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体外转录法制备小反刍兽疫病毒荧光定量RT-PCR检测标准阳性模板
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作者 赵文姬 包静月 +1 位作者 李林 王志亮 《中国动物检疫》 CAS 北大核心 2008年第12期28-30,共3页
针对小反刍兽疫病毒的F基因设计了一对荧光定量RT—PCR的引物和探针，在正向引物的5’端加上T7启动子后与反向引物扩增小反刍兽疫病毒株Nigeria75／1细胞培养液RNA．切胶回收目的条带作为体外转录模板．体外转录后测RNA浓度以及OD值。... 针对小反刍兽疫病毒的F基因设计了一对荧光定量RT—PCR的引物和探针，在正向引物的5’端加上T7启动子后与反向引物扩增小反刍兽疫病毒株Nigeria75／1细胞培养液RNA．切胶回收目的条带作为体外转录模板．体外转录后测RNA浓度以及OD值。线性试验和特异性试验结果表明，该模板具有良好的线性范围和特异性。当稀释度为4．9×10^8-4．9×10^3拷贝／μL时，相关系数为0．999。该模板稳定性好。-80℃保存一个月后无显著变化。对起始浓度为4．9×10^6、4．9×10^5、4．9×10^4拷贝／μl的标准品分别检测10次，变异系数分别为1．09％，1．47％，1．34％，表明以此模板进行荧光定量PCR具有较好的重复性。 展开更多
关键词 小反刍兽疫病毒 体外转录 实时定量RT—PCR
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