 71 4bp和 60 6bp片段。与其他弹状病毒IHNV... 用逆转录多聚酶链式反应 (RT PCR)方法快速、灵敏、特异地检测鲤春病毒血症病毒(SVCV) ,根据SVC病毒糖蛋白基因序列设计的引物经过RT PCR和半嵌套PCR(semi nested PCR)可扩增出SVC病毒核酸中的 71 4bp和 60 6bp片段。与其他弹状病毒IHNV、VHSV、PFRV没有交叉 ,具有特异性。灵敏度检测 ,表明不小于 1 0 0 0个病毒就可检测出阳性结果。本文还对复性温度 ,引物 ,Mg2 +,Tag酶以及反转录酶的浓度对检测结果的影响进行了探讨。 展开更多

关键词 RT-PCR法 快速检测 鲤春病毒血症 病毒基因 鱼病

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数字RT-PCR检测鲤春病毒血症的方法建立与应用 被引量：12

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作者 吴斌 申翠翠 +3 位作者 张晨曦 胡德聪 肇慧君 张琳 《中国动物检疫》 CAS 2015年第7期72-76,共5页

[目的]通过实时定量RT-PCR和数字RT-PCR两种方法的比对试验,建立快速检测鲤春病毒血症的数字RT-PCR方法。[方法]利用同一对引物和探针,以梯度稀释的方法测定两种方法针对SVCV的灵敏性、特异性及重现性。[结果]两种方法均能够检测出104... [目的]通过实时定量RT-PCR和数字RT-PCR两种方法的比对试验,建立快速检测鲤春病毒血症的数字RT-PCR方法。[方法]利用同一对引物和探针,以梯度稀释的方法测定两种方法针对SVCV的灵敏性、特异性及重现性。[结果]两种方法均能够检测出104倍稀释的SVCV,而数字RT-PCR可以检测出单个微滴中的SVCV,其灵敏度性高于实时定量RT-PCR。同时,两种方法的特异性都很强,对其他病毒,如传染性胰腺坏死病毒(IPNV)、传染性造血器官坏死病毒(IHNV)、病毒性出血败血病毒(VHSV)均未有扩增反应。两种方法的重现性也较好。[结论]数字RT-PCR方法比实时定量RT-PCR具有更高的灵敏度,在鲤春病毒血症的早期快速诊断方面具有重要作用。 展开更多

关键词 鲤春病毒血症(SVC) 数字RT-PCR 实时定量RT-PCR 灵敏性 特异性 重现性

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流式细胞仪在快速测定鲤春病毒血症病毒滴度中的应用 被引量：2

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作者 王津津 贾鹏 +7 位作者 史秀杰 于力 阮周曦 郑晓聪 何俊强 兰文升 宋思静 刘荭 《中国动物检疫》 CAS 2015年第9期82-86,共5页

本研究建立了流式细胞仪快速检测鲤春病毒血症病毒(spring viraemia of carp virus,SVCV)滴度的方法。运用荧光激活细胞分选(fluorescence-activated cell sorting,FACS)技术检测SVCV A1株对草鱼性腺细胞系(GCO)的感染情况。用SVCV病毒... 本研究建立了流式细胞仪快速检测鲤春病毒血症病毒(spring viraemia of carp virus,SVCV)滴度的方法。运用荧光激活细胞分选(fluorescence-activated cell sorting,FACS)技术检测SVCV A1株对草鱼性腺细胞系(GCO)的感染情况。用SVCV病毒单克隆抗体为一抗,FITC标记的羊抗鼠抗体为二抗,运用FACS来检测感染后不同时间点,以及不同病毒接种量的阳性细胞率。感染第3天时为最佳的病毒滴度测定时间点,测得SVCV的病毒滴度为8.31×105 FIU/m L,最低检测病毒滴度为(1000 FIU/m L),与传统空斑试验(plaque assay,PA)相比,两种方法测得的结果基本一致。实验结果表明,FACS是一种简捷、高效、直接的检测SVCV滴度的方法,是一种新型的病毒滴度测定方法。 展开更多

关键词 鲤春病毒血症 草鱼性腺细胞系 流式细胞术 空斑试验 病毒滴度

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国外鲤春病毒病的研究概况

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作者 叶金云 杨国梁 周志明 《福建水产》 1985年第3期64-68,共5页

鲤春病毒病(SVC)早在1930年首先在欧洲记载，当时人们把该病称之为传染性水肿。据报道其病原为萤光极毛杆菌(Pseudomonas fluorescons)，但其病因学并非力所有调查者所接受，争论较大。人们一般认为，至少明显地存在着两种症状相异的疾... 鲤春病毒病(SVC)早在1930年首先在欧洲记载，当时人们把该病称之为传染性水肿。据报道其病原为萤光极毛杆菌(Pseudomonas fluorescons)，但其病因学并非力所有调查者所接受，争论较大。人们一般认为，至少明显地存在着两种症状相异的疾病类型，即急性型与慢性型。1971年当Fijan等从患急性传染性水肿的鲤鱼(Cyprinus carpio L．)中分离出一种病毒， 展开更多

关键词 鲤春病毒病 流行病学 症状 病理变化 病因 诊断 防治

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鲤春病毒血症病毒糖蛋白在杆状病毒表达系统中的表达与鉴定 被引量：2

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作者 刘红 郑晓聪 +8 位作者 于力 王津津 贾鹏 何俊强 史秀杰 兰文升 叶奕优 刘荭 吴志新 《中国动物检疫》 CAS 2014年第6期74-78,共5页

本实验利用杆状病毒表达系统表达鲤春病毒血症病毒(SVCV)糖蛋白。将SVCV糖蛋白基因(G)插入到供体质粒pFastBacHTA中,再用构建的质粒pFastBac-G转化E.coli DH10αBac感受态细胞,经蓝白斑筛选,获得含G基因的重组穿梭载体Bacmid-G。通过脂... 本实验利用杆状病毒表达系统表达鲤春病毒血症病毒(SVCV)糖蛋白。将SVCV糖蛋白基因(G)插入到供体质粒pFastBacHTA中,再用构建的质粒pFastBac-G转化E.coli DH10αBac感受态细胞,经蓝白斑筛选,获得含G基因的重组穿梭载体Bacmid-G。通过脂质体介导将Bacmid-G转染对数生长期的Sf9细胞,获得重组杆状病毒AcNPV-G。AcNPV-G感染Sf9细胞,超声破碎后离心取上清进行SDS-PAGE及Western Blot试验,结果可见大小约为57 kDa的蛋白条带,并与羊抗SVCV血清发生特异性反应。间接免疫荧光试验在感染AcNPV-G的Sf9细胞中观察到荧光信号。试验结果表明,AcNPV-G在Sf9细胞中成功的表达了SVCV糖蛋白,且具有良好的免疫学活性。 展开更多

关键词 鲤春病毒血症病毒 糖蛋白 杆状病毒表达

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鲤春病快速诊断技术的临床应用 被引量：4

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作者 张利峰 王姝 +4 位作者 段向英 高隆英 邴国霞 江育林 夏春 《检验检疫科学》 2008年第3期16-19,共4页

本文在建立的鲤春病病毒荧光RT-PCR快速检测技术基础上,对国内外收集的19株SVCV病毒悬液进行了验证试验.验证结果良好。另外,还通过人工动物感染试验,将感染SVC病毒的鲤鱼组织样品在同经典的细胞培养分离病毒方法对比研究后,认为应用该... 本文在建立的鲤春病病毒荧光RT-PCR快速检测技术基础上,对国内外收集的19株SVCV病毒悬液进行了验证试验.验证结果良好。另外,还通过人工动物感染试验,将感染SVC病毒的鲤鱼组织样品在同经典的细胞培养分离病毒方法对比研究后,认为应用该方法检测SVCV的组织研磨样品悬液时,最多能将3尾鱼的组织器官混合后制备待检样品。本文还用本实验室制备的SVCV单抗,运用间接免疫荧光抗体技术(IFAT)对SVCV欧洲株和亚洲株感染的鲤鱼上皮瘤细胞进行检测.结果表明,该抗体可特异性检出接毒后感染细胞中的SVCV欧洲株和亚洲株.表明应用该单抗可以检测出SVCV的欧洲株或亚洲株.不会造成漏检现象。 展开更多

关键词 鲤春病毒 荧光RT-PCR 单克隆抗体 间接免疫荧光抗体技术

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鲤春病毒血症病毒研究进展 被引量：3

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作者 尚信池 尹玉伟 +4 位作者 程义 王楠 刘佳 张一琳 李月红 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2020年第6期61-64,共4页

鲤春病毒血症病毒(Spring viremia of carp virus,SVCV)属于弹状病毒科[1],其基因组由负义单链RNA组成,长度约为11 kb,并含有N,P,M,G,L五个基因。这5个基因分别编码核蛋白N、糖蛋白G、磷蛋白P、基质蛋白M和RNA聚合酶L。SVCV是几种经济... 鲤春病毒血症病毒(Spring viremia of carp virus,SVCV)属于弹状病毒科[1],其基因组由负义单链RNA组成,长度约为11 kb,并含有N,P,M,G,L五个基因。这5个基因分别编码核蛋白N、糖蛋白G、磷蛋白P、基质蛋白M和RNA聚合酶L。SVCV是几种经济上重要鲤科鱼类高致病性病原体,是世界动物卫生组织(OIE)必须申报的病原微生物,给水产养殖业造成了巨大的经济损失。该病毒引起鲤春病毒血症病(SVC)主要在欧洲养殖的鲤鱼中流行,造成重大经济损失,病鱼临床症状主要表现为体内出血,神经紊乱,腹腔炎症和腹内积水。 展开更多

关键词 重大经济损失 世界动物卫生组织 弹状病毒科 病原微生物 神经紊乱 OIE 糖蛋白G 腹腔炎症

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鲤春病毒血症病毒基质蛋白基因的原核表达及多克隆抗体的制备

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作者 杨振慧 葛均青 +3 位作者 刘荭 杨金先 郑晓聪 林天龙 《福建农林大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2011年第6期614-617,共4页

根据鲤春病毒血症病毒(SVCV)基因组序列(GenBank:NC_002803),人工合成M基因开放阅读框序列,克隆至原核表达载体pET-32a(+),转化工程菌株BL21(DE3),在0.1 mmol.L-1 IPTG、37℃下诱导5 h,获得高效表达的M蛋白,但其主要以包涵体的形式存在... 根据鲤春病毒血症病毒(SVCV)基因组序列(GenBank:NC_002803),人工合成M基因开放阅读框序列,克隆至原核表达载体pET-32a(+),转化工程菌株BL21(DE3),在0.1 mmol.L-1 IPTG、37℃下诱导5 h,获得高效表达的M蛋白,但其主要以包涵体的形式存在,经超声破碎、包涵体纯化后,再经Ni亲和层析柱纯化,获得高纯度的M蛋白.以纯化的M蛋白为抗原免疫新西兰大白兔,制备了M蛋白的多克隆抗血清.ELISA检测显示抗血清的效价达1∶128000;western blot分析显示抗血清能够识别SVCV的M蛋白,表明其具有较好的灵敏性和特异性. 展开更多

关键词 鲤春病毒血症病毒 基质蛋白基因 原核表达 多克隆抗体

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纳米磁珠现场提取鲤春病毒核酸的方法研究

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作者 王姝 刘朋朋 +6 位作者 张雷 张伟 孙明 赵晓丽 刘翌 邓丛良 张利峰 《中国动物检疫》 CAS 2013年第5期46-48,共3页

使用纳米磁珠(MNP)提取鲤春病毒(SVCV)核酸,置25℃和4℃保存,分别在第1、4、11、20天时,用荧光RT-PCR方法检测。结果显示MNP提取到的SVCV核酸均出现典型扩增,并且与对照样品的Ct值接近,证实MNP可以有效地吸附鲤春病毒核酸,并能释放核酸... 使用纳米磁珠(MNP)提取鲤春病毒(SVCV)核酸,置25℃和4℃保存,分别在第1、4、11、20天时,用荧光RT-PCR方法检测。结果显示MNP提取到的SVCV核酸均出现典型扩增,并且与对照样品的Ct值接近,证实MNP可以有效地吸附鲤春病毒核酸,并能释放核酸。MNP提取的核酸保存20d后,荧光RT-PCR依然可检测到阳性,说明MNP提取到的病毒核酸能在常温或低温下保存。这样就能够在现场处理样品,方便样品的携带,节约运输成本,提高实验室的样品处理效率。 展开更多

关键词 纳米磁珠(MNP) 鲤春病毒(SVCV) 荧光RT-PCR

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江西省2005～2017年鲤春病毒血症病毒感染流行病学研究 被引量：5

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作者 田飞焱 欧阳敏 +5 位作者 谢世红 徐节华 刘文珍 孟霞 银旭红 花麒 《水产学杂志》 CAS 北大核心 2019年第2期32-36,共5页

2005—2017年,从江西省69个县(区、市)的渔场采集576份样品,用细胞分离法和聚合酶链式反应(PCR)监测鲤春病毒血症(SVC)病原,通过测序获得部分病毒分离株糖蛋白(G)的部分基因片段进行进化树分析,以了解江西省SVC的流行状况和特征。结果... 2005—2017年,从江西省69个县(区、市)的渔场采集576份样品,用细胞分离法和聚合酶链式反应(PCR)监测鲤春病毒血症(SVC)病原,通过测序获得部分病毒分离株糖蛋白(G)的部分基因片段进行进化树分析,以了解江西省SVC的流行状况和特征。结果共发现了23个鲤春病毒血症病毒(SVCV)分离株,阳性检出率为3.99%,阳性渔场分布区域较广,表明SVCV在江西省散在性分布;鲫Carassius auratus的SVCV携带率显著高于鲤Cyprinus carpio、草鱼Ctenopharyngodon idellus,与锦鲤Cyprinus carpio haematopterus相当,说明在本地区除锦鲤外,鲫也是SVCV高度易感种。SVCV G基因部分序列的进化树分析显示,江西地区SVCV分离株与其他SVCV中国分离株、美国分离株同源性较高,均属于SVCVⅠa基因亚型。江西省各主要水系均与鄱阳湖密切相连。为了降低SVC病原的传播和扩散风险,需扩大疫情监测范围(包括野生鱼类),加强生物安保意识的宣传,筑牢生物安全屏障。 展开更多

关键词 江西 鲤春病毒血症病毒 流行病学

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池塘鲤高效养殖技术(三)

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作者 侯和菊 《农村养殖技术》 2007年第06S期30-30,共1页

（五）疾病防治尽管鲤鱼具有较强的抗病能力,但由于养殖环境的恶化、品种退化、饲养管理工作不到位等主、客观原因，养殖的鲤易患痘疮病、疥疮病、烂腮病、竖鳞病、肠炎病、赤皮病、水霉病、鲤春病毒病、鲤嗜子宫线虫病和小瓜虫病等。

关键词 鲤春病毒病 高效养殖技术 池塘 饲养管理工作 嗜子宫线虫病 抗病能力 疾病防治 养殖环境

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