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布氏杆菌分泌蛋白BspD真核表达载体的构建及在小鼠巨噬细胞中的表达
1
作者 李志强 王书利 +7 位作者 朱庆妍 蔺秋慧 高丰衣 马亚静 齐德重 祝芳 孙婷 解然 《畜牧与兽医》 北大核心 2025年第6期83-91,共9页
旨在构建布氏杆菌分泌蛋白BspD基因的真核表达载体,研究其在小鼠巨噬细胞RAW 264.7中的表达情况。根据GenBank公布的牛种布氏杆菌2308 bspD基因序列进行合成和设计特异性引物,通过PCR获得bspD基因片段,并将其克隆至pcDNA3.1-EGFP载体,... 旨在构建布氏杆菌分泌蛋白BspD基因的真核表达载体,研究其在小鼠巨噬细胞RAW 264.7中的表达情况。根据GenBank公布的牛种布氏杆菌2308 bspD基因序列进行合成和设计特异性引物,通过PCR获得bspD基因片段,并将其克隆至pcDNA3.1-EGFP载体,获得真核表达载体pcDNA3.1-EGFP-bspD;pcDNA3.1-EGFP-bspD经酶切和测序分析鉴定后,用Lipofectamine 3000脂质体转染至小鼠巨噬细胞RAW 264.7,采用Western blot检测BspD蛋白在RAW 264.7细胞的表达,用ELISA试剂盒检测细胞上清中细胞因子γ-干扰素(IFN-γ)和白细胞介素-4(IL-4)的分泌水平,利用水溶性四唑盐-1(WST-1)细胞毒性检测试剂盒检测细胞毒性水平,利用细胞活力检测试剂盒-8(CCK-8)检测细胞增殖情况,利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测细胞凋亡基因Caspase-3和Caspase-8的表达水平。结果:阳性克隆载体经PCR扩增出936 bp的bspD基因片段,经限制性内切酶KpnⅠ和BamHⅠ酶切验证正确,测序分析显示与GenBank公布的序列信息同源性为100%,表明真核表达载体pcDNA3.1-EGFP-bspD构建成功;Western blot检测结果为pcDNA3.1-EGFP-bspD转染组在36 kDa处出现条带,与预期结果相符,表明BspD蛋白能够在RAW 264.7细胞中表达;细胞因子检测结果显示,BspD蛋白可诱导RAW 264.7细胞分泌辅助型T细胞1(Th1)型细胞因子IFN-γ和辅助型T细胞2(Th2)型细胞因子IL-4;细胞毒性检测结果显示,BspD蛋白对细胞无毒性,BspD蛋白对细胞增殖和Caspase-3和Caspase-8的表达无显著影响。综上,布氏杆菌分泌蛋白BspD能够在RAW 264.7细胞中表达,为进一步研究其功能及分子机制提供参考。 展开更多
关键词 布氏杆菌 BspD蛋白 真核表达 巨噬细胞
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群体感应分子3OC12HSL对小鼠生长、血液和肠道的影响 被引量：1
2
作者 陈帅 高前磊 +4 位作者 李川皓 张相伦 王迎雪 袁震 盛清凯 《山东农业科学》 北大核心 2024年第4期159-163,共5页
本研究旨在探讨群体感应分子3OC12HSL对小鼠生长、炎症因子及肠粘膜屏障的影响。采用高剂量盐酸林可霉素灌胃方法建立小鼠腹泻模型,对正常小鼠和腹泻模型小鼠分别灌胃生理盐水、二甲基亚砜(DMSO)、溶于DMSO的3OC12HSL溶液。结果显示,灌... 本研究旨在探讨群体感应分子3OC12HSL对小鼠生长、炎症因子及肠粘膜屏障的影响。采用高剂量盐酸林可霉素灌胃方法建立小鼠腹泻模型,对正常小鼠和腹泻模型小鼠分别灌胃生理盐水、二甲基亚砜(DMSO)、溶于DMSO的3OC12HSL溶液。结果显示,灌胃3OC12HSL降低正常小鼠和腹泻小鼠的增重,提高血清中D-乳酸、TNF-α含量,降低大肠长度及空肠和回肠绒毛长度(P<0.05);腹泻提高血清中IL-1、IL-8、TNF-α含量,降低空肠及回肠绒毛长度(P<0.05);灌胃3OC12HSL和腹泻对回肠绒隐比有协同降低趋势,但差异不显著(P>0.05)。综上,3OC12HSL不利于小鼠的生长,腹泻可能加重3OC12HSL的影响。 展开更多
关键词 3OC12HSL 小鼠 腹泻 生长 血液 肠道 粘膜屏障
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牦牛屠宰环境中大肠杆菌分离菌株的病原学特征研究 被引量：5
3
作者 孟含 陈娟 +2 位作者 龙虎 佟尧 唐俊妮 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第3期80-84,88,共6页
为了了解牦牛屠宰过程中大肠杆菌污染状况、菌株所携带的毒力基因及其耐药情况。2018年11月份以随机采样方式从成都市某屠宰场采集样品150份,其中牦牛胴体拭子30份,鼻腔拭子60份,土壤拭子31份,皮毛拭子29份,应用伊红美蓝琼脂培养基和麦... 为了了解牦牛屠宰过程中大肠杆菌污染状况、菌株所携带的毒力基因及其耐药情况。2018年11月份以随机采样方式从成都市某屠宰场采集样品150份,其中牦牛胴体拭子30份,鼻腔拭子60份,土壤拭子31份,皮毛拭子29份,应用伊红美蓝琼脂培养基和麦康凯琼脂培养基对大肠杆菌进行初步分离和鉴定,PCR法扩增分离菌株携带的主要毒力因子基因est、elt、stx、eaeA、ipaH、aggR、ehxA、hlyA、astA等,采用K-B纸片扩散法检测细菌的耐药性。结果表明:从150份牦牛屠宰样品中共分离到20株大肠杆菌,分离率为13.33%(20/150)。不同样品中大肠杆菌检出率由高到低依次为牦牛胴体拭子(16.67%,5/30)、鼻腔拭子(15.00%,9/60)、土壤拭子(12.90%,4/31)和皮毛拭子(6.90%,2/29)。从20株大肠杆菌中均检出astA基因,15株菌株检出eaeA基因,9株菌株检出aggR基因,5株菌株检出ipaH基因,3株菌株检出stx2基因,分别从1株菌株检出stx1、ehxA和hlyA基因。大肠杆菌对氨苄西林的耐药率为50%,其次为氯霉素(45%)、链霉素(5%)、四环素(5%)。说明在牦牛屠宰过程中会污染致病性大肠杆菌,对食品安全带来潜在风险。 展开更多
关键词 大肠杆菌 牦牛 屠宰 流行 耐药性 毒力基因
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