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非洲猪瘟病毒人工感染猪主要脏器的病理学观察
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作者 常玲玲 张永强 +6 位作者 王雅诗 张冯禧 张歆悦 赵晓民 戈胜强 李金明 王志亮 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第5期2383-2392,共10页
非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)引起的猪的一种急性、烈性和高度接触性传染病,2018年8月ASFV首次传入我国,给养猪业带来灾难性打击。为明确我国分离获得的ASFV CN2018株的病理损... 非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)引起的猪的一种急性、烈性和高度接触性传染病,2018年8月ASFV首次传入我国,给养猪业带来灾难性打击。为明确我国分离获得的ASFV CN2018株的病理损伤特征,本文对一例人工感染猪主要脏器进行病理学观察。试验猪在人工感染ASFV CN2018株后第11天死亡,对尸体进行系统剖检和组织病理学检查。大体剖检可见皮肤、全身淋巴结、肾脏、膀胱、盲肠、胆囊、心脏、大脑等脏器表面或浆膜面分布出血斑点,胸腔和腹腔积血,肺脏淤血、水肿,呈全身出血性败血症病变。镜检病变以弥漫性出血和淤血为主,伴微血栓形成,淋巴结和脾脏中淋巴细胞严重缺失。免疫组化染色结果显示,巨噬细胞、肾小管上皮细胞及肝细胞胞质中呈ASFV抗原阳性。综上,ASFV CN2018株人工感染猪表现广泛性出血性病变,损伤的主要靶器官及抗原分布与之前报道类似。推测ASFV感染引起的广泛性出血主要与单核巨噬细胞系统激活损伤导致的炎症因子风暴及血管内皮细胞损伤有关,为深入研究我国ASFV流行毒株的致病机制提供了理论数据。 展开更多
关键词 非洲猪瘟 人工感染 病理学观察
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仔猪沙门菌病的诊断与防治
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作者 蒋增海 白松培 +1 位作者 余星雨 姬少佳 《河南畜牧兽医》 2025年第18期79-81,共3页
为了对郑州市某猪场的患病仔猪进行正确诊断,更好地指导临床用药,经过病史调查、临床症状检查和病理剖解后,无菌采集病死仔猪的心血、肺脏及淋巴结等进行常规细菌分离,通过革兰染色镜检、PCR检测与血清学试验对分离菌进行鉴定,采取纸片... 为了对郑州市某猪场的患病仔猪进行正确诊断,更好地指导临床用药,经过病史调查、临床症状检查和病理剖解后,无菌采集病死仔猪的心血、肺脏及淋巴结等进行常规细菌分离,通过革兰染色镜检、PCR检测与血清学试验对分离菌进行鉴定,采取纸片法进行分离菌的药敏试验。结果显示,从病死仔猪体内成功分离一株鼠伤寒沙门菌,该分离菌对磺胺异噁唑、阿莫西林、氨苄西林、氯霉素、卡那霉素、四环素和多西环素均耐药,呈多重耐药性;而对头孢噻呋、阿米卡星和多粘菌素B敏感。结合临床症状、病理特征和流行特点,以及病原菌分离鉴定的结果,将该次病例诊断为仔猪沙门菌病;根据药敏试验结果,推荐头孢噻呋、阿米卡星、多粘菌素治疗。 展开更多
关键词 仔猪 沙门菌 药敏试验 诊断 防治
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猪流行性腹泻病毒感染对小肠杯状细胞的影响及其机制的初步分析 被引量:1
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作者 刘芮伶 李昱辰 +1 位作者 汤荣锋 杨倩 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第2期900-911,共12页
本研究旨在探明猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)对仔猪肠道黏液分泌的影响并揭示其潜在的分子机制。构建仔猪PEDV感染模型,通过阿利新蓝-过碘酸-雪夫(Alcian blue-periodic acid-Schiff,AB-PAS)染色和免疫荧光... 本研究旨在探明猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)对仔猪肠道黏液分泌的影响并揭示其潜在的分子机制。构建仔猪PEDV感染模型,通过阿利新蓝-过碘酸-雪夫(Alcian blue-periodic acid-Schiff,AB-PAS)染色和免疫荧光染色,揭示病毒感染对仔猪肠道杯状细胞数量和功能的影响。进一步利用肠道干细胞构建杯状细胞的体外实验模型,探明PEDV在该细胞模型的复制特点后,初步解析PEDV感染对杯状细胞黏液蛋白转录及其分泌调控相关信号通路的影响。体内试验结果显示,PEDV主要感染仔猪的空肠和回肠,其对空肠具有更高的易感性,并能显著抑制肠道黏膜中杯状细胞的数量和分泌功能。进一步利用肠道干细胞建立了杯状细胞体外培养模型,发现病毒感染显著降低了杯状细胞Muc2、TFF 3和SPDEF基因的转录水平,同时,黏液分泌调控的关键通路MAPK信号通路的活性也受到了明显抑制。PEDV感染会导致仔猪肠道杯状细胞数量减少,黏蛋白分泌水平降低。病毒对MAPK信号途径的抑制可能是导致这一现象的关键原因。 展开更多
关键词 PEDV 杯状细胞 MAPK信号通路
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广西某猪场一株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的分离鉴定及致病性分析 被引量:1
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作者 李逸楠 张佳妮 +7 位作者 纪宛彤 吴钰兴 麻润雯 张凌源 李茂宁 韦懿仙 王晓晔 李珣 《广西畜牧兽医》 2025年第1期17-21,共5页
为探究2023年11月广西南宁西乡塘区某规模化养猪场内仔猪全身皮炎的感染病因,确定导致该病的病原菌并探究其病原学特性,为广西地区该疾病临床防控提供一定的理论依据。本研究无菌采集患病仔猪皮炎样本,分离培养病原菌,并通过细菌分离鉴... 为探究2023年11月广西南宁西乡塘区某规模化养猪场内仔猪全身皮炎的感染病因,确定导致该病的病原菌并探究其病原学特性,为广西地区该疾病临床防控提供一定的理论依据。本研究无菌采集患病仔猪皮炎样本,分离培养病原菌,并通过细菌分离鉴定、耐药基因的扩增、细菌全基因的测序、药物敏感性试验、动物回归试验等试验方法,从病原菌的生物学特性、耐药性以及临床发病率进行分析。结果:致病菌株为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA),分离菌在TSA平板上长出金黄色凸起菌落,革兰氏染色可见革兰氏阳性葡萄串状球菌。药敏试验结果提示该致病菌对阿莫西林、环丙沙星等喹诺酮类和β-内酰胺类等药物敏感,对庆大霉素、泰乐霉素等氨基糖苷类、大环内酯类药物呈耐药,对多西环素表现为中介。通过动物回归试验,将该菌株接种到健康猪的皮肤上能造成严重且典型的皮炎症状。本研究顺利分离到一株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌,并对其进行全基因分析和致病性分析,本研究结果能够为该病的预防及用药提供指导性意见。 展开更多
关键词 仔猪皮炎 金黄色葡萄球菌 药物敏感性试验 动物回归试验
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猪流行性腹泻病毒感染仔猪的免疫器官组织病理学和部分细胞因子变化
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作者 李豪 徐巧玉 +6 位作者 靳晓慧 陈红英 李庆豪 金鑫 马俊兴 马世杰 魏战勇 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第10期5190-5201,共12页
为探究猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)感染对仔猪免疫器官的影响,选取8头5日龄健康仔猪作为研究对象,随机分为对照组(n=4)和PEDV感染组(n=4)。PEDV感染仔猪后观察并记录临床症状,在病毒感染2 d后实施安乐死并... 为探究猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)感染对仔猪免疫器官的影响,选取8头5日龄健康仔猪作为研究对象,随机分为对照组(n=4)和PEDV感染组(n=4)。PEDV感染仔猪后观察并记录临床症状,在病毒感染2 d后实施安乐死并采集胸腺、脾、肠系膜淋巴结、髂下淋巴结、腹股沟淋巴结、肩前淋巴结、下颌淋巴结和肺门淋巴结。利用HE染色观察各免疫器官的病理学变化,通过IHC、Western blot和RT-qPCR分别检测病毒在免疫器官的分布、表达量以及肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factorα,TNF-α)、干扰素-β(interferonβ,IFN-β)、白细胞介素-1(interleukin 1,IL-1)与白细胞介素-6(interleukin 6,IL-6)表达量的变化。结果显示:仔猪感染PEDV 1 d后发生水样腹泻。第二天剖检观察到各淋巴结有不同程度的肿大。HE染色发现PEDV主要引起脾脏红髓部分增多,脾索和脾窦界限模糊,脾窦中可见大量的细胞破裂;肠系膜淋巴结中小梁增生变厚,淋巴小结结构模糊不清,数量减少。IHC和RT-qPCR结果显示,PEDV在脾脏、肠系膜淋巴结等免疫器官均有分布,其中肠系膜淋巴结内病毒载量最高;而Western blot未能在以上组织中检测到该病毒。RT-qPCR检测脾脏和肠系膜淋巴结结果表明TNF-α、IFN-β和IL-1均有不同程度的升高,IL-6未发生明显变化。上述结果说明PEDV感染仔猪后部分免疫器官结构受到破坏,且影响了脾脏和肠系膜淋巴结中免疫相关因子TNF-α、IFN-β和IL-1的转录水平,这也为深入研究PEDV的致病机制提供了坚实的基础。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 仔猪 免疫器官 病理损伤 免疫相关因子 病毒分布
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猪支气管败血波氏杆菌、副猪格拉瑟菌和猪链球菌TaqMan三重荧光定量PCR方法的建立与初步应用
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作者 刘汉元 王梓浩 +5 位作者 赵梦菲 黄茜 王斐 华琳 吴斌 彭忠 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第11期5936-5942,共7页
本研究旨在建立一种可快速同时诊断猪支气管败血波氏杆菌(Bordetela bronchiseptica,Bb)、副猪格拉瑟菌(Glaesserella parasuis,GPS)和猪链球菌(Streptococcus suis,SS)的多重荧光定量PCR方法。根据Bb的fla基因,GPS的infB基因,SS的gdh... 本研究旨在建立一种可快速同时诊断猪支气管败血波氏杆菌(Bordetela bronchiseptica,Bb)、副猪格拉瑟菌(Glaesserella parasuis,GPS)和猪链球菌(Streptococcus suis,SS)的多重荧光定量PCR方法。根据Bb的fla基因,GPS的infB基因,SS的gdh基因保守序列设计特异性引物和探针,经过反应条件优化后,建立一种检测三种病原的TaqMan多重荧光定量PCR方法。结果表明,该方法对胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌、伪狂犬病病毒、猪源肺炎克雷伯菌、猪肺源大肠杆菌等病原核酸检测未出现阳性,具有良好的特异性;对三种标准质粒品的最低检测下限分别为8.06、7.11和7.15 copies·μL^(-1),具有较高敏感性;组内和组间变异系数均小于2%,具有良好的稳定性。对2023—2025年收集的513份临床猪肺脏样品进行检测,结果显示,Bb与GPS混合感染的比例为6.63%;Bb与SS混合感染的比例为8.11%;GPS与SS混合感染比例为12.47%;三种病原混合感染的比例为5.46%;所有混合感染的总比例为16.57%。所建立的多重荧光定量PCR方法具有较好的特异性、敏感性和稳定性,可作为临床上三种病原的快速诊断工具。 展开更多
关键词 猪支气管败血波氏杆菌 副猪格拉瑟菌 猪链球菌 多重荧光定量PCR
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基于免疫磁珠的智能手机辅助比色传感平台用于PDCoV/TGEV IgG抗体的快速检测
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作者 刘君君 郭东辉 +6 位作者 刘缓缓 宋润泽 赵赛娅 杨钧尧 魏战勇 项玉强 陈丽颖 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第9期4559-4571,共13页
本研究旨在建立灵敏、经济、便携和快速现场可视化检测猪丁型冠状病毒(PDCoV)和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)IgG抗体的方法。本研究分别将PDCoV和TGEV的N蛋白偶联到羧基磁珠表面形成“PDCoV-N/TGEV-N蛋白特异性IgG-酶标记抗体”三聚体复合... 本研究旨在建立灵敏、经济、便携和快速现场可视化检测猪丁型冠状病毒(PDCoV)和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)IgG抗体的方法。本研究分别将PDCoV和TGEV的N蛋白偶联到羧基磁珠表面形成“PDCoV-N/TGEV-N蛋白特异性IgG-酶标记抗体”三聚体复合物检测体系,建立基于免疫磁珠的间接ELISA方法,结合智能手机辅助比色传感平台,用于猪血清中PDCoV和TGEV IgG抗体的快速可视化检测。结果显示:以检测PDCoV IgG抗体为例,优化了免疫磁珠间接ELISA的反应条件,其最佳反应条件:磁珠用量25μg、抗原包被浓度5μg·mL^(-1)(30 min)、封闭液为2.5%BSA+脱脂奶粉混合液(37℃封闭2 h)、血清孵育60 min、酶标二抗1∶8000稀释(孵育30 min)、TMB显色10 min。在该最佳反应条件下,该方法对PDCoV和TGEV抗体检测效价分别达1∶32768和1∶8192,批内/批间变异系数均<8%,且与7种常见猪源病原体阳性血清无交叉反应。临床验证显示,与中和试验相比,80份样本的检测总符合率达95%(PDCoV)和96.25%(TGEV)。本研究建立的基于免疫磁珠的智能手机辅助比色传感平台的检测方法具有较高的特异性和敏感性,且重复性好,可用于PDCoV和TGEV临床血清样本的现场快速可视化检测,将为PDCoV/TGEV的流行病学调查和疫苗免疫效果评价提供可靠工具。 展开更多
关键词 免疫磁珠 猪丁型冠状病毒 猪传染性胃肠炎病毒 N蛋白 智能手机 比色检测
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猪源致病性格氏乳球菌的分离鉴定及毒力基因分析
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作者 舒静超 张菡 +1 位作者 彭志锋 乔宏兴 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第7期3399-3407,共9页
本研究旨在研究猪源格氏乳球菌的生物学特征、药物敏感性及致病性。从患病猪肝脏中分离到可疑细菌,并对分离的细菌进行革兰染色镜检、基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)鉴定、16S rRNA基因序列测定及序列分析;通过药敏试... 本研究旨在研究猪源格氏乳球菌的生物学特征、药物敏感性及致病性。从患病猪肝脏中分离到可疑细菌,并对分离的细菌进行革兰染色镜检、基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)鉴定、16S rRNA基因序列测定及序列分析;通过药敏试验和小鼠感染试验探究分离菌株的耐药性和致病性;通过PCR扩增筛选分离菌株相关毒力基因。结果显示:从患病猪肝脏中分离到1株产α-溶血环的阳性球菌;MALDI-TOF MS分析、16S rRNA基因测序及进化树分析均显示分离菌株为格氏乳球菌;小鼠感染试验显示,分离菌株对小鼠有较强的致死性,能引起小鼠肝、脾肿大,肠道、腹腔、胸腔严重充血;药敏试验结果显示,分离菌株对β-内酰胺类药物如青霉素G、氨苄西林,以及红霉素、林可霉素耐药,对其它抗生素均敏感;毒力基因检测结果显示,分离菌株含有黏附相关基因adhC1、psaA、eno以及lp1,含有溶血相关基因hly1、hly2、hly3,含有荚膜基因簇形成相关基因cgcC,含有外多糖相关基因epsA、epsB、epsC、epsD、epsL,以及其他毒力基因nadho、sod、pgm、chp。本试验分离的猪格氏乳球菌具有较强的致病性,因其属于人畜共患病原体,带来的潜在风险不可忽视,本研究为临床格氏乳球菌感染的防治提供数据参考。 展开更多
关键词 格氏乳球菌 16S rRNA 药敏试验 毒力基因
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猪伪狂犬病病毒实验感染江口萝卜仔猪的脑组织转录组学差异分析
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作者 孙伟 刘杉杉 +2 位作者 樊雨 邓生青 王清艳 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第10期5170-5179,共10页
为了研究猪伪狂犬病病毒(PRV)感染对江口萝卜猪脑组织基因表达的影响。将12头2月龄仔猪随机分为感染组和对照组,感染组通过肌肉注射接种1 mL PRV-HLJ株(毒价为1×10^(4)TCID50·100μL^(-1)),对照组注射等量PBS。感染后7 d,采... 为了研究猪伪狂犬病病毒(PRV)感染对江口萝卜猪脑组织基因表达的影响。将12头2月龄仔猪随机分为感染组和对照组,感染组通过肌肉注射接种1 mL PRV-HLJ株(毒价为1×10^(4)TCID50·100μL^(-1)),对照组注射等量PBS。感染后7 d,采集脑组织进行组织病理学、免疫组织化学和转录组学测序分析。通过基因本体论(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)分析差异表达基因的功能和通路,并使用荧光定量PCR(qRT-PCR)验证关键基因的表达趋势。结果显示:感染组脑组织中少突胶质细胞数量显著增加,且PRV阳性表达明显。转录组测序共鉴定出269个差异表达基因,其中149个基因上调,120个基因下调。GO分析显示,差异基因主要涉及信号转导、跨膜转运、凋亡和神经活性配体-受体相互作用等生物过程。KEGG分析表明,差异基因显著富集于神经活性配体-受体相互作用、铁死亡和IL-17信号通路。qRT-PCR结果显示,神经活性配体-受体相互作用通路中的LPAR3、GZMA、P2RY2和NMB基因下调表达,而CNR1、CALCR和NTSR1基因上调表达;铁死亡通路中的SLC7A11和SLC40A1基因上调表达,TF基因下调表达;IL-17信号通路中的FOS、FOSB和MAPK15基因均下调表达。本试验研究发现为进一步研究PRV的致病机制提供了新的分子生物学证据,并为PRV的防控和治疗策略提供了重要数据参考。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病病毒 江口萝卜猪 脑组织 转录组学 致病机理
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几起疑似猪李氏杆菌病的诊治报告
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作者 曾令日 熊飙 +1 位作者 曾令越 罗国华 《广西畜牧兽医》 2025年第1期21-22,共2页
猪李氏杆菌病是一种散发性的人畜共患传染病,其主要特征是脑膜炎、败血症和流产[1]。该病多发生在仔猪阶段,发病率较低,但死亡率较高,给养猪业带来一定的经济损失。笔者在工作中诊治过几起疑似猪李氏杆菌病,共发病4头,治愈3头,死亡1头,... 猪李氏杆菌病是一种散发性的人畜共患传染病,其主要特征是脑膜炎、败血症和流产[1]。该病多发生在仔猪阶段,发病率较低,但死亡率较高,给养猪业带来一定的经济损失。笔者在工作中诊治过几起疑似猪李氏杆菌病,共发病4头,治愈3头,死亡1头,治愈率75%,现将诊治情况报告如下。 展开更多
关键词 猪李氏杆菌病 人畜共患传染病 养猪业 诊治报告 脑膜炎 败血症 仔猪 流产
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一株血清Ⅰ型副猪嗜血杆菌的分离鉴定与毒力基因分析
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作者 黄海愉 文愈 +2 位作者 欧美玲 赵觊哲 阮怡颖 《广西畜牧兽医》 2025年第5期199-201,213,共4页
副猪嗜血杆菌(Haemophilus Parasuis,HPS),属于巴斯德氏菌科(Pasteurellacea)、嗜血杆菌属成员副猪嗜血杆菌病是引发猪的一种泛嗜性细菌性传染病,各年龄段猪均可发病,主要影响断奶前后和保育阶段猪。临床特征以多发性纤维素性浆膜炎,如... 副猪嗜血杆菌(Haemophilus Parasuis,HPS),属于巴斯德氏菌科(Pasteurellacea)、嗜血杆菌属成员副猪嗜血杆菌病是引发猪的一种泛嗜性细菌性传染病,各年龄段猪均可发病,主要影响断奶前后和保育阶段猪。临床特征以多发性纤维素性浆膜炎,如关节炎、胸膜炎、心包炎、腹膜炎和伴发肺炎等^([1])。副猪嗜血杆菌为革兰氏阴性菌,不具有溶血性,NAD依赖型细菌,为杆状菌,具有多形性,从球杆状到纤细丝状不等,具有荚膜。副猪嗜血杆菌至少有血清1型~血清15型15个不同的血清型,其中血清型1、5、10、12、13、14型毒力最强,其余血清型通常因患猪不死亡、临床症状不明显,被认为是低毒力菌株^([2])。 展开更多
关键词 血清Ⅰ型 纤维素性浆膜炎 毒力基因 副猪嗜血杆菌
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农村哺乳仔猪链球菌病防治浅谈
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作者 韦华强 《广西畜牧兽医》 2025年第4期173-174,共2页
近两年我镇陆续有小型养猪场(户)前来服务中心咨询,说自家不时出现有母猪生下小猪后一两天,先有1头小猪仔出现脚跛,但还是努力吮奶,认为是母猪踩或压中小猪仔。第二天陆续增加2~3头小猪出现脚跛,仔细观察后发现仔猪脚关节有明显的潮红肿... 近两年我镇陆续有小型养猪场(户)前来服务中心咨询,说自家不时出现有母猪生下小猪后一两天,先有1头小猪仔出现脚跛,但还是努力吮奶,认为是母猪踩或压中小猪仔。第二天陆续增加2~3头小猪出现脚跛,仔细观察后发现仔猪脚关节有明显的潮红肿大,而后自行肌肉注射氟尼辛葡甲胺、磷酸地塞米松、头孢噻呋钠、磺胺类、氟苯尼考、恩诺沙星等,肌肉注射治疗后隔天生病小猪症状未见好转反而加重,出现爬行昏睡不吃奶,换药再注射也效果甚差,仔猪已无力走动,第四天生病仔猪因衰竭而出现死亡,往后几天这窝仔猪几乎全部死亡。 展开更多
关键词 潮红肿大 链球菌病 磷酸地塞米松 脚跛
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一起猪场暴发猪流感的诊治报告
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作者 梁清 《广西畜牧兽医》 2025年第4期171-172,共2页
猪流感(SI)的病原为猪流行性感冒病毒(swine influenza viruses,SIV),属正黏病毒科,基因组为负链RNA。SI是由甲型流感病毒引起的猪急性、热性、高度接触性传染病,猪感染后发生急性上呼吸道感染等病症,并借助空气迅速传播,在全世界各个... 猪流感(SI)的病原为猪流行性感冒病毒(swine influenza viruses,SIV),属正黏病毒科,基因组为负链RNA。SI是由甲型流感病毒引起的猪急性、热性、高度接触性传染病,猪感染后发生急性上呼吸道感染等病症,并借助空气迅速传播,在全世界各个地方经常产生周期性、季节性、地方性流行。甲型流感病毒可感染多种动物,包括哺乳动物和禽类。流感病毒囊膜上的2种重要的抗原,分别是血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA),也是流感病毒分类的2个重要指标。迄今,甲型流感病毒HA有16个亚型(H1~H16),NA有9个亚型(N1~N9),有极强的变异性,可组成各种亚型毒株,各亚型或毒株间致病力差异很大,且对不同宿主的易感性也存在一定差异。 展开更多
关键词 猪流行性感冒病毒 猪流感
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猪肺炎支原体乳酸脱氢酶在诱导猪支气管上皮细胞凋亡中的作用 被引量:4
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作者 王吉英 尹蕊如 +7 位作者 谢星 王海燕 刘胡栋 胡辉 熊祺琰 冯志新 邵国青 于岩飞 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期2195-2205,共11页
猪肺炎支原体感染会引起宿主上皮细胞的损伤及凋亡。上皮屏障的破坏往往导致细菌和病毒的继发感染,给养猪业造成严重的经济损失,但具体的致病机制及毒力因子尚未完全阐明。前期研究发现猪肺炎支原体乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, L... 猪肺炎支原体感染会引起宿主上皮细胞的损伤及凋亡。上皮屏障的破坏往往导致细菌和病毒的继发感染,给养猪业造成严重的经济损失,但具体的致病机制及毒力因子尚未完全阐明。前期研究发现猪肺炎支原体乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)不仅参与猪肺炎支原体的代谢还与猪肺炎支原体的毒力相关。因此,本研究通过原核表达及亲和层析获得猪肺炎支原体乳酸脱氢酶重组蛋白(recombinant LDH, rLDH),之后分别用不同浓度的rLDH与猪支气管上皮细胞(porcine bronchial epithelial cell, PBEC)孵育,经显微镜观察rLDH对细胞形态的影响,通过CCK-8法检测rLDH对细胞活力的影响。选取对细胞形态及活力影响不显著的50和100μg·mL^(-1) rLDH分别与PBEC孵育,通过流式细胞仪检测细胞凋亡率,反转录荧光定量PCR(reverse transcription-quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR)法和免疫印记检测凋亡相关基因caspase 3、caspase 8、caspase 9、Bax、BCL-2的转录水平和蛋白水平。结果显示:猪肺炎支原体rLDH呈剂量依赖性地诱导PBEC凋亡,其作用与猪肺炎支原体菌株一致。用rLDH及Mhp 168孵育后,PBEC的促凋亡因子Bax、caspase 3和caspase 9的mRNA水平显著上调,凋亡抑制因子BCL-2的mRNA水平显著下调,caspase 8的mRNA水平未发生显著变化。促凋亡因子Bax、caspase 3的蛋白表达水平显著上调,凋亡抑制因子BCL-2的蛋白表达水平显著下调。结果表明,猪肺炎支原体可能通过LDH诱导PBEC内源性细胞凋亡,凋亡相关因子caspase 3、caspase 9、Bax和BCL-2在其中发挥重要作用。 展开更多
关键词 猪肺炎支原体(Mhp) 乳酸脱氢酶(LDH) 猪支气管上皮细胞(PBEC) 凋亡
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PEDV、PoRVA和PDCoV TaqMan三重RT-qPCR检测方法的建立与初步应用 被引量:4
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作者 胡泽奇 李润成 +5 位作者 谭祖明 谢秀艳 王江平 秦乐娟 李荣 葛猛 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期2267-2272,共6页
旨在建立一种可快速同时检测猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)、猪A群轮状病毒(porcine rotavirus type A, PoRVA)和猪丁型冠状病毒(porcine deltacoronavirus, PDCoV)三重荧光定量PCR方法。针对PEDV-N、PoRVA-... 旨在建立一种可快速同时检测猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)、猪A群轮状病毒(porcine rotavirus type A, PoRVA)和猪丁型冠状病毒(porcine deltacoronavirus, PDCoV)三重荧光定量PCR方法。针对PEDV-N、PoRVA-VP6和PDCoV-M基因设计了引物和探针,条件优化后进行性能评估,并与商品化试剂盒检测对比。结果显示:本研究建立的三重RT-qPCR方法具有良好特异性,对PRRSV、PCV_2和PRV等阳性核酸不发生扩增;具有较高的敏感性,PEDV、PoRVA和PDCoV的最低检测限均达1 copies·μL^(-1);重复性良好,组内和组间变异系数均小于1%;样本适应性广,检测不同样本类型时,变异系数均小于1%。与商品化试剂盒对比,本研究建立的方法PEDV和PoRVA的检测符合率为92.5%和97.5%,并对PDCoV的检测范围更广,对其变异毒株仍有较好的检测效果。本研究建立的检测方法具有特异性好、敏感性高、稳定性强和样本适应性广等优势,为临床腹泻样本提供了一种好的检测方法。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 猪A群轮状病毒 猪丁型冠状病毒 三重RT-qPCR
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利用单B细胞分选技术制备猪瘟病毒E2蛋白单克隆抗体及其在ELISA中的应用 被引量:2
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作者 马中元 郑君佐 +2 位作者 梁志博 潘丽 曾巧英 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期4579-4589,共11页
本研究旨在建立一种猪瘟病毒E2单抗竞争ELISA检测方法,用于评价猪瘟C株弱毒苗和E2亚单位疫苗的免疫效果。首先,构建猪瘟E2杆状病毒表达载体pFastBAC,通过悬浮培养SF9细胞高效表达E2蛋白;其次,用纯化的E2蛋白免疫BABL/c小鼠,通过流式分选... 本研究旨在建立一种猪瘟病毒E2单抗竞争ELISA检测方法,用于评价猪瘟C株弱毒苗和E2亚单位疫苗的免疫效果。首先,构建猪瘟E2杆状病毒表达载体pFastBAC,通过悬浮培养SF9细胞高效表达E2蛋白;其次,用纯化的E2蛋白免疫BABL/c小鼠,通过流式分选IgM-PE-/E2-APC+型单个B细胞。然后,利用半巢式PCR分别扩增E2特异性IgG抗体的重链和轻链,测序后将抗体重链及轻链构建到pCDNA3.1载体,再将构建好的质粒共转染至HEK-293细胞,制备猪瘟E2单克隆抗体。结果表明,本研究通过单B细胞分选技术获得的两株单克隆抗体,即mAb3A9(IgG1,kappa)和mAb4F7(IgG2a,lambda),分别识别猪瘟E2蛋白B细胞线性表位25GLTTTWKEYSHDLQL^(39)和259GNTTVKVHASDERGP^(273)。此外,用上述两株单克隆抗体及E2蛋白建立的单抗竞争ELISA检测方法,在血清样本检测过程中,均展现出优异的诊断敏感性(97.49%,95.97%)及特异性(96.08%,94.38%),该研究为我国猪瘟的逐步净化提供了有利的技术支撑。 展开更多
关键词 猪瘟 E2 单B细胞 表位 ELISA
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猪流行性腹泻病毒N蛋白纳米抗体的筛选与鉴定
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作者 殷冬冬 丁祥 +9 位作者 兰梦蝶 姬凯元 王洁茹 尹磊 沈学怀 戴银 赵瑞宏 候宏艳 胡晓苗 潘孝成 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2024年第6期224-230,共7页
由猪流行性腹泻病毒(PEDV)引起的高度接触性胃肠道传染病对我国养猪业造成巨大的经济损失。为建立PEDV抗体检测方法及N蛋白的功能研究奠定基础,通过噬菌体展示技术针对PEDV N蛋白进行筛选获得其特异性的纳米抗体(Nb)。利用前期制备的N... 由猪流行性腹泻病毒(PEDV)引起的高度接触性胃肠道传染病对我国养猪业造成巨大的经济损失。为建立PEDV抗体检测方法及N蛋白的功能研究奠定基础,通过噬菌体展示技术针对PEDV N蛋白进行筛选获得其特异性的纳米抗体(Nb)。利用前期制备的N蛋白免疫羊驼,采集其外周血并分离淋巴细胞,提取细胞总RNA,反转录为cDNA,通过PCR扩增重链抗体重链可变区(VHH),插入pCANTAB5E-ccdb载体,电转化至ER2738感受态细胞,构建VHH噬菌体展示文库;随后,以PEDV N蛋白作为靶向蛋白,对文库进行4轮淘选获得阳性噬菌体,将其克隆至pET-30a载体,表达纯化后通过间接ELISA、Western Blot鉴定Nb的结合力和特异性。结果显示,羊驼经5次免疫后,抗体效价达到1∶25600。构建的噬菌体展示文库库容为4.72×10^(8),丰度为4.3×10^(10 )cfu/mL,阳性率为93.75%。经过4轮筛选,获得16株氨基酸序列不同的Nb,随后验证了Nb45与PEDV N蛋白具有良好特异性和结合能力。研究筛选获得了PEDV N蛋白特异性Nb,为PEDV检测方法的建立和基础研究提供生物材料。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 N蛋白 噬菌体展示 纳米抗体 特性鉴定
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猪链球菌的分离及油乳剂灭活疫苗的研究 被引量:10
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作者 杜雅楠 胡亚澜 +2 位作者 杨莲茹 李平安 许连平 《中国动物检疫》 CAS 2001年第8期27-28,共2页
内蒙古包头市郊某猪场仔猪发生高发病率、高死亡率疾病。经检查,确诊为猪链球菌病。用该场发病仔猪分离的链球菌,研制成猪链球菌油乳剂死活疫苗,给怀孕母猪产前40d和20d各免疫一次,结合其他防制措施,控制了该猪场链球菌病的... 内蒙古包头市郊某猪场仔猪发生高发病率、高死亡率疾病。经检查,确诊为猪链球菌病。用该场发病仔猪分离的链球菌,研制成猪链球菌油乳剂死活疫苗,给怀孕母猪产前40d和20d各免疫一次,结合其他防制措施,控制了该猪场链球菌病的发生,使仔猪的成活率达到 95%以上。 展开更多
关键词 链球菌病 油乳剂灭活疫苗 链球菌 分离 症状 病理变化 诊断
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规模化猪场非典型猪瘟的诊断和防制 被引量:9
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作者 陈钟鸣 张定东 +2 位作者 方光远 张志成 张智勇 《畜牧与兽医》 北大核心 2007年第5期49-51,共3页
应用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和兔体交叉试验,对采自山东、安徽、苏北等不同地区的疑似猪瘟病料进行检测,显示出RT-PCR诊断技术快速、便捷、准确的特点,提示一些猪场非典型猪瘟感染率比较高,并就此提出加强免疫监测,加大猪瘟兔化... 应用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和兔体交叉试验,对采自山东、安徽、苏北等不同地区的疑似猪瘟病料进行检测,显示出RT-PCR诊断技术快速、便捷、准确的特点,提示一些猪场非典型猪瘟感染率比较高,并就此提出加强免疫监测,加大猪瘟兔化弱毒疫苗的免疫剂量,果断淘汰感染母猪等综合性防制措施。 展开更多
关键词 猪瘟 反转录 聚合酶链式反应 诊断 防制
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规模化猪场猪衣原体病的监测 被引量:6
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作者 邱昌庆 程淑敏 +3 位作者 周继章 高双娣 段跃进 潘松年 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2000年第3期23-24,共2页
关键词 衣原体病 症状 诊断 防制措施
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