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植物雌激素大豆黄酮对小鼠乳腺上皮细胞乳成分合成和细胞增殖的影响及机制 被引量：1
1
作者 黄心河 李浩楠 +3 位作者 周潇 徐佳婧 张源淑 韩正康 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第1期417-429,共13页
本试验旨在研究植物雌激素大豆黄酮(daidzein, DZ)对小鼠乳腺上皮细胞EpH4-Ev乳糖、乳蛋白、乳脂肪合成及细胞增殖的影响,探讨相关的调节作用。首先用不同浓度DZ(0~1 000μmol·L^(-1))处理EpH4-Ev细胞6、12、24、48 h,通过检测细... 本试验旨在研究植物雌激素大豆黄酮(daidzein, DZ)对小鼠乳腺上皮细胞EpH4-Ev乳糖、乳蛋白、乳脂肪合成及细胞增殖的影响,探讨相关的调节作用。首先用不同浓度DZ(0~1 000μmol·L^(-1))处理EpH4-Ev细胞6、12、24、48 h,通过检测细胞活力确定DZ作用浓度及时间;试验分为对照组(0μmol·L^(-1) DZ处理)、低浓度组(10μmol·L^(-1) DZ处理)、中浓度组(20μmol·L^(-1) DZ处理)、高浓度组(40μmol·L^(-1) DZ处理),并以生理剂量的雌二醇(E2)作为阳性对照,37℃、5%CO_(2)培养12 h后,进行如下试验:(1)测定细胞及分泌上清中甘油三酯(TG)、葡萄糖(GLU)含量及脂滴染色变化;(2)检测细胞增殖与凋亡相关蛋白、乳成分合成相关蛋白的表达变化;(3)检测PI3K/AKT-mTOR信号通路关键蛋白的磷酸化水平;(4)流式细胞技术分析细胞凋亡率与细胞周期分布情况。结果显示:(1)与对照组相比,2.5~80.0μmol·L^(-1 ) DZ处理后,细胞活力极显著提高(P<0.01),其中20μmol·L^(-1 )DZ处理提高效果最为显著,结合实验室前期结果,选择DZ作用的低、中和高浓度分别为10、20和40μmol·L^(-1),作用时间为12 h。(2)与对照组相比,中浓度及高浓度组DZ及E2处理后极显著提高了EpH4-Ev细胞及分泌上清中TG和GLU的含量,促进了脂滴的合成(P<0.01)。(3)与对照组相比,不同浓度DZ处理后葡萄糖转运载体1(GLUT1)和β-酪蛋白(β-casein)的表达均极显著升高(P<0.01),同时DZ及E2处理后均提高脂肪酸合成酶(FASN)、胆固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)的表达。(4)与对照组相比,不同浓度DZ及E2处理后均增加了G2/M期和S期的细胞占比,上调了增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白D1、D3、抗凋亡蛋白Bcl-2的表达量,同时中浓度DZ组极显著增加了Bcl-2/Bax比值(P<0.01),细胞凋亡率降低。(5)三个浓度DZ及E2处理后均上调了PI3K/AKT-mTOR信号通路中p-PI3K、p-mTOR、p-AKT的磷酸化水平。结果表明:DZ处理可促进乳腺上皮细胞的增殖及乳成分的合成。其机制与上调细胞增殖蛋白的表达、降低细胞凋亡率,激活PI3K/AKT-mTOR通路有关。 展开更多
关键词 植物雌激素 大豆黄酮 小鼠乳腺上皮细胞 乳成分合成 乳腺上皮细胞的增殖
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脂多糖对奶牛乳腺上皮细胞乳糖代谢的影响及其作用机制 被引量：1
2
作者 刘秀芝 龙全梅 +1 位作者 王建发 武瑞 《中国生物制品学杂志》 2025年第3期291-296,311,共7页
目的探讨脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对奶牛乳腺上皮细胞(MAC-T)乳糖代谢的影响及其作用机制,为选择更合理的免疫代谢调控方案以保障奶牛乳腺健康提供新思路。方法用10μg/mL LPS处理MAC-T细胞0、3、6、12、24 h,紫外分光光度计下... 目的探讨脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对奶牛乳腺上皮细胞(MAC-T)乳糖代谢的影响及其作用机制,为选择更合理的免疫代谢调控方案以保障奶牛乳腺健康提供新思路。方法用10μg/mL LPS处理MAC-T细胞0、3、6、12、24 h,紫外分光光度计下检测细胞内糖酵解酶(己糖激酶、磷酸果糖激酶、丙酮酸激酶)活性以及乳酸、葡萄糖、乳糖含量;Western blot法检测低氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)、蛋白激酶B(又称AKT)表达及磷酸化水平;荧光定量RT-PCR法检测HIF-1α、AKT、葡萄糖转运体1(glucose transporter 1,GLUT1)mRNA转录水平。结果与0 h相比,LPS处理3 h时己糖激酶、磷酸果糖激酶活性达到峰值(F分别为4.197、6.941,P均<0.01),之后逐渐降低,24 h时己糖激酶活性显著下降(F=4.987,P<0.01);磷酸果糖激酶活性在24 h内均维持在相对较高水平;丙酮酸激酶活性在最初6 h内显著增加,随后极显著升高,24 h时升高至0 h的27倍(F=26.95,P<0.001)。LPS处理24 h,乳糖含量均显著降低;3 h时葡萄糖含量显著增加(t=4.294,P<0.001),之后呈明显下降趋势,24 h时含量显著降低(t=5.218,P<0.001);12和24 h时乳酸含量显著增加。HIF-1αmRNA及蛋白表达水平在LPS处理6 h时均显著升高(F分别为5.355、5.466,P<0.001),之后逐渐下降;总AKT mRNA及蛋白表达水平、p-AKT(Ser473)蛋白表达水平在LPS处理24 h时均显著升高(F分别为6.207、6.368、6.253,P均<0.01);GLUT1 mRNA转录水平在LPS刺激3、6、12 h时均显著升高(F分别为6.549、5.821、5.553,P均<0.01)。结论LPS处理导致MAC-T细胞对葡萄糖的摄取增加,摄取的葡萄糖从大部分用于乳糖合成转向大部分用于糖酵解代谢和炎性应答,细胞内乳糖合成显著减少。 展开更多
关键词 奶牛 乳腺上皮细胞 脂多糖 乳糖 葡萄糖 糖酵解
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表儿茶素没食子酸酯对MAC-T和小鼠乳腺炎症与细胞焦亡及NF-κB通路和NLRP3炎性小体的抑制效应
3
作者 王浩磊 刘梦燕 +4 位作者 龙泉 李曼曼 吕祥 林涛 蒋曹德 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第1期430-441,共12页
本研究旨在探究表儿茶素没食子酸酯(epicatechin gallate, ECG)对牛乳腺上皮细胞NF-κB(nuclear factor kappa B)炎性通路和NOD样受体3(NOD-like receptor protein 3, NLRP3)炎症小体的抑制作用。利用脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)... 本研究旨在探究表儿茶素没食子酸酯(epicatechin gallate, ECG)对牛乳腺上皮细胞NF-κB(nuclear factor kappa B)炎性通路和NOD样受体3(NOD-like receptor protein 3, NLRP3)炎症小体的抑制作用。利用脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)处理牛乳腺上皮细胞系(MAC-T)和小鼠乳腺;采用CCK-8法筛选ECG处理MAC-T细胞的最佳浓度,ELISA法检测促炎因子、氧化应激指示因子以及焦亡指示因子的表达水平;苏木精-伊红染色和Annexin V-FITC/PI法检测小鼠乳腺组织炎性变化和细胞膜破裂情况;Western blot检测NF-κB、NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein, ASC)、caspase-1和Gasdermin NH_(3 )端(GSDMD-N)的表达水平;免疫荧光检测p65核转移情况。结果发现:(1)ECG在10、20、40 mg·kg^(-1)浓度下均可减轻LPS诱导的乳腺炎症和炎性细胞浸润;(2)ECG在体内和体外均可显著且剂量依赖性地降低LPS诱导的促炎因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)和氧化应激指示因子(COX-2、iNOS、MPO)表达水平(P<0.05),(3)ECG剂量依赖性地降低了LPS诱导的细胞死亡率以及ROS、IL-18和LDH焦亡指示因子表达水平(P<0.05),(4)ECG极显著地抑制LPS诱导的NLRP3、ASC、GSDMD-N、caspase-1、磷酸化p65的表达与核转移(P<0.05)。综上表明,ECG抑制MAC-T细胞和小鼠乳腺炎症与细胞焦亡以及NF-κB通路和NLRP3炎性小体。本研究为利用ECG替代抗生素防治牛乳腺炎提供了新的数据。 展开更多
关键词 表儿茶素没食子酸酯 NF-ΚB 乳腺炎 NLRP3炎性小体 焦亡
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姜黄素影响铁死亡途径缓解LPS诱导牛乳腺上皮细胞炎性反应的分析
4
作者 杨文哲 王锦浩 +7 位作者 赵子琛 赵彤 潘飞龙 陈芳芳 邵雯琪 刘克祥 赵树臣 赵立佳 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第9期4730-4740,共11页
本研究旨在从铁死亡途径探究姜黄素(curcumin,Cur)对脂多糖(LPS)诱导的牛乳腺上皮细胞(MAC-T)炎性反应的影响。将处于对数生长期的MAC-T细胞按照试验要求随机分组并进行相应的处理,每组3个重复。采用MTT法测定不同浓度的LPS/Cur对MAC-T... 本研究旨在从铁死亡途径探究姜黄素(curcumin,Cur)对脂多糖(LPS)诱导的牛乳腺上皮细胞(MAC-T)炎性反应的影响。将处于对数生长期的MAC-T细胞按照试验要求随机分组并进行相应的处理,每组3个重复。采用MTT法测定不同浓度的LPS/Cur对MAC-T细胞存活率的影响;RT-PCR法检测炎症相关基因(TNF-α、IL-6、IL-1β、iNOS、CXCL2、CCL2)与铁死亡相关基因(PTGS2、SLC7A11、GPX4、FTH1、ACSL4)的转录水平;BODIPY 581/591 C11染色检测细胞脂质过氧化水平;试剂盒检测细胞中MDA含量、LPO浓度、GSH含量、GSH/GSSG比值;Ferro-Orange染色和Fe2+检测试剂盒测定细胞中Fe2+含量;ELISA试剂盒检测细胞中TNF-α、IL-6、IL-1β浓度;Western blot检测GPX4、ACSL4、TNF-α、IL-6、IL-1β蛋白的相对表达水平。结果显示,与CON组相比,10μg·mL^(-1)LPS或20μmol·L^(-1)Cur处理对MAC-T细胞存活率无显著影响。LPS处理后细胞中促炎相关基因(TNF-α、IL-6、IL-1β、iNOS、CXCL2、CCL2)、促铁死亡相关基因(PTGS2、ACSL4)以及相关蛋白(ACSL4)的表达水平极显著升高(P<0.01);抗铁死亡相关基因(SLC7A11、GPX4、FTH1)和蛋白(GPX4)的表达水平极显著下降(P<0.01);MDA含量和LPO浓度均极显著升高(P<0.01);GSH含量和GSH/GSSG比值均极显著下降(P<0.01);Fe2+含量极显著升高(P<0.01);TNF-α、IL-6、IL-1β的浓度和蛋白的表达水平均极显著升高(P<0.01)。与LPS单独处理组相比,LPS与Cur-H共处理组促炎相关基因、促铁死亡相关基因以及相关蛋白的表达水平极显著下降(P<0.01);抗铁死亡相关基因和蛋白的表达水平极显著升高(P<0.01);脂质过氧化水平、MDA含量和LPO浓度均极显著下降(P<0.01);GSH含量和GSH/GSSG比值均极显著升高(P<0.01);Fe^(2+)含量极显著下降(P<0.01);TNF-α、IL-6、IL-1β的浓度和蛋白的表达水平均极显著下降(P<0.01)。此外,铁死亡激活剂Erastin显著抑制了Cur对LPS诱导炎症的缓解作用。综上所述,Cur可通过抑制铁死亡缓解LPS诱导的MAC-T细胞炎性反应。 展开更多
关键词 铁死亡 姜黄素 脂多糖 牛乳腺上皮细胞(MAC-T)
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湖北省部分地区奶牛场凝固酶阴性葡萄球菌的分离鉴定及耐药性分析
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作者 田可可 刘佳一 +6 位作者 吴香云 豆保静 孙文 李倩 李双双 余皓 王玉莲 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2025年第9期80-88,共9页
为了解湖北省部分地区奶牛场凝固酶阴性葡萄球菌(coagulase negative Staphylococcus,CNS)的流行情况和耐药特点,试验于2019—2020年采集武汉市江夏区(A场)、黄冈市溪水县(B场)、黄冈市(C场)、武汉市东西湖区(D场)和宜昌市(E场)的规模... 为了解湖北省部分地区奶牛场凝固酶阴性葡萄球菌(coagulase negative Staphylococcus,CNS)的流行情况和耐药特点,试验于2019—2020年采集武汉市江夏区(A场)、黄冈市溪水县(B场)、黄冈市(C场)、武汉市东西湖区(D场)和宜昌市(E场)的规模化奶牛场的健康奶牛、患亚临床型乳房炎(subclinical mastitis,SCM)奶牛和患临床型乳房炎(clinical mastitis,CM)奶牛的乳头乳、乳头皮肤拭子样本及环境样本共计887份,进行葡萄球菌的分离与纯化,对分离到的葡萄球菌进行触媒试验,并选取触酶阳性的菌株进行凝固酶试验,再对筛选到的CNS进行16S rDNA基因的PCR扩增、测序及菌种鉴定,统计各类型样本中不同种类CNS的分离率、各地区奶牛养殖场CNS的分离率,最后对CNS分离株进行耐药性分析。结果表明:从887份样本中共分离到234株葡萄球菌,这些分离株均为触酶阳性菌株,其中有134株菌株为CNS。134株CNS中,共鉴定到16种葡萄球菌,包括45株鸡葡萄球菌(占比为33.6%)、13株人葡萄球菌(占比为9.7%)、11株腐生葡萄球菌(占比为8.2%)、17株产色葡萄球菌(占比为12.67%)、12株未分类葡萄球菌(占比为9.0%)、10株表皮葡萄球菌(占比为7.5%)、5株模仿葡萄球菌(占比为3.7%)、5株木糖葡萄球菌(占比为3.7%)、3株阿尔莱特葡萄球菌(占比为2.2%)、2株克氏葡萄球菌(占比为1.5%)、4株路邓葡萄球菌(占比为3.0%)、2株溶血葡萄球菌(占比为1.5%)、2株肉质葡萄球菌(占比为1.5%)、1株伪中间型葡萄球菌(占比为0.8%)、1株琥珀葡萄球菌(占比为0.8%)和1株猪葡萄球菌(占比为0.8%)。鸡葡萄球菌在健康奶牛各类型样本、患SCM奶牛的乳头乳和乳头皮肤拭子样本及环境样本中分离率均最高。患CM奶牛的乳头乳样本中人葡萄球菌、模仿葡萄球菌和阿尔莱特葡萄球菌的分离率最高(1.4%),乳头皮肤拭子样本中鸡葡萄球菌、人葡萄球菌和模仿葡萄球菌的分离率最高(2.6%),肛门拭子样本中鸡葡萄球菌、产色葡萄球菌和人葡萄球菌的分离率最高(3.8%);患SCM奶牛的肛门拭子样本中鸡葡萄球菌、产色葡萄球菌和腐生葡萄球菌的分离率最高(3.0%)。CNS在E场的分离率最高(30.7%),然后依次为A场(13.8%)、C场(12.1%)、B场(8.9%)和D场(5.6%)。CNS分离株对磺胺异口恶唑、复方新诺明、头孢噻呋、恩诺沙星、氧氟沙星、青霉素、阿莫西林/克拉维酸、头孢西丁、克林霉素的耐药率较高,分别为100%、100%、94.8%、99.3%、63.4%、70.1%、53.0%、75.4%和51.5%;对万古霉素、替米考星、庆大霉素、氟苯尼考、多西环素、利奈唑胺、苯唑西林的耐药率较低,分别为7.5%、12.7%、7.5%、15.7%、17.9%、32.8%和36.6%。134株CNS均为多重耐药菌株,包括97种耐药表型。耐药重数最低为3重,占比为4.5%(6/134);耐药重数最高为11重,占比为2.2%(3/134);5重耐药菌株占比最大,为19.4%(26/134)。青霉素-头孢西丁-头孢噻呋-泰妙菌素-磺胺异口恶唑-复方新诺明-恩诺沙星和青霉素-利奈唑胺-头孢噻呋-泰妙菌素-磺胺异口恶唑-复方新诺明-恩诺沙星-氧氟沙星为优势耐药表型。说明湖北省部分地区奶牛场CNS普遍存在,且种类较多,鸡葡萄球菌占比较高;分离到的CNS均为多重耐药菌株,对大多数抗生素耐药率较高,对万古霉素和庆大霉素的耐药率较低。 展开更多
关键词 湖北省 奶牛乳房炎 凝固酶阴性葡萄球菌 细菌分离 细菌鉴定 耐药性
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组学技术在奶牛乳腺炎发病机制和诊断上应用研究进展 被引量：1
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作者 范曼婷 黄若婷 +3 位作者 佘远航 郭建超 刘建营 郭勇庆 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第3期1076-1088,共13页
乳腺炎是奶牛养殖中危害较大的疾病之一,严重影响奶牛健康和乳品安全,因此需要及时采取预防和控制措施。目前,奶牛乳腺炎存在诊断效率不高和发病机制解释不清晰等问题。随着高通量测序技术的快速发展,基因组学、表观基因组学、转录组学... 乳腺炎是奶牛养殖中危害较大的疾病之一,严重影响奶牛健康和乳品安全,因此需要及时采取预防和控制措施。目前,奶牛乳腺炎存在诊断效率不高和发病机制解释不清晰等问题。随着高通量测序技术的快速发展,基因组学、表观基因组学、转录组学、蛋白质组学等组学技术已被逐步应用于奶牛乳腺炎相关研究上,推动了对该疾病的深入认知。本文综述了组学技术在奶牛乳腺炎发病机制和诊断上的应用现状及研究进展,旨在为科学认识和降低乳腺炎发病率提供参考。通过解析奶牛乳腺炎的多层面机制,揭示了关键调控通路、潜在生物标志物,如CHI3L1、LBP、GSN、GCLC、C4等蛋白质及乳酸、酪氨酸等代谢物,可为乳腺炎发病机制的解析提供指导,也为干预治疗提供了新的途径。但是,在生产中应用时,组学技术仍面临着成本和技术门槛高等挑战。随着多组学技术的深入整合和成本降低,将有助于发现更精确的生物标志物,深入了解特定信号通路,为奶牛乳腺炎的预防、诊断和治疗提供更为科学的依据。 展开更多
关键词 组学技术 奶牛 乳腺炎 发病机制 诊断
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不同病变程度乳房炎山羊乳腺组织中IL-6的表达变化
7
作者 田曦庆 王天星 +3 位作者 高士孔 乔玉娥 陈德坤 马文涛 《动物医学进展》 北大核心 2025年第5期98-104,共7页
随着山羊养殖业不断集约化发展,乳房炎的发病率逐年升高,给山羊养殖业造成巨大的经济损失。为了确定乳房炎乳腺病理变化程度与乳腺组织白细胞介素-6(interlukin-6,IL-6)表达水平之间的联系,采用加利福尼亚乳房炎检测法(CMT)和病原菌分... 随着山羊养殖业不断集约化发展,乳房炎的发病率逐年升高,给山羊养殖业造成巨大的经济损失。为了确定乳房炎乳腺病理变化程度与乳腺组织白细胞介素-6(interlukin-6,IL-6)表达水平之间的联系,采用加利福尼亚乳房炎检测法(CMT)和病原菌分离鉴定法检测山羊乳房炎,使用real-time PCR检测健康山羊和乳房炎患病山羊乳汁体细胞趋化因子的相对表达水平,对健康和乳房炎乳腺组织进行苏木素-伊红(HE)染色,根据乳腺组织病理变化程度将其划分为轻度乳房炎乳腺、中度乳房炎乳腺、重度乳房炎乳腺,使用免疫荧光染色法确定不同病理变化程度乳房炎乳腺组织的IL-6表达水平。最后,对乳腺组织进行双重免疫荧光染色确定IL-6的来源。结果表明,乳房炎患病山羊乳汁体细胞的趋化因子表达水平显著上调;患病山羊乳腺组织腺泡排列紊乱,结构完整性被破坏,乳腺上皮细胞脱落并伴有大量的炎性细胞浸润;随着乳腺组织病理损伤程度的加重,IL-6表达水平也随之上调;IL-6可由乳腺组织的Ly6G^(+)细胞和CD68^(+)细胞分泌。研究结果提示IL-6可作为监测乳房炎的病理变化程度的生物学标志。 展开更多
关键词 山羊 乳房炎 乳腺组织 白细胞介素6 生物学标志
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奶牛乳腺健康及精准管理的研究进展
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作者 季金豆 耿子健 +1 位作者 连帅 王建发 《黑龙江动物繁殖》 2025年第2期21-26,43,共7页
乳腺健康是影响奶牛泌乳能力、免疫防御能力与牛奶产量与质量的直接因素。奶牛乳腺健康管理及疾病预防在乳业高效生产的环节中至关重要,而奶牛乳房炎已经成为奶牛养殖管理过程中的主要威胁。文章综述了奶牛乳腺健康整体精准管理策略,介... 乳腺健康是影响奶牛泌乳能力、免疫防御能力与牛奶产量与质量的直接因素。奶牛乳腺健康管理及疾病预防在乳业高效生产的环节中至关重要,而奶牛乳房炎已经成为奶牛养殖管理过程中的主要威胁。文章综述了奶牛乳腺健康整体精准管理策略,介绍了营养、饲养管理及奶牛乳房炎的精准防治策略,以及基于物联网、大数据、云计算、人工智能等电子信息技术的数智化畜牧理念。这些措施和技术的应用,将在很大程度上降低奶牛乳房炎发病率,提高乳房炎诊断的效率和准确性,同时通过病原菌治疗方案实现奶牛乳房炎的精准治疗。未来,数智化畜牧将进一步推动奶牛乳腺健康的精准管理,逐步走上标准化、高效化、智能化的道路,为乳业可持续发展提供有力支撑。 展开更多
关键词 乳腺健康 精准管理 疾病诊断 奶牛养殖 数智化畜牧 乳房炎
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奶牛乳房炎5种致病菌多重PCR检测方法的建立与应用 被引量：4
9
作者 王雪容 张宇 +3 位作者 张海森 杨王浩 靳亚平 陈华涛 《动物医学进展》 北大核心 2025年第1期48-55,共8页
为建立一种能快速检测奶牛乳房炎主要病原菌(大肠埃希氏菌、无乳链球菌、肺炎克雷伯氏菌、金黄色葡萄球菌和肠炎沙门氏菌)的多重PCR检测方法,根据大肠埃希氏菌phoA基因、无乳链球菌ef-tu基因、肺炎克雷伯氏菌Khe基因、金黄色葡萄球菌Nu... 为建立一种能快速检测奶牛乳房炎主要病原菌(大肠埃希氏菌、无乳链球菌、肺炎克雷伯氏菌、金黄色葡萄球菌和肠炎沙门氏菌)的多重PCR检测方法,根据大肠埃希氏菌phoA基因、无乳链球菌ef-tu基因、肺炎克雷伯氏菌Khe基因、金黄色葡萄球菌Nuc基因和肠炎沙门氏菌invA基因设计特异性引物,优化PCR反应体系与反应程序并进行特异性试验,同时分别构建含病原菌基因的pMD-19T重组质粒进行灵敏性试验。结果显示,多重PCR反应的最适引物工作浓度为0.8μmol/L,最适退火温度为59.6℃,最佳延伸时间为40 s,最合适的循环数为30次;优化后的多重PCR反应体系可扩增出5种目标病原菌的特异性条带;5种病原菌PCR检测灵敏度可达到5 copies/μL。进一步利用该多重PCR反应体系对采集的108份乳房炎乳样进行检测,检测结果显示,108份样本的阳性检出率为77.8%,大肠埃希氏菌、无乳链球菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯氏菌和肠炎沙门氏菌的检出率分别为23.1%、8.3%、34.3%、8.3%、5.6%。结果表明,建立了一种具有良好特异性和灵敏性的多重PCR检测方法,在临床生产实践中可用于快速鉴定奶牛乳房炎的致病菌,为奶牛乳房炎的诊断、防控与流行病学调查提供了方法基础。 展开更多
关键词 奶牛 乳房炎 病原菌 多重PCR
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抗奶山羊源葡萄球菌藏药筛选及对小鼠乳房炎的治疗作用研究
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作者 李启瑞 豆薇 +2 位作者 顾庆云 李生庆 郭抗抗 《动物医学进展》 北大核心 2025年第6期57-64,共8页
乳房炎是影响奶山羊养殖业的主要疾病之一,目前,临床上普遍采用抗菌药物治疗奶山羊乳房炎,但长期使用抗菌药物已导致细菌耐药和兽药残留等公共卫生问题。因此,寻找替代抗菌药物治疗乳房炎具有重要意义。选取9种具有抗菌、抗病毒及免疫... 乳房炎是影响奶山羊养殖业的主要疾病之一,目前,临床上普遍采用抗菌药物治疗奶山羊乳房炎,但长期使用抗菌药物已导致细菌耐药和兽药残留等公共卫生问题。因此,寻找替代抗菌药物治疗乳房炎具有重要意义。选取9种具有抗菌、抗病毒及免疫调节作用的藏药,使用水提法提取其有效成分。然后采用水提物与细菌共培养的方式探究其体外抑菌作用。同时,使用SPF级昆明系小鼠验证藏药水提物的安全性,并利用金黄色葡萄球菌构建小鼠乳房炎动物模型,使用前期证明具有体外抑菌作用的藏药进行灌胃治疗,观察小鼠病变情况。此外,使用qPCR方法分别检测不同组内小鼠乳腺组织TNF-α、IL-6、IL-8、IL-1β4种炎症因子表达量,结果表明,TNF-α、IL-6、IL-8、IL-1β4种炎症因子阳性对照与阴性对照相比差异极显著(P<0.01),当藏药灌注时间达到14 d时炎症因子表达量均出现不同程度的下降,其中IL-1β下降最为明显,但与阴性组对照差异不显著(P>0.05)。结果表明,所选用的藏药中甘青青兰、蒺藜在原药浓度1 g/mL时对4种葡萄球菌有抑制作用。小鼠安全性试验表明,在原药浓度为1 g/mL时用药剂量在400μL以下时,两组小鼠均未表现出明显的异常,同时,在藏药治疗中仅甘青青兰能够有效缓解小鼠乳腺组织的炎症情况。以上试验结果表明,成功筛选出一种同时具有体内、体外抗葡萄球菌作用的藏药,为综合开发藏药治疗奶山羊乳房炎提供了一定的研究基础。 展开更多
关键词 奶山羊 乳房炎 藏药 动物模型
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乳房链球菌感染对乳腺上皮细胞中氨基酸代谢的影响 被引量：2
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作者 卢劲晔 高亚兵 +2 位作者 韩心茹 刘钰臻 赵家玉 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期1766-1776,共11页
代谢是一切生理活动的基石,氨基酸代谢作为三大物质代谢之一,参与机体的多种生理活动,与宿主免疫细胞的功能有密切关系,在疾病的发展中具有不可替代的作用。为探究乳房链球菌(Streptococcus uberis,S.uberis)感染对乳腺上皮细胞中氨基... 代谢是一切生理活动的基石,氨基酸代谢作为三大物质代谢之一,参与机体的多种生理活动,与宿主免疫细胞的功能有密切关系,在疾病的发展中具有不可替代的作用。为探究乳房链球菌(Streptococcus uberis,S.uberis)感染对乳腺上皮细胞中氨基酸代谢的影响,本研究以S.uberis和乳腺上皮细胞系(EpH4-Ev)为研究对象,采用靶向氨基酸代谢组学技术对细胞中的氨基酸进行定量分析,并采用RT-qPCR和Western blot方法对关键氨基酸——精氨酸代谢通路关键酶进行验证。结果表明:S.uberis感染细胞后,细胞中甘氨酸、苏氨酸、鸟氨酸、天冬酰胺和谷氨酰胺的含量被显著上调(P<0.05),谷氨酸、脯氨酸、精氨酸、丝氨酸、组氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、赖氨酸和天冬氨酸的含量被显著下调(P<0.05),其中,精氨酸含量变化极显著(P<0.000 1,VIP>1.2),天冬酰胺和谷氨酰胺两种生糖氨基酸显著上升(P<0.05),赖氨酸和亮氨酸两种生酮氨基酸含量显著下降(P<0.05)。进一步研究精氨酸分解代谢通路发现:S.uberis感染乳腺上皮细胞会显著上调精氨酸代谢关键酶NOS2的mRNA和蛋白表达水平(P<0.05),显著下调ARG1的表达水平(P<0.05)。与对照组相比,S.uberis感染乳腺后,显著上调了细胞中促炎因子IL-1β、TNF-α表达(P<0.05)。综上所述,S.uberis感染造成乳腺上皮细胞氨基酸代谢紊乱,加速细胞内精氨酸耗竭,诱发炎症反应。结果提示,精氨酸在宿主抵抗S.uberis感染过程中具有重要作用,可作为奶牛乳腺炎早期诊断和未来防治的突破口。 展开更多
关键词 乳房链球菌 氨基酸代谢 精氨酸 乳腺炎
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病理组织学方法在犬乳腺肌上皮细胞源肿瘤诊断中的应用
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作者 康静静 焦静旖 +2 位作者 蔡茂 秦永敏 宋予震 《动物医学进展》 北大核心 2024年第8期109-112,共4页
犬乳腺肌上皮细胞源肿瘤是少见的犬乳腺肿瘤类型之一,瘤细胞常呈梭形或多形性,细胞质中常可见透明空泡,较易与其他含有空泡化胞质的肿瘤和梭形细胞瘤混淆,因此采用合适的诊断方法对犬乳腺肌上皮细胞源肿瘤进行精准诊断是很有必要的,尤... 犬乳腺肌上皮细胞源肿瘤是少见的犬乳腺肿瘤类型之一,瘤细胞常呈梭形或多形性,细胞质中常可见透明空泡,较易与其他含有空泡化胞质的肿瘤和梭形细胞瘤混淆,因此采用合适的诊断方法对犬乳腺肌上皮细胞源肿瘤进行精准诊断是很有必要的,尤其对于其临床精准治疗至关重要。其中病理组织学诊断是肿瘤病诊断的金标准,论文总结了常规HE染色、PAS糖原染色、脂肪染色和免疫组织化学染色方法在犬乳腺肌上皮细胞源肿瘤诊断中的应用,以期为实现犬乳腺肌上皮细胞源肿瘤的精准诊断提供依据。 展开更多
关键词 犬 乳腺肌上皮细胞 肿瘤 病理组织学方法 精准诊断
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新疆某规模化奶牛场乳房炎发病率及影响因素调查 被引量：1
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作者 邵白新月 马亚楠 +9 位作者 史雪妍 周渝新 乔献琦 马雪连 孙亚伟 王锡波 王金泉 钟旗 李娜 姚刚 《动物医学进展》 北大核心 2024年第8期130-134,共5页
为了解新疆某规模化奶牛场乳房炎发病规律及其影响因素,通过牛场管理系统,收集整理该场1659头成年母牛发病信息,对临床乳房炎的发病率及其影响因素进行Spearman相关性分析;采用加利福尼亚乳房炎试验、体细胞计数法与视诊相结合的方法,... 为了解新疆某规模化奶牛场乳房炎发病规律及其影响因素,通过牛场管理系统,收集整理该场1659头成年母牛发病信息,对临床乳房炎的发病率及其影响因素进行Spearman相关性分析;采用加利福尼亚乳房炎试验、体细胞计数法与视诊相结合的方法,对隐性乳房炎和临床乳房炎进行抽样诊断,并采集抽检奶牛的血液样本,采用全自动血液分析仪测定其血液生理指标。调查发现,临床型乳房炎全年总发病率为42.20%,其中,1月份发病率(6.03%)最高,4月份发病率(1.27%)最低。产奶量与临床型乳房炎发病率呈显著正相关(r=0.028,P<0.05),自第3胎后,胎次与临床型乳房炎发病率呈显著负相关(r=-0.015,P<0.05)。隐性乳房炎白细胞数和红细胞分布宽度显著降低(P<0.05),临床型乳房炎红细胞分布宽度显著降低(P<0.05),白细胞数、淋巴细胞数极显著降低(P<0.01)。调查表明奶牛乳房炎发病率与季节、产奶量、胎次密切相关,调查结果可为奶牛场乳房炎综合防控提供参考。 展开更多
关键词 奶牛 乳房炎 发病率 影响因素 血液生理学
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奶牛乳房炎病原菌研究进展 被引量：8
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作者 蒋维 刘俊琦 周望平 《湖南畜牧兽医》 2024年第2期52-55,共4页
奶牛乳房炎是危害奶牛业健康发展的最重要的疾病之一,该病可引起奶牛产奶量下降,乳汁成分改变,导致奶农收入减少。无乳链球菌、乳房链球菌、停乳链球菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌是当前奶牛乳房炎最主要的病原菌。文章就奶牛乳房炎在... 奶牛乳房炎是危害奶牛业健康发展的最重要的疾病之一,该病可引起奶牛产奶量下降,乳汁成分改变,导致奶农收入减少。无乳链球菌、乳房链球菌、停乳链球菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌是当前奶牛乳房炎最主要的病原菌。文章就奶牛乳房炎在全球的流行情况、主要致病菌特征进行归纳、概述,以期为日后净化此病,制定科学、合理、有效的综合防制措施提供参考依据。 展开更多
关键词 奶牛乳房炎 链球菌 金黄色葡萄球菌 大肠杆菌 LAMP
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非哺乳期乳腺炎大鼠模型的建立及评价
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作者 殷玉莲 马丽娜 +3 位作者 屠思远 陈玲 叶媚娜 陈红风 《实验动物与比较医学》 CAS 2024年第6期587-596,共10页
目的通过模拟高催乳素血症及免疫炎症状态,建立非哺乳期乳腺炎(non-puerperal mastitis,NPM)大鼠模型,评价其乳腺局部炎症特征,为乳腺疑难疾病的诊疗研究提供依据。方法选用SPF级Wistar雌性大鼠12只,均分为对照组和模型组。实验期间,对... 目的通过模拟高催乳素血症及免疫炎症状态,建立非哺乳期乳腺炎(non-puerperal mastitis,NPM)大鼠模型,评价其乳腺局部炎症特征,为乳腺疑难疾病的诊疗研究提供依据。方法选用SPF级Wistar雌性大鼠12只,均分为对照组和模型组。实验期间,对照组未接受任何实验性操作和药物处理;模型组连续7 d每日皮下注射1次盐酸甲氧氯普胺注射液100 mg/kg,在注射首日后第10、20、30天分别采用ELISA法检测血清催乳素水平。注射7 d后,将200μL哺乳期SD母鼠乳汁混合200μL完全弗氏佐剂制备为油包水乳剂,多点皮下注射至模型组大鼠背部进行首次免疫。首次免疫7 d后,再将油包水乳剂经多点皮下注射至大鼠第3、4、5对乳房进行末次免疫。末次免疫后连续观察乳房外观28 d,计算乳腺结节大小;并于第3、7、14、28天,通过HE染色分析乳腺组织形态学,免疫组织化学法检测CD138表达水平,ELISA法测定乳腺组织中白细胞介素(interleukin,IL)-6、IL-1β、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α和诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)含量,以综合评价造模情况。结果模型组大鼠可见乳腺皮肤破溃,并于破溃处闻及恶臭味,触诊及超声下可见乳腺结节形成。HE染色显示,末次免疫后第3天大鼠乳腺组织中正常导管及小叶结构消失,并见大量浆细胞浸润;第7天可见乳腺导管扩张,导管上皮坏死脱落,管周浆细胞、淋巴细胞(以T淋巴细胞为主)浸润明显;第14天时可见大量纤维脂肪组织、小血管及肉芽组织增生,间质内可见散在浆细胞;第28天时炎性细胞浸润、纤维组织增生现象减轻,肉芽肿形成。大鼠在造模成功后第10天、第20天催乳素水平逐渐升高(P<0.05,P<0.001);模型组大鼠在末次免疫后第3、7、14、28天时,乳腺组织中IL-6和TNF-α含量均较对照组升高(P<0.05);IL-1β含量在末次免疫后第3、7、14天时较对照组升高(P<0.01),第28天时略低于对照组(P>0.05);iNOS在末次免疫后第7天显著高于对照组(P<0.001)。结论成功构建大鼠NPM模型,其乳房局部具有肿块、脓肿、溃疡等表现以及乳腺导管扩张和浆细胞浸润的典型病理特征,可为该临床疑难疾病的诊疗研究奠定基础。 展开更多
关键词 非哺乳期乳腺炎 WISTAR大鼠 催乳素 免疫炎症
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磷酸二酯酶在金黄色葡萄球菌性乳腺炎中的表达分析
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作者 张良 万凯 +2 位作者 陈灰 李慧萍 刘淑英 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2024年第1期1-9,16,共10页
为了探究磷酸二酯酶(PDEs)家族成员表达与金黄色葡萄球菌性乳腺炎的关系,试验采用PCR技术检测了PDE家族除PDE6、PDE10和PDE11基因外的各亚型在奶牛乳腺上皮细胞(bMECs)、小鼠乳腺上皮细胞(mMECs)及小鼠乳腺(mMG)中的表达情况,实时荧光定... 为了探究磷酸二酯酶(PDEs)家族成员表达与金黄色葡萄球菌性乳腺炎的关系,试验采用PCR技术检测了PDE家族除PDE6、PDE10和PDE11基因外的各亚型在奶牛乳腺上皮细胞(bMECs)、小鼠乳腺上皮细胞(mMECs)及小鼠乳腺(mMG)中的表达情况,实时荧光定量PCR技术检测了金黄色葡萄球菌刺激下这些PDE家族亚型的表达差异及PDE4抑制剂RO-20-1724对金黄色葡萄球菌诱导的炎症因子表达的影响。结果表明:在bMECs中,PDE3B、PDE5A、PDE8B、PDE9A基因呈高表达;在mMECs中,PDE2A基因呈高表达;而在mMG中,PDE2A、PDE3A基因呈高表达。金黄色葡萄球菌刺激8 h后bMECs中PDE1C、PDE4A、PDE4B、PDE4C、PDE4D、PDE5A、PDE8A基因的相对表达量显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01),而PDE1B、PDE7A、PDE7B基因相对表达量显著或极显著降低(P<0.05或P<0.01);mMECs中PDE1B、PDE1C、PDE2A、PDE3A、PDE4A、PDE4C、PDE4D、PDE5A基因相对表达量极显著升高(P<0.01),而PDE7A基因相对表达量极显著降低(P<0.01);mMG中PDE1B、PDE3A、PDE4C、PDE4D、PDE5A、PDE8A、PDE8B基因相对表达量显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01),而PDE1C、PDE4B、PDE7B基因相对表达量极显著降低(P<0.01)。加入PDE4抑制剂RO-20-1724孵育8 h后可极显著降低金黄色葡萄球菌诱导的mMECs中IL-1β基因的相对表达量。说明乳腺上皮细胞中PDE家族的一些亚型表达存在种属差异,金黄色葡萄球菌感染后可引起不同PDE亚型表达发生改变。 展开更多
关键词 乳腺炎 磷酸二酯酶 金黄色葡萄球菌 MRNA表达 上皮细胞
原文传递
母猪乳房炎的诊断与防治 被引量：2
17
作者 周传稳 《养猪》 2024年第5期78-79,共2页
文章阐明引起母猪乳房炎的主要原因,包括环境、母猪生理特性、初生仔猪未剪牙及饲喂管理等因素。简述乳房炎的主要症状表现,提出了临床诊断、实验室检测等诊断方法和西药与中药治疗办法,并落实科学饲养管理、仔猪护理等预防性措施,以全... 文章阐明引起母猪乳房炎的主要原因,包括环境、母猪生理特性、初生仔猪未剪牙及饲喂管理等因素。简述乳房炎的主要症状表现,提出了临床诊断、实验室检测等诊断方法和西药与中药治疗办法,并落实科学饲养管理、仔猪护理等预防性措施,以全面提升乳房炎的防治水平。 展开更多
关键词 母猪乳房炎 病因分析 诊断 防治
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奶牛乳房炎大肠埃希氏菌和肺炎克雷伯菌及奇异变形杆菌三重TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立 被引量：1
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作者 朱安基 李世宏 +4 位作者 徐浩 杨亚军 白莉霞 李剑勇 许笑 《动物医学进展》 北大核心 2024年第12期19-25,共7页
为建立检测奶牛乳房炎主要革兰氏阴性致病菌的快速诊断方法,选择大肠埃希氏菌phoa基因,肺炎克雷伯菌rcsa基因以及奇异变形杆菌urer基因设计合成特异性引物与探针,建立了奶牛乳房炎大肠埃希氏菌和肺炎克雷伯菌及奇异变形杆菌三重Taq Man... 为建立检测奶牛乳房炎主要革兰氏阴性致病菌的快速诊断方法,选择大肠埃希氏菌phoa基因,肺炎克雷伯菌rcsa基因以及奇异变形杆菌urer基因设计合成特异性引物与探针,建立了奶牛乳房炎大肠埃希氏菌和肺炎克雷伯菌及奇异变形杆菌三重Taq Man荧光定量PCR检测方法。该方法可在120 min内通过一管反应体系特异性鉴定出3种常见的奶牛乳房炎革兰氏阴性致病菌,最低检测限可达1×10^(1)copies/μL且特异性和重复性良好,以此方法对80份奶牛乳房炎生乳样进行检测,大肠埃希氏菌检出率为35%(28/80),肺炎克雷伯菌检出率为21.2%(17/80),奇异变形杆菌检出率为11.2%(9/80)。结果表明,所建立的奶牛乳房炎大肠埃希氏菌和肺炎克雷伯菌及奇异变形杆菌三重Taq Man荧光定量PCR检测方法具有操作简单、特异性强、灵敏度高的特点,适用于奶牛乳房炎的临床诊断,对革兰氏阴性致病菌的快速检测及合理用药具有指导意义。 展开更多
关键词 奶牛乳房炎 实时荧光定量PCR 大肠埃希氏菌 肺炎克雷伯菌 奇异变形杆菌
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奶牛乳房炎4种常见致病菌多重PCR检测方法的建立及应用 被引量：3
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作者 田堯 蔡文杰 +5 位作者 杨俊 王红兵 王慧 陈一峰 黎满香 刘俊琦 《湖南畜牧兽医》 2024年第5期40-43,52,共5页
为建立一种能同时检测大肠杆菌、乳房链球菌、金黄色葡萄球菌、无乳链球菌等4种病菌的多重PCR检测方法,研究针对大肠杆菌pauA基因、乳房链球菌pauA基因、金黄色葡萄球菌nuc基因、无乳链球菌cfb基因设计特异引物,通过对反应体系及反应条... 为建立一种能同时检测大肠杆菌、乳房链球菌、金黄色葡萄球菌、无乳链球菌等4种病菌的多重PCR检测方法,研究针对大肠杆菌pauA基因、乳房链球菌pauA基因、金黄色葡萄球菌nuc基因、无乳链球菌cfb基因设计特异引物,通过对反应体系及反应条件的优化,成功建立了一种高效准确的多重PCR检测方法。特异性试验结果显示,该方法能够特异性扩增4种目的致病菌,而其他病原菌未见扩增,具有较高特异性;灵敏性试验结果显示,该方法对大肠杆菌、乳房链球菌和无乳链球菌的最低检出限度为0.1 ng/μL、对金黄色葡萄球菌最低检出限度为1 ng/μL。采用多重PCR方法和单重PCR方法分别对湖南省采集的460份临床样品进行检测,结果显示二者符合率为100%。该研究为生产实践提供了一种快速、准确的奶牛乳房炎检测技术,可用于监测奶牛乳房炎和维持奶牛乳房健康。 展开更多
关键词 奶牛乳房炎 多重PCR 大肠杆菌 乳房链球菌 金黄色葡萄球菌 无乳链球菌
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阿霉素处理后对犬乳腺肿瘤细胞系CHMp lncRNAs差异表达的影响
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作者 张琰 吴梅金 +1 位作者 周家豪 刁洪秀 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期2716-2726,共11页
旨在探究阿霉素对犬乳腺肿瘤细胞中lncRNAs分子的影响,寻找犬乳腺肿瘤潜在生物标志物和治疗靶点,本试验采用RNA-Seq技术对经阿霉素处理的犬乳腺肿瘤细胞进行转录组测序分析,筛选差异表达lncRNAs,应用GO富集和KEGG富集分析进行基因功能... 旨在探究阿霉素对犬乳腺肿瘤细胞中lncRNAs分子的影响,寻找犬乳腺肿瘤潜在生物标志物和治疗靶点,本试验采用RNA-Seq技术对经阿霉素处理的犬乳腺肿瘤细胞进行转录组测序分析,筛选差异表达lncRNAs,应用GO富集和KEGG富集分析进行基因功能和途径注释并验证其表达情况。结果显示,经阿霉素处理后的犬乳腺肿瘤细胞中共有277个差异表达的lncRNAs,其中,147个表达上调,130个表达下调,主要涉及细胞新陈代谢、转录程序失调、ECM受体相互作用以及细胞坏死性凋亡等生物学过程。实时荧光定量PCR技术随机检测3个差异表达的lncRNAs,其表达趋势与RNA-Seq一致,表明RNA-Seq测序结果的准确性。本研究基于转录组学技术,综合分析阿霉素抗犬乳腺肿瘤细胞相关lncRNAs表达变化的整体特征,揭示其可能的调控新机制,为犬乳腺肿瘤的靶向治疗和潜在生物标志物的开发利用提供参考。 展开更多
关键词 lncRNA 犬 乳腺肿瘤细胞 阿霉素 RNA-SEQ
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