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嗜水气单胞菌国内分离株的毒力因子分布与致病性相关性分析 被引量：18
1
作者 付乔芳 邱军强 +2 位作者 胡鲲 杨先乐 安健 《生物学杂志》 CAS CSCD 2011年第6期53-57,共5页
为了研究分析国内致病性嗜水气单胞菌的毒力因子的分布及与致病性的相关性及其防治,选取5种主要毒力因子气溶素(aerA)、溶血素(hlyA)、丝氨酸蛋白酶(ahpA)、抗金属蛋白酶(ast)、肠毒素(altA)设计5对特异性引物,用PCR方法进行检测,采用... 为了研究分析国内致病性嗜水气单胞菌的毒力因子的分布及与致病性的相关性及其防治,选取5种主要毒力因子气溶素(aerA)、溶血素(hlyA)、丝氨酸蛋白酶(ahpA)、抗金属蛋白酶(ast)、肠毒素(altA)设计5对特异性引物,用PCR方法进行检测,采用急性毒性实验方法测定菌株对异育银鲫的半数致死量(50%lethal dose,LD50),细菌药物敏感试验纸片扩散(K-B)法检测对抗生素的敏感性,结果显示:除菌株Hong12的LD50约为109 cfu,毒力弱外,其他毒力均较强,LD50均在106 cfu左右。aerA、ahpA、hlyA、altA、ast 5种毒力基因的携带率分别为77.8%、88.9%、100%、100%、77.8%。通过比较嗜水气单胞菌毒力基因的分布情况与其对鲫鱼致病性试验结果可以发现,aerA、ahpA为嗜水气单胞菌致病的主要毒力因子,与致病性存在相关性,ast与致病力存在一定相关性,但不是主要毒力因子,hlyA、altA与致病性不存在相关性。9株嗜水气单胞菌对青霉素、羧苄青霉素、万古霉素不敏感,对复合磺胺、头孢噻肟、利福平中毒敏感,对呋喃妥因、氯霉素、四环素、氧氟沙星高度敏感。 展开更多
关键词 嗜水气单胞菌 毒力因子 致病性 相关性
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乳酸杆菌组成型启动子探测载体pgateway-612的构建 被引量：2
2
作者 陈家锃 崔红玉 +4 位作者 田志军 葛俊伟 安同庆 彭金美 李一经 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期849-853,共5页
为筛选适宜乳酸菌(LAB)宿主表达载体的启动子,本研究以大肠杆菌-LAB穿梭载体pPG612为基本骨架,利用GatewayTM克隆技术操作构建了LAB组成型启动子探测载体,并利用该载体筛选了短乳杆菌的S层启动子。我们利用底物X-gluC与报告基因gusA编... 为筛选适宜乳酸菌(LAB)宿主表达载体的启动子,本研究以大肠杆菌-LAB穿梭载体pPG612为基本骨架,利用GatewayTM克隆技术操作构建了LAB组成型启动子探测载体,并利用该载体筛选了短乳杆菌的S层启动子。我们利用底物X-gluC与报告基因gusA编码的蛋白酶之间的特异性显色反应筛选阳性菌落,超声破碎后的菌体蛋白经SDS-PAGE和western blot分析表明该启动子在宿主菌中具有组成型启动子活性。本研究为进一步利用表达载体及筛选其他LAB启动子奠定基础。 展开更多
关键词 乳酸菌 启动子探测载体 Gateway克隆技术 X-gluC
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致鹅卵黄性腹膜炎E.coli fimFGH基因序列分析
3
作者 钱琨 张永志 +1 位作者 金文杰 秦爱建 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期854-857,共4页
为研究致鹅卵黄性腹膜炎大肠杆菌(E.coli)fimFGH基因的变异情况,本实验根据GenBank中登录的序列设计引物,PCR扩增了3株致鹅卵黄性腹膜炎性E.coli E0238、E0239、E0240Ⅰ型菌毛的fimFGH基因并测序。序列比对分析结果表明,3株细菌的fimF、... 为研究致鹅卵黄性腹膜炎大肠杆菌(E.coli)fimFGH基因的变异情况,本实验根据GenBank中登录的序列设计引物,PCR扩增了3株致鹅卵黄性腹膜炎性E.coli E0238、E0239、E0240Ⅰ型菌毛的fimFGH基因并测序。序列比对分析结果表明,3株细菌的fimF、fimG和fimH基因及其所编码的蛋白序列同源性达96%以上,其中fimH编码蛋白的序列同源性达98%以上。序列变异分析结果显示,FimH蛋白的变异主要集中分布在FimH粘附素N末端的4个氨基酸位点N91(S)/S91N99、A48V以及N156K,仅有E0239菌株发生了A48V变异;FimF、FimG蛋白各有一个多变区域,分别位于FimF蛋白的111位～124位氨基酸和FimG蛋白的4位～16位氨基酸之间,其中E0238、E0239菌株FimF蛋白发生了A111S的变异,E0238和E0240菌株FimG蛋白发生了C4R/V9L的变异,但变异的具体意义还需要进一步研究。 展开更多
关键词 鹅卵黄性腹膜炎 E.COLI fimF fimG fimH 序列分析
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禽多杀性巴氏杆菌外膜蛋白H基因在真核细胞中的表达及检测
4
作者 宫强 牛明福 +3 位作者 秦翠丽 孙晓菲 王帅涛 曲宁 《畜牧与兽医》 北大核心 2010年第7期50-52,共3页
利用PCR技术扩增出禽多杀性巴氏杆菌1 050 bp的外膜蛋白H基因(omph)片段,克隆到pMD18-T上,再亚克隆到真核载体pcDNA3.1(+)上,构建重组质粒pOMPH,将该重组质粒体外转染SP2/0细胞,检测其表达情况。结果表明本试验成功构建了真核表达质粒pO... 利用PCR技术扩增出禽多杀性巴氏杆菌1 050 bp的外膜蛋白H基因(omph)片段,克隆到pMD18-T上,再亚克隆到真核载体pcDNA3.1(+)上,构建重组质粒pOMPH,将该重组质粒体外转染SP2/0细胞,检测其表达情况。结果表明本试验成功构建了真核表达质粒pOMPH,通过RT-PCR由转染了重组质粒的SP2/0细胞中扩增出了目的条带,Western blotting分析结果显示重组质粒pOMPH转染的SP2/0细胞泳道出现38ku的特异条带,间接免疫荧光分析表明在转染了pOMPH的SP2/0细胞中出现绿色荧光,说明omph基因在SP2/0细胞中成功表达了活性蛋白,从而为进一步研制DNA疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 禽多杀性巴氏杆菌 外膜蛋白H基因(omph) 表达
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