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蜜蜂球囊菌几丁质酶3基因的生物信息学和表达模式分析
1
作者 王梦怡 吴陶 +8 位作者 范小雪 胡艳雯 王炜 郑一荻 邱剑丰 张荣华 严提珍 陈大福 郭睿 《福建农林大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第5期640-646,共7页
【目的】丰富蜜蜂球囊菌(Ascosphaera apis)几丁质酶3(AaCHIT3)的理化性质和分子特征信息,为AaCHIT3基因的功能研究提供科学依据。【方法】利用Expasy网站的ProtParam和ProtScale软件分别预测AaCHIT3蛋白的理化性质和亲水性,采用MEME软... 【目的】丰富蜜蜂球囊菌(Ascosphaera apis)几丁质酶3(AaCHIT3)的理化性质和分子特征信息,为AaCHIT3基因的功能研究提供科学依据。【方法】利用Expasy网站的ProtParam和ProtScale软件分别预测AaCHIT3蛋白的理化性质和亲水性,采用MEME软件鉴定保守基序和结构域,通过Mega 11.0软件对蜜蜂球囊菌及其他真菌的CHIT3进行系统进化分析。使用RT-qPCR检测蜜蜂球囊菌侵染意大利蜜蜂(Apis mellifera ligustica)工蜂幼虫过程中AaCHIT3的表达模式。【结果】AaCHIT3由372个氨基酸组成,分子质量约为43.03 ku,理论等电点为5.05,分子式为C_(1953)H_(2986)N_(514)O_(559)S_(13),平均亲水系数为-0.39。AaCHIT3中,α-螺旋含102个氨基酸,延长链由53个氨基酸组成,无规则卷曲结构由217个氨基酸构成。AaCHIT3的三级结构与模板A0A168BB95.1.A的序列一致性达100%。AaCHIT3包含2个结构域(GH18和CCDC50),而疏棉状嗜热丝孢菌(Thermomyces lanuginosus)、石膏样奈尼兹皮真菌(Nannizzia gypsea)等其他9种真菌的CHIT3仅含有1个相同结构域(GH18-CTS3)。AaCHIT3含有7个保守基序,疏棉状嗜热丝孢菌、奥菲迪菌(Ophidiomyces ophidiicola)、石膏样奈尼兹皮真菌、副球孢子菌(Paracoccidioides lutzii)和印度块菌(Tuber indicum)的CHIT3均包含9个相同保守基序,曲霉菌(Aspergillus hiratsukae)、烟曲霉(Aspergillus fumigatus)、灰青霉(Penicillium canescens)和紫红曲霉(Monascus purpureus)包含10个相同保守基序。系统进化分析显示,蜜蜂球囊菌和印度块菌的CHIT3在进化树上各自单独为一支。与蜜蜂球囊菌接种后1 d(1 dpi)相比,AaCHIT3的表达水平在2 dpi显著上调,3 dpi时则下调。【结论】AaCHIT3是一种潜在的亲水性蛋白;蜜蜂球囊菌与上述其他真菌的CHIT3在保守性和同源性方面均较低。在蜜蜂球囊菌侵染意大利蜜蜂工蜂幼虫过程中,AaCHIT3的表达呈现先上调后下调的趋势,提示AaCHIT3可能在蜜蜂球囊菌的侵染过程中发挥重要作用。 展开更多
关键词 蜜蜂白垩病 蜜蜂球囊菌 意大利蜜蜂 几丁质 几丁质酶 分子特征 表达模式
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中华蜜蜂囊状幼虫病的诊断和防治研究进展 被引量：1
2
作者 李爱芳 王倩芳 +3 位作者 王孜龙 李亚兰 徐朋 冯书营 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第2期864-873,共10页
中华蜜蜂囊状幼虫病(Chinese sacbrood disease, CSBD)是由中华蜜蜂囊状幼虫病病毒(Chinese sacbrood virus, CSBV)引起的一种病毒性疾病。该病对蜂群危害严重,传染性强,死亡率高达100%,给中国养蜂业造成了巨大的经济损失。尽管实际生... 中华蜜蜂囊状幼虫病(Chinese sacbrood disease, CSBD)是由中华蜜蜂囊状幼虫病病毒(Chinese sacbrood virus, CSBV)引起的一种病毒性疾病。该病对蜂群危害严重,传染性强,死亡率高达100%,给中国养蜂业造成了巨大的经济损失。尽管实际生产中采用了多种方法和措施对该病进行预防和治疗,但实际效果欠佳。针对CSBV的检测技术发展迅速,尤其是分子生物学检测手段的更新,使得检测结果的准确性和特异性大大提高。鉴于卵黄抗体(egg yolk antibodies, EYA)在多种病毒性疾病中的应用效果显著,对于CSBD的防治有着潜在的应用开发价值。笔者综述了CSBD诊断和防治的最新研究进展,总结了EYA抗体药物的治疗应用现状。此外,在剖析EYA药物优缺点的基础上,提出了多种EYA协同增效的策略,并从多个方面如新型抗体药物的开发、新型中药单体/配方的鉴定、核苷酸药物的开发等对抗CSBV的研究前景进行望,以期为蜂业病毒性疾病的防控提供参考。 展开更多
关键词 中华蜜蜂囊状幼虫病病毒(CSBV) 诊断 防治 卵黄抗体(EYA)
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中蜂两种幼虫病的区别和防治措施
3
作者 邵奎龙 袁小波 《中国蜂业》 2025年第11期15-16,共2页
对中蜂危害较大的幼虫病主要有两种,一种是中囊病(简称中囊病),另一种是欧幼病(简称欧幼病)。岫岩满族自治县地处辽东山区,以饲养中华蜜蜂为主。2008年,中囊病在我县爆发,之后基本上每年都有蜂场发病,给我县中蜂饲养造成严重的影响。抗... 对中蜂危害较大的幼虫病主要有两种,一种是中囊病(简称中囊病),另一种是欧幼病(简称欧幼病)。岫岩满族自治县地处辽东山区,以饲养中华蜜蜂为主。2008年,中囊病在我县爆发,之后基本上每年都有蜂场发病,给我县中蜂饲养造成严重的影响。抗中囊病抗体药剂出现以后,中囊病才得以控制。但该药剂价格较高,部分蜂农经济上难以承受。而另一种中蜂幼虫病欧幼病在我县也时有发生,有些蜂农对两种幼虫病的症状难以准确判断,只要蜂群出现了幼虫病,就会首选抗中囊病抗体药剂,既给养蜂者产生经济上浪费,又延误了蜂病的治疗。本文主要介绍两种中蜂幼虫病的区别和防治措施,希望对广大中蜂饲养者识别和防治两种中蜂幼虫病能有所帮助。 展开更多
关键词 中蜂 欧幼病 岫岩满族自治县 幼虫病 中囊病
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桓仁县中华蜜蜂欧洲幼虫腐臭病的诊断和防治体会
4
作者 姚健 范雪 《山东畜牧兽医》 2025年第10期99-100,102,共3页
欧洲幼虫腐臭病(European foulbrood)是蜜蜂幼虫常见的细菌性传染病,简称欧幼病。该病于1769年首次报道,目前几乎所有养蜂国家都有发生。我国于20世纪50年代在广东省首先发现,60年代初南方各省相继出现病害,随后蔓延至全国。该病害对中... 欧洲幼虫腐臭病(European foulbrood)是蜜蜂幼虫常见的细菌性传染病,简称欧幼病。该病于1769年首次报道,目前几乎所有养蜂国家都有发生。我国于20世纪50年代在广东省首先发现,60年代初南方各省相继出现病害,随后蔓延至全国。该病害对中华蜜蜂的危害要比对西方蜜蜂严重得多。近年来,本县西路一些中蜂养蜂户在春繁季节发现感染欧洲幼虫腐臭病,发病速度快,传染性极强,导致蜂群大规模衰弱,给养殖户带来不小损失。本文结合本县养蜂户欧洲幼虫腐臭病案例,总结一些欧洲幼虫腐臭病的诊断及防治措施,为广大养蜂从业者提供参考和借鉴。 展开更多
关键词 中华蜜蜂 欧洲幼虫腐臭病 诊断 防治
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中华蜜蜂Peter Pan蛋白的原核表达载体构建
5
作者 仇会桐 刘宇明 +5 位作者 白桦 程玉 李明 费东亮 刘艳霞 马鸣潇 《现代畜牧兽医》 2025年第6期7-11,共5页
试验旨在探究彼得潘(Peter Pan,PPAN)在中华蜜蜂幼虫中的功能。试验通过构建原核表达质粒并诱导蛋白表达,得到PPAN原核蛋白;借助PCR技术对PPAN基因进行扩增,并将扩增产物插入到原核表达载体pGEX-4T-1,成功构建重组质粒pGEX-4T-1-PPAN并... 试验旨在探究彼得潘(Peter Pan,PPAN)在中华蜜蜂幼虫中的功能。试验通过构建原核表达质粒并诱导蛋白表达,得到PPAN原核蛋白;借助PCR技术对PPAN基因进行扩增,并将扩增产物插入到原核表达载体pGEX-4T-1,成功构建重组质粒pGEX-4T-1-PPAN并转化入大肠杆菌BL21 (DE3)感受态细胞中。通过SDSPAGE分析优化目的蛋白诱导表达条件,并进行Western-blot鉴定。结果显示,在大肠杆菌中,PPAN蛋白以包涵体形式成功表达,蛋白的最佳诱导条件为诱导温度28℃,诱导时间8 h,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导浓度0.5 mmol/L,扩增得到的PPAN基因片段大小为1 146 bp,编码蛋白的分子量为70.6 kDa。研究表明,试验成功构建PPAN蛋白的原核表达载体,并实现其在大肠杆菌中的诱导表达,为后续探究PPAN蛋白对中蜂囊状幼虫病毒(CSBV)复制的影响奠定了一定基础。 展开更多
关键词 中华蜜蜂幼虫 原核表达 彼得潘(PPAN)
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中蜂囊状幼虫病的诊断与防治
6
作者 张相君 《现代农村科技》 2025年第4期87-88,共2页
中蜂囊状幼虫病是由囊状幼虫病毒(CSBV)所引起的高致病性传染病。中蜂幼虫是易感个体,早期发病症状并不明显,且容易死亡,死亡的幼虫尸体不会腐烂,也没有明显的臭味,容易被工蜂清除掉,所以蜂农很难及时发现。为了提升中蜂养殖水平,为蜂... 中蜂囊状幼虫病是由囊状幼虫病毒(CSBV)所引起的高致病性传染病。中蜂幼虫是易感个体,早期发病症状并不明显,且容易死亡,死亡的幼虫尸体不会腐烂,也没有明显的臭味,容易被工蜂清除掉,所以蜂农很难及时发现。为了提升中蜂养殖水平,为蜂农带来更高的养殖效益,本文阐述了中蜂囊状幼虫病的发病特点,分析了中蜂囊状幼虫病的症状表现及诊断方法,并提出了有针对性的防治措施,希望能够为相关研究提供一些参考和借鉴。 展开更多
关键词 中蜂囊状幼虫病 诊断 防治
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抗白垩病相关SNP位点C2587245T在意大利蜜蜂雄蜂幼虫中的抗性鉴定
7
作者 唐韶晗 耿龙 +8 位作者 武尊 曾照阳 王子函 梁立强 吕洋 许雪玲 聂红毅 李志国 苏松坤 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期29-37,共9页
【目的】基于抗白垩病相关单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点C2587245T在意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica雄蜂幼虫中白垩病抗性检验,验证该位点遗传稳定性和抗病性,为分子标记辅助育种在育种生产中直接应用... 【目的】基于抗白垩病相关单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点C2587245T在意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica雄蜂幼虫中白垩病抗性检验,验证该位点遗传稳定性和抗病性,为分子标记辅助育种在育种生产中直接应用提供技术支持。【方法】通过白垩病虫尸,在实验室条件下制备白垩真菌孢子悬液,通过形态学和分子生物学方法鉴定蜜蜂球囊菌Ascosphaera apis。使用无伤害方法提取意大利蜜蜂蜂蜂王DNA筛选出SNP位点C2587245T为C/C和T/T基因型的蜂王,并培育C/C和T/T基因型处女王,用二氧化碳刺激其产出雄蜂卵,选择C和T基因型2日龄意大利蜜雄蜂幼虫进行实验室培养,3日龄龄雄蜂幼虫接种5×10^(4)个孢子/μL的蜜蜂球囊菌悬液10 d,观测接种蜜蜂球囊菌后的C基因型和T基因型雄蜂幼虫的生长情况和存活率。【结果】通过无伤害提取DNA的方法可以在不影响意大利蜜蜂雄蜂幼虫正常生活的条件下提取出高质量的DNA;用本研究的饲养方法可以保证意大利蜜蜂雄蜂幼虫在实验室条件的正常生长发育。C基因型和T基因型意大利蜜蜂雄蜂3日龄幼虫接种蜜蜂球囊菌后在发病时间和发病症状等方面都有明显差异,C基因型雄蜂幼虫在表现疾病典型症状的时间上比T基因型雄蜂幼虫晚大约2 d;在接种蜜蜂球囊菌后6 d时两种基因型雄蜂幼虫表现出的症状差异最为明显。【结论】雄蜂由于其纯合单倍体的生物学特性,更方便验证SNP位点C2587245T纯合的抗病作用。SNP位点C2587245T为C基因型雄蜂幼虫具有良好的抗白垩病能力,并且SNP位点C2587245T具有稳定的遗传性,这些研究结果可为在蜜蜂抗病育种领域提供一种可靠的分子辅助标记,为后续雄蜂转录组测序、寻找雄蜂和工蜂在免疫相关基因表达方面的差异,尝试找到SNP位点C2587245T对白垩病所特有的抗病机制提供基础。 展开更多
关键词 意大利蜜蜂 雄蜂 白垩病 蜜蜂球囊菌 单核苷酸多态性 白垩病抗性
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中华蜜蜂工蜂幼虫肠道细胞自噬与凋亡相关基因及其剪接本鉴定
8
作者 荆欣 胡颖 +6 位作者 臧贺 宋宇轩 李坤泽 叶道有 康婧 陈大福 郭睿 《福建农林大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期786-791,共6页
【目的】通过鉴定和解析中华蜜蜂(Apis cerana cerana)工蜂幼虫肠道细胞自噬与凋亡相关基因及其剪接本,为进一步的功能研究提供依据。【方法】使用Blast工具将中华蜜蜂剪接本与Nr数据库进行比对,以鉴定自噬与凋亡相关基因及其剪接本。采... 【目的】通过鉴定和解析中华蜜蜂(Apis cerana cerana)工蜂幼虫肠道细胞自噬与凋亡相关基因及其剪接本,为进一步的功能研究提供依据。【方法】使用Blast工具将中华蜜蜂剪接本与Nr数据库进行比对,以鉴定自噬与凋亡相关基因及其剪接本。采用Astalavista软件挖掘相关基因的可变剪接(alternative splicing,AS)事件。通过RT-PCR验证AS事件的真实性。利用TAPIS pipeline软件预测相关基因的可变多聚腺苷酸化(alternative polyadenylation,APA)位点。使用TBtools软件预测APA位点上游的基序(motif)。【结果】鉴定出中华蜜蜂工蜂幼虫肠道中与自噬相关的49个基因及其170种剪接本,以及与凋亡相关的76个基因及其347种剪接本。鉴定出细胞自噬相关的8个基因的88次AS事件及凋亡相关的15个基因的339次AS事件。PCR扩增结果符合预期,证实了随机选择的3种类型AS事件(3'端可变剪接、外显子跳跃、内含子保留)的真实性。预测结果表明,自噬相关的36个基因含有1个或多个APA位点,但在这些APA位点的上游未鉴定到任何motif;而凋亡相关的55个基因含有1个或多个APA位点,并在其上游识别出多个motif,具有一致性序列:NNNDNDNNDNDNDNNDNDNDNNDNDNNNNDDHNNN,NNNNNVNNDNNNNNDHNNHNNNNVNNNH。【结论】中华蜜蜂工蜂幼虫肠道细胞自噬与凋亡相关基因可通过AS和APA形成数量丰富的剪接本,自噬和凋亡相关基因中最丰富的AS类型分别是3'端可变剪接和外显子跳跃,含1个APA位点的基因数目最多。 展开更多
关键词 中华蜜蜂 自噬 凋亡 剪接本 可变剪接 可变多聚腺苷酸化
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蜜蜂白垩病的病原特性与综合防治 被引量：1
9
作者 黄廷悦 陈胜 马振刚 《四川畜牧兽医》 2024年第11期58-60,共3页
蜂病可分为非传染性病害和传染性病害两种,前者由遗传因素或环境中的有害物质等引起,后者则由病原微生物或寄生虫引起。蜜蜂传染性病害对蜂产业的威胁极大,可从感染蜜蜂个体,干扰蜜蜂正常生理代谢,破坏其组织结构,到影响蜂群乃至整个蜂场。
关键词 传染性病害 病原微生物 病原特性 蜂病 遗传因素 正常生理代谢 蜜蜂白垩病 寄生虫
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CSBV的分离鉴定及其感染幼虫后的应答反应 被引量：2
10
作者 费世港 刘合永 +3 位作者 王叶元 冯敏 王子龙 孙京臣 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第2期89-96,共8页
本研究旨在为了解江西某蜂场蜜蜂是否感染中蜂囊状幼虫病病毒(CSBV)并探究CSBV感染中蜂幼虫后的应答反应。采集该蜂场疑似感染CSBV的蜜蜂,采用RT-PCR的方法检测CSBV核酸,取阳性的蜜蜂样品进行病毒分离纯化、电镜观察及测序。将纯化鉴定... 本研究旨在为了解江西某蜂场蜜蜂是否感染中蜂囊状幼虫病病毒(CSBV)并探究CSBV感染中蜂幼虫后的应答反应。采集该蜂场疑似感染CSBV的蜜蜂,采用RT-PCR的方法检测CSBV核酸,取阳性的蜜蜂样品进行病毒分离纯化、电镜观察及测序。将纯化鉴定后的CSBV对3日龄的中蜂幼虫进行人工感染,进行转录组测序,分析中蜂幼虫感染CSBV的应答反应。通过RT-PCR验证和电镜观察成功鉴定CSBV,并命名为CSBV-JX。CSBV-JX电镜观察直径为25~30 nm。对其进行分段扩增测序,发现基因组序列为8781 bp,对其进行系统发育分析,表明东方蜜蜂的SBV(AcSBV)与西方蜜蜂的SBV(AmSBV)明显分为两个分支,具有较强的地域分化性。转录组测序分析发现,中蜂幼虫在感染CSBV-JX后2 h有59个基因上调表达,83个基因下调表达;感染后12 h有68个基因上调表达,86个基因下调表达。本研究成功分离鉴定一株中蜂囊状幼虫病毒并命名为CSBV-JX。同时对CSBV-JX感染中蜂幼虫的转录组学分析发现,CSBV-JX感染2 h和12 h引起宿主的响应较小,这可能是CSBV-JX感染的2 h和12 h为病毒增殖的早期阶段病毒载量低,引起的宿主免疫响应小所导致。在CSBV-JX感染中蜂幼虫的2 h和12 h期间引起的差异基因与代谢通路关联较大,研究结果为阐明解析CSBV感染中蜂的分子机制提供了基础。 展开更多
关键词 中蜂囊状幼虫病毒 分离鉴定 系统发育分析 转录组学
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意大利蜜蜂幼虫肠道在球囊菌胁迫后期的差异表达微小RNA及其靶基因分析 被引量：12
11
作者 郭睿 杜宇 +9 位作者 周倪红 刘思亚 熊翠玲 郑燕珍 付中民 徐国钧 王海朋 耿四海 周丁丁 陈大福 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期49-60,共12页
【目的】蜜蜂球囊菌Ascosphaera apis(简称球囊菌)是一种特异性侵染蜜蜂幼虫肠道的致死性真菌病原。微小RNA(microRNA,mi RNA)是一种在转录后水平对m RNA进行负调控的关键调控因子。本研究旨在对意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica(简... 【目的】蜜蜂球囊菌Ascosphaera apis(简称球囊菌)是一种特异性侵染蜜蜂幼虫肠道的致死性真菌病原。微小RNA(microRNA,mi RNA)是一种在转录后水平对m RNA进行负调控的关键调控因子。本研究旨在对意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica(简称意蜂)幼虫肠道在球囊菌胁迫后期的差异表达mi RNAs(DEmiRNAs)及其靶基因进行深入分析,为揭示DEmiRNAs在胁迫应答中的作用提供重要信息。【方法】利用small RNA-seq(s RNA-seq)技术对正常及球囊菌侵染的意蜂6日龄幼虫肠道(分别表示为Am CK和Am T)进行测序,通过相关生物信息学软件对DEmiRNAs进行预测和分析。利用TargetFinder软件预测DEmiRNAs的靶基因,然后利用Blast软件对靶基因进行GO和KEGG数据库的功能注释。通过Cytoscape软件构建DEmiRNAs与其靶m RNAs的调控网络。通过茎环实时荧光定量PCR(stem-loop RT-qPCR)验证测序数据的可靠性。【结果】Am CK和Am T的测序分别得到9 230 496和10 823 667条有效序列标签; Am CK vs Am T比较组中包含15个上调和6个下调mi RNAs,分别结合3 503和3 252个靶基因,它们可分别注释到40和39个GO terms以及104和99条代谢通路;进一步分析发现调控网络中的17个DEmiRNAs靶向结合116个与丝氨酸蛋白酶相关的m RNAs,14个DEmiRNAs靶向结合54个与泛素介导的蛋白水解相关的m RNAs。Stem-loop RT-qPCR验证结果显示随机选择的4个DEmiRNAs (mi R-251-x,mi R-9277-y,mi R-1672-x和mi R-4968-y)的表达量变化趋势与测序结果一致,表明测序数据真实可信。【结论】本研究率先对意蜂幼虫肠道在球囊菌胁迫后期的DEmiRNAs及其靶基因进行预测与分析,提供了mi RNAs的表达谱和差异表达信息。ame-miR-927b,mi R-429-y和mi R-8440-y等DEmiRNAs可能参与对丝氨酸蛋白酶的调控和对泛素介导的蛋白水解的调控,DEmiRNAs与靶基因之间存在复杂的调控网络关系。DEmiRNAs可参与到意蜂幼虫肠道与球囊菌间的互作。 展开更多
关键词 意大利蜜蜂 蜜蜂球囊菌 胁迫应答 微小RNA 免疫防御 靶基因
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中蜂囊状幼虫病毒RdRp基因dsRNA干扰的研究 被引量：14
12
作者 史红霞 党晓群 +5 位作者 朱祥龙 马振刚 刘永梅 黄钰彬 周泽扬 许金山 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期103-111,共9页
中蜂囊状幼虫病毒(Chinese sacbrood virus,CSBV)可以引起中蜂幼虫死亡,给中蜂的养殖造成严重的威胁。其RNA依赖的RNA聚合酶(RNA-dependent RNA polymerase,RdRp)是病毒复制中必不可少的中心酶,控制着病毒的复制和翻译过程。本研究以CSB... 中蜂囊状幼虫病毒(Chinese sacbrood virus,CSBV)可以引起中蜂幼虫死亡,给中蜂的养殖造成严重的威胁。其RNA依赖的RNA聚合酶(RNA-dependent RNA polymerase,RdRp)是病毒复制中必不可少的中心酶,控制着病毒的复制和翻译过程。本研究以CSBV RdRp基因为靶标,选取两个干扰区域RdRp-1和RdRp-2,并构建相应的dsRNA表达载体,获取dsRNA后进行RNAi实验,通过qRT-PCR检测CSBV RdRp基因的表达情况。实验结果显示:干扰片段RdRp-1不能显著下调RdRp基因的转录,而干扰片段RdRp-2可显著性下调RdRp表达并具有剂量依赖性,当添食2μg dsRdRp-2时,在72 h RdRp基因表达下调了85%,CSBV的衣壳蛋白VP1基因下调表达78%,幼虫死亡率降低60%,表明RdRp基因可以作为RNA干扰的靶标用于CSBV防治,本研究为后期在养蜂场进行蜜蜂病毒病的防治奠定了基础。 展开更多
关键词 中华蜜蜂 中蜂囊状幼虫病毒(CSBV) RNA依赖的RNA聚合酶(RdRp) dsRNA的体外表达 RNAI
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囊状幼虫病病毒的流行及其感染治疗 被引量：8
13
作者 沈克飞 曹联飞 +3 位作者 曹兰 任勤 谭方明 张邑帆 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2017年第9期954-957,共4页
目的调查重庆、浙江和云南蜜蜂幼虫囊状幼虫病病毒(sacbrood virus,SBV)的感染率,并观察抗微生物肽(amicrobial peptide)小分子阳离子六肽(short cationic hexapeptides,SP6)对人工感染的中蜂囊状幼虫病的治疗效果。方法采用RT-PCR法检... 目的调查重庆、浙江和云南蜜蜂幼虫囊状幼虫病病毒(sacbrood virus,SBV)的感染率,并观察抗微生物肽(amicrobial peptide)小分子阳离子六肽(short cationic hexapeptides,SP6)对人工感染的中蜂囊状幼虫病的治疗效果。方法采用RT-PCR法检测重庆、浙江和云南蜜蜂幼虫SBV的感染率。将SP6溶于糖水,隔天饲喂1次SBV人工感染的发病中华蜜蜂蜂群,连续给药9次,测定蜂群幼虫死亡率,评价其对感染的防治效果。结果重庆和浙江中蜂幼虫SBV感染率分别为85.6%和4.76%,云南西方蜜蜂幼虫SBV感染率为6.67%;重庆和浙江西方蜜蜂幼虫及云南中蜂幼虫未检出SBV。0.1%SP6给药组能极显著地降低SBV感染蜂群的幼虫死亡率,防治效果达到74.48%。结论在重庆、浙江和云南地区均检出SBV,但SBV在不同地区对蜜蜂种群的危害程度不同,在重庆中蜂群广泛流行。SP6对SBV感染中蜂有良好的防治效果,具有药物开发价值。 展开更多
关键词 囊状幼虫病病毒 蜜蜂 抗微生物肽 小分子阳离子六肽 防治效果
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基于比较转录组学分析揭示中华蜜蜂及意大利蜜蜂幼虫的球囊菌抗性差异机制 被引量：4
14
作者 熊翠玲 杜宇 +6 位作者 王鸿权 郑燕珍 付中民 王海朋 张璐 陈大福 郭睿 《中国农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期106-114,共9页
为探究中华蜜蜂(Apis cerana cerana,以下简称中蜂)与意大利蜜蜂(Apis mellifera ligustica,以下简称意蜂)幼虫的球囊菌(Ascospahaera apis)抗性差异产生的原因,利用Venn分析、GO分类分析、KEGG代谢通路分析以及Ka/Ks分析对二者的转录... 为探究中华蜜蜂(Apis cerana cerana,以下简称中蜂)与意大利蜜蜂(Apis mellifera ligustica,以下简称意蜂)幼虫的球囊菌(Ascospahaera apis)抗性差异产生的原因,利用Venn分析、GO分类分析、KEGG代谢通路分析以及Ka/Ks分析对二者的转录组进行比较研究。Venn分析结果显示,中蜂与意蜂的同源基因有17 656个,归属于8 111个基因家族,二者的特有基因分别有1 158和241个,分别归属于468和86个基因家族。GO分类结果显示,中蜂和意蜂的特有基因分别富集在38和28个GO条目。KEGG代谢通路富集分析结果显示,中蜂和意蜂的特有基因分别富集于96和21个代谢通路;进一步分析发现中蜂的特有基因富集在内吞作用、溶酶体、泛素介导的蛋白水解和黑化作用等4个细胞免疫通路,以及MAPK信号通路和Toll-like受体信号通路等2个体液免疫通路,而意蜂仅有1个特有基因富集在MAPK信号通路。Ka/Ks分析结果显示受到强烈正向选择、弱正向选择、中性选择和负向选择的单拷贝同源基因分别有37、281、2 630和3 269个。对受到强烈正向选择的基因进行GO分类和KEGG代谢通路富集分析,GO结果显示中蜂和意蜂的单拷贝同源基因富集的GO条目类型相同;KEGG结果显示中蜂的单拷贝基因仅富集在氧化磷酸化。上述结果表明免疫相关基因数量的差异是二者的球囊菌抗性差异产生的重要原因之一,中蜂在与球囊菌的协同进化过程中可能通过提高能量利用从而限制球囊菌的增殖。本研究结果可为阐明中蜂及意蜂幼虫的球囊菌抗性差异产生的分子机制提供参考。 展开更多
关键词 中华蜜蜂 意大利蜜蜂 幼虫 比较转录组学 球囊菌
原文传递
意大利蜜蜂6日龄幼虫肠道内球囊菌的差异表达基因分析 被引量：5
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作者 杜宇 熊翠玲 +5 位作者 史秀丽 郑燕珍 付中民 徐细建 陈大福 郭睿 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2017年第7期1119-1128,共10页
为检测蜜蜂球囊菌(Ascosphaera apis)在胁迫意大利蜜蜂(Apis mellifera ligustica,简称意蜂)幼虫后期的基因表达谱,利用RNA-seq技术对纯培养的球囊菌孢子及球囊菌胁迫的意蜂6日龄幼虫肠道进行深度测序。通过比较处理组和对照组得到21 36... 为检测蜜蜂球囊菌(Ascosphaera apis)在胁迫意大利蜜蜂(Apis mellifera ligustica,简称意蜂)幼虫后期的基因表达谱,利用RNA-seq技术对纯培养的球囊菌孢子及球囊菌胁迫的意蜂6日龄幼虫肠道进行深度测序。通过比较处理组和对照组得到21 361个差异表达基因(DEGs),包括15 306个上调基因和6 055个下调基因。GO富集分析结果显示,上调基因富集于39个GO条目(term),基因富集数最多的为细胞进程(2 416unigenes)、细胞(2 408 unigenes)和细胞组件(2 408 unigenes);下调基因富集于38个GO term,基因富集数最多的为代谢进程(1 227 unigenes)、细胞进程(1 185 unigenes)和细胞(1 131 unigenes)。KEGG代谢通路富集分析结果显示,上调基因富集在119个通路,其中基因富集数最多的是核糖体(221 unigenes),其次为内质网中蛋白加工(190 unigenes)和内吞作用(177 unigenes);下调基因富集在113个通路上,基因富集数最多的是核糖体(144 unigenes),其次为RNA转运(113 unigenes)和氨基酸生物合成(108 unigenes)。进一步分析发现,富集在MAPK信号通路上的64个基因上调表达,说明该通路在球囊菌胁迫后期被激活。研究结果不仅为揭示球囊菌在胁迫意蜂幼虫后期的病原-宿主互作提供了重要信息,也为阐明球囊菌致病的分子机制奠定了基础。 展开更多
关键词 球囊菌 意大利蜜蜂 幼虫肠道 差异表达基因 RNA-SEQ
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胁迫中华蜜蜂幼虫肠道的球囊菌及其体外培养的高表达基因分析 被引量：5
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作者 陈大福 王鸿权 +6 位作者 李汶东 熊翠玲 郑燕珍 付中民 徐细建 黄枳腱 郭睿 《福建农林大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2017年第5期562-568,共7页
利用RNA-seq技术对胁迫中华蜜蜂(简称中蜂)6日龄幼虫肠道的球囊菌及其体外培养进行深度测序,根据基因的FPKM值筛选得到高表达基因(HEGs),进而对HEGs进行GO及KEGG代谢通路(pathway)富集分析.Illumina测序数据经质控和过滤得到100814558... 利用RNA-seq技术对胁迫中华蜜蜂(简称中蜂)6日龄幼虫肠道的球囊菌及其体外培养进行深度测序,根据基因的FPKM值筛选得到高表达基因(HEGs),进而对HEGs进行GO及KEGG代谢通路(pathway)富集分析.Illumina测序数据经质控和过滤得到100814558条有效读段(clean reads),平均Q30均在93.81%以上.GO富集分析结果显示处理组(Aac T)的HEGs富集于39个GO term,基因富集数最多的是细胞(1872 unigene)、细胞组件(1872 unigene)和细胞进程(1748 unigenes);对照组(Aa CK)的HEGs富集于37个GO term,基因富集数最多的是细胞(785 unigenes),其次是细胞组件(785 unigenes)和代谢进程(776 unigenes).KEGG pathway富集分析显示,Aac T的HEGs富集在119个代谢通路上,基因富集数最多的是核糖体(176 unigenes)、碳代谢(147 unigenes)及氨基酸的生物合成(134 unigenes);Aa CK的HEGs富集在110个代谢通路上,基因富集数最多的是核糖体(179 unigenes)、氨基酸的生物合成(70 unigenes)以及碳代谢(62 unigenes).深入分析发现,对于富集在MAPK信号通路上的高表达基因数量,胁迫中蜂幼虫肠道的球囊菌远多于体外培养的球囊菌,说明病原的该通路在胁迫后期被显著激活. 展开更多
关键词 中华蜜蜂 RNA-SEQ 球囊菌 高表达基因
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中华蜜蜂细胞吞噬与包囊作用相关基因全长转录本鉴定及分析 被引量：1
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作者 郭思佳 张凯遥 +7 位作者 荆欣 高旭泽 冯佩林 邹培缘 张浩宇 陈大福 郭睿 付中民 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2024年第3期1-10,共10页
【目的】系统鉴定和分析中华蜜蜂(Apis cerana cerana)吞噬与包囊作用相关基因和全长转录本,为深入开展相关基因和剪接体的功能研究奠定基础。【方法】基于前期已获得的高质量中华蜜蜂纳米孔长读段测序数据,通过Blast工具将全长转录本比... 【目的】系统鉴定和分析中华蜜蜂(Apis cerana cerana)吞噬与包囊作用相关基因和全长转录本,为深入开展相关基因和剪接体的功能研究奠定基础。【方法】基于前期已获得的高质量中华蜜蜂纳米孔长读段测序数据,通过Blast工具将全长转录本比对Nr数据库筛选出吞噬与包囊作用相关基因和全长转录本。利用gffcompare软件将全长转录本与东方蜜蜂(Apis cerana)参考基因组上注释的转录本进行比较,鉴定未注释的新基因和新转录本。利用TAPIS pipeline预测和分析吞噬与包囊作用相关基因的可变多聚腺苷酸化(alternative polyadenylation, APA)位点,并通过TBtools软件鉴定APA位点上游的基序(motif)。使用Astalavista软件鉴定可变剪接(alternative splicing, AS)事件,并通过IGV浏览器进行结构可视化。通过RT-PCR验证AS事件的真实性。【结果】共鉴定到中华蜜蜂吞噬与包囊作用相关的基因66个和全长转录本395条,发掘出东方蜜蜂参考基因组未注释的2个新基因和303条新转录本。对参考基因组已注释的34个基因进行了结构优化,分别延伸了18个基因的5′端和12个基因的3′端,同时延长了4个基因的5′端和3′端。共鉴定到含有1个及以上APA位点的吞噬与包囊作用相关基因47个,其中多于5个APA位点的基因最多,为32个。在APA位点上游鉴定到多个基序,一致性序列为:GRBGCNKSDAACAAYTRBGCBMRNGGBYAYTAYWCNVWNGG。共鉴定到吞噬与包囊作用相关基因的AS事件296次,其中包括131次可变3′端剪接(alternative 3′splice site, A3SS)、85次内含子保留(intron retention, IR)、70次可变5′端剪接(alternative 5′splice site, A5SS)和10次外显子跳跃(exon skipping, ES)。RT-PCR结果显示,扩增的目的片段大小符合预期,证实了随机选择的2次AS事件的真实性。【结论】系统鉴定了中华蜜蜂吞噬与包囊作用相关基因和全长转录本以及AS事件和APA位点,优化了东方蜜蜂参考基因组注释的吞噬与包囊作用相关基因的结构。 展开更多
关键词 中华蜜蜂 吞噬作用 包囊作用 全长转录本 纳米孔测序 可变剪接 可变多聚腺苷酸化
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中华蜜蜂幼虫响应中蜂囊状幼虫病毒感染的MicroRNAs分析 被引量：1
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作者 李一 肖宇婷 +3 位作者 马跃宇 李明 费东亮 马鸣潇 《病毒学报》 CSCD 北大核心 2024年第6期1366-1377,共12页
为了研究中蜂囊状幼虫病毒(Chinese sacbrood virus,CSBV)感染中华蜜蜂幼虫后体内MicroRNAs(miRNA)表达谱变化,探讨差异miRNAs(DEmiRNAs)在中蜂幼虫响应CSBV应答中的功能。本研究分别对感染CSBV24h和48h中蜂幼虫进行Illumina高通量测序... 为了研究中蜂囊状幼虫病毒(Chinese sacbrood virus,CSBV)感染中华蜜蜂幼虫后体内MicroRNAs(miRNA)表达谱变化,探讨差异miRNAs(DEmiRNAs)在中蜂幼虫响应CSBV应答中的功能。本研究分别对感染CSBV24h和48h中蜂幼虫进行Illumina高通量测序,通过生物信息学软件分析DEmiRNAs及其靶基因,并进行GO功能注释和KEGG通路富集分析。通过RT-qPCR对测序结果进行验证。结果显示:对CSBV感染前后中蜂幼虫测序共筛选出140个已知miRNAs和预测到5个新miRNAs。其中,L24I组(CSBV感染24h幼虫)和L24H组(健康幼虫)对比发现18个DEmiRNAs,其中有12个表达上调,有6个表达下调;L48I组(CSBV感染48h幼虫)和L48H组(健康幼虫)筛选到47个DEmiRNAs,其中有30个表达上调,有17个表达下调。GO分析表明,部分DEmiRNAs及相关靶基因参与免疫系统过程和刺激反应等功能;KEGG通路分析显示,除涉及物质和能量代谢通路外,主要的免疫通路包括MAPK、溶酶体、Hippo、凋亡信号通路等。选取对蜜蜂调控具有重要作用和将要研究的8个miRNAs进行RT-qPCR验证结果表明,结果表明其表达水平与测序结果高度一致,表明测序准确可靠。通过本研究,不仅有助于我们深入认识CSBV感染中蜂幼虫过程中宿主miRNA变化情况,也为探究中华蜜蜂和CSBV相互作用时miRNA发挥的功能提供帮助。 展开更多
关键词 CSBV 中华蜜蜂 幼虫 MICRORNA 测序
原文传递
春繁期补饲花粉和橡胶蜂蜜对中蜂囊状幼虫病的防控探究 被引量：9
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作者 张学文 杨爽 +4 位作者 宋文菲 苗春辉 陈顺安 黄新球 罗卫庭 《浙江农业科学》 2016年第12期2114-2117,共4页
中蜂囊状幼虫病(简称中囊病)是危害中华蜜蜂养殖最为严重的病毒病,中蜂一旦感染中蜂囊状幼虫病毒(Chinese sacbrood virus,CSBV),很难治愈。为研究营养饲喂对中囊病的防治效果,在春繁期定期对已检测患中囊病的蜂群补充饲喂花粉和橡胶蜂... 中蜂囊状幼虫病(简称中囊病)是危害中华蜜蜂养殖最为严重的病毒病,中蜂一旦感染中蜂囊状幼虫病毒(Chinese sacbrood virus,CSBV),很难治愈。为研究营养饲喂对中囊病的防治效果,在春繁期定期对已检测患中囊病的蜂群补充饲喂花粉和橡胶蜂蜜,利用RT-PCR技术检测饲喂后蜂群中成年工蜂、工蜂幼虫和雄蜂幼虫感染CSBV情况。结果显示,补饲花粉和橡胶蜂蜜后,感染CSBV蜂群中成年工蜂、工蜂幼虫和雄蜂幼虫均携带CSBV,染病率分别为91.7%、50.0%和100.0%,但蜂群"烂子"明显减轻,患病蜂群由显性感染转为隐性感染。表明春繁期补充饲喂花粉和橡胶蜂蜜对中囊病有一定的防控效果,能提高蜂群的抗病力,但不能根除CSBV。 展开更多
关键词 中华蜜蜂 囊状幼虫病 春繁期 花粉 橡胶蜂蜜 补充饲喂
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蜜蜂对接种球囊菌孢子幼虫清除行为的研究 被引量：5
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作者 李江红 王海 +2 位作者 庄建斌 郑志阳 梁勤 《中国蜂业》 2010年第12期5-8,共4页
为研究不同白垩病抗性蜜蜂蜂群对接种蜜蜂球囊菌孢子幼虫的清除行为。利用微量移液器对未患白垩病的意大利蜜蜂、患白垩病的意大利蜜蜂以及从未报道患病的中华蜜蜂的二日龄幼虫接种蜜蜂球囊菌孢子的水溶液,观察计算患病与否蜂群对接种... 为研究不同白垩病抗性蜜蜂蜂群对接种蜜蜂球囊菌孢子幼虫的清除行为。利用微量移液器对未患白垩病的意大利蜜蜂、患白垩病的意大利蜜蜂以及从未报道患病的中华蜜蜂的二日龄幼虫接种蜜蜂球囊菌孢子的水溶液,观察计算患病与否蜂群对接种幼虫的清除能力的差异。结果显示,未患病的意大利蜜蜂和中华蜜蜂对接种蜜蜂幼虫分别有65%和60%的清除率,而患病意大利蜜蜂则只有约22%的清除率。抗性蜂群对接种幼虫的清除主要发生在接种后的2～3天内和化蛹后,而患病蜂群在幼虫期则基本没有清除,只在蛹期有少量的清除。该结果说明,对染病幼虫的及时清除行为是蜜蜂抗白垩病的重要机制。 展开更多
关键词 蜜蜂 球囊菌 孢子 接种 卫生行为
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