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中华蜜蜂囊状幼虫病的诊断和防治研究进展 被引量：1
1
作者 李爱芳 王倩芳 +3 位作者 王孜龙 李亚兰 徐朋 冯书营 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第2期864-873,共10页
中华蜜蜂囊状幼虫病(Chinese sacbrood disease, CSBD)是由中华蜜蜂囊状幼虫病病毒(Chinese sacbrood virus, CSBV)引起的一种病毒性疾病。该病对蜂群危害严重,传染性强,死亡率高达100%,给中国养蜂业造成了巨大的经济损失。尽管实际生... 中华蜜蜂囊状幼虫病(Chinese sacbrood disease, CSBD)是由中华蜜蜂囊状幼虫病病毒(Chinese sacbrood virus, CSBV)引起的一种病毒性疾病。该病对蜂群危害严重,传染性强,死亡率高达100%,给中国养蜂业造成了巨大的经济损失。尽管实际生产中采用了多种方法和措施对该病进行预防和治疗,但实际效果欠佳。针对CSBV的检测技术发展迅速,尤其是分子生物学检测手段的更新,使得检测结果的准确性和特异性大大提高。鉴于卵黄抗体(egg yolk antibodies, EYA)在多种病毒性疾病中的应用效果显著,对于CSBD的防治有着潜在的应用开发价值。笔者综述了CSBD诊断和防治的最新研究进展,总结了EYA抗体药物的治疗应用现状。此外,在剖析EYA药物优缺点的基础上,提出了多种EYA协同增效的策略,并从多个方面如新型抗体药物的开发、新型中药单体/配方的鉴定、核苷酸药物的开发等对抗CSBV的研究前景进行望,以期为蜂业病毒性疾病的防控提供参考。 展开更多
关键词 中华蜜蜂囊状幼虫病病毒(CSBV) 诊断 防治 卵黄抗体(EYA)
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一种新的蜜蜂细菌性幼虫病病原的分离鉴定 被引量：9
2
作者 戎映君 苏松坤 +1 位作者 陈集双 陈盛禄 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期994-998,共5页
2005年早春,在浙江部分地区出现了一种严重的蜜蜂细菌性幼虫病,该病导致蜜蜂幼虫颜色发黄,失去光泽;严重时幼虫死亡腐烂。从10批发病死亡幼虫样品中,分离得到并保存了5类纯培养物。通过蜂群接种试验和实验室人工培养的幼虫接种,确定L2... 2005年早春,在浙江部分地区出现了一种严重的蜜蜂细菌性幼虫病,该病导致蜜蜂幼虫颜色发黄,失去光泽;严重时幼虫死亡腐烂。从10批发病死亡幼虫样品中,分离得到并保存了5类纯培养物。通过蜂群接种试验和实验室人工培养的幼虫接种,确定L2菌株能引起与自然发病相似的症状,且能从接种发病的幼虫上再次分离到相同菌株,证明L2菌株是该蜜蜂细菌性幼虫病的致病菌。进一步对分离到的该致病菌从发病特征、病原形态学、生理生化特性、16SrRNA序列等方面进行了分析鉴定,结果显示:该菌株属于肠球菌属的屎肠球菌(Enterococcusfaecium),不是目前报道的任何一种已知蜜蜂细菌性幼虫病的病原。 展开更多
关键词 蜜蜂细菌性幼虫病 病原 鉴定 屎肠球菌
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蜜蜂残翼病RT-PCR快速检测方法的建立 被引量：3
3
作者 薛力刚 王振国 +2 位作者 宋战昀 周亮 刘金华 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第10期91-93,共3页
为了建立蜜蜂残翼病病毒(Deformed wing virus,DWV)RT-PCR快速检测方法,试验采用GenBank公布的蜜蜂残翼病病毒全基因序列设计1对特异性引物,对所提取的RNA进行反转录合成cDNA后,进行聚合酶链式反应,并对这种快速检测方法的特异性和敏感... 为了建立蜜蜂残翼病病毒(Deformed wing virus,DWV)RT-PCR快速检测方法,试验采用GenBank公布的蜜蜂残翼病病毒全基因序列设计1对特异性引物,对所提取的RNA进行反转录合成cDNA后,进行聚合酶链式反应,并对这种快速检测方法的特异性和敏感性进行研究。结果表明:在约702 bp处出现目的条带,其他病原无目的条带出现,灵敏性可达1×104的模板稀释度。 展开更多
关键词 蜜蜂残翼病 RT—PCR 检测
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中蜂囊状幼虫病病毒检测及地区间遗传变异 被引量：2
4
作者 宋文菲 张学文 +3 位作者 张祖芸 王艳辉 黄平 罗卫庭 《中国农学通报》 CSCD 2013年第17期42-46,共5页
为了摸清云南蒙自地区整个中蜂场春繁季节中蜂囊状幼虫病病毒(CSBV)的感染及其病毒株分化情况。运用RT-PCR对57群滇南中蜂进行CSBV带毒率检测和遗传变异分析。结果表明:该蜂场有26群滇南中蜂感染CSBV,感染率为45.6%,其中隐性感染为31.5... 为了摸清云南蒙自地区整个中蜂场春繁季节中蜂囊状幼虫病病毒(CSBV)的感染及其病毒株分化情况。运用RT-PCR对57群滇南中蜂进行CSBV带毒率检测和遗传变异分析。结果表明:该蜂场有26群滇南中蜂感染CSBV,感染率为45.6%,其中隐性感染为31.57%,显性感染为14.04%。所选用的2对引物均能较好地对滇南中蜂CSBV进行分子识别鉴定,其中第二对引物更适合;种群间RNA序列变异分析表明:云南种群与重庆种群聚为一个分支,遗传距离为0.014。说明春繁季节是云南蒙自地区滇南中蜂CSBV发生的重要时段,应提早采取预防措施;CSBV病毒株在不同地区存在分化现象,云南种群与重庆种群遗传关系较近,推测CSBV地理距离与遗传距离可能有关系。 展开更多
关键词 滇南中蜂 中蜂囊状幼虫病病毒 春繁季节 感染率 遗传距离
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浙江省淳安县中华蜜蜂囊状幼虫病毒与蜂房球菌感染情况调查 被引量：2
5
作者 王德前 黄敏婕 +3 位作者 郭海坤 方勐鸽 李君竹 董捷 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期389-394,共6页
为了解浙江省淳安县中华蜜蜂囊状幼虫病和欧洲幼虫腐臭病病原[中蜂囊状幼虫病毒(Chinese sacbrood virus,CSBV)和蜂房球菌(Melissococcus pluton)]全年流行情况,于2019年1月—12月采集淳安县5个饲养点的中蜂工蜂,并采用聚合酶链式反应... 为了解浙江省淳安县中华蜜蜂囊状幼虫病和欧洲幼虫腐臭病病原[中蜂囊状幼虫病毒(Chinese sacbrood virus,CSBV)和蜂房球菌(Melissococcus pluton)]全年流行情况,于2019年1月—12月采集淳安县5个饲养点的中蜂工蜂,并采用聚合酶链式反应检测方法,监测这2种病原在蜂群内的动态变化情况。结果显示:CSBV蜂群感染率在春季3月最高,为84%,到夏季7月降到最低,又从秋季开始升高,一直延续到冬季;蜂房球菌感染率从春季开始升高,到夏季开始下降,又从秋季开始升高,在10月和11月达到全年最高水平,为72%,冬季略有下降;在一年当中,蜂群内中蜂囊状幼虫病和欧洲幼虫腐臭病病原具有共同存在的现象;通过实时荧光定量聚合酶链式反应检测发现,秋季蜂房球菌存在的蜂群内CSBV载量显著高于单一检出CSBV的蜂群(P<0.05)。总之,本研究明确了浙江省淳安县中蜂2种主要病原在蜂群中的全年流行动态情况,可为该地区中蜂病害的预防和控制提供理论指导。 展开更多
关键词 中华蜜蜂囊状幼虫病 欧洲幼虫腐臭病 流行病学 淳安县 病原共存
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蜜蜂传染性疾病的实验室诊断技术 被引量：2
6
作者 任勤 戴荣国 +2 位作者 郭军 王瑞生 姬聪慧 《四川畜牧兽医》 2011年第8期30-32,共3页
蜜蜂传染性疾病都具有一定的潜伏期或隐性感染,只有在一定条件下才表现出症状,一旦内外环境适应病原的生存和发展,便会引起病害的流行。本文主要对蜜蜂传染性病原的体外培养镜检、免疫学及分子生物学的实验室诊断方法及最新研究进展、... 蜜蜂传染性疾病都具有一定的潜伏期或隐性感染,只有在一定条件下才表现出症状,一旦内外环境适应病原的生存和发展,便会引起病害的流行。本文主要对蜜蜂传染性病原的体外培养镜检、免疫学及分子生物学的实验室诊断方法及最新研究进展、发展趋势等进行综述。 展开更多
关键词 蜜蜂 实验室诊断 传染性疾病
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蜜蜂病毒性疾病的综合预防措施
7
作者 郝连声 邵希荣 +6 位作者 任福生 刘学才 常德生 刘金平 孙建福 付世范 张登祥 《吉林农业》 2004年第9期25-25,共1页
蜜蜂和自然界其它生物一样,都会受到病原微生物的侵袭,感染各种各样的疾病.其中包括蜜蜂病毒性疾病.侵袭蜜蜂的病毒大都属于肠道病毒属和虹彩病毒属的病毒.蜜蜂感染这些致病性病毒后,使幼虫和成蜂发病死亡.造成蜂群群势下降,生产性能低... 蜜蜂和自然界其它生物一样,都会受到病原微生物的侵袭,感染各种各样的疾病.其中包括蜜蜂病毒性疾病.侵袭蜜蜂的病毒大都属于肠道病毒属和虹彩病毒属的病毒.蜜蜂感染这些致病性病毒后,使幼虫和成蜂发病死亡.造成蜂群群势下降,生产性能低下.例如,蜜蜂囊状幼虫病、蜜蜂麻痹病. 展开更多
关键词 蜜蜂 病毒性疾病 综合预防 蜂王 饲养
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蜜蜂球囊菌基因结构优化及新基因鉴定 被引量：9
8
作者 郭睿 陈华枝 +7 位作者 童新宇 熊翠玲 郑燕珍 付中民 解彦玲 王海朋 赵红霞 陈大福 《中国农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期61-68,共8页
为补充和完善蜜蜂球囊菌Ascosphaera apis基因组序列和功能注释信息,本研究利用RNA-seq技术对球囊菌菌丝和孢子进行深度测序,并基于高质量的转录组数据对已注释基因进行结构优化,对未注释基因进行预测、鉴定和分析。将测序得到的有效读... 为补充和完善蜜蜂球囊菌Ascosphaera apis基因组序列和功能注释信息,本研究利用RNA-seq技术对球囊菌菌丝和孢子进行深度测序,并基于高质量的转录组数据对已注释基因进行结构优化,对未注释基因进行预测、鉴定和分析。将测序得到的有效读段进行参考基因组比对和转录本重构;利用Cuffcompare软件将重构转录本与参考基因组进行比对。结果表明:共对101个已注释基因的5′端或3′端进行了延长;共鉴定出373个新基因,随机挑选10个新基因进行RT-PCR验证,其中8个能扩增出符合预期的目的片段,表明预测出的多数新基因真实存在;共计147个球囊菌新基因可注释到Nr和eggNOG数据库中,85个新基因注释到29个GO条目,66个新基因注释到33条代谢通路。本研究结果补充了球囊菌的基因结构和功能注释信息,也为新基因的功能研究打下了初步基础。 展开更多
关键词 蜜蜂球囊菌 转录组 已注释基因 结构优化 新基因
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中蜂囊状幼虫病毒的纯化、结晶与结构研究 被引量：19
9
作者 冯建勋 张勤奋 +3 位作者 马泽微 张景强 黄文忠 张学峰 《电子显微学报》 CAS CSCD 1998年第4期387-388,共2页
中蜂囊状幼虫病毒的纯化、结晶与结构研究冯建勋卢火斤英张勤奋马泽微张景强黄文忠＊张学峰＊（中山大学昆虫研究所生物防治国家重点实验室，广州５１０２７５）（＊广东省昆虫研究所蜜蜂组，广州５１０２６０）＊国家自然科学基金重点... 中蜂囊状幼虫病毒的纯化、结晶与结构研究冯建勋卢火斤英张勤奋马泽微张景强黄文忠＊张学峰＊（中山大学昆虫研究所生物防治国家重点实验室，广州５１０２７５）（＊广东省昆虫研究所蜜蜂组，广州５１０２６０）＊国家自然科学基金重点项目资助中蜂囊状幼虫病是中峰生产中... 展开更多
关键词 中蜂囊状幼虫病 病毒 蜜蜂 电镜
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中蜂囊状幼虫病病毒结构蛋白的表达及其抗血清的制备 被引量：9
10
作者 沈克飞 张邑帆 +4 位作者 曹兰 王瑞生 杨金龙 杨柳 戴荣国 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2013年第1期89-92,共4页
目的原核表达中蜂囊状幼虫病病毒(Chinese sarbood virus,CSBV)结构蛋白,并制备其抗血清。方法采用RT-PCR法扩增CSBV结构蛋白基因片段,克隆至pGEX-4T-1载体中,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达的重组蛋白经Gluthathione-Sephar... 目的原核表达中蜂囊状幼虫病病毒(Chinese sarbood virus,CSBV)结构蛋白,并制备其抗血清。方法采用RT-PCR法扩增CSBV结构蛋白基因片段,克隆至pGEX-4T-1载体中,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达的重组蛋白经Gluthathione-Sepharose 4B亲和层析纯化后,免疫小鼠,制备抗血清,并进行Western blot鉴定。结果重组表达质粒经菌落PCR鉴定证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约52 000,以可溶性形式表达;纯化后纯度可达95%以上;制备的抗血清可识别天然CSBV结构蛋白。结论成功在大肠杆菌中表达了CSBV结构蛋白,并制备了其抗血清,为进一步研究囊状幼虫病病毒与宿主的相互作用及开发血清学诊断方法奠定了基础。 展开更多
关键词 囊状幼虫病病毒 病毒结构蛋白质类 基因表达 抗血清
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高效液相色谱法对农产品中黄曲霉毒素的测定研究 被引量：27
11
作者 马良 李培武 张文 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期774-778,共5页
采用免疫亲和方法进行样品前处理，用甲醇一乙腈一水三元流动相体系分离黄曲霉毒素，氯化汞溶液在线衍生，荧光检测器检测，建立了新型的高效液相色谱柱后衍生测定黄曲霉毒素（B1、B2、G1、G2、M1）的方法。该方法在13min内完成测定，... 采用免疫亲和方法进行样品前处理，用甲醇一乙腈一水三元流动相体系分离黄曲霉毒素，氯化汞溶液在线衍生，荧光检测器检测，建立了新型的高效液相色谱柱后衍生测定黄曲霉毒素（B1、B2、G1、G2、M1）的方法。该方法在13min内完成测定，线性关系良好，5种黄曲霉毒素的线性相关系数r值均大于0．999。方法成功应用于花生、花生制品、大米、玉米等农产品。对样品进行不同水平的加标回收实验，回收率为83％-100％，相对标准偏差1．51％-4．98％（12=7），B，检出限（S／N=3）和定量下限（S／N=10）分别达到了0．05μg/kg和0．17μg/kg。 展开更多
关键词 黄曲霉毒素 高效液相色谱 柱后衍生 氯化汞
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蜜蜂囊状幼虫病研究进展 被引量：13
12
作者 李薇 薛菲 +4 位作者 Wubie Abebe Jenberie 黄家兴 国占宝 周婷 徐书法 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第6期117-122,共6页
蜜蜂囊状幼虫病是由蜜蜂囊状幼虫病毒(Sacbrood virus,SBV)引起的一种病毒病,对蜂群危害极其严重,对我国本土蜂种的中华蜜蜂危害更甚。到目前为止,我国有20多个省发现中华蜜蜂感染此病,病害侵袭极其严重。由于该病无特效药物可以治疗,... 蜜蜂囊状幼虫病是由蜜蜂囊状幼虫病毒(Sacbrood virus,SBV)引起的一种病毒病,对蜂群危害极其严重,对我国本土蜂种的中华蜜蜂危害更甚。到目前为止,我国有20多个省发现中华蜜蜂感染此病,病害侵袭极其严重。由于该病无特效药物可以治疗,我国部分省份的部分地区由于囊状幼虫病的大流行已经导致该地区中华蜜蜂饲养数量几乎为零,给当地的蜂业生产带来巨大损失。论文从蜜蜂囊状幼虫病的流行规律、病毒的生物学特性、病害诊断方法和蜜蜂抗性机理四个方面对蜜蜂囊状幼虫病研究进展进行概述,旨在为今后有效防控蜜蜂囊状幼虫病提供参考。 展开更多
关键词 蜜蜂 囊状幼虫病 诊断方法 流行
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营养生态条件对蜜蜂球囊菌生长及产孢的影响 被引量：17
13
作者 梁勤 陈大福 王建鼎 《中国生态农业学报》 CAS CSCD 2001年第4期31-34,共4页
从碳源、氮源、维生素、矿质元素等方面研究了营养生态条件对蜜蜂球囊菌(Ascosphaera apis Olive＆Spiltoir)生长及产孢的影响。结果表明,营养生态条件的变化对蜜蜂球囊菌的影响极大。A.apis菌丝体生长最好的碳源是果糖,产孢量最高的是... 从碳源、氮源、维生素、矿质元素等方面研究了营养生态条件对蜜蜂球囊菌(Ascosphaera apis Olive＆Spiltoir)生长及产孢的影响。结果表明,营养生态条件的变化对蜜蜂球囊菌的影响极大。A.apis菌丝体生长最好的碳源是果糖,产孢量最高的是葡萄糖,不利用山梨糖和甘露糖;该菌优先利用有机氮源,不利用无机氮源中NaNO_2、H_2NCSNH_2;维生素对A.apis产孢量有极为显著的影响,复合维生素比单一维生素能更好地促进菌丝体生长,尤其对产孢更为有利;矿质元素中Mg^(2+)、P^(5+)、K^+、Zn^(2+)促进菌丝体生长和孢子的形成,Na^+对菌丝体的生长有抑制作用。 展开更多
关键词 蜜蜂球囊菌 营养生态 菌丝体生长 产孢 蜜蜂病害 白垩病
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蜜蜂球囊菌分泌多种胞外酶侵染蜜蜂幼虫 被引量：12
14
作者 郑志阳 李江红 +1 位作者 梁勤 陈大福 《福建农林大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2011年第3期280-284,共5页
对健康和患病蜜蜂幼虫血淋巴进行SDS-PAGE电泳和蛋白酶、酯酶的活性染色,以研究蜜蜂球囊菌分泌的胞外酶种类及对蜜蜂侵染的作用.结果表明:健康蜜蜂幼虫血淋巴中的蛋白含量丰富,主要由4种高分子质量的蛋白组成,而患病幼虫血淋巴中的蛋白... 对健康和患病蜜蜂幼虫血淋巴进行SDS-PAGE电泳和蛋白酶、酯酶的活性染色,以研究蜜蜂球囊菌分泌的胞外酶种类及对蜜蜂侵染的作用.结果表明:健康蜜蜂幼虫血淋巴中的蛋白含量丰富,主要由4种高分子质量的蛋白组成,而患病幼虫血淋巴中的蛋白含量很少,主要蛋白组分被降解;在患病幼虫血淋巴中可以检测到健康幼虫所没有的多种蛋白酶和酯酶的活性.可见,蜜蜂球囊菌在侵染蜜蜂幼虫的过程中涉及到胞外酶的作用,这些胞外酶参与降解蜜蜂的组织,为蜜蜂球囊菌的生长提供营养. 展开更多
关键词 蜜蜂球囊菌 侵染 胞外酶 血淋巴 活性染色
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中蜂囊状幼虫病毒LN-QY株VP1蛋白的空间结构与B细胞抗原表位预测 被引量：6
15
作者 程健 张佩 +2 位作者 马鸣潇 李明 杨松 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2011年第3期280-284,共5页
目的预测中蜂囊状幼虫病毒(Chinese sacbrood virus,CSBV)LN-QY株VP1蛋白的空间结构及其B细胞抗原表位。方法以CSBV LN-QY株RNA为模板,RT-PCR扩增结构蛋白VP1基因,与pMD18-T载体连接后,转化感受态大肠杆菌DH5α,对经EcoRⅠ和HindⅢ双酶... 目的预测中蜂囊状幼虫病毒(Chinese sacbrood virus,CSBV)LN-QY株VP1蛋白的空间结构及其B细胞抗原表位。方法以CSBV LN-QY株RNA为模板,RT-PCR扩增结构蛋白VP1基因,与pMD18-T载体连接后,转化感受态大肠杆菌DH5α,对经EcoRⅠ和HindⅢ双酶切鉴定为阳性的重组质粒进行测序,通过序列比对,获得LN-QY株VP1的核苷酸序列和推导的氨基酸序列,建立VP1结构蛋白的3D模型,在此基础上,应用DNAStar软件中的Protean模块综合分析结构蛋白的柔性区域,亲水性,表面可能性以及抗原指数等参数。结果 VP1结构蛋白的空间构象比较规则,其可能的B细胞抗原表位区域位于47-53,139-145,273-284氨基酸区段。结论本研究为CSBV LN-QY株VP1蛋白表位疫苗的设计以及血清诊断试剂盒的研制奠定了理论基础。 展开更多
关键词 中蜂囊状幼虫病毒 病毒结构蛋白质类 空间结构 表位 B淋巴细胞 预测
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环介导等温扩增(LAMP)技术检测蜜蜂球囊菌 被引量：6
16
作者 席伟军 李江红 +1 位作者 陈大福 梁勤 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期765-774,共10页
【目的】建立一种快速、灵敏的检测蜜蜂球囊菌(Ascosphaera apis)的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)方法,为监测和防治蜜蜂白垩病提供技术支撑。[方法]根据蜜蜂球囊菌特异性序列ITS区,用在线引物设计软件P... 【目的】建立一种快速、灵敏的检测蜜蜂球囊菌(Ascosphaera apis)的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)方法,为监测和防治蜜蜂白垩病提供技术支撑。[方法]根据蜜蜂球囊菌特异性序列ITS区,用在线引物设计软件PrimerExplorer V4.0设计并合成4条特异性引物A.apis-F3(5'-ACATTGCGCCCTCTGGTA-3')、A.apis-B3(5'-TGGTTAGACCGGACAGTCG-3')、A.apis-FIP(5'-TAAGACGGGACGATCGCCC AACCTGTCCGAGCGTCATTG-3')和A.apis-BIP(5'-GAAAGGCAGTGACGGCGTCGGGCCACTAGAGCGAAAGAC-3'),进行LAMP扩增试验,分别设置Mg^(2+)终浓度为0、2、4、6、8、10、12、14 mmol·L^(-1),dNPTs终浓度为0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6、1.8 mmol·L^(-1),内引物FIB/BIF终浓度为0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6、1.8 mmol·L^(-1),甜菜碱终浓度分别为0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mo1·L-1,反应温度为58、60、63、65℃,反应时间分别为30、40、50、60 min,并利用实时浊度仪测定浊度值和扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳来检测LAMP反应的结果,确定优化的LAMP检测体系。以东方蜜蜂微孢子虫(Nosema ceranae)、蜜蜂微孢子虫(Nosema apis)、蜜蜂残翅病毒(Deformed wing virus,DWV)、蜜蜂囊状幼虫病毒(Sacbrood virus,SBV)、黑蜂王台病毒(Black queen cell virus,BQCV)和以色列急性麻痹病毒(Israel acute paralysis virus,IAPV)基因组为模板进行特异性验证。并用PvuⅠ酶切验证产物,最终确定LAMP反应体系的准确性;进而通过将蜜蜂球囊菌基因组DNA进行10倍梯度稀释,分别获得DNA浓度0.2231、0.2231×10^(-1)、0.2231×10^(-2)、0.2231×10^(-3)、0.2231×10^(-4)、02231×10^(-5)、0.2231×10^(-6)、0.2231×10^(-7)、0.2231×10^(-8)μg·μL^(-1)作为模板,比较LAMP和普通PCR检测灵敏度,并检测验证该技术在临床应用上的可行性。【结果】建立了一种特异检测蜜蜂球囊菌的方法,反应条件优化后的检测体系为4 mmol·L^(-1)Mg^(2+)、1.2 mmol·L^(-1)dNTPs、1.6 mmol·L^(-1)FIP/BIP、0.4 mol·L^(-1)甜菜碱,并在63℃反应60 min可完成检测。选用蜜蜂球囊菌、东方蜜蜂微孢子虫、蜜蜂微孢子虫、蜜蜂残翅病毒、蜜蜂囊状幼虫病毒、黑蜂王台病毒和以色列急性麻痹病毒的基因组作为LAMP反应模板进行特异性检测,结果显示仅有蜜蜂球囊菌有扩增曲线和梯状条带,建立的LAMP检测体系有很好的特异性。将蜜蜂球囊菌基因组DNA浓度0.2231、0.2231×10^(-1)、0.2231×10^(-2)、0.2231×10^(-3)、0.2231×10^(-4)、0.2231×10^(-5)μg·μL^(-1)作为模板进行PCR反应后,检测结果为阳性,随DNA浓度降低,电泳检测不能观察到PCR的扩增产物。进行LAMP反应时,浊度曲线和电泳条带显示可检测DNA浓度为0.2231×10^(-6)μg·μL^(-1)。LAMP每反应检出量比PCR高10倍,并且方法简单、节省时间。【结论】成功建立了准确、快速、低成本的LAMP检测蜜蜂球囊菌技术,为相关研究和应用提供了技术支持。 展开更多
关键词 环介导等温扩增 蜜蜂球囊菌 快速检测 实时浊度
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意大利蜜蜂幼虫肠道响应球囊菌 早期胁迫的转录组学分析 被引量：4
17
作者 郭睿 熊翠玲 +4 位作者 郑燕珍 张璐 童新宇 梁勤 陈大福 《应用昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期553-560,共8页
【目的】球囊菌特异性地侵染蜜蜂幼虫而导致白垩病,该病造成成年蜜蜂数量的大幅下降,从而严重影响蜂蜜等产品的产量。目前,尚无利用二代测序技术研究白垩病的报道。本研究利用RNA-seq技术对正常及球囊菌胁迫后的意大利蜜蜂4日龄幼虫肠... 【目的】球囊菌特异性地侵染蜜蜂幼虫而导致白垩病,该病造成成年蜜蜂数量的大幅下降,从而严重影响蜂蜜等产品的产量。目前,尚无利用二代测序技术研究白垩病的报道。本研究利用RNA-seq技术对正常及球囊菌胁迫后的意大利蜜蜂4日龄幼虫肠道进行深度测序,为解析宿主响应球囊菌胁迫的应答机制提供了重要的参考信息。【方法】利用Illumina Hiseq2500平台对对照组(AmCK)和处理组(AmT)幼虫肠道进行双端(PE125)测序;利用Perl脚本进行下机数据过滤;利用R软件进行测序饱和度分析、计算各样品之间的相关性系数;利用SOAP aligner/soap2软件将未比对上核糖体的读段(Reads)比对到意大利蜜蜂参考基因组;基于GO数据库和KEGG数据库进行GO分类和KEGG代谢通路(Pathway)富集分析。【结果】RNA-seq共得到181096194条原始读段(Raw reads),经过滤得到179078764条有效读段(Clean reads)。差异表达基因(DEGs)分析结果显示上调与下调基因的数量分别为4和20个。DEG的基因本体论(Gene ontology,GO)分析结果显示,这些DEGs分布于10个GO分类,除归入结合(Binding)的基因和催化活性(Catalytic activity)的部分基因外,绝大多数GO分类上的基因均表现为下调。DEGs的KEGG代谢通路分析结果显示各有1个DEG分别富集在核糖体和氧化磷酸化且均下调表达。【结论】本研究揭示了意大利蜜蜂幼虫肠道在球囊菌入侵早期的胁迫应答,为解析宿主响应球囊菌胁迫的应答机制奠定了基础。 展开更多
关键词 意大利蜜蜂 幼虫肠道 球囊菌 转录组
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中蜂囊状幼虫病病毒部分结构蛋白基因的克隆及序列分析 被引量：5
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作者 冯建勋 余健秀 张景强 《中山大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 1999年第5期124-126,共3页
根据小ＲＮＡ 病毒科（ Ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅ） 中病毒ＲＮＡ 所具有的结构特征， 采用ｍＲＮＡｃａｐｔｕｒｅ ｋｉｔ 提取纯化中蜂囊状幼虫病病毒（Ｃｈｉｎｅｓｅｓｃａｂｒｏｏｄ ｖｉｒｕｓ ＣＳＢＶ） 的ＲＮＡ， 并以... 根据小ＲＮＡ 病毒科（ Ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅ） 中病毒ＲＮＡ 所具有的结构特征， 采用ｍＲＮＡｃａｐｔｕｒｅ ｋｉｔ 提取纯化中蜂囊状幼虫病病毒（Ｃｈｉｎｅｓｅｓｃａｂｒｏｏｄ ｖｉｒｕｓ ＣＳＢＶ） 的ＲＮＡ， 并以之为ｃＤＮＡ合成的模板． 依据小ＲＮＡ病毒科中的脊髓灰质炎病毒结构蛋白基因序列设计了一对引物ＶＰ５和ＶＰ３ ， 通过ＰＣＲ 扩增获得预期大小约为１ １００ ｂｐ的ＤＮＡ 片段， 将此片段克隆到ｐＧＥＭＴｅａｓｙ载体上并直接测序． 序列分析表明， 该片段为中蜂囊状幼虫病病毒部分结构蛋白基因， 与意蜂幼虫囊状病病毒结构蛋白基因序列的同源性为８６－８ ％ ， 与之对应氨基酸序列的同源性高达９３－４ ％ ． 展开更多
关键词 中蜂 囊状幼虫病 病毒 CSBV 结构蛋白 基因克隆
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蜜蜂球囊菌荧光PCR快速检测方法的建立及应用 被引量：4
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作者 宋战昀 王振国 +4 位作者 冯新 王伟利 罗雁非 刘金华 姜永莉 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2010年第12期49-53,共5页
以蜜蜂球囊菌ITS1、ITS2和5.8 S rDNA保守序列(U68313)为参考,设计一对特异性引物和一条TaqMan探针,建立了一种快速检测蜜蜂球囊菌的荧光PCR方法。该方法灵敏度达1 ng/μL的阳性DNA比常规PCR高10倍。检测的特异性高,与蜜蜂幼虫芽胞杆菌... 以蜜蜂球囊菌ITS1、ITS2和5.8 S rDNA保守序列(U68313)为参考,设计一对特异性引物和一条TaqMan探针,建立了一种快速检测蜜蜂球囊菌的荧光PCR方法。该方法灵敏度达1 ng/μL的阳性DNA比常规PCR高10倍。检测的特异性高,与蜜蜂幼虫芽胞杆菌、蜂房蜜蜂球菌、蜜蜂败血杆菌无交叉反应,同时可避免常规PCR因电泳造成的污染。应用该方法对蜜蜂及蜂制品的实际样品和模拟样品进行检测,结果显示所建立的荧光PCR检测方法在4 h内即可报告结果,与传统病原菌分离培养、常规PCR相比较,该方法具有快速、灵敏、特异、重复性好等优点,可以用于蜜蜂及其制品中蜜蜂球囊菌的快速检测和进出境检疫。 展开更多
关键词 蜜蜂白垩病 蜜蜂球囊菌 TAQMAN探针 荧光PCR
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蜜蜂共生菌研究进展 被引量：8
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作者 徐龙龙 吴杰 李继莲 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期107-112,共6页
蜂类昆虫是自然界最主要的授粉昆虫类群,它们在保护植物多样性及维持生态系统平衡等方面发挥着极为重要的作用。介绍了蜜蜂属(Apis)和熊蜂属(Bombus)昆虫体内共生菌的种类、分布以及部分共生菌在抑制病原菌生长、抵抗寄生虫侵染、提供... 蜂类昆虫是自然界最主要的授粉昆虫类群,它们在保护植物多样性及维持生态系统平衡等方面发挥着极为重要的作用。介绍了蜜蜂属(Apis)和熊蜂属(Bombus)昆虫体内共生菌的种类、分布以及部分共生菌在抑制病原菌生长、抵抗寄生虫侵染、提供营养物质等方面的作用,分析了研究中有待解决的问题,并探讨了未来的研究热点,旨在为提高蜜蜂的环境适应性和防治其病虫害提供一定的参考。 展开更多
关键词 共生菌 蜜蜂 熊蜂 肠道微生物
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