为了研究鳜(Siniperca chuatsi)赖氨酸甲基转移酶SMYD3(SET and MYND Domain Containing 3)基因的分子特征及其在抗病毒免疫中的功能,首先通过氨基酸序列比对、蛋白质结构预测及进化树分析表明,鳜SMYD3基因在进化过程中具有较高的保守...为了研究鳜(Siniperca chuatsi)赖氨酸甲基转移酶SMYD3(SET and MYND Domain Containing 3)基因的分子特征及其在抗病毒免疫中的功能,首先通过氨基酸序列比对、蛋白质结构预测及进化树分析表明,鳜SMYD3基因在进化过程中具有较高的保守性。本文克隆了鳜SMYD3基因,其全长1332个核苷酸,编码443个氨基酸。荧光定量qRT-PCR结果表明,在感染鳜弹状病毒SCRV(Siniperca chuatsi Rhabdovirus)后,过表达鳜SMYD3显著抑制抗病毒基因的表达,并且促进SCRV病毒的复制。分子机制解析表明,鳜SMYD3和干扰素调节因子3和7(IRF3和IRF7)之间存在相互作用,随后通过荧光素酶报告基因实验证明,鳜SMYD3抑制由IRF3和IRF7激活的干扰素启动子和干扰素刺激响应元件ISRE的活性。为了研究SMYD3在SCRV病毒感染过程中的在体生物学功能,利用模式生物斑马鱼作为模型,对野生型斑马鱼和smyd3缺失的斑马鱼进行了SCRV的攻毒实验,发现smyd3缺失的斑马鱼抗SCRV病毒感染的能力显著增强。这些研究结果表明鳜SMYD3负调控抗病毒先天免疫信号通路,为深入解析鳜抗病毒免疫的分子调控机制提供依据,同时为培育抗病毒鳜新种质提供了分子靶标。展开更多
VI型分泌系统(type VI secretion system,T6SS)是迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)的一种新型毒力因子。迟缓爱德华氏菌毒力蛋白P(E.tarda virulence protein P,EvpP)是T6SS的效应蛋白,但目前对EvpP功能机制的研究仍十分有限。【目...VI型分泌系统(type VI secretion system,T6SS)是迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)的一种新型毒力因子。迟缓爱德华氏菌毒力蛋白P(E.tarda virulence protein P,EvpP)是T6SS的效应蛋白,但目前对EvpP功能机制的研究仍十分有限。【目的】解析EvpP的生物学功能,深入探究T6SS在E.tarda致病过程中的作用。【方法】构建E.tarda的evpP基因缺失株(ΔevpP)和回补株(ΔevpP-C),在此基础上开展evpP基因缺失对E.tarda生物学特性以及巨噬细胞感染影响的研究。【结果】E.tarda野生株、ΔevpP和ΔevpP-C在生长曲线和生理生化特性方面并无显著差异。相较于野生株,ΔevpP的运动性、生物被膜生成能力以及感染RAW264.7巨噬细胞的黏附率、胞内增殖率和触发细胞自噬的能力均显著下降,但能诱发巨噬细胞分泌更多的肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)。ΔevpP-C的胞内增殖能力未完全恢复至野生株水平,但其他表型均得到完全恢复。【结论】EvpP不影响E.tarda的生长和生理生化特性,但能不同程度地增强该菌的运动性、生物膜形成能力以及对巨噬细胞的黏附、胞内增殖能力和自噬活性,且能抑制E.tarda感染的巨噬细胞分泌更多TNF-α。研究结果进一步证实EvpP参与E.tarda的致病过程,并在其中发挥重要作用。展开更多
文摘为了研究鳜(Siniperca chuatsi)赖氨酸甲基转移酶SMYD3(SET and MYND Domain Containing 3)基因的分子特征及其在抗病毒免疫中的功能,首先通过氨基酸序列比对、蛋白质结构预测及进化树分析表明,鳜SMYD3基因在进化过程中具有较高的保守性。本文克隆了鳜SMYD3基因,其全长1332个核苷酸,编码443个氨基酸。荧光定量qRT-PCR结果表明,在感染鳜弹状病毒SCRV(Siniperca chuatsi Rhabdovirus)后,过表达鳜SMYD3显著抑制抗病毒基因的表达,并且促进SCRV病毒的复制。分子机制解析表明,鳜SMYD3和干扰素调节因子3和7(IRF3和IRF7)之间存在相互作用,随后通过荧光素酶报告基因实验证明,鳜SMYD3抑制由IRF3和IRF7激活的干扰素启动子和干扰素刺激响应元件ISRE的活性。为了研究SMYD3在SCRV病毒感染过程中的在体生物学功能,利用模式生物斑马鱼作为模型,对野生型斑马鱼和smyd3缺失的斑马鱼进行了SCRV的攻毒实验,发现smyd3缺失的斑马鱼抗SCRV病毒感染的能力显著增强。这些研究结果表明鳜SMYD3负调控抗病毒先天免疫信号通路,为深入解析鳜抗病毒免疫的分子调控机制提供依据,同时为培育抗病毒鳜新种质提供了分子靶标。
文摘VI型分泌系统(type VI secretion system,T6SS)是迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)的一种新型毒力因子。迟缓爱德华氏菌毒力蛋白P(E.tarda virulence protein P,EvpP)是T6SS的效应蛋白,但目前对EvpP功能机制的研究仍十分有限。【目的】解析EvpP的生物学功能,深入探究T6SS在E.tarda致病过程中的作用。【方法】构建E.tarda的evpP基因缺失株(ΔevpP)和回补株(ΔevpP-C),在此基础上开展evpP基因缺失对E.tarda生物学特性以及巨噬细胞感染影响的研究。【结果】E.tarda野生株、ΔevpP和ΔevpP-C在生长曲线和生理生化特性方面并无显著差异。相较于野生株,ΔevpP的运动性、生物被膜生成能力以及感染RAW264.7巨噬细胞的黏附率、胞内增殖率和触发细胞自噬的能力均显著下降,但能诱发巨噬细胞分泌更多的肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)。ΔevpP-C的胞内增殖能力未完全恢复至野生株水平,但其他表型均得到完全恢复。【结论】EvpP不影响E.tarda的生长和生理生化特性,但能不同程度地增强该菌的运动性、生物膜形成能力以及对巨噬细胞的黏附、胞内增殖能力和自噬活性,且能抑制E.tarda感染的巨噬细胞分泌更多TNF-α。研究结果进一步证实EvpP参与E.tarda的致病过程,并在其中发挥重要作用。
