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新疆黑蜂狄斯瓦螨病的诊断与综合防治实例分析
1
作者 王振宝 张九歌 +6 位作者 艾拉提·格玛迪 伊恒博 侯鑫 贾磊 邵永荣 雷程红 何晓杰 《中南农业科技》 2025年第6期118-122,共5页
为确诊新疆黑蜂(Apis mellifera)蜂螨感染种类并提高防治效果,2022年3—8月,选取新疆伊犁哈萨克自治州4个蜂场开展试验,采用临床诊断和形态学鉴定方法确认病原种类为狄斯瓦螨(Varroa destructor)。通过断子法联合不同化学药物进行综合防... 为确诊新疆黑蜂(Apis mellifera)蜂螨感染种类并提高防治效果,2022年3—8月,选取新疆伊犁哈萨克自治州4个蜂场开展试验,采用临床诊断和形态学鉴定方法确认病原种类为狄斯瓦螨(Varroa destructor)。通过断子法联合不同化学药物进行综合防治,结果显示,各蜂场蜂螨感染呈明显的季节性波动,春繁期使用断子法联合甲酸、双甲脒、氟胺氰菊酯乳油、除螨精油等药物均在24 h后见效,各蜂场感染率维持在1.8%~3.0%的低水平;大流蜜期结束后,使用断子法联合升华硫及甲酸、升华硫及杀螨粉剂、双甲脒、除螨精油等防治,其中升华硫联合甲酸或杀螨粉剂、双甲脒需2次施药基本净螨,除螨精油需3次施药基本净螨。对新疆黑蜂狄斯瓦螨病进行诊断和防治实例分析,建立了“三阶段防控”策略,为西北干旱区蜂螨防治提供了技术支撑,对保障蜂群健康和蜂产品安全具有重要意义。 展开更多
关键词 新疆黑蜂(Apis mellifera) 狄斯瓦螨(Varroa destructor) 断子法 综合防治 季节性流行 蜂产品安全
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小鼠仙台病毒HN蛋白单克隆抗体的制备及鉴定
2
作者 李泽睿 王霄 +4 位作者 孙莉 费东亮 马跃宇 马鸣潇 李明 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2024年第9期66-70,共5页
为了制备小鼠仙台病毒(Sendai virus,SeV)HN蛋白单克隆抗体,试验采用SeV参考毒株HN基因(GenBank登录号为NC_001552.1)对编码HN蛋白的基因密码子优化后克隆重组至原核表达载体pGEX-6P-1上获得重组质粒pGEX-6P-1-HN,将其转化至大肠杆菌BL2... 为了制备小鼠仙台病毒(Sendai virus,SeV)HN蛋白单克隆抗体,试验采用SeV参考毒株HN基因(GenBank登录号为NC_001552.1)对编码HN蛋白的基因密码子优化后克隆重组至原核表达载体pGEX-6P-1上获得重组质粒pGEX-6P-1-HN,将其转化至大肠杆菌BL21感受态细胞中,用IPTG进行诱导表达,并对纯化的重组蛋白rHN进行SDS-PAGE分析。用重组蛋白rHN免疫Balb/c小鼠6次,取其脾脏细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,通过亚克隆技术和间接ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞,然后注入小鼠腹腔制备抗HN蛋白单克隆抗体,分析单克隆抗体的免疫活性、特异性和稳定性。结果表明:获得3株分泌抗SeV HN蛋白抗体的杂交瘤细胞2F9、5D8、10H2,分泌的抗体效价均为1∶16 000左右。3株单克隆抗体的亚型均为IgG1,均可特异性识别SeV,并不与其他小鼠病毒产生交叉反应,具有良好的特异性。经过10次传代,3株单克隆抗体的效价均在1∶8 000以上,稳定性较好。说明试验成功制备了具备良好免疫活性、特异性和稳定性的抗SeV HN蛋白单克隆抗体,可以为SeV的检测提供有效试剂。 展开更多
关键词 小鼠 仙台病毒 HN蛋白 单克隆抗体 原核表达 杂交瘤细胞
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东方蜜蜂微孢子虫nce-miR-11248及其靶基因SGT1的生物信息学和表达谱研究 被引量：1
3
作者 张凯遥 赵浩东 +7 位作者 张艺琼 赵萧 高旭泽 邹培缘 张奎昊 陈大福 郭睿 牛庆生 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2024年第2期32-39,共8页
【目的】对前期鉴定所获得的东方蜜蜂微孢子虫的nce-miR-11248进行表达和序列验证,预测、分析其靶基因,并检测nce-miR-11248及其靶基因在东方蜜蜂微孢子虫侵染意大利蜜蜂工蜂过程中的表达谱,为进一步开展nce-miR-11248调控东方蜜蜂微孢... 【目的】对前期鉴定所获得的东方蜜蜂微孢子虫的nce-miR-11248进行表达和序列验证,预测、分析其靶基因,并检测nce-miR-11248及其靶基因在东方蜜蜂微孢子虫侵染意大利蜜蜂工蜂过程中的表达谱,为进一步开展nce-miR-11248调控东方蜜蜂微孢子虫侵染的功能及作用机制研究提供参考。【方法】利用Stem-loop RT-PCR和Sanger测序验证nce-miR-11248的真实性;利用相关生物信息学软件预测nce-miR-11248的靶基因,并分析其编码蛋白的分子特性;使用MEME和TBtools软件预测SGT1蛋白的保守基序和结构域,通过Mega 11.0软件进行氨基酸序列多重比对,采用邻接法构建系统进化树。采集东方蜜蜂微孢子虫孢子侵染1,2,4,6和8 d的意蜂工蜂中肠组织,采用RT-qPCR检测nce-miR-11248及其靶基因SGT1的表达谱。【结果】nce-miR-11248在东方蜜蜂微孢子虫孢子中真实存在,其序列长度为25 bp。nce-miR-11248的靶基因为SGT1。SGT1蛋白分子式为C_(765)H_(1213)N_(195)O_(241)S_(4),分子质量约为17.10 ku,脂溶系数为82.67,等电点为5.50,亲水系数为-0.709,不含典型的信号肽和跨膜结构域,可同时定位于细胞核、线粒体和过氧化物酶体。东方蜜蜂微孢子虫、家蚕微孢子虫、泛胞虫、肠脑炎微孢子虫和蚱蜢脑炎微孢子虫的SGT1中均含有4个保守基序(Motif 1、Motif 2、Motif 3和Motif 4)和1个结构域(SGT1超家族结构域)。东方蜜蜂微孢子虫、家蚕微孢子虫、肠脑炎微孢子虫和蚱蜢脑炎微孢子虫的SGT1聚为一支,且东方蜜蜂微孢子虫与家蚕微孢子虫的SGT1进化距离最近。相较于侵染东方蜜蜂微孢子虫后1 d,侵染后2,4,6和8 d nce-miR-11248的表达量均显著下调(P<0.05);侵染后2,4,6和8 d SGT1的表达量均下调,其中侵染后4,6和8 d的表达量与2 d的差异达显著水平(P<0.05)。【结论】nce-miR-11248在东方蜜蜂微孢子虫孢子中真实存在;东方蜜蜂微孢子虫与家蚕微孢子虫的SGT1亲缘关系最近;随着侵染时间的延长,nce-miR-11248及其靶基因SGT1在东方蜜蜂微孢子虫侵染意大利蜜蜂工蜂过程中的表达量均呈持续下降;nce-miR-11248和SGT1是潜在的参与调控微孢子虫侵染过程的因子。 展开更多
关键词 东方蜜蜂微孢子虫 意大利蜜蜂 nce-miR-11248 SGT1基因 表达谱
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以色列急性麻痹病毒LN株全基因克隆与遗传进化分析
4
作者 陈路 李林熹 +3 位作者 梁爽 韩宇 李明 孙莉 《现代畜牧兽医》 2024年第5期19-22,共4页
研究旨在了解辽宁省以色列急性麻痹病毒(IAPV)的遗传进化特点。试验选取成年患病蜜蜂提取IAPV并进行PCR测序,选取China-BJ (GenBank登录号:KX421583.1)基因序列设计12对引物进行全基因克隆,将获得的基因序列与GenBank已公布的19株IAPV... 研究旨在了解辽宁省以色列急性麻痹病毒(IAPV)的遗传进化特点。试验选取成年患病蜜蜂提取IAPV并进行PCR测序,选取China-BJ (GenBank登录号:KX421583.1)基因序列设计12对引物进行全基因克隆,将获得的基因序列与GenBank已公布的19株IAPV序列进行遗传进化分析。结果显示:试验成功分离出IAPV,并将其命名为IAPV-LN株(GenBank登录号:MZ269472.1)。IAPV-LN株与China-BJ和China-BJ2 (GenBank登录号:MG599488.1)同属一个分支。研究表明,丹东市某蜂场患病蜜蜂中分离得到的IAPV-LN株与China-BJ2、China-BJ的亲缘关系最近,可能来自同一个原始毒株。 展开更多
关键词 以色列急性麻痹病毒 全基因克隆 遗传进化分析
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如何防治蜜蜂麻痹病 被引量：2
5
作者 成茹 《致富天地》 2005年第1期31-31,共1页
蜜蜂麻痹病，又叫黑蜂病、瘫痪病，是由慢性麻痹病毒或急性麻痹病毒引起的一种成年蜜蜂传染病。这种病传染快，病情重，比较顽固难治，对蜜蜂的危害很大。如不及时防治，轻则造成蜂蜜严重减产，重则会使蜜蜂出现大量死亡。
关键词 蜜蜂 麻痹病 防治 蜂箱清洁 药剂防治
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蜜蜂慢性麻痹病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立
6
作者 张体银 王武军 +3 位作者 林素洁 张志灯 李宋钰 于师宇 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第3期72-78,共7页
为建立慢性蜜蜂麻痹病毒(CBPV)快速诊断方法,本研究根据CBPV RNA依赖RNA聚合酶(RdRp)基因保守区设计特异性引物和TaqMan探针,建立了荧光定量RT-PCR检测方法。结果显示,以构建的重组质粒为标准品建立的TaqMan荧光定量PCR方法,标准曲线具... 为建立慢性蜜蜂麻痹病毒(CBPV)快速诊断方法,本研究根据CBPV RNA依赖RNA聚合酶(RdRp)基因保守区设计特异性引物和TaqMan探针,建立了荧光定量RT-PCR检测方法。结果显示,以构建的重组质粒为标准品建立的TaqMan荧光定量PCR方法,标准曲线具有良好的线性关系,线性相关系数达0.998;该方法最低检出限为10拷贝/μL,与蜜蜂急性麻痹病毒等常见蜜蜂病毒无交叉反应,具有良好的灵敏性和特异性;组内和组间变异系数分别低于0.5%和2%,具有较好的稳定性。本研究建立的CBPV荧光定量RT-PCR检测方法,可用于实验室检测、流行病学调查和疫情监测。 展开更多
关键词 蜜蜂慢性麻痹病毒 荧光定量RT-PCR RNA依赖RNA聚合酶
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中华蜜蜂欧洲幼虫腐臭病病原的药物试验研究 被引量：9
7
作者 周婷 冯峰 +1 位作者 董秉义 王风忠 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期283-288,共6页
本研究在对自然发病的中蜂欧洲幼虫腐臭病 (EFB)的病原蜂房蜜球菌进行分离鉴定的基础上 ,着重对蜂房蜜蜂球菌的敏感药物进行了筛选研究。研究分为三个层次 ,第一层 :临床常规用于蜂病防治的抗生素的研究 ;第二层 :中草药有效成份提取物... 本研究在对自然发病的中蜂欧洲幼虫腐臭病 (EFB)的病原蜂房蜜球菌进行分离鉴定的基础上 ,着重对蜂房蜜蜂球菌的敏感药物进行了筛选研究。研究分为三个层次 ,第一层 :临床常规用于蜂病防治的抗生素的研究 ;第二层 :中草药有效成份提取物的研究 ;第三层 :应用均匀设计原理进行中草药配方的研究。通过以上研究 ,拟对EFB防治药物的更新换代和“绿色蜂药”的使用打下基础。 展开更多
关键词 中华蜜蜂 欧洲幼虫腐臭病 蜂房蜜蜂 菌 药敏试验 均匀设计
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蜜蜂KBV和APV病毒RT-PCR检测技术研究 被引量：6
8
作者 周婷 姚军 +2 位作者 兰文升 温建新 王强 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期459-462,共4页
根据蜜蜂克什米尔病毒(Kashmirbeevirus,KBV)和急性麻痹病毒(Acuteparalysisvirus,APV)的RNA聚合酶基因序列,参照DonStoltz报道的引物KBV1、KBV2,美国农业部提供的引物DC62F、DC682R,对美国农业部惠赠的标准KBV和APV的RNA聚合酶基因片段... 根据蜜蜂克什米尔病毒(Kashmirbeevirus,KBV)和急性麻痹病毒(Acuteparalysisvirus,APV)的RNA聚合酶基因序列,参照DonStoltz报道的引物KBV1、KBV2,美国农业部提供的引物DC62F、DC682R,对美国农业部惠赠的标准KBV和APV的RNA聚合酶基因片段,以及2001-2002年收集到的中国21个省市的180份疑似KBV和APV病蜂RNA聚合酶基因片段进行RT-PCR。对以KBV1、KBV2和DC62F、DC682R为引物扩增出的RNA聚合酶基因片段进行克隆、转化,并对克隆结果测序,证明其可靠性。建立了用分子生物学方法检测蜜蜂KBV和APV病毒的技术,有一定的应用前景。检测结果表明:到目前为止,我国蜜蜂群中未发现KBV和APV病毒病。 展开更多
关键词 RT-PCR 检测技术 蜜蜂克什米尔病毒 蜜蜂急性麻痹病毒 口岸检疫 成蜂病
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感染意大利蜜蜂工蜂的东方蜜蜂微孢子虫及其纯化孢子的高表达基因分析 被引量：8
9
作者 熊翠玲 耿四海 +7 位作者 周丁丁 石彩云 郭意龙 陈大福 郑燕珍 徐国钧 张曦 郭睿 《上海交通大学学报（农业科学版）》 2019年第2期6-13,共8页
为探究东方蜜蜂微孢子虫(Nosema ceranae)在侵染意大利蜜蜂(Aips mellifera ligustica)过程的基因表达谱及高表基因(highly expressed gene,HEG)的功能,本研究利用RNA-seq技术对N.ceranae感染的意蜂工蜂7和10 d工蜂中肠(NcT1和NcT2)及... 为探究东方蜜蜂微孢子虫(Nosema ceranae)在侵染意大利蜜蜂(Aips mellifera ligustica)过程的基因表达谱及高表基因(highly expressed gene,HEG)的功能,本研究利用RNA-seq技术对N.ceranae感染的意蜂工蜂7和10 d工蜂中肠(NcT1和NcT2)及其纯化孢子(NcCK)进行高通量测序。根据FPKM值≧15的标准筛选出各组的HEG并进行Venn分析,进而通过GO分类和KEGG代谢通路富集分析对各组的共有HEG进行功能注释。测序得到的原始读段经严格质控后分别得到5 816 465、28 501 225和210 824 312条高质量的有效读段,分别从NcT1、NcT2和NcCK中筛选出1 263、1 233和1 511个HEG,其中有1 079个基因在各组均高量表达,分别有15和7个基因仅在NcT1和NcT2中高量表达。GO分类结果显示,共有HEG涉及9个生物学进程相关条目,10个细胞组分相关条目,以及5个分子功能相关条目。KEGG代谢通路富集分析结果表明,共有HEG富集在218条代谢通路,富集基因数最多的是核糖体、Epstein-Barr病毒感染、细胞周期、内质网蛋白加工和真菌核糖体生物合成。深入分析结果显示分别有5和5个共有HEG富集在MAPK和cAMP信号通路,表明此2条信号通路及富集的HEG可能在N.ceranae的环境应激和侵染过程中发挥重要作用。研究结果提供了N.ceranae感染意蜂工蜂过程中的基因表达谱,揭示了HEG的作用,为深入解析N.ceranae的侵染机制打下了初步基础。 展开更多
关键词 意大利蜜蜂 中肠 转录组 东方蜜蜂微孢子虫 高表达基因
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瓦螨(Varroa destructor)寄生密度与蜜蜂卷翅病毒动态复制相关性研究 被引量：5
10
作者 张炫 周丹银 +1 位作者 赵文正 和绍禹 《云南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期192-197,共6页
病毒复制动态变化对揭示病毒病致病的机理具有重要意义。本研究以蜜蜂卷翅病毒(deformed wing virus,简写为DWV)为模型,使用荧光反转录定量PCR方法检测DWV病毒隐性感染蜂群在体壁寄生螨侵袭压力下工蜂体内病毒基因表达量的变化动态,以... 病毒复制动态变化对揭示病毒病致病的机理具有重要意义。本研究以蜜蜂卷翅病毒(deformed wing virus,简写为DWV)为模型,使用荧光反转录定量PCR方法检测DWV病毒隐性感染蜂群在体壁寄生螨侵袭压力下工蜂体内病毒基因表达量的变化动态,以揭示外界生物压力与隐性感染蜜蜂体内病毒动态复制的相关性。结果显示:弱群势蜜蜂体内DWV基因表达量与引入瓦螨密度呈显著正相关(第3天:R2=0.82;第7天:R2=0.99;双向方差分析F=5.059,P=0.0171);在瓦螨密度增至30%,处理后第7天时DWV浓度达最大值;强群势的蜜蜂群体引入瓦螨后,蜜蜂体内DWV基因表达量在处理后第3天表现出与弱群相似的变化规律(R2=0.88;双向方差分析F=11.74,P=0.001 3),但在处理后第7天时,供试蜜蜂体内DWV浓度整体下降,且不同瓦螨处理水平试验组间的DWV浓度差异不明显(R2=0.66)。结果显示,强群势蜂群的工蜂可有效抑制病毒拷贝量的持续增长,从而表现较强抗病性,而弱群势蜜蜂因病毒动态复制的不可逆激增而导致病毒病暴发。该研究结果在一定程度上解释了弱群势蜜蜂高病毒病易感性和年周损失的原因。 展开更多
关键词 西方蜜蜂 卷翅病毒 瓦螨 蜂群群势
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意蜂来源的微孢子虫感染对中蜂工蜂血淋巴蛋白的影响 被引量：3
11
作者 黄少康 胡庆银 路贺然 《福建农林大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2008年第6期646-649,共4页
为探讨微孢子虫交叉感染对中蜂工蜂血淋巴蛋白的影响,用意蜂来源的微孢子虫经口侵染不同日龄的中蜂和意蜂工蜂,在(30±0.5)℃、60%-80%RH的温箱内,用蔗糖液隔离饲养8 d后,提取工蜂血淋巴,测量其蛋白含量,并对其进行了SDS-PAGE.结果... 为探讨微孢子虫交叉感染对中蜂工蜂血淋巴蛋白的影响,用意蜂来源的微孢子虫经口侵染不同日龄的中蜂和意蜂工蜂,在(30±0.5)℃、60%-80%RH的温箱内,用蔗糖液隔离饲养8 d后,提取工蜂血淋巴,测量其蛋白含量,并对其进行了SDS-PAGE.结果表明:(1)感染微孢子虫的8日龄中蜂及意蜂工蜂的血淋巴蛋白含量均比对照组高;而11、14日龄中蜂工蜂血淋巴蛋白含量均比对照组低.(2)无论感染与否,8日龄中蜂工蜂血淋巴蛋白含量均比同龄意蜂工蜂的高.(3)SDS-PAGE图谱显示,微孢子虫感染主要造成一些蛋白量上的差异.其中47、38、35 ku蛋白可能是8日龄意蜂工蜂感染微孢子虫后出现的特征条带. 展开更多
关键词 微孢子虫属 血淋巴 中华蜜蜂 意大利蜜蜂 交叉感染
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大蜡螟气味受体基因Gmel/Orco的克隆与序列分析 被引量：1
12
作者 杨爽 赵慧婷 +6 位作者 宋文菲 孟娇 杨珊珊 杜亚丽 潘建芳 王树杰 姜玉锁 《环境昆虫学报》 CSCD 北大核心 2016年第4期798-804,共7页
为进一步研究大蜡螟嗅觉通讯分子机制和寻求新的大蜡螟防治技术,本研究克隆了大蜡螟Galleria mellonella L.的气味受体基因Gmel/Orco,并对其序列进行生物信息学分析。根据GenBank中已发表的鳞翅目昆虫非典型气味受体家族基因的氨基酸保... 为进一步研究大蜡螟嗅觉通讯分子机制和寻求新的大蜡螟防治技术,本研究克隆了大蜡螟Galleria mellonella L.的气味受体基因Gmel/Orco,并对其序列进行生物信息学分析。根据GenBank中已发表的鳞翅目昆虫非典型气味受体家族基因的氨基酸保守序列设计简并引物,采用RT-PCR方法扩增目的基因,将其克隆至T载体并测序。克隆获得大蜡螟气味受体Orco的cDNA序列,命名为Gmel/Orco(GenBank登录号:KT020861),序列分析结果显示,Gmel/Orco开放阅读框长1425 bp,编码474个氨基酸,分子量为53.36 k D,等电点为8.44,序列中有7个跨膜区,N-端在细胞膜内,C-端在细胞膜外。通过在Gen Bank中进行序列的同源性比较,该基因与已公布的鳞翅目螟蛾科、夜蛾科昆虫的非典型气味受体基因序列有较高的同源性。克隆所获得的基因属于非典型气味受体家族基因。 展开更多
关键词 大蜡螟 气味受体 基因克隆 序列对比
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东方蜜蜂微孢子虫一新型孢壁蛋白的基因克隆、表达及亚细胞定位 被引量：2
13
作者 熊亮 敖塘堰 +2 位作者 张真 马振刚 周泽扬 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第9期1070-1079,共10页
【目的】微孢子虫(Microsporidia)孢壁在孢子构成及孢子侵染宿主过程中扮演重要的角色。本研究旨在鉴定获得的东方蜜蜂微孢子虫Nosema ceranae新型孢壁蛋白,并进行基因克隆和原核表达,明确其亚细胞定位。【方法】通过在线软件对东方蜜... 【目的】微孢子虫(Microsporidia)孢壁在孢子构成及孢子侵染宿主过程中扮演重要的角色。本研究旨在鉴定获得的东方蜜蜂微孢子虫Nosema ceranae新型孢壁蛋白,并进行基因克隆和原核表达,明确其亚细胞定位。【方法】通过在线软件对东方蜜蜂微孢子虫新型孢壁蛋白AAJ76_1400036761序列进行生物信息学分析。利用PCR法获取目的片段并将其克隆至原核表达载体pCold II中,利用IPTG诱导表达重组蛋白并通过镍柱亲和层析法纯化目的蛋白。以获得的重组蛋白为抗原免疫小鼠制备多克隆抗体,通过间接免疫荧光技术和免疫胶体金定位技术对该蛋白进行亚细胞定位分析;利用蛋白质免疫印迹法检测该蛋白与东方蜜蜂微孢子虫几丁质壳的互作。【结果】在MicrosporidiaDB数据库中获得AAJ76_1400036761基因序列,基因全长681 bp,编码226个氨基酸;预测等电点为6.84,分子量为26.19 kD。SDS-PAGE电泳和Western blot结果表明AAJ76_1400036761重组蛋白能够在大肠杆菌Eescherichia coli Rosetta中高量表达。Western blot结果表明,制备的多克隆抗体能够特异地识别东方蜜蜂微孢子虫总蛋白中的AAJ76_1400036761,说明其在成熟东方蜜蜂微孢子虫中有表达。亚细胞定位结果显示,AAJ76_1400036761定位于东方蜜蜂微孢子虫孢壁上。重组蛋白AAJ76_1400036761能够与蜜蜂微孢子虫的几丁质壳结合。【结论】AAJ76_1400036761蛋白在东方蜜蜂微孢子虫成熟孢子中有表达;该蛋白定位于东方蜜蜂微孢子虫孢壁上,为东方蜜蜂微孢子虫新的孢壁蛋白。本研究为深入研究该蛋白的生物学功能奠定了基础。 展开更多
关键词 东方蜜蜂微孢子虫 孢壁蛋白 原核表达 多克隆抗体 亚细胞定位
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东方蜜蜂微孢子虫一新孢壁蛋白NcER_100148的鉴定与生物学功能研究 被引量：1
14
作者 敖塘堰 王静琳 +1 位作者 马振刚 周泽扬 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期747-758,共12页
【目的】东方蜜蜂微孢子虫Nosema ceranae作为蜜蜂微孢子虫病的主要病原体,对其侵染机制的相关研究鲜有报道。本研究旨在对团队前期通过质谱鉴定获得的东方蜜蜂微孢子虫候选孢壁蛋白NcER_100148进行原核表达,明确其亚细胞定位,并初步探... 【目的】东方蜜蜂微孢子虫Nosema ceranae作为蜜蜂微孢子虫病的主要病原体,对其侵染机制的相关研究鲜有报道。本研究旨在对团队前期通过质谱鉴定获得的东方蜜蜂微孢子虫候选孢壁蛋白NcER_100148进行原核表达,明确其亚细胞定位,并初步探索其生物学功能。【方法】通过在线软件对前期鉴定的东方蜜蜂微孢子虫候选孢壁蛋白NcER_100148序列进行生物信息学分析;利用RT-PCR检测东方蜜蜂微孢子虫侵染后西方蜜蜂Apis mellifera成蜂中肠中NcER_100148的表达量;将NcER_100148基因片段克隆至原核表达载体pET30a中,IPTG诱导表达重组蛋白并用于制备多克隆抗体;利用Western blot检测NcER_100148在东方蜜蜂微孢子虫成熟孢子中的表达量;通过间接免疫荧光和免疫电镜技术分析NcER_100148在东方蜜蜂微孢子虫成熟孢子中的亚细胞定位;利用Western blot和免疫共沉淀法分别分析重组蛋白NcER_100148与东方蜜蜂微孢子虫几丁质孢子壳(chitin spore coats,CSCs)和极管蛋白NcPTP2和NcPTP3的相互作用关系。【结果】序列分析结果表明,东方蜜蜂微孢子虫NcER_100148预测分子量为12.169 kD,含1个O-糖基化位点、1个N-糖基化位点和1个糖基磷脂酰肌醇(glycosylphosphatidylinositol,GPI)锚定位点;RT-PCR检测结果表明,NcER_100148在东方蜜蜂微孢子虫感染后4 d时的西方蜜蜂成蜂中肠中开始表达;Western blot结果表明,NcER_100148蛋白能在成熟孢子表面表达,并且能够与东方蜜蜂微孢子虫的CSCs互作;亚细胞定位结果显示NcER_100148定位于东方蜜蜂微孢子虫的成熟孢子孢壁上;Western blot和免疫共沉淀结果显示重组蛋白NcER_100148能够与极管蛋白NcPTP2和NcPTP3相互作用。【结论】NcER_100148是定位在东方蜜蜂微孢子虫的成熟孢子孢壁上的一个新型孢壁蛋白,且其可能在孢子内壁的构建、极管的盘绕与固定和参与对宿主的侵染等过程中扮演重要的角色。 展开更多
关键词 东方蜜蜂微孢子虫 孢壁蛋白 亚细胞定位 几丁质孢子壳 极管蛋白 互作
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东方蜜蜂微孢子虫侵染意大利蜜蜂工蜂过程中nce-miR-10660及其靶基因表达谱 被引量：4
15
作者 张凯遥 张文德 +9 位作者 王紫馨 胡颖 钱加珺 王思懿 赵浩东 顾小雨 牛庆生 付中民 陈大福 郭睿 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期181-189,共9页
【目的】本研究旨在为探究nce-miR-10660调控东方蜜蜂微孢子虫Nosema ceranae侵染的作用机制提供理论和实验依据。【方法】采用Stem-loop RT-PCR对前期鉴定到的东方蜜蜂微孢子虫nce-miR-10660进行表达验证,再通过Sanger测序验证nce-miR-... 【目的】本研究旨在为探究nce-miR-10660调控东方蜜蜂微孢子虫Nosema ceranae侵染的作用机制提供理论和实验依据。【方法】采用Stem-loop RT-PCR对前期鉴定到的东方蜜蜂微孢子虫nce-miR-10660进行表达验证,再通过Sanger测序验证nce-miR-10660的序列。利用相关生物信息学软件预测和分析nce-miR-10660的靶基因。通过RT-qPCR检测nce-miR-10660及其靶基因在东方蜜蜂微孢子虫侵染意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica工蜂过程中中肠中的表达谱。【结果】Stem-loop RT-PCR和Sanger测序结果分别证实了nce-miR-10660在东方蜜蜂微孢子虫孢子中的表达和真实存在。靶向预测结果显示nce-miR-10660共靶向RRDRP和RCDP 42等9个基因;分别有2和6个靶基因可被分别注释到KEGG数据库中的4条通路和GO数据库中的23个条目。RT-qPCR结果显示,相较于东方蜜蜂微孢子虫侵染后1 d时意大利蜜蜂工蜂中肠中nce-miR-10660的表达量,东方蜜蜂微孢子虫侵染后2 d时意大利蜜蜂工蜂中肠中nce-miR-10660的表达量显著上调,在东方蜜蜂微孢子虫侵染后4,6和8 d时意大利蜜蜂工蜂中肠中nce-miR-10660的表达量均显著下调;东方蜜蜂微孢子虫侵染后4,6和8 d时意大利蜜蜂工蜂中肠中靶基因RRDRP的表达量均显著下调表达;东方蜜蜂微孢子虫侵染后2,4,6和8 d时意大利蜜蜂工蜂中肠中靶基因RCDP 42的表达量显著下调。【结论】nce-miR-10660在东方蜜蜂微孢子虫孢子中真实存在和表达;nce-miR-10660及其靶向的RRDRP和RCDP 42在东方蜜蜂微孢子虫侵染意大利蜜蜂工蜂过程中差异表达;nce-miR-10660通过正调控RRDRP和RCDP 42表达潜在参与调节东方蜜蜂微孢子虫侵染。 展开更多
关键词 东方蜜蜂微孢子虫 意大利蜜蜂 nce-miR-10660 靶基因 表达谱
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微孢子虫的侵染机制 被引量：12
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作者 黄少康 鲁兴萌 《中国养蜂》 2005年第12期7-9,共3页
蜂微孢子虫病是蜜蜂的检疫性病害,该病严重阻碍了蜂群的生产繁殖。微孢子虫孢子侵入寄主细胞有3种方式:发芽侵染、自发感染、细胞内吞感染,又以发芽侵染为主。微孢子虫孢子表面蛋白与孢子发芽密切有关,找到孢子表面发芽关键蛋白将有助... 蜂微孢子虫病是蜜蜂的检疫性病害,该病严重阻碍了蜂群的生产繁殖。微孢子虫孢子侵入寄主细胞有3种方式:发芽侵染、自发感染、细胞内吞感染,又以发芽侵染为主。微孢子虫孢子表面蛋白与孢子发芽密切有关,找到孢子表面发芽关键蛋白将有助于揭示微孢子虫的侵染机制。 展开更多
关键词 微孢子虫 发芽
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慢性蜜蜂麻痹病的分布危害及季节特征和防治药物 被引量：4
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作者 冯峰 陈淑静 《中国养蜂》 1990年第1期5-6,共2页
慢性蜜蜂麻痹病是一种危害成年蜂的病毒病,世界许多国家普遍都有此病分布,1982～1985年调查表明,在我国,慢性麻痹病的发病率占成年蜂病的66.8％。该病严重影响密蜂的寿命,造成蜂群群势下降,蜂蜜和王浆产量降低。发病与季节关系密切,一... 慢性蜜蜂麻痹病是一种危害成年蜂的病毒病,世界许多国家普遍都有此病分布,1982～1985年调查表明,在我国,慢性麻痹病的发病率占成年蜂病的66.8％。该病严重影响密蜂的寿命,造成蜂群群势下降,蜂蜜和王浆产量降低。发病与季节关系密切,一年之中,以春、秋季节发病为重。应用“抗蜂病毒一号”药物防治该病,对蜜蜂安全,疗效达90％以上,现已在全国推广,经济效益和社会效益显著。 展开更多
关键词 慢性蜜蜂麻痹病病毒 地理分布 季节特征 药物 防治
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浅述蜜蜂慢性麻痹病的综合防治 被引量：1
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作者 徐士磊 石丽萍 杨术环 《现代畜牧兽医》 2006年第11期34-34,共1页
关键词 麻痹病 蜜蜂 综合防治 慢性 秋末冬初 春末夏初 西部地区 产品产量
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以色列急性麻痹病毒Taq Man荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用 被引量：5
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作者 张体银 黄嫦娇 +4 位作者 田国宁 侯义宏 王武军 张志灯 林素洁 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第12期1287-1292,共6页
为建立以色列急性麻痹病毒(IAPV)荧光定量RT-PCR检测方法,本研究根据GenBank中IAPV RNA依赖的RNA聚合酶(RdRp)基因保守区域序列设计了一对特异性引物和一条特异性探针,以体外转录制备的重组质粒标准品为模板,经过反应条件优化,建立了IAP... 为建立以色列急性麻痹病毒(IAPV)荧光定量RT-PCR检测方法,本研究根据GenBank中IAPV RNA依赖的RNA聚合酶(RdRp)基因保守区域序列设计了一对特异性引物和一条特异性探针,以体外转录制备的重组质粒标准品为模板,经过反应条件优化,建立了IAPV荧光定量RT-PCR检测方法,并对其进行了特异性、敏感性、重复性试验;利用所建立的方法对70份福建地区临床疑似IAPV感染的蜜蜂样品进行检测,并对阳性样品进行测序验证。结果显示,荧光定量RT-PCR方法的最佳引物和探针浓度分别为0.25μmol/L和0.20μmol/L,最佳退火温度为61℃。该方法仅对IAPV出现阳性扩增信号,对蜜蜂克什米尔病毒、蜜蜂慢性麻痹病毒、蜜蜂残翅病毒、蜜蜂急性麻痹病毒、蜜蜂黑蜂王台病毒、蜜蜂囊状幼虫病毒等6种病毒均未出现扩增,特异性较强;该方法对重组质粒标准品的最低检测限为9.7拷贝/μL,比普通RT-PCR敏感性高约100倍;该方法批内及批间变异系数均小于1.5%,重复性好。利用该方法和普通RT-PCR方法分别对70份临床样品进行检测,结果显示,两种方法的阳性检出率分别为31.4%(22/70)和27.1(19/70),二者的符合率为95.9%。本研究首次建立的IAPV Taq Man荧光定量RTPCR检测方法快速、敏感,检测结果准确可靠,为IAPV的流行病学调查及其分子生物学的快速检测奠定了基础。 展开更多
关键词 以色列急性麻痹病毒 荧光定量RT-PCR RNA依赖的RNA聚合酶
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中华蜜蜂工蜂中肠响应东方蜜蜂微孢子虫胁迫的高表达基因分析 被引量：3
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作者 付中民 周丁丁 +7 位作者 陈华枝 耿四海 陈大福 郑燕珍 熊翠玲 徐国钧 张曦 郭睿 《四川大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期191-198,共8页
为探究高表达基因(highly expressed gene,HEG)在中华蜜蜂(Apis cerana cerana,简称中蜂)工蜂中肠响应东方蜜蜂微孢子虫(Nosema ceranae)胁迫过程的表达谱及作用,利用RNA-seq技术对正常中蜂工蜂中肠(Ac7CK和Ac10CK)及N.ceranae胁迫7 d和... 为探究高表达基因(highly expressed gene,HEG)在中华蜜蜂(Apis cerana cerana,简称中蜂)工蜂中肠响应东方蜜蜂微孢子虫(Nosema ceranae)胁迫过程的表达谱及作用,利用RNA-seq技术对正常中蜂工蜂中肠(Ac7CK和Ac10CK)及N.ceranae胁迫7 d和10 d的中肠(Ac7T和Ac10T)进行深度测序、生物信息学分析和分子生物学验证.共测得1809736786条raw reads,经质控得到1562162742条clean reads.Ac7CK、Ac7T、Ac10CK和Ac10T的共有HEG为2074个,特有HEG分别为89、283、156和78个.Ac7T和Ac10T的特有HEG分别涉及35和28个功能条目,以及39和37条代谢通路.RT-PCR结果证实了8个共有HEG的真实表达.上述结果表明,宿主的物质和能量代谢、细胞和体液免疫均受到不同程度的激活,二者间存在密切的相互作用.研究结果解析了中蜂工蜂中肠响应N.ceranae胁迫的HEG表达谱及潜在作用. 展开更多
关键词 中华蜜蜂 高表达基因 东方蜜蜂微孢子虫 中肠 胁迫
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