自然界中存在对家蚕二分浓核病毒(Bombyx mori Bidensovirus, BmBDV)不敏感的家蚕,对病毒的抗性由家蚕缺失基因+nsd2决定,以该基因为研究对象展开研究。本文利用家蚕中肠cDNA为模版,通过PCR分别扩增出在对BmBDV敏感家蚕和不敏感家蚕中...自然界中存在对家蚕二分浓核病毒(Bombyx mori Bidensovirus, BmBDV)不敏感的家蚕,对病毒的抗性由家蚕缺失基因+nsd2决定,以该基因为研究对象展开研究。本文利用家蚕中肠cDNA为模版,通过PCR分别扩增出在对BmBDV敏感家蚕和不敏感家蚕中均表达的+nsd2基因序列中的3部分截短片段,以及仅在对BmBDV敏感家蚕中表达的+nsd2基因序列的截短片段,测序后将扩增出的片段分别连接至pET-30a原核表达载体。异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导融合蛋白表达,对诱导得出的带有6*His标签的融合蛋白进行SDS-PAGE电泳和Western blot分析。将得到的蛋白纯化后与弗氏佐剂按一定比例混合,充分乳化后对小鼠进行皮下注射免疫。利用制得的抗血清对原核表达产物和家蚕中肠组织蛋白进行免疫印迹分析。SDS-PAGE电泳和Western blot分析证明成功构建带有6*His标签和不同截短蛋白的原核表达载体,获得对应的2种重组融合蛋白,利用该蛋白制备2种多克隆抗体,制得的抗体可分别对敏感型家蚕和不敏感家蚕进行分析检测,该抗体还可验证+NSD2蛋白在家蚕中肠内的特异性表达。本研究成功实现2种不同截短蛋白的表达,利用截短+NSD2蛋白制备的2种多克隆抗体可分别特异性检测+NSD2完整型蛋白和NSD2缺失型蛋白,为后续对+NSD2蛋白跨膜域缺失后的功能探究奠定了基础。展开更多
