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犬抗蜱疫苗研究进展
1
作者 杨丰利 刘雨双 +2 位作者 孙静 喻俊皓 万春云 《中国畜牧兽医》 北大核心 2026年第1期127-135,共9页
蜱作为犬类重要的体外寄生虫,可传播多种人兽共患病,如莱姆病和巴贝斯虫病等,对公共卫生构成严重威胁。目前,杀虫剂是防控蜱虫的主要手段,但长期使用导致蜱的抗药性增加,且会带来环境污染问题。因此,亟需开发更安全、有效的防控措施。... 蜱作为犬类重要的体外寄生虫,可传播多种人兽共患病,如莱姆病和巴贝斯虫病等,对公共卫生构成严重威胁。目前,杀虫剂是防控蜱虫的主要手段,但长期使用导致蜱的抗药性增加,且会带来环境污染问题。因此,亟需开发更安全、有效的防控措施。犬抗蜱疫苗通过特异性抗体干扰蜱的摄食、生殖和附着功能,具有广阔的应用前景。研究发现,多种候选蛋白(如Bm86、ATAQ、SUB、TIM、HK、LIP、FER1、FER2、P0、64TRP、AQP、L7LTU1和GST等)可作为疫苗抗原,通过减少蜱的数量、体重、产卵量等方式降低蜱的繁殖和感染能力。然而,现有抗原对多种蜱的交叉保护效果仍不理想,且在犬中的应用效果尚需进一步验证。未来研究应聚焦于犬的疫苗接种试验,开发更多候选保护抗原,利用疫苗组学和量子疫苗组学等新技术提高疫苗效力,并结合饲养管理、合理使用杀虫剂和抗蜱疫苗,形成综合防控体系。笔者概括了蜱的种类及其对犬和人类健康的危害,回顾了杀虫剂在蜱防控中的应用及其局限性,并重点分析了犬抗蜱疫苗的研究现状。 展开更多
关键词 犬 蜱 疫苗 候选抗原
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抗球虫病枯草芽孢杆菌活载体口服疫苗ET seven的构建与鉴定
2
作者 卢俊营 倪君丽 +13 位作者 代倩倩 陈祥杰 蔡海明 宋勇乐 林栩慧 吕敏娜 张小慧 李娟 廖申权 戚南山 孙铭飞 张健騑 朱易斌 胡倩倩 《中国畜牧兽医》 北大核心 2026年第3期1512-1522,共11页
【目的】构建柔嫩艾美耳球虫EtAMA1-EtAMA2-EtMIC3-EtMIC4-EtMIC13-EtROP5-EtSAG17抗原表位的ET seven重组枯草芽孢杆菌表达质粒,并验证其在枯草芽孢杆菌中蛋白表达及其展示部位,为研发新型口服球虫疫苗提供研究思路。【方法】利用ET se... 【目的】构建柔嫩艾美耳球虫EtAMA1-EtAMA2-EtMIC3-EtMIC4-EtMIC13-EtROP5-EtSAG17抗原表位的ET seven重组枯草芽孢杆菌表达质粒,并验证其在枯草芽孢杆菌中蛋白表达及其展示部位,为研发新型口服球虫疫苗提供研究思路。【方法】利用ET seven真核表达质粒和枯草芽孢杆菌基因组DNA,分别扩增ET seven基因和芽孢衣壳蛋白编码基因CotB,通过同源重组技术与载体pDG364融合,构建整合型重组质粒pDG364-CotBET seven,并将该重组质粒电转化枯草芽孢杆菌WB800N感受态细胞。通过Western blotting和间接免疫荧光方法检测ET seven融合蛋白的表达。利用重组枯草芽孢杆菌芽孢免疫麻黄鸡,间接ELISA检测鸡血清中特异性IgG抗体水平,通过攻虫试验评估免疫保护效果。【结果】PCR扩增获得大小分别为1761和1124 bp的ET seven和CotB基因。成功构建整合型重组质粒pDG364-CotB-ET seven并转入枯草芽孢杆菌WB800N感受态细胞内,获得能稳定遗传的重组枯草芽孢杆菌WB800N-CotB-ET seven。Western blotting结果显示,重组枯草芽孢杆菌WB800NCotB-ET seven在90.6 ku处有特异性条带,ET seven蛋白的高免血清可特异性结合融合表达蛋白,确定融合蛋白正确表达。间接免疫荧光检测结果显示,在芽孢上检测到特异性荧光信号。ELISA检测结果显示,免疫鸡血清中特异性IgG抗体在二次免疫后呈高抗体水平阳性。攻虫试验结果显示,与攻虫对照组相比,免疫重组枯草芽孢杆菌芽孢组鸡每克粪便卵囊数显著下降(P<0.05)。【结论】本研究成功构建了表面展示ET seven融合蛋白的重组枯草芽孢杆菌,该重组芽孢具有良好的免疫原性,并能诱导产生特异性免疫保护,为开发新型抗球虫口服疫苗奠定基础。 展开更多
关键词 柔嫩艾美耳球虫 口服疫苗ET seven 枯草芽孢杆菌 芽孢表面展示
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棘胸蛙抗菌肽Cathelicidin的分子特征及在柠檬酸杆菌胁迫下的表达分析
3
作者 蓝丽珍 华宝玉 傅明骏 《中国畜牧兽医》 北大核心 2026年第1期469-478,共10页
【目的】Cathelicidin是一类脊椎动物特有的内源性抗菌肽类物质,具有明显的抗菌抗炎作用。本研究在棘胸蛙中鉴定一种新的Cathelicidin,并探究Cathelicidin基因的结构及功能,为抗菌肽基因家族的研究提供依据。【方法】采用基因克隆方法获... 【目的】Cathelicidin是一类脊椎动物特有的内源性抗菌肽类物质,具有明显的抗菌抗炎作用。本研究在棘胸蛙中鉴定一种新的Cathelicidin,并探究Cathelicidin基因的结构及功能,为抗菌肽基因家族的研究提供依据。【方法】采用基因克隆方法获得Cathelicidin基因序列全长,利用生物信息学方法分析其编码蛋白的理化性质、结构域、信号肽、二级结构和三级结构,通过Mega X软件构建系统进化树。利用实时荧光定量PCR方法检测棘胸蛙各组织中Cathelicidin基因表达水平,以及在弗氏柠檬酸杆菌和布氏柠檬酸杆菌胁迫下Cathelicidin基因表达变化。【结果】Cathelicidin基因序列全长为730 bp,开放阅读框为465 bp,编码154个氨基酸,预测Cathelicidin分子质量为137.3 ku,等电点(pI)为5.20;1-20位氨基酸为信号肽,21-116位氨基酸间有1个结构域,该结构域内存在4个保守的半胱氨酸残基,末端有一段含18个氨基酸的成熟肽。二级结构预测显示,Cathelicidin蛋白α-螺旋、β-折叠和无规则卷曲占比分别为35.7%、19.5%和44.8%;三级结构同源建模显示,其由1条肽链盘绕形成,功能域由α-螺旋和β-折叠构成。系统进化分析表明,棘胸蛙Cathelicidin与蛙科的云南棘蛙亲缘关系最近,聚为一支。实时荧光定量PCR结果显示,Cathelicidin基因在棘胸蛙各组织中均表达,其中在肝脏和肾脏中表达量较高。柠檬酸杆菌感染后,棘胸蛙肝脏中Cathelicidin基因的表达呈现时序性表达变化特征,弗氏柠檬酸杆菌感染后,与0 h相比,其表达量在72 h出现极显著高峰;而布氏柠檬酸杆菌感染则引起其表达持续下调。【结论】Cathelicidin基因结构特征明确,在棘胸蛙各组织均广泛表达,其mRNA表达随不同病原菌侵染呈现时序性表达变化,为后续深入挖掘Cathelicidin基因在养殖产业中的应用提供理论基础。 展开更多
关键词 棘胸蛙 抗菌肽 CATHELICIDIN 病原菌胁迫
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抗菌肽Loong-3的分子设计及其抑菌活性影响因素分析
4
作者 杭柏林 李杰 +9 位作者 阿卜杜瓦日斯·艾海提 程洛妤 楚彪 董明欣 任涛 盛玥 宋如意 王俊文 何宏轩 刘保国 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第10期4952-4963,共12页
【目的】通过分子设计及抑菌性能评价,获得具有广谱抗菌活性的抗菌肽,为临床生产提供新的抗生素替代品。【方法】借助在线生物信息学工具设计1条多肽Loong-3,采用琼脂糖扩散法测定其抑菌活性,通过倍比稀释法测定其最小抑菌浓度,采用菌... 【目的】通过分子设计及抑菌性能评价,获得具有广谱抗菌活性的抗菌肽,为临床生产提供新的抗生素替代品。【方法】借助在线生物信息学工具设计1条多肽Loong-3,采用琼脂糖扩散法测定其抑菌活性,通过倍比稀释法测定其最小抑菌浓度,采用菌落培养法测定其最小杀菌浓度,通过倍比稀释法测定其溶血率,并分析多种理化因子(热、紫外线、反复冻融、盐离子、酸碱、血清、有机试剂、酶)对其抑菌活性的影响。【结果】设计的多肽Loong-3为新的阳离子型疏水性耐热螺旋多肽,抗菌谱较广,其对革兰阴性菌大肠杆菌、沙门菌和绿脓杆菌的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度分别为0.976~500和1.953~31.25μg/mL,对革兰阳性菌金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度分别为31.25和62.5μg/mL,对真菌白色念珠菌的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度分别为125和500μg/mL。多肽Loong-3有一定的溶血性,浓度从0.976增至250μg/mL时,溶血率也从5.78%升至76.68%。除了胰酶外,在多种理化因子(热、紫外线、反复冻融、盐离子、酸碱、血清、有机试剂、酶)作用下,多肽Loong-3的最小抑菌浓度虽有波动,但仍具有抑菌活性。【结论】设计的多肽Loong-3为新的阳离子型广谱抗菌肽,有一定的溶血性,热、紫外、反复冻融、盐离子、酸碱、血清、有机试剂、酶对多肽Loong-3的抑菌活性没有明显影响。 展开更多
关键词 抗菌肽 分子设计 抑菌活性 生物信息学 抗生素替代品
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禽腺病毒Fiber2蛋白抗原制备2种新型疫苗及保护效果试验
5
作者 岳筠 刘霞 +3 位作者 胡茜 许力文 尹德晶 程振涛 《贵州畜牧兽医》 2025年第6期27-31,共5页
为提高禽腺病毒4型(FAdV-4)疫苗的免疫效果,以FAdV-4贵州分离株的纤突蛋白(Fiber2)为抗原,通过间接免疫荧光检测pVAX1-Fiber2重组质粒在LMH细胞内的表达情况,以此构建重组质粒,制备DNA疫苗;通过pColdⅠ载体对Fiber2进行原核表达,构建原... 为提高禽腺病毒4型(FAdV-4)疫苗的免疫效果,以FAdV-4贵州分离株的纤突蛋白(Fiber2)为抗原,通过间接免疫荧光检测pVAX1-Fiber2重组质粒在LMH细胞内的表达情况,以此构建重组质粒,制备DNA疫苗;通过pColdⅠ载体对Fiber2进行原核表达,构建原核表达载体,制备亚单位疫苗,并对2种新型疫苗与灭活疫苗的攻毒保护效果进行比较。结果:pVAX1-Fiber2重组质粒可在LMH细胞内有效表达Fiber2蛋白,原核表达的Fiber2重组蛋白具有良好的免疫原性;Fiber2亚单位疫苗、Fiber2 DNA疫苗、灭活疫苗的保护率分别为98%、58%、96%。组织病理学分析显示,3种疫苗均可减轻FAdV-4感染的病理变化程度,其中Fiber2亚单位疫苗与灭活疫苗的效果更好。结论:Fiber2亚单位疫苗具有良好的攻毒保护效果,可作为防控FAdV-4的候选疫苗。 展开更多
关键词 禽腺病毒4型 Fiber2蛋白 DNA疫苗 亚单位疫苗 保护效果
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禽流感、新城疫二联五价灭活疫苗的免疫效果研究 被引量：3
6
作者 于晴晴 周祥瑜 +10 位作者 李文昕 刘艳晶 王燕 和新文 何晨 邓国华 施建忠 田国彬 包红梅 曾显营 陈化兰 《中国农业科学》 北大核心 2025年第1期182-191,共10页
【背景】H5、H7、H9亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)和新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)是严重危害禽业的重要病原,接种油乳剂型灭活疫苗是预防禽流感和新城疫的主要手段。当前养殖场预防这些传染病至少需要2种以上... 【背景】H5、H7、H9亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)和新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)是严重危害禽业的重要病原,接种油乳剂型灭活疫苗是预防禽流感和新城疫的主要手段。当前养殖场预防这些传染病至少需要2种以上疫苗,导致家禽接种疫苗次数多,免疫负担重;另外,制备油乳剂型灭活疫苗的白油主要依赖进口,存在“卡脖子”风险。【目的】为了减少疫苗接种次数,降低免疫负担,对比国产和进口白油佐剂效果,本研究制备并评估了同时预防禽流感(H5+H7+H9)、新城疫的不同白油佐剂二联五价灭活疫苗,以期达到“一针防多病”的免疫效果,并为实现动物疫苗进口白油佐剂国产化替代提供数据支撑。【方法】将已构建的禽流感H5-Re13、H5-Re14、H7-Re4、H9-GX11583株和新城疫ND rLa-VII株共5株疫苗株分别接种鸡胚,收获尿囊液,经浓缩灭活后,按照1份抗原3份佐剂的比例加入不同的矿物油佐剂(Total、Marcol 52和HTM70),混合乳化,制成二联五价灭活疫苗,并分别以2 mL/只和0.5 mL/只的剂量通过肌肉注射接种3周龄SPF鸡,评价疫苗的安全性和有效性。【结果】免疫效力试验结果显示,3种白油佐剂制备的二联五价灭活疫苗对鸡均具有良好的安全性;3种白油佐剂疫苗接种鸡或免疫后均可产生针对H5-Re13株、H5-Re14株、H7-Re4株、H9-GX11583株和ND rLa-VII株有效的HI抗体,均可获得对效力检验毒株攻击的完全免疫保护。HI抗体持续期结果显示,3种白油佐剂灭活疫苗均可持续诱导高水平抗体半年以上,与进口白油(Total、Marcol 52)相比,国产白油HTM70诱导的HI抗体水平与进口白油Total差异不显著,高于进口白油Marcol 52,且国产白油佐剂HTM70批次间无明显差异。【结论】制备的禽流感(H5+H7+H9)、新城疫二联五价灭活疫苗对SPF鸡具有良好的免疫效果,且有望实现进口白油佐剂国产化替代。 展开更多
关键词 禽流感 新城疫 多联多价 灭活疫苗 佐剂 免疫效果
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抗菌肽抑菌作用机制及在畜禽中的应用 被引量：6
7
作者 郭佳佳 聂晶 +4 位作者 曲久 旦增占都 李小伟 江明锋 刘益丽 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第2期934-945,共12页
抗菌肽(antimicrobibal peptides, AMPs)是一类由宿主基因编码且具有广谱杀菌作用的小分子多肽,是几乎所有生物体非特异性免疫的重要组成成分。抗菌肽种类多样,按照生物活性可分为抗细菌、抗真菌、抗病毒、抗寄生虫、抗肿瘤等不同类型... 抗菌肽(antimicrobibal peptides, AMPs)是一类由宿主基因编码且具有广谱杀菌作用的小分子多肽,是几乎所有生物体非特异性免疫的重要组成成分。抗菌肽种类多样,按照生物活性可分为抗细菌、抗真菌、抗病毒、抗寄生虫、抗肿瘤等不同类型。抗菌肽一般具有正电荷和两亲性,可与疏水表面和膜结构发生相互作用,破环膜的完整性及抑制细胞内核酸、蛋白质等物质的活性,在细胞壁、细胞膜、细胞内及病毒的相关靶点发挥抑菌作用。在以细胞膜为靶点的抗菌肽中,相关研究提出了桶板、环孔、地毯、凝聚等不同细胞膜损伤模型,即抗菌肽通过不同的杀菌机制表现出了抗细菌、抗真菌和抗病毒等广谱的生物活性。抗菌肽因其独特的杀菌机制有着广阔的应用前景,在畜禽养殖过程中,作为绿色饲料添加剂能增加畜禽体重、提高肠道有益菌数量、提高免疫球蛋白含量、降低炎症因子浓度,在畜禽的生产性能、肠道菌群、免疫力及疾病防治等方面发挥重要作用,是畜禽行业未来发展中替抗产品的良好选择。然而抗菌肽还存在用法用量尚未明确、使用成本较高、联合使用效果不明确等限制因素,笔者对抗菌肽的抑菌作用机制及在畜禽中的应用进行总结,并对其未来发展进行展望,以期为抗菌肽的研究及应用提供参考。 展开更多
关键词 抗菌肽 作用机制 生产性能 肠道菌群 免疫 疾病防治
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表达PEDV S蛋白优势抗原区域的重组PRRSV活载体疫苗株的鉴定 被引量：1
8
作者 劳梦琴 刘瑞琳 +13 位作者 陈鹏飞 黄世静 于家荣 朱钧锐 孙祁 虞凌雪 高飞 姜一峰 童武 刘长龙 李丽薇 于海 童光志 周艳君 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第1期155-163,共9页
猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)和猪流行性腹泻(PED)是当前对养猪业影响较大的两种重要传染病,为了开发可同时针对这两种疫病的疫苗,本研究以PRRSV HuN4-F112活疫苗株为载体,将PEDV S蛋白中可诱导产生中和抗体的抗原区域进行优化和组合,命名... 猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)和猪流行性腹泻(PED)是当前对养猪业影响较大的两种重要传染病,为了开发可同时针对这两种疫病的疫苗,本研究以PRRSV HuN4-F112活疫苗株为载体,将PEDV S蛋白中可诱导产生中和抗体的抗原区域进行优化和组合,命名为SNE,利用反向遗传操作技术将其引入至HuN4-F112株基因组中,构建了含有SNE的PRRSV全长cDNA克隆pHuN4-F112-SNE,通过病毒拯救获得了重组病毒rHuN4-F112-SNE株,经过对重组病毒引入基因和表达蛋白的鉴定,证实获得的重组病毒rHuN4-F112-SNE能够正确表达PEDV S蛋白优势抗原区域,其生物学特性与亲本毒株相似。将该重组病毒连续传至30代,引入的SNE基因均能获得稳定表达,且不影响亲本毒复制和自身蛋白的表达,表明重组病毒rHuN4-F112-SNE中引入的SNE基因可稳定遗传,研究结果为后续评价rHuN4-F112-SNE作为二价基因工程活载体疫苗的有效性奠定了基础。 展开更多
关键词 PEDV S蛋白 PRRSV 重组病毒
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抗菌肽MALK杀菌活性、生物相容性与作用机制 被引量：1
9
作者 李毓雯 胡明阳 +2 位作者 赵璐 方禹鑫 董娜 《东北农业大学学报》 北大核心 2025年第2期89-99,共11页
为获得1条具备良好杀菌活性、生物相容性及环境稳定性的铁调素衍生肽,以猪肝脏表达的铁调素Hepcidin为模板,运用截短和氨基酸替换策略获得衍生肽MALK。通过杀菌活性、溶血活性、细胞毒性和稳定性评估其功能特性;运用圆二色谱(CD)及分子... 为获得1条具备良好杀菌活性、生物相容性及环境稳定性的铁调素衍生肽,以猪肝脏表达的铁调素Hepcidin为模板,运用截短和氨基酸替换策略获得衍生肽MALK。通过杀菌活性、溶血活性、细胞毒性和稳定性评估其功能特性;运用圆二色谱(CD)及分子动力学试验,分析MALK二级结构及其与脂质体间的作用关系;利用LPS结合、细菌外膜通透性、内膜通透性及ROS聚集试验探讨其潜在杀菌机制。结果表明:抗菌肽MALK对多种细菌具有广谱杀菌活性,在酸性环境及胃蛋白酶作用下依然保持较强活性,同时具有低溶血性和低细胞毒性。CD光谱及分子动力学的分析结果表明,MALK在模拟疏水环境呈α-螺旋结构;机制研究结果表明,MALK可诱导细菌内膜、外膜通透性升高和细胞内ROS积累,可能通过膜破坏与氧化应激双重机制发挥杀菌作用。综上,MALK具有良好杀菌性能和安全性,有望作为替抗候选肽应用于畜牧领域。 展开更多
关键词 抗菌肽 铁调素 杀菌活性 生物相容性 分子动力学 杀菌机制
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筛选Toll样受体激动剂用于羊抗人载脂蛋白A1抗体的制备 被引量：1
10
作者 邓碧华 周宇杰 +3 位作者 尹文竹 唐欣薇 梅栋 徐志伟 《安徽农业科学》 2025年第1期98-101,共4页
为了筛选能够提高羊免疫应答的Toll样受体激动剂,设计针对羊TLR1~TLR10基因序列的引物,采用PCR方法检测羊体内Toll样受体的表达情况。然后,将人载脂蛋白A1(ApoA1)和HMT13佐剂配伍不同的TLR1~TLR9样受体激动剂,分组免疫湖羊后采集血样,... 为了筛选能够提高羊免疫应答的Toll样受体激动剂,设计针对羊TLR1~TLR10基因序列的引物,采用PCR方法检测羊体内Toll样受体的表达情况。然后,将人载脂蛋白A1(ApoA1)和HMT13佐剂配伍不同的TLR1~TLR9样受体激动剂,分组免疫湖羊后采集血样,并通过琼脂扩散试验检测抗体效价。结果表明:在湖羊的血液中均可检测到TLR1~TLR10的特异性目的片段。经过3、5、7次免疫后,添加TLR3激动剂的组效价最高,说明TLR3激动剂Ploy(I∶C)免疫增强效果最佳,可作为提高羊疫苗免疫的候选激动剂。 展开更多
关键词 TOLL样受体 激动剂 湖羊 APOA1 免疫应答
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猪流行性腹泻新型疫苗的研究进展
11
作者 刘晓琳 张传健 +6 位作者 郭仕琦 郭容利 陈赛赛 王志胜 姜平 王继春 白娟 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第3期229-236,共8页
猪流行性腹泻(PED)是一种以呕吐、腹泻脱水和对哺乳仔猪致死率高为特征的高度接触性猪肠道传染病,给猪场造成严重的经济损失。2010年以来,猪流行性腹泻病毒(PEDV)变异株在我国猪群中暴发,对1周龄内仔猪致死率可达100%。传统的疫苗诱导... 猪流行性腹泻(PED)是一种以呕吐、腹泻脱水和对哺乳仔猪致死率高为特征的高度接触性猪肠道传染病,给猪场造成严重的经济损失。2010年以来,猪流行性腹泻病毒(PEDV)变异株在我国猪群中暴发,对1周龄内仔猪致死率可达100%。传统的疫苗诱导抗体水平低,黏膜免疫反应不足,已不能提供充足的保护,因此,新型疫苗的研制是控制变异株的关键。目前研制的亚单位疫苗使用安全而免疫原性有待提高;重组病毒活载体疫苗可表达外源抗原,但免疫效力不稳定;细菌活载体疫苗口服可刺激黏膜免疫,但存在毒力返强风险;转基因植物疫苗表达产物安全可靠而产量不高;核酸疫苗花费低、制备简单但输入基因存在不可控性。本文从PED亚单位疫苗、重组病毒活载体疫苗、细菌活载体疫苗、转基因植物疫苗以及核酸疫苗五个方面进行综述,以期为PED的防控提供参考。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 亚单位疫苗 重组病毒活载体疫苗 细菌活载体疫苗 转基因植物疫苗 核酸疫苗
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欧亚类禽H1N1亚型猪流感全病毒灭活疫苗的免疫保护效力评价
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作者 陈荣琳 邢燕茹 +13 位作者 王娟 李健楠 高硕磊 刘清艳 祝宇翔 周艳君 单同领 童武 郑浩 刘长龙 姜一峰 孔宁 童光志 于海 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第2期35-42,共8页
本研究以Madin-Darby犬肾(MDCK)细胞作为培养基质扩增猪流感病毒,并选择甲醛和β-丙内酯(BPL)两种化学灭活剂对病毒灭活。这两种灭活试剂最佳灭活条件为0.1%甲醛终浓度及37℃灭活24 h,以及0.02%BPL终浓度及4℃灭活18 h,灭活后抗原血凝... 本研究以Madin-Darby犬肾(MDCK)细胞作为培养基质扩增猪流感病毒,并选择甲醛和β-丙内酯(BPL)两种化学灭活剂对病毒灭活。这两种灭活试剂最佳灭活条件为0.1%甲醛终浓度及37℃灭活24 h,以及0.02%BPL终浓度及4℃灭活18 h,灭活后抗原血凝效价比原始病毒低1个滴度左右。在不同灭活剂基础上分别配伍油佐剂ISA 201 VG和水佐剂HA 208乳化,在BALB/c小鼠上对灭活疫苗进行免疫评估及攻毒保护评价,攻毒使用剂量为1×10~6 TCID50/只。甲醛灭活苗相比BPL灭活苗更能刺激小鼠产生高水平的HI抗体,佐剂选用油佐剂ISA 201 VG相比水佐剂HA 208所产生的HI抗体效价更高。攻毒后疫苗免疫组的存活率均达到100%,与对照组相比免疫组肺脏样品中病毒含量明显减少。据以上试验结果,初步认为甲醛+ISA 201 VG佐剂灭活苗对BALB/c小鼠所产生的免疫效果最佳并能较好地抵抗欧亚类禽猪流感病毒的攻击。以上研究结果为后续猪流感全病毒灭活疫苗的设计以及病毒灭活生产工艺提供了一定的研究基础。 展开更多
关键词 欧亚类禽H1N1 甲醛 BPL 全病毒灭活疫苗 免疫效力评价
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猪群疫病mRNA疫苗研究进展
13
作者 殷靖淇 沙洲 +6 位作者 张海光 崔进 郑辉 董雅琴 魏荣 古少鹏 尼博 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第9期4346-4357,共12页
mRNA疫苗是将编码目的蛋白或多肽的mRNA大分子传递至细胞中,经翻译后产生相应抗原蛋白,诱导机体产生免疫应答,以达到免疫预防目的和效果的疫苗。目前,鉴于传统疫苗不能完全满足防疫需求,mRNA疫苗凭借其研发周期短、安全性高及免疫效力... mRNA疫苗是将编码目的蛋白或多肽的mRNA大分子传递至细胞中,经翻译后产生相应抗原蛋白,诱导机体产生免疫应答,以达到免疫预防目的和效果的疫苗。目前,鉴于传统疫苗不能完全满足防疫需求,mRNA疫苗凭借其研发周期短、安全性高及免疫效力强等特点,已成为重大动物疫病防控的主要研究方向之一,有效的mRNA疫苗可减少猪病的发生和传播。笔者对mRNA疫苗的类型及结构、关键技术及已报道的mRNA疫苗在猪流行性腹泻、口蹄疫、猪繁殖与呼吸综合征、非洲猪瘟、猪伪狂犬病、猪流感等猪病领域的研究进行总结,展望mRNA疫苗在猪病防控、疫苗研发领域的应用,以期为猪群疫病mRNA疫苗的研制及开发提供参考。 展开更多
关键词 mRNA疫苗 免疫 预防 猪病
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CHO细胞表达基因工程抗体的研究进展
14
作者 邓思棋 朱元源 +5 位作者 徐璐 李芳韬 赵俊杰 刘业兵 邬静 邹兴启 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第4期520-527,共8页
基因工程抗体为肿瘤、自身免疫性疾病和感染性疾病等提供了新的治疗途径,具有重要的临床使用价值。该抗体属第三代抗体,通过抗体基因改造、DNA重组和蛋白表达技术,在合适的宿主细胞中转录和翻译而进行生产。它具有可塑性强、制备周期短... 基因工程抗体为肿瘤、自身免疫性疾病和感染性疾病等提供了新的治疗途径,具有重要的临床使用价值。该抗体属第三代抗体,通过抗体基因改造、DNA重组和蛋白表达技术,在合适的宿主细胞中转录和翻译而进行生产。它具有可塑性强、制备周期短、操作简单、生产成本低廉等优点。目前,大多数批准上市的治疗性抗体是由中国仓鼠卵巢细胞(CHO)生产的,它能提供复杂的翻译后修饰,使抗体药物具备活性和稳定性。在开发抗体药物的过程中,现有的生产平台仍然面临抗体产量低、质量和稳定性不一致、生产成本高等挑战。本文将综述基因工程抗体的类型、CHO细胞以及重组表达载体的设计策略等,旨在优化表达系统,为提高抗体表达量和降低生产成本提供参考,以满足未来日益增长的生物医药需求。 展开更多
关键词 基因工程抗体 CHO细胞 重组表达载体 生产力
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基于杆状病毒Bac-to-Bac系统的VLP递送mRNA疫苗平台的建立
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作者 马莉莉 王琼娴 +5 位作者 王晓丽 马孙婷 吕立新 徐彬 冯志新 欧阳伟 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第5期41-50,共10页
噬菌体MS2 VLP(噬菌体病毒样颗粒)是不含病毒遗传物质的纳米颗粒,可以自组装成一个二十面体衣壳,适合靶向传递RNA。本研究利用Bac-to-Bac系统(杆状病毒表达系统)生产MS2 VLP包裹的eGFP mRNA。分别设计、合成MS2 VLP的表达框和eGFP mRNA... 噬菌体MS2 VLP(噬菌体病毒样颗粒)是不含病毒遗传物质的纳米颗粒,可以自组装成一个二十面体衣壳,适合靶向传递RNA。本研究利用Bac-to-Bac系统(杆状病毒表达系统)生产MS2 VLP包裹的eGFP mRNA。分别设计、合成MS2 VLP的表达框和eGFP mRNA的表达框,将MS2 VLP的表达框和eGFP mRNA的表达框同时插入pFastBac Dual载体中,获得重组供体质粒pFastBacDual-MS2-eGFP mRNA。转化DH10Bac感受态,通过三抗和蓝白斑(卡拉霉素/庆大霉素/四环素/IPTG/X-Gal)筛选以及PCR鉴定,获得重组的rBacmid-MS2-eGFP mRNA。将rBacmid-MS2-eGFP mRNA转染sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒vBacmid-MS2-eGFP mRNA。通过倒置荧光显微镜观察及Western blot检测表明eGFP获得表达。用vBacmid-MS2-eGFP mRNA感染High 5悬浮细胞进行MS2-eGFP mRNA的大量表达,经超速离心纯化,电镜观察可见大量的直径约30 nm的病毒样颗粒(VLP)。提取纯化的MS2 VLP中包裹的mRNA,通过RT-PCR及测序鉴定,结果表明MS2 VLP中包裹的mRNA为eGFP mRNA。将MS2-eGFP mRNA免疫BALB/c小鼠,进行免疫原性研究,通过ELISA测得的抗体效价为1∶819200,表明MS2-eGFP mRNA可以刺激小鼠产生较强的抗原特异性抗体应答。以上结果表明,利用杆状病毒Bac-to-Bac表达系统生产的MS2 VLP可以包裹外源mRNA,并可将外源mRNA递送到小鼠体内产生特异性体液免疫反应。本研究建立了基于杆状病毒Bac-to-Bac表达系统的VLP递送mRNA疫苗研究平台,为今后动物传染病的mRNA疫苗研发提供新的参考。 展开更多
关键词 BAC-TO-BAC MS2 VLP 递送系统 mRNA疫苗
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表达猪流行性腹泻病毒S1基因重组罗伊氏黏液乳杆菌诱导仔猪特异性免疫应答的研究
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作者 国桂海 马茹梦 +9 位作者 尹方洁 刘芯孜 王梓 孟伟静 李佳璇 崔文 姜艳平 唐丽杰 赵海渊 王晓娜 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第9期4581-4592,共12页
旨在研究猪源罗伊氏黏液乳杆菌(Limosilactobacillus reuteri)作为活菌载体表达猪流行性腹泻病毒保护性抗原S1,口服免疫新生仔猪后进行免疫效果评价,以期研制安全高效的口服黏膜疫苗制剂。本研究构建表达PEDV S1的重组乳酸菌pPG-T7g10-S... 旨在研究猪源罗伊氏黏液乳杆菌(Limosilactobacillus reuteri)作为活菌载体表达猪流行性腹泻病毒保护性抗原S1,口服免疫新生仔猪后进行免疫效果评价,以期研制安全高效的口服黏膜疫苗制剂。本研究构建表达PEDV S1的重组乳酸菌pPG-T7g10-S1/L.reuteri J31,进行生长特性、重组质粒的遗传稳定性、体外IPEC-J2细胞黏附特性,并进行新生仔猪口服重组菌免疫效果的评估。结果显示,重组菌pPG-T7g10-S1/L.reuteri J31相对于亲本株其生长特性未发生显著改变,质粒能够稳定遗传,在仔猪空肠具有较强的定植能力;新生仔猪口服免疫重组菌后,产生黏膜特异性SIgA抗体与血清特异性IgG抗体,且均具有中和PEDV的活性,能够诱导仔猪产生Th1、Th2和Th17型细胞免疫应答反应。综上所述,本研究成功构建重组乳酸菌pPG-T7g10-S1/L.reuteri J31,口服免疫重组菌可诱导仔猪显著产生体液免疫、黏膜免疫和Th1、Th2和Th17型细胞免疫应答,为开发PEDV的口服疫苗候选制剂奠定了理论和实验基础。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻 猪源罗伊氏黏液乳杆菌 口服疫苗
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过表达Klotho的犬脂肪间充质干细胞源的外泌体对犬急性肾损伤的治疗作用
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作者 王晨蕾 郭鑫瑞 +3 位作者 贺海洋 刘阳 马保华 彭莎 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第6期2978-2989,共12页
本研究旨在探究过表达Klotho的犬脂肪间充质干细胞来源的外泌体(exosomes from canine adipose derived mesenchymal stem cells overexpressing Klotho,KL-Exos)对犬急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)的治疗作用。构建过表达Klotho... 本研究旨在探究过表达Klotho的犬脂肪间充质干细胞来源的外泌体(exosomes from canine adipose derived mesenchymal stem cells overexpressing Klotho,KL-Exos)对犬急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)的治疗作用。构建过表达Klotho的重组质粒pCDH-EF1-copGFP-T2A-PURO-Klotho(EF1-KL重组质粒),并转染至犬脂肪间充质干细胞(canine adipose derived mesenchymal stem cells,cADMSCs),超速离心细胞培养液上清收集KL-Exos。选取8只一岁左右体况相近的雄性中华田园犬,随机分为4组,分别为正常对照组(NC)、急性肾损伤组(AKI)、Exos治疗组(Exo)和KL-Exos治疗组(KL-Exo)。AKI组、Exo组和KL-Exo组注射硫酸庆大霉素,剂量为60 mg·(kg·次)^(-1),每日两次,连续5 d;Exo组和KL-Exo组于第6、9、12天分别注射300μg的Exos或KL-Exos进行治疗,NC组和AKI组注射同等剂量的生理盐水。治疗完成后分别依次通过影像学、血清学、解剖学、组织学和分子生物学方法检测相关指标来综合评价治疗效果。测序结果表明,成功构建了EF1-KL重组质粒。相较于转染空载体组,转染EF1-KL重组质粒的cADMSCs的Klotho表达水平显著上调(P<0.001),提示成功建立了过表达Klotho的cADMSCs(KL-cADMSCs)。对该细胞培养液超速离心得到的沉淀进行检测,其粒径在150 nm左右,呈“茶托样”,表达外泌体标志蛋白CD63和Alix,以上结果均证明该沉淀属于外泌体。治疗结果显示,相较于AKI组犬,Exo组和KL-Exo组犬的肾功能显著提高、肾脏的形态质地和组织结构明显恢复好转、肾脏氧化应激程度下降。相较于Exo组犬,KL-Exo组犬的血清肌酐(Cre)浓度(P<0.0001)和尿素氮(Bun)浓度(P<0.0001)极显著下降;B超检查未见明显的肾脏积液;肾脏呈红褐色,质地柔软光滑;苏木精-伊红(HE)染色结果显示,肾小管排列整齐,未见淤血等病变;肾脏组织中超氧化物歧化酶(SOD)浓度显著升高(P<0.0001),过氧化氢(H_(2)O_(2))(P<0.0001)和丙二醛(MDA)(P<0.01)浓度显著下降;肾脏中kelch样ECH相关蛋白1(Keap1)的基因表达水平显著上调(P<0.05),核因子红细胞2相关因子2(Nrf2)的基因表达水平的下调趋势更加明显。KL-Exos主要通过减少肾脏组织氧化应激,提高机体抗氧化能力来治疗犬的AKI,Keap1-Nrf2信号通路可能是KL-Exos治疗AKI的关键通路。 展开更多
关键词 KLOTHO 外泌体 脂肪间充质干细胞 急性肾损伤 犬
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猪α干扰素8s突变体原核表达及其体内外活性鉴定
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作者 吴琼 李凌丹 +7 位作者 袁辉 宾晨 邓可 李伟 叶十一 李国攀 沈青春 熊涛 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第5期2413-2423,共11页
猪α干扰素(PoIFN-α)可用于治疗和预防病毒感染,但天然猪α干扰素抗病毒活性低,寻找高生物活性的突变体序列对猪传染性疾病的防治措施研究具有重要意义。运用生物信息学方法分析和比对PoIFN-α的各亚型氨基酸序列,对天然PoIFN-α序列... 猪α干扰素(PoIFN-α)可用于治疗和预防病毒感染,但天然猪α干扰素抗病毒活性低,寻找高生物活性的突变体序列对猪传染性疾病的防治措施研究具有重要意义。运用生物信息学方法分析和比对PoIFN-α的各亚型氨基酸序列,对天然PoIFN-α序列的八个位点进行定点突变构建PoIFN-α8s突变体并进行原核表达纯化;获得重组蛋白后在PK-15细胞上针对水疱性口炎病毒(VSV)进行活性测定,同时在小鼠体内验证PoIFN-α8s突变体对猪伪狂犬病病毒(PRV)的抑制能力。结果发现,重组PoIFN-α8s测得抗病毒活性为1.13×10^(7)IU·mg^(-1),对比PoIFN-α产品,PoIFN-α8s可降低PK-15细胞上VSV的病毒滴度和基因拷贝数达10倍以上,具有更高的体外抑制VSV增殖能力;动物试验表明,PoIFN-α8s可降低感染PRV小鼠体内各器官的病毒载量。综上,本研究成功构建高效的PoIFN-α8s突变体,并验证了其良好的体内外抗病毒活性。 展开更多
关键词 猪Α干扰素 原核表达 突变 生物信息学分析 抗病毒活性
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猪防御素-1的原核表达及抑菌效应分析
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作者 国德洋 胡慧 +1 位作者 郑雪莉 姜艳芬 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第6期2836-2846,共11页
旨在探究原核表达的猪防御素-1(porcineβ-defensin-1)的体内外抑菌作用,为临床乳房炎的治疗提供材料和理论依据。本试验通过构建PBD-1的原核表达载体,优化诱导表达条件,过量表达纯化后测定最小抑菌浓度并绘制杀菌动力曲线。分别用E.col... 旨在探究原核表达的猪防御素-1(porcineβ-defensin-1)的体内外抑菌作用,为临床乳房炎的治疗提供材料和理论依据。本试验通过构建PBD-1的原核表达载体,优化诱导表达条件,过量表达纯化后测定最小抑菌浓度并绘制杀菌动力曲线。分别用E.coli 13-1和S.aureus 4-1构建小鼠乳房炎模型,并用不同浓度的PBD-1进行乳房内灌注治疗试验,通过乳腺组织病理变化及其载菌量观察治疗效果。结果显示,成功构建PBD-1的原核表达载体,重组PBD-1为可溶性表达,表达量为328.6 mg·mL^(-1)。体外抑菌试验显示,PBD-1对E.coli 13-1、S.aureus 4-1和S.epidermidis 25-1均有抑制作用,且MIC为82.15μg·mL^(-1)。乳房内灌注试验结果显示,1×MIC和2×MIC的PBD-1对S.aureus 4-1和E.coli 13-1小鼠乳房炎模型有一定的治疗作用。重组PBD-1对3种细菌均具有体外抑制作用,且对S.aureus 4-1和E.coli 13-1的乳房炎模型具有治疗作用。 展开更多
关键词 原核表达 乳房炎 猪防御素-1 体外抑菌 动物模型
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SARS-CoV-2刺突蛋白受体结合结构域编码基因的体外转录及其在293T细胞中的表达
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作者 周雪 高磊 +3 位作者 张瑾宬 袁思凌 操蓉 刘丽娜 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第3期123-129,共7页
为获得能表达严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)刺突蛋白受体结合结构域(RBD)的体外转录mRNA,将设计、优化并合成的RBD基因片段插入真核表达载体pcDNA3.1(+),构建重组表达质粒pcDNA3.1(+)-RBD;重组质粒转染哺乳动物细胞293T后,We... 为获得能表达严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)刺突蛋白受体结合结构域(RBD)的体外转录mRNA,将设计、优化并合成的RBD基因片段插入真核表达载体pcDNA3.1(+),构建重组表达质粒pcDNA3.1(+)-RBD;重组质粒转染哺乳动物细胞293T后,Western blot检测重组蛋白RBD的表达;以表达RBD的重组质粒为模板,PCR扩增包含T7启动子的RBD基因片段作为体外转录模板,之后利用T7转录试剂盒体外转录获得修饰的RBD mRNA,添加多聚腺苷酸尾后使用RNA纯化试剂盒进行纯化,纯化后的RBD mRNA转染至293T细胞中,利用Western blot进行目的蛋白表达鉴定。结果显示,编码RBD的重组质粒构建成功并能在293T细胞中表达外源蛋白,体外转录获得修饰的RBD mRNA能在哺乳动物细胞中翻译,表达的RBD蛋白能与抗RBD的单克隆抗体反应,具有免疫反应原性,为SARS-CoV-2 RBD mRNA疫苗的研制奠定了基础。 展开更多
关键词 严重急性呼吸综合征冠状病毒2 刺突蛋白 受体结合结构域 体外转录 真核表达
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