猫传染性腹膜炎病毒SYBR Green实时荧光定量PCR检测方法的建立与临床应用 被引量：3

1

作者 李星颖 谢梓民 +11 位作者 原耀贤 孙铭澮 江文康 赵明明 何诗 何静 赖健仪 白银山 陈胜锋 陈志胜 马骏 王丙云 《中国兽医杂志》 北大核心 2025年第3期44-49,共6页

为了提高猫传染性腹膜炎(FIP)的临床检出率,本试验根据猫传染性腹膜炎病毒(FIPV)M基因设计特异性引物,将扩增的目的基因连接到p MD19-T载体上,获得重组质粒并作为标准阳性模板,建立针对FIPV的SYBR Green实时荧光定量PCR(q PCR)检测方法... 为了提高猫传染性腹膜炎(FIP)的临床检出率,本试验根据猫传染性腹膜炎病毒(FIPV)M基因设计特异性引物,将扩增的目的基因连接到p MD19-T载体上,获得重组质粒并作为标准阳性模板,建立针对FIPV的SYBR Green实时荧光定量PCR(q PCR)检测方法,并对其特异性、敏感性、重复性和临床检出率进行验证。结果显示,本方法梯度稀释的标准品与Ct值呈良好的线性关系,R^(2)=0.999 9,扩增效率为92.4%;与其他猫常见病毒未发生交叉反应;最低检测限为3.48×10^(2) copies/μL,敏感性是普通PCR检测方法的100倍;该方法重复性好,批内和批间变异系数均小于2.4%;应用该方法对临床阳性样本的检出率为100%,阴性样本检出率为0。结果表明,本试验建立的SYBR Green q PCR检测方法特异性强、敏感性高、重复性好、临床检测效果佳,可用于FIPV的临床诊断。 展开更多

关键词 猫传染性腹膜炎病毒 M基因 SYBR Green 实时荧光定量PCR(qPCR)

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猪流行性腹泻病毒重组腺病毒疫苗的构建及小鼠免疫试验 被引量：25

2

作者 焦茂兴 吴锋 +1 位作者 刘德辉 黄毓茂 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第2期11-16,共6页

通过RT-PCR和重组PCR技术扩增出猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)疫苗株sM、M、S基因,构建重组腺病毒穿梭质粒。穿梭质粒与BJ5183细菌同源重组构建同源重组腺病毒质粒,同源重组腺病毒质粒经PacⅠ酶切后转染AD-29... 通过RT-PCR和重组PCR技术扩增出猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)疫苗株sM、M、S基因,构建重组腺病毒穿梭质粒。穿梭质粒与BJ5183细菌同源重组构建同源重组腺病毒质粒,同源重组腺病毒质粒经PacⅠ酶切后转染AD-293细胞,获得3个含有目的基因的重组腺病毒。将3个具有感染能力的复制缺陷性重组腺病毒共同感染Vero细胞,细胞上清液进行小鼠免疫特性研究。结果表明,共同感染Vero细胞所得蛋白能诱导小鼠产生特异性体液免疫应答。 展开更多

关键词 猪流行性腹泻病毒 重组腺病毒 疫苗 免疫

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不同毒力番鸭呼肠孤病毒在番鸭免疫器官的分布和排毒 被引量：1

3

作者 程晓霞 朱小丽 +4 位作者 林锋强 陈仕龙 陈少莺 王劭 李兆龙 《畜牧兽医杂志》 2012年第5期8-10,12,共4页

探讨番鸭呼肠孤病毒强毒株和弱毒株在番鸭免疫器官中的分布和排毒的差异。结果显示强毒株在感染后1d就可在脾脏、法氏囊、胸腺检出病毒RNA,高峰期为攻毒后7～14d;直到感染后35d,在免疫器官中不能检测到病毒RNA。接种强毒株后7d开始向外... 探讨番鸭呼肠孤病毒强毒株和弱毒株在番鸭免疫器官中的分布和排毒的差异。结果显示强毒株在感染后1d就可在脾脏、法氏囊、胸腺检出病毒RNA,高峰期为攻毒后7～14d;直到感染后35d,在免疫器官中不能检测到病毒RNA。接种强毒株后7d开始向外界排毒,而14d后停止向外界排毒。雏鸭免疫弱毒疫苗后3d,即可在脾、胸腺、法氏囊中检出病毒RNA;高峰期为攻毒后7～14d,免疫后21d免疫器官中的检测逐渐降低,直到感染后28d,在免疫器官中不能检测到病毒RNA。表明番鸭接种活疫苗后7d开始向外界排毒,而11d后停止向外界排毒。 展开更多

关键词 番鸭呼肠孤病毒 免疫器官 强毒株 弱毒株 分布排毒

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山羊关节炎-脑炎病毒甘肃株env基因的克隆和序列分析

4

作者 曲娟娟 赵立平 +1 位作者 沈荣显 相文华 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期478-481,共4页

本试验参考GenBank上发表的CAEV-63株的env基因核苷酸序列设计一对引物,以CAEV甘肃株前病毒DNA为模板,PCR扩增产物约2.9kb,与预期的目的片段大小一致。回收目的基因片段并将其克隆到pMD18-T载体上,经PCR及酶切鉴定阳性的重组质粒测序,... 本试验参考GenBank上发表的CAEV-63株的env基因核苷酸序列设计一对引物,以CAEV甘肃株前病毒DNA为模板,PCR扩增产物约2.9kb,与预期的目的片段大小一致。回收目的基因片段并将其克隆到pMD18-T载体上,经PCR及酶切鉴定阳性的重组质粒测序,结果表明所扩增2893个核苷酸片段含有CAEV囊膜基因的全序列,编码964个氨基酸。核苷酸和氨基酸序列分析显示,CAEV甘肃株env基因与CAEV-63美国株的env基因核苷酸和氨基酸的同源性分别为99.0%和98.1%。 展开更多

关键词 山羊关节炎-脑炎病毒 ENV基因 克隆 序列分析

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几种新出现的猪源病毒研究综述 被引量：1

5

作者 翁善钢 《广东畜牧兽医科技》 2012年第4期1-4,共4页

过去的20多年里,有多种新的猪病病毒出现。猪Torque teno病毒、猪博卡病毒以及其他新出现的猪细小病毒、猪淋巴细胞疱疹病毒以及猪札幌病毒等感染猪后,通常呈亚临床状态。本文主要讨论上述病毒的传播、流行以及致病情况。

关键词 新出现病毒 猪Torque teno病毒 猪博卡病毒 猪淋巴细胞疱疹病毒 猪札幌病毒

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H1N1亚型猪流感病毒中国分离株血凝素基因分子演化的研究 被引量：20

6

作者 陈君彦 李海燕 +3 位作者 申之义 陈化兰 于康震 毕英佐 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期13-17,共5页

对 2 0 0 1年中国华南及东北地区的 15株H1N1亚型猪流感病毒 (SIV)分离株的血凝素 (HA)基因进行了序列测定和分析 ,并绘制了进化树。研究结果表明 ,15株H1N1SIV和HA基因核苷酸全长为 1778bp ,共编码 5 6 6个氨基酸 ;而且 ,15株H1N1亚型... 对 2 0 0 1年中国华南及东北地区的 15株H1N1亚型猪流感病毒 (SIV)分离株的血凝素 (HA)基因进行了序列测定和分析 ,并绘制了进化树。研究结果表明 ,15株H1N1SIV和HA基因核苷酸全长为 1778bp ,共编码 5 6 6个氨基酸 ;而且 ,15株H1N1亚型SIV的HAI蛋白在 10、11、2 3、87、2 87位都存在高度保守的糖基化位点 ,此外 ,在 2 76位多了一个“_NTT_”糖基化位点 ,与参考毒株SW /IW / 93/ 0 1一致 ,这可能是近期H1N1亚型SIV的一个分子特征。本研究进一步发现 ,15株H1N1亚型SIV的HA基因切割位点氨基酸组成为IPSIQSR↓G ,具有非高致病力毒株分子特征 ;而其受体结合位点在HA蛋白上第 2 2 6位是Q ,第 2 2 8位是G ,可能具有感染禽的潜力。经同源性比较 ,15株H1N1亚型SIV的HA基因与古典型H1N1猪谱系中的WIS/ 4 75 4 / 94的同源性相对最高 ,核苷酸和氨基酸序列同源性分别达到 95 7%～ 96 1%和96 5 %～ 97 2 %。由同源性比较结果和进化树分析可见 。 展开更多

关键词 H1N1亚型 猪流感病毒 中国分离株 血凝素基因 分子演化 序列分析

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猪流感病毒广东株的分离鉴定及其特性 被引量：33

7

作者 王连想 毕英佐 +1 位作者 曹永长 李海燕 《中国兽医科技》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期17-21,共5页

对广东省 2 5个猪场有呼吸道症状的 30～ 6 0日龄仔猪 ,用棉拭子采样 ,接种鸡胚分离病毒。经鉴定 ,7株为H1N1亚型毒株。对其中 3株分离株的形态学、部分理化特性和生物学特性的研究结果表明 ,病毒粒子在透射电镜下为杆状、丝状、椭圆形... 对广东省 2 5个猪场有呼吸道症状的 30～ 6 0日龄仔猪 ,用棉拭子采样 ,接种鸡胚分离病毒。经鉴定 ,7株为H1N1亚型毒株。对其中 3株分离株的形态学、部分理化特性和生物学特性的研究结果表明 ,病毒粒子在透射电镜下为杆状、丝状、椭圆形及圆形 ,大小为 80～ 12 0nm ;血凝素(HA)均为热不稳定型 ;均不耐热且对乙醚、氯仿敏感 ;均能凝集公鸡、豚鼠、兔、大白鼠、山羊等动物红细胞 ,对小白鼠红细胞的凝集性有所不同 ,均不凝集牛和猪红细胞 ;经绒毛尿囊腔接种 9日龄鸡胚 ,不能导致鸡胚死亡 ,EID50 分别为 10 — 6 .17/ 0 .2mL、10 - 5.83/ 0 .2mL、10 - 4.4 3/ 0 .2mL ;经鼻腔途径感染小白鼠 ,均未导致小鼠出现症状和死亡 ,接种后第 14d在部分存活的小鼠血清中可检出病毒抗体。 展开更多

关键词 广东株 猪 流感病毒 分离 鉴定 特性

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非典型性型猪瘟病毒云南株的分离鉴定及其E0/E2基因序列分析 被引量：6

8

作者 孙永科 杨玉艾 +3 位作者 孔令富 毕保良 冷春永 冷思明 《中国动物传染病学报》 CAS 2009年第3期13-20,共8页

从云南10个地州13个大型猪场采集到的17份样品中分离得到5株猪瘟病毒。经测序鉴定昆明、玉溪、曲靖地区分离株的核苷酸序列99.99%同源,大理和宝山地区的核苷酸序列99.99%同源,5株分离毒均属于基因二群。5株分离毒在PK-15细胞上的平均毒... 从云南10个地州13个大型猪场采集到的17份样品中分离得到5株猪瘟病毒。经测序鉴定昆明、玉溪、曲靖地区分离株的核苷酸序列99.99%同源,大理和宝山地区的核苷酸序列99.99%同源,5株分离毒均属于基因二群。5株分离毒在PK-15细胞上的平均毒价约为2×106TCID50/mL,应用荧光抗体染色可以检测到CSFV。通过RT-PCR扩增猪瘟病毒约1 200bp和700bp的E2和E0蛋白全部抗原编码区序列,并将其分别克隆到pMD18-T载体中。序列分析结果表明,5株分离株的E0和E2基因片段为697bp和1 173bp,与猪瘟病毒Shimen株的核苷酸同源性仅为95.4%和96.6%、82.5%和84.3%,与C-株的核苷酸同源性分别为94.1%和95.2%、83.3%和85.4%。动物试验结果表明,分离的2株猪瘟野毒不能引起典型的猪瘟症状,但是能持续带毒。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 非典型性症状 分离鉴定

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猪细小病毒VP2基因核酸疫苗的构建及免疫原性 被引量：5

9

作者 王印 王新 郭万柱 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期533-536,共4页

将PPV VP2基因酶切后克隆到真核表达载体pcDNA-3.1(+)中,构建pcDNA-VP2,经脂质体法转染IBRS-2细胞后,Western blotting检测pcDNA-VP2能正常表达。采用pcDNA-VP2肌注Balb/c小鼠,作间接ELISA抗体检测试验,并采用淋巴细胞增殖试验(MTT法)... 将PPV VP2基因酶切后克隆到真核表达载体pcDNA-3.1(+)中,构建pcDNA-VP2,经脂质体法转染IBRS-2细胞后,Western blotting检测pcDNA-VP2能正常表达。采用pcDNA-VP2肌注Balb/c小鼠,作间接ELISA抗体检测试验,并采用淋巴细胞增殖试验(MTT法)和流式细胞仪(FACS)法对小鼠的细胞免疫进行检测。结果表明,pcDNA-VP2能诱导小鼠产生细胞免疫和体液免疫应答。PCR扩增检测结果显示,未能从免疫小鼠各组织的基因组中扩增出VP2基因片段。 展开更多

关键词 猪细小病毒 VP2基因 核酸疫苗 免疫原性

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牛白血病病毒分子致病机理研究进展 被引量：6

10

作者 张志 赵宏坤 崔治中 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期154-156,共3页

牛白血病 (BovineLeucosis,BL)是牛的一种慢性肿瘤性疾病 ,其特征为淋巴样细胞恶性增生、进行性恶病质和高度病死率。其病原为牛白血病病毒 (BLV)。本病分布广泛 ,几乎遍布全世界养牛的国家。我国自 1977年以来 ,先后在江苏、安徽、上... 牛白血病 (BovineLeucosis,BL)是牛的一种慢性肿瘤性疾病 ,其特征为淋巴样细胞恶性增生、进行性恶病质和高度病死率。其病原为牛白血病病毒 (BLV)。本病分布广泛 ,几乎遍布全世界养牛的国家。我国自 1977年以来 ,先后在江苏、安徽、上海、陕西、新疆等地发现本病 ,并有扩大之势 ,对养牛业的发展构成严重威胁。近年来 ,随着分子生物学的飞速发展 ,牛白血病病毒的研究也取得了较大进展 。 展开更多

关键词 牛白血病病毒 病原分子生物学 致病机理

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NDV基因Ⅶ型DNA纳米颗粒疫苗初探 被引量：2

11

作者 吴耀棠 梁健鹏 +6 位作者 林思娴 刘宏梽 向斌 丁铲 徐成刚 廖明 任涛 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2022年第2期34-41,共8页

本研究利用PCR方法扩增新城疫病毒(NDV)rGM株的F基因,并将其克隆至真核表达载体pCAGGS,构建重组表达质粒pCAGGS-F。采用离子交联法将壳聚糖、MgSO4、pCAGGS-F以及三聚磷酸钠(TPP)混合,制备成新城疫DNA纳米颗粒疫苗。IFA试验检测结果表... 本研究利用PCR方法扩增新城疫病毒(NDV)rGM株的F基因,并将其克隆至真核表达载体pCAGGS,构建重组表达质粒pCAGGS-F。采用离子交联法将壳聚糖、MgSO4、pCAGGS-F以及三聚磷酸钠(TPP)混合,制备成新城疫DNA纳米颗粒疫苗。IFA试验检测结果表明,F重组蛋白成功表达。制备的纳米颗粒疫苗通过点眼滴鼻免疫2周龄SPF鸡2次后,对10^(3) EID_(50) NDV强毒株rGM保护率可达100%。此试验为新城疫DNA纳米疫苗等的研制奠定基础。 展开更多

关键词 新城疫病毒 F基因 壳聚糖 纳米颗粒

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由化脓隐秘杆菌引起犊牛化脓性关节炎的诊治 被引量：2

12

作者 董文龙 王家祯 +3 位作者 朱世馨 贾小营 马红霞 高云航 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2016年第9期55-55,共1页

吉林省某牛场饲养50头商品育肥牛,其中3头引进不久的犊牛于2015年5月初陆续出现以跛行、行动困难为主要症状的疾病。根据发病情况、临床症状及实验室检验,确诊为由化脓隐秘杆菌引起牛化脓性关节炎。1发病情况该牛场于2015年4月末从外地... 吉林省某牛场饲养50头商品育肥牛,其中3头引进不久的犊牛于2015年5月初陆续出现以跛行、行动困难为主要症状的疾病。根据发病情况、临床症状及实验室检验,确诊为由化脓隐秘杆菌引起牛化脓性关节炎。1发病情况该牛场于2015年4月末从外地引进20头育肥犊牛,为长途运输,运输车辆装载密度过大,有3头犊牛膝关节不同程度受伤,入群前未做任何消毒处理。 展开更多

关键词 化脓性关节炎 犊牛 杆菌 诊治 发病情况 临床症状 实验室检验 长途运输

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基因Ⅶ型新城疫的特点与防制 被引量：1

13

作者 杜元钊 范根成 《河南畜牧兽医》 2000年第10期23-24,共2页

关键词 鸡病 基因Ⅶ型新城疫 流行特点 防治

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八正散加减治疗畜禽尿闭症

14

作者 孙德聪 《中兽医医药杂志》 北大核心 1995年第3期24-25,共2页

八正散加减治疗畜禽尿闭症孙德聪（山东省威海市环翠区兽医站２６４２００）八正散出自《和剂局方》，是治湿热蕴结下焦之良方。凡症见小便黄赤，淋沥不畅，尿时疼痛或小腹胀痛，癃闭不通等皆可治疗。亦对肾盂肾炎。膀胱炎、泌尿系结石... 八正散加减治疗畜禽尿闭症孙德聪（山东省威海市环翠区兽医站２６４２００）八正散出自《和剂局方》，是治湿热蕴结下焦之良方。凡症见小便黄赤，淋沥不畅，尿时疼痛或小腹胀痛，癃闭不通等皆可治疗。亦对肾盂肾炎。膀胱炎、泌尿系结石的下焦湿热郁结，经加减化裁，每每得... 展开更多

关键词 家畜 家禽 八正散 尿闭症 治疗

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仔猪传染性胃肠炎的综合防控 被引量：10

15

作者 魏天锁 罗香彦 +4 位作者 海兴正 张军锋 朱文超 王乃侠 李乃学 《动物医学进展》 CSCD 2007年第B08期106-107,共2页

猪传染性胃肠炎是猪的一种常见性、多发性传染病,尤其是哺乳仔猪病死率很高,给养殖户造成较大的经济损失。笔者通过多年的兽医工作实践,认真分析了本病在诊断和治疗方面的误区和问题,并总结归纳出了一套有效的治疗方案,对今后猪病的防... 猪传染性胃肠炎是猪的一种常见性、多发性传染病,尤其是哺乳仔猪病死率很高,给养殖户造成较大的经济损失。笔者通过多年的兽医工作实践,认真分析了本病在诊断和治疗方面的误区和问题,并总结归纳出了一套有效的治疗方案,对今后猪病的防控工作具有一定的指导意义。 展开更多

关键词 猪传染性胃肠炎 诊断 防控

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规模场散发猪瘟的原因分析及防控措施

16

作者 徐东华 张守伟 《河南畜牧兽医（综合版）》 2010年第3期20-21,共2页

1当前猪瘟的流行和发病特点 猪瘟（HC）是由猪瘟病毒引起的一种高度接触性传染病，被国际兽医局（OIE）列为A类传染病。近几年来，尽管规模猪场采取了一系列预防措施控制猪瘟，然而，猪体的免疫抗体保护率仍较低（63％）。其流行形式... 1当前猪瘟的流行和发病特点 猪瘟（HC）是由猪瘟病毒引起的一种高度接触性传染病，被国际兽医局（OIE）列为A类传染病。近几年来，尽管规模猪场采取了一系列预防措施控制猪瘟，然而，猪体的免疫抗体保护率仍较低（63％）。其流行形式从周期性大流行转为一年四季波浪式地区散发性流行, 展开更多

关键词 猪瘟病毒 散发性 防控措施 接触性传染病 原因 模场 发病特点 规模猪场

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传染性法氏囊病病毒分子生物学研究进展

17

作者 张靖飞 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2001年第z1期120-125,共6页

传染性法氏囊病毒是鸡的一种重要的病原。文章概述了在传染性法氏囊病毒基因组结构和功能。

关键词 传染性法氏囊病毒 分子生物学 鸡病防治

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应用ELISA法、RT-PCR法检测固原市部分地区肉牛轮状病毒的研究 被引量：3

18

作者 田风林 魏锁成 《黑龙江畜牧兽医（下半月）》 北大核心 2017年第10期126-128,共3页

为了探析固原地区肉牛轮状病毒病的流行情况及临床意义,采集宁夏固原市部分地区500头腹泻病牛粪样,首先用酶联免疫吸附试验(ELISA)进行轮状病毒检测,再用RT-PCR法进行核酸复检。结果表明:所有采集的500份粪样中,用ELISA检测出128份轮状... 为了探析固原地区肉牛轮状病毒病的流行情况及临床意义,采集宁夏固原市部分地区500头腹泻病牛粪样,首先用酶联免疫吸附试验(ELISA)进行轮状病毒检测,再用RT-PCR法进行核酸复检。结果表明:所有采集的500份粪样中,用ELISA检测出128份轮状病毒粪样,阳性率为25.6%;用RT-PCR检测出141份轮状病毒粪样,阳性率为28.2%。说明:轮状病毒是导致固原地区肉牛腹泻的主要病原微生物;ELISA法和RT-PCR法结合应用检测肉牛轮状病毒效果良好。 展开更多

关键词 肉牛 轮状病毒 酶联免疫吸附试验(ELISA) RT-PCR检测 腹泻

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特种野猪仔猪黄白痢病原菌的分离鉴定及流行病学调查 被引量：1

19

作者 孙秋艳 《黑龙江畜牧兽医（下半月）》 CAS 北大核心 2015年第6期90-92,共3页

随着人们生活水平的提高,肉类制品的品质安全、绿色、营养成为人们的追求,健康绿色的畜禽食品是未来的消费趋势。特种野猪养殖业正是适应了这一趋势迅速发展起来,并不断得到完善。特种野猪肉香味很浓,具有“野味”的特色,营养丰富,瘦肉... 随着人们生活水平的提高,肉类制品的品质安全、绿色、营养成为人们的追求,健康绿色的畜禽食品是未来的消费趋势。特种野猪养殖业正是适应了这一趋势迅速发展起来,并不断得到完善。特种野猪肉香味很浓,具有“野味”的特色,营养丰富,瘦肉率高,脂肪含量低,野猪后腿肉的脂肪只有家猪的50%, 展开更多

关键词 特种野猪 仔猪黄白痢 流行病学调查 肉类制品 肉香味 消费趋势 后腿肉 仔猪黄痢 发病仔猪 仔猪腹泻病

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