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抗猪胸膜肺炎放线杆菌ApxIV毒素单克隆抗体的制备及初步应用
被引量：
2
1
作者
张志妮
张伟娟
+5 位作者
林燕清
顾万军
黄良宗
朱军
姚丰华
朱国强
《中国动物传染病学报》
CAS
2009年第4期36-42,共7页
据猪胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus pleuropneumoniae,App）apxⅣ毒素基因5′端的保守区域设计一对特异性引物,应用PCR方法扩增出致病性App1~12血清型菌株的保守5′端序列片段,构建的重组质粒pETapxⅣN经IPTG诱导表达出分子量大小为...
据猪胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus pleuropneumoniae,App）apxⅣ毒素基因5′端的保守区域设计一对特异性引物,应用PCR方法扩增出致病性App1~12血清型菌株的保守5′端序列片段,构建的重组质粒pETapxⅣN经IPTG诱导表达出分子量大小为35.3kDa的可溶性重组蛋白。以亲和层析试剂盒纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备抗ApxⅣ毒素单克隆抗体（McAb）。以间接ELISA法筛选到两株分泌稳定、抗体亚类均为IgGl的杂交瘤细胞5B7和5C11,其培养上清和小鼠腹水抗体效价分别为1∶64、1∶128和1∶64 000、1∶128 000.两株单抗与临床猪瘟病毒、猪圆环病毒、猪呼吸道繁殖障碍综合征病毒、猪黄、白痢产肠毒素大肠杆菌和猪肺疫多杀性巴氏杆菌感染阳性血清均不发生交叉反应,显示出良好的特异性.竞争性结合试验表明两株单抗识别不同的抗原结合表位.以（NH4）2SO4盐析法纯化的5C11小鼠腹水单抗包被酶标板,生物素标记纯化的5B7单抗建立了检测ApxⅣ毒素的双抗体夹心ELISA法,其包被单抗最佳工作浓度为4μg/ml,生物素标记单抗最佳工作浓度为0.8μg/mL,对重组表达ApxⅣ毒素（rApxⅣ）的最低检出量为60pg/mL。从10份临床病猪血清样本中检出6份ApxⅣ毒素阳性,与细菌分离鉴定和PCR结果相符合,结果表明此法可用于App感染的临床诊断。
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关键词
猪胸膜肺炎放线杆菌
ApxⅣ毒素
表达
单克隆抗体
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职称材料
某核心种猪场猪胸膜肺炎放线杆菌的分离鉴定与药敏试验
被引量：
1
2
作者
王迪
李泽伟
+3 位作者
段倩倩
李国
程家园
李郁
《养猪》
2021年第1期98-104,共7页
为了确诊某种猪场后备母猪疑似猪传染性胸膜肺炎(PCP)病例,试验在掌握相关信息的基础上,应用常规细菌学鉴定方法对采集的4头发病猪病料组织进行细菌分离培养与生物型测定,PCR技术对分离菌进行猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)及其血清型测定、...
为了确诊某种猪场后备母猪疑似猪传染性胸膜肺炎(PCP)病例,试验在掌握相关信息的基础上,应用常规细菌学鉴定方法对采集的4头发病猪病料组织进行细菌分离培养与生物型测定,PCR技术对分离菌进行猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)及其血清型测定、毒力基因检测以及分离菌之间亲缘关系的鉴定,Kirby-Bauer纸片法分析分离菌的药物感受性。结果显示,4份病料均分离出APP,且同为生物I型、血清8型菌株,均检测到毒力基因Omp2和ApxⅣ而无ApxⅡ、ApxⅢ,菌株之间的Omp2和ApxⅣ基因核苷酸序列相似度达100%,并处于系统发育树的同一分支,4株APP分离菌高度同源。4株APP分离菌对环丙沙星、诺氟沙星、氟苯尼考、氧氟沙星、头孢唑林和头孢曲松均100%敏感;对青霉素、卡那霉素和四环素均100%耐药,对链霉素、庆大霉素、丁胺卡那、复方新诺明、多西环素、红霉素、阿莫西林和氨苄西林的耐药率介于25%~75%。结果表明,该种猪场存在血清8型APP菌株感染且为同一菌株,分离菌对抗菌药物的感受性存在差异。
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关键词
种猪
猪胸膜肺炎放线杆菌
分离鉴定
药物感受性
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职称材料
题名
抗猪胸膜肺炎放线杆菌ApxIV毒素单克隆抗体的制备及初步应用
被引量：
2
1
作者
张志妮
张伟娟
林燕清
顾万军
黄良宗
朱军
姚丰华
朱国强
机构
扬州大学兽医学院
佛山科学技术学院生命科学学院
出处
《中国动物传染病学报》
CAS
2009年第4期36-42,共7页
基金
国家十一五科技支撑项目(2006BAD06A12)
文摘
据猪胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus pleuropneumoniae,App）apxⅣ毒素基因5′端的保守区域设计一对特异性引物,应用PCR方法扩增出致病性App1~12血清型菌株的保守5′端序列片段,构建的重组质粒pETapxⅣN经IPTG诱导表达出分子量大小为35.3kDa的可溶性重组蛋白。以亲和层析试剂盒纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备抗ApxⅣ毒素单克隆抗体（McAb）。以间接ELISA法筛选到两株分泌稳定、抗体亚类均为IgGl的杂交瘤细胞5B7和5C11,其培养上清和小鼠腹水抗体效价分别为1∶64、1∶128和1∶64 000、1∶128 000.两株单抗与临床猪瘟病毒、猪圆环病毒、猪呼吸道繁殖障碍综合征病毒、猪黄、白痢产肠毒素大肠杆菌和猪肺疫多杀性巴氏杆菌感染阳性血清均不发生交叉反应,显示出良好的特异性.竞争性结合试验表明两株单抗识别不同的抗原结合表位.以（NH4）2SO4盐析法纯化的5C11小鼠腹水单抗包被酶标板,生物素标记纯化的5B7单抗建立了检测ApxⅣ毒素的双抗体夹心ELISA法,其包被单抗最佳工作浓度为4μg/ml,生物素标记单抗最佳工作浓度为0.8μg/mL,对重组表达ApxⅣ毒素（rApxⅣ）的最低检出量为60pg/mL。从10份临床病猪血清样本中检出6份ApxⅣ毒素阳性,与细菌分离鉴定和PCR结果相符合,结果表明此法可用于App感染的临床诊断。
关键词
猪胸膜肺炎放线杆菌
ApxⅣ毒素
表达
单克隆抗体
Keywords
Actinobacillus pleuropneumoniae
ApxⅣ
expression
monoclonal antibody
分类号
S858.282.619 [农业科学—临床兽医学]
Q785 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
某核心种猪场猪胸膜肺炎放线杆菌的分离鉴定与药敏试验
被引量：
1
2
作者
王迪
李泽伟
段倩倩
李国
程家园
李郁
机构
安徽农业大学动物科技学院
出处
《养猪》
2021年第1期98-104,共7页
基金
国家星火计划重点项目(2014GA710002)
安徽省重点研究与开发计划(面上攻关)项目(201904a06020013)
+1 种基金
安徽省长三角联合科技攻关项目(1101c0603065)
安徽省生猪产业体系基金项目[皖农科(2016)84号]。
文摘
为了确诊某种猪场后备母猪疑似猪传染性胸膜肺炎(PCP)病例,试验在掌握相关信息的基础上,应用常规细菌学鉴定方法对采集的4头发病猪病料组织进行细菌分离培养与生物型测定,PCR技术对分离菌进行猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)及其血清型测定、毒力基因检测以及分离菌之间亲缘关系的鉴定,Kirby-Bauer纸片法分析分离菌的药物感受性。结果显示,4份病料均分离出APP,且同为生物I型、血清8型菌株,均检测到毒力基因Omp2和ApxⅣ而无ApxⅡ、ApxⅢ,菌株之间的Omp2和ApxⅣ基因核苷酸序列相似度达100%,并处于系统发育树的同一分支,4株APP分离菌高度同源。4株APP分离菌对环丙沙星、诺氟沙星、氟苯尼考、氧氟沙星、头孢唑林和头孢曲松均100%敏感;对青霉素、卡那霉素和四环素均100%耐药,对链霉素、庆大霉素、丁胺卡那、复方新诺明、多西环素、红霉素、阿莫西林和氨苄西林的耐药率介于25%~75%。结果表明,该种猪场存在血清8型APP菌株感染且为同一菌株,分离菌对抗菌药物的感受性存在差异。
关键词
种猪
猪胸膜肺炎放线杆菌
分离鉴定
药物感受性
Keywords
breeding pigs
Actinobacillus pleuropneumoniae
isolation and identification
drug sensitivity
分类号
S858.282.619 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
抗猪胸膜肺炎放线杆菌ApxIV毒素单克隆抗体的制备及初步应用
张志妮
张伟娟
林燕清
顾万军
黄良宗
朱军
姚丰华
朱国强
《中国动物传染病学报》
CAS
2009
2
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职称材料
2
某核心种猪场猪胸膜肺炎放线杆菌的分离鉴定与药敏试验
王迪
李泽伟
段倩倩
李国
程家园
李郁
《养猪》
2021
1
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职称材料
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