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牛结核病大罐奶抗体检测方法的评估 被引量：1
1
作者 陈颖钰 张琼文 +2 位作者 王杰 陈洁 郭爱珍 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2025年第1期75-79,共5页
为了评估大罐奶抗体检测是否可用于牛结核病的监测和预警,本试验利用酶联免疫吸附试验(ELISA)抗体检测法,对采自湖北省3家规模化奶牛场的85头奶牛的奶样与其对应的血样进行牛结核病抗体相关性分析;并通过检测27家奶牛场的大罐奶和2998... 为了评估大罐奶抗体检测是否可用于牛结核病的监测和预警,本试验利用酶联免疫吸附试验(ELISA)抗体检测法,对采自湖北省3家规模化奶牛场的85头奶牛的奶样与其对应的血样进行牛结核病抗体相关性分析;并通过检测27家奶牛场的大罐奶和2998份个体奶样,分析大罐奶抗体水平与牛结核病流行率之间的相关性,建立基于大罐奶抗体检测的牛结核病的流行率预测模型;为确定不同效价阳性奶样在大罐奶中的检测能力,通过对不用阳性奶样进行稀释后混样检测,分析阳性奶样的效价和具有相近大罐奶S/P值的牛群中动物个体的抗体水平经验分布函数的差异性。结果显示,奶样和血样的牛结核病抗体检测结果之间具有高度一致性(Kappa=0.862)和相关性(Pearson相关系数r=0.976,P<0.01)。大罐奶抗体水平检测结果与牛结核病流行率之间具有中度相关性(Pearson相关系数r=0.681,P<0.01),流行率预测模型y=e4.7010+1.8784ln(x)-0.01(R2=0.8933)的预测能力为89.33%。分别稀释不同效价的阳性奶样,牛结核弱阳性奶样2倍稀释后阳性检出率为16.67%,中阳性奶样16倍稀释后阳性检出率为50.00%,高阳性奶样16倍稀释后阳性检出率为100%。结果表明,奶样可用于牛结核病的抗体检测,且大罐奶抗体水平与牛结核病流行率之间具有相关性,并可以通过模型预测牛结核病的流行率。大罐奶抗体检测可作为一项经济快捷的检测手段用于牛结核病的监测和预警,对于有着较高流行率或存在有强阳性个体的牛场,该检测方法敏感性更高,更为适用。 展开更多
关键词 牛结核病 大罐奶 效价 预测模型
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动物结核分枝杆菌复合群间接ELISA诊断方法的建立 被引量：1
2
作者 庄勇 向蒙 +6 位作者 冯桂丹 杨显超 夏炉明 肖文轩 张蒙 王建 张鹭 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第1期125-133,共9页
本研究通过前期已构建好一些优势抗原的表达载体库,以生物信息学工具分析候选抗原的理化性质、二级结构、B细胞抗原表位,选择优势抗原,以纯化后的融合抗原ECX作为包被抗原,将HRP标记的Protein G作为酶标的二抗,成功建立了一种用于多动... 本研究通过前期已构建好一些优势抗原的表达载体库,以生物信息学工具分析候选抗原的理化性质、二级结构、B细胞抗原表位,选择优势抗原,以纯化后的融合抗原ECX作为包被抗原,将HRP标记的Protein G作为酶标的二抗,成功建立了一种用于多动物结核分枝杆菌复合群间接ELISA诊断的方法。该方法适用于实验室样品批量检测,其敏感性为0.912,特异性为0.949。应用本研究建立的动物结核分枝杆菌间接ELISA法和商品化动物结核分枝杆菌夹心ELISA抗体检测试剂盒共检测犬、猫、野生动物、SPF实验动物血清共552份。其中间接ELISA方法共检出6份血清抗体阳性,阳性检出率为1.09%(6/552);商品化夹心法试剂盒共检出8份血清抗体阳性,阳性检出率为1.45%(8/552);两者之间阳性重合数为6份,阳性重合率为85.72%(6/7);阴性重合数为544份,阴性重合率为99.82%(544/545)。结果表明,两种诊断方法的检测结果具有较高的一致性。本方法的建立,与国外商品化试剂盒比较,不但有望实现这类检测产品的国产替代,同时实现了一种方法对不同物种来源血清的快速检测。 展开更多
关键词 抗原 结核分枝杆菌复合群 ECX 间接ELISA
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基于结核分枝杆菌牛变种C68001随机突变体库筛选和鉴定成膜相关基因
3
作者 时文健 徐磊 +5 位作者 张泽 杨蕊 辛凌翔 王楠 陈祥 鑫婷 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第8期3992-4006,共15页
旨在利用结核分枝杆菌牛变种C68001菌株的突变体文库,高通量筛选鉴定影响生物膜形成的关键基因。本研究利用结核分枝杆菌牛变种C68001菌株的突变体文库,用苏通培养基进行培养,筛选生物膜表型差异明显的突变株,通过抗性标记挽救法及测序... 旨在利用结核分枝杆菌牛变种C68001菌株的突变体文库,高通量筛选鉴定影响生物膜形成的关键基因。本研究利用结核分枝杆菌牛变种C68001菌株的突变体文库,用苏通培养基进行培养,筛选生物膜表型差异明显的突变株,通过抗性标记挽救法及测序,确定突变基因位置;检测突变基因对菌株抗氧化性及抗SDS性能的影响;进一步以噬菌体系统构建靶标基因缺失、回补及过表达菌株,利用扫描电子显微镜检测靶基因对细菌菌丝影响,通过测定细菌的抗酸、抗氧化、抗SDS以及在小鼠巨噬细胞系J774A.1中的存活性能,检测靶标基因对细菌抗逆性和胞内存活的影响。利用突变体文库,筛选到8个生物膜形成缺陷的菌株,鉴定其中4个为单基因突变菌株,突变基因分别为Rv1096、Rv3425、Rv 3136和Rv 3671c;构建Rv 3671c基因敲除、回补和过表达菌株,通过PCR及Western blot验证构建成功,测试其生物膜形成能力、抗逆性和胞内存活性能,发现Rv 3671c基因可提高结核分枝杆菌牛变种抗SDS、生物膜形成及胞内存活等方面的能力。Rv 3671c基因在结核分枝杆菌牛变种C68001的生物膜形成和抗逆性能力中发挥重要作用。构建的结核分枝杆菌牛变种C68001菌株突变体文库可高效用于靶标基因的筛选和鉴定,为探索结核分枝杆菌牛变种的基因功能提供了可靠的工具。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌牛变种 Himar 1转座子 随机插入突变库 生物膜 Rv 3671c
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微生物菌群调控人畜共患结核病的研究进展
4
作者 许霄峰 张广智 +8 位作者 鑫婷 叶建新 张建伟 贾丽 钱佳豪 温贺飞 吴慧光 蒋卉 丁家波 《动物医学进展》 北大核心 2025年第1期91-96,共6页
目前,人畜共患结核病(zTB)仍是世界上最重要的细菌传染性疫病之一,严重威胁人和动物健康以及公共卫生安全。机体数量庞大的微生物菌群积极参与着机体的发育、免疫调控、代谢等。研究发现微生物菌群和zTB的发生、发展、治疗、疫苗免疫具... 目前,人畜共患结核病(zTB)仍是世界上最重要的细菌传染性疫病之一,严重威胁人和动物健康以及公共卫生安全。机体数量庞大的微生物菌群积极参与着机体的发育、免疫调控、代谢等。研究发现微生物菌群和zTB的发生、发展、治疗、疫苗免疫具有紧密的相关性,现已成为诸多领域中的研究热点。菌群对zTB进程的调控可通过诸多途径直接或间接地进行,如菌群稳态、代谢物及对免疫的调控等。基于此,论文综述了目前微生物菌群与zTB相关研究的最新进展,重点讨论了肠道菌群和肺部菌群与zTB的关联及调节机制,分析了肠-肺轴相互作用、菌群代谢产物对zTB的影响,探讨了通过调节宿主的菌群组成和功能对预防和辅助治疗结核病的潜在价值,旨在为zTB防控提供理论基础和借鉴。 展开更多
关键词 人畜共患结核病 肠道微生物菌群 肠-肺轴 益生菌
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牛C-反应蛋白夹心ELISA定量检测方法的建立与应用
5
作者 靳家鑫 杨蕊 +4 位作者 张泽 时文健 张广智 丁家波 鑫婷 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第6期764-769,共6页
制备针对牛C-反应蛋白(CRP)的单克隆抗体,建立牛CRP双抗体夹心ELISA定量检测方法,为牛细胞因子检测以及感染的快速诊断提供有力工具。利用原核表达系统和293F真核表达系统表达牛CRP,采用亲和层析纯化重组蛋白,免疫小鼠后利用淋巴细胞杂... 制备针对牛C-反应蛋白(CRP)的单克隆抗体,建立牛CRP双抗体夹心ELISA定量检测方法,为牛细胞因子检测以及感染的快速诊断提供有力工具。利用原核表达系统和293F真核表达系统表达牛CRP,采用亲和层析纯化重组蛋白,免疫小鼠后利用淋巴细胞杂交瘤技术制备并筛选针对牛CRP的单抗,以棋盘法筛选抗体对并建立夹心ELISA方法,以临床样品验证该方法的可行性。SDS-PAGE结果显示成功纯化到CRP,经3轮亚克隆成功获得5株针对牛CRP的单抗细胞株,其中3H4和2G4-HRP抗体对的检测效果最佳。临床样品检测显示结核菌感染早期的牛血清中CRP质量浓度显著高于健康牛,结果说明制备的牛CRP单抗对可以识别天然牛CRP。检测结核排菌期和非排菌期的牛血浆样品,发现排菌期的结核病牛CRP质量浓度显著高于非排菌期的结核病牛。结果表明,建立的牛CRP夹心ELISA检测方法可用于牛结核病的诊断,为分析牛免疫感染状态及诊断牛感染性疾病奠定了基础。 展开更多
关键词 C-反应蛋白 单克隆抗体 ELISA 牛结核病
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小鼠tfeb基因对巨噬细胞自噬功能影响的研究
6
作者 张镇钧 冯婷婷 +8 位作者 聂蝉蝉 段祎凡 陈春文 郭若男 高云洁 李梦雨 崔莹莹 党光辉 刘思国 《中国预防兽医学报》 北大核心 2025年第6期614-622,共9页
转录因子EB(TFEB)作为自噬的主要转录调节因子,通过调控细胞自噬体和溶酶体相关基因的表达影响自噬的发生。为研究TFEB在结核分枝杆菌(MTB)介导细胞自噬中的作用,本实验采用CRISPR/Cas9原理构建重组质粒pSpCas9(BB)-2A-GFP-tfeb,并测序... 转录因子EB(TFEB)作为自噬的主要转录调节因子,通过调控细胞自噬体和溶酶体相关基因的表达影响自噬的发生。为研究TFEB在结核分枝杆菌(MTB)介导细胞自噬中的作用,本实验采用CRISPR/Cas9原理构建重组质粒pSpCas9(BB)-2A-GFP-tfeb,并测序鉴定正确后电转化小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7细胞,简写为WT细胞),经流式细胞仪筛选GFP阳性单克隆细胞,经PCR及western blot鉴定,将鉴定正确的细胞连续传10代,每隔3代均经western blot鉴定。结果显示,经流式细胞术共筛选到25株出现绿色荧光的单克隆细胞,对这些细胞纯化后经PCR鉴定并测序结果显示,仅一株单克隆细胞敲除tfeb中PAM序列(AGG)前的第3位碱基;western blot鉴定结果显示,相比正常细胞,该细胞无57 ku的特异性条带,且每隔3代该细胞均无该57 ku的特异性条带,表明tfeb基因缺失细胞系Δtfeb RAW264.7正确构建,且其遗传稳定性较强。将MTB H37Ra株分别感染WT细胞和Δtfeb RAW264.7细胞,12 h后经western blot检测各组细胞中自噬相关蛋白LC3-II和溶酶体相关膜糖蛋白1(LAMP1)的表达水平,通过RT-qPCR检测自噬相关基因maplc3、ctsb、lamp1、tpp1的转录水平,采用激光共聚焦试验检测TFEB对H37Ra诱导细胞自噬流形成的影响。Western blot和RT-qPCR结果显示,与未感染的两种细胞相比,H37Ra菌株感染的WT细胞中LC3-II和LAMP1蛋白的表达量均极显著升高(P<0.01、P<0.001);自噬相关基因maplc3和溶酶体相关基因lamp1、ctsb和tpp1的转录水平均显著和极显著升高(P<0.05、P<0.01)。H37Ra菌株感染的Δtfeb RAW264.7细胞中上述两种蛋白的表达量均无显著差异,其上述两种蛋白的表达水平均低于WT细胞且该细胞中上述自噬体和溶酶体相关基因的转录水平均无显著差异。激光共聚焦试验结果显示,与WT细胞相比,H37Ra株感染的WT细胞中黄色荧光(成熟自噬体)和红色荧光(溶酶体)的数量均极显著增加(P<0.01),且自噬流通畅,表明WT细胞发生了自噬;H37Ra株感染的Δtfeb RAW264.7细胞与未感染的该细胞中二者的荧光数量均无显著差异,且二者荧光的数量均比WT细胞整体降低,自噬流受阻。上述结果表明,本研究构建了tfeb基因稳定缺失的细胞系Δtfeb RAW264.7,且首次证实TFEB是MTB介导巨噬细胞自噬的关键宿主因子,在巨噬细胞自噬过程中发挥关键作用,本研究为深入探究TFEB在MTB介导巨噬细胞自噬中的作用提供了细胞模型和参考依据。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9 转录因子EB蛋白 自噬 结核分枝杆菌
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γ-干扰素试验及比较皮试在结核污染牛群的应用研究 被引量：27
7
作者 张喜悦 呼西旦 +3 位作者 杨经纬 曹瑞 黄保续 范伟兴 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期53-56,共4页
目的引进了国外的牛结核病γ-干扰素试验和比较变态反应,与我国常用单纯颈部变态反应试验进行比较,评价不同检疫方法的优缺点。方法5个结核污染牛群的167头牛同时用牛结核病γ-干扰素试验和比较变态反应进行检测,其中的106头牛用于其他... 目的引进了国外的牛结核病γ-干扰素试验和比较变态反应,与我国常用单纯颈部变态反应试验进行比较,评价不同检疫方法的优缺点。方法5个结核污染牛群的167头牛同时用牛结核病γ-干扰素试验和比较变态反应进行检测,其中的106头牛用于其他变态反应方法的比对。结果167头牛中,γ-干扰素试验和国外比较变态反应检出阳性符合数为89头,阳性符合率为92.7%(89/96);106头牛中,国产牛型结核菌素(PPD)检与国外牛型PPD检出的阳性符合数为78头,阳性符合率为93.41%(78/83.5),国内常规皮试检出阳性牛84头,阳性率为79.25%(84/106),国外常规皮试检出阳性牛66头,阳性率为62.26%(66/106),国内比较变态反应与国外比较变态反应之间的阳性符合数为59头,阳性符合率为92.19%(59/64)。结论证实γ-干扰素试验和国外比较变态反应之间具有较好的阳性符合率,国内牛PPD与国外牛PPD试验结果相似,但国内常规皮试的特异性很低,而将国内皮试改进为国内比较皮试,则与国外常规的比较皮试具有较好的阳性符合率。 展开更多
关键词 牛结核 Γ-干扰素 比较变态反应
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γ-干扰素ELISA检测方法在广西牛结核病流行病学调查中的应用 被引量：13
8
作者 徐贤坤 熊毅 +5 位作者 韦达有 黄小武 蓝纪 黄胜斌 马琳 刘棋 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期667-670,共4页
【目的】摸清广西水牛及奶牛结核病的流行情况，为制定净化广西牛结核病防制策略提供参考。【方法】2008～2011年采用皮内变态反应和γ-干扰素ELISA检测方法联合对广西奶牛及水牛开展结核病流行病学调查，共检疫5478头奶牛和1580头奶水... 【目的】摸清广西水牛及奶牛结核病的流行情况，为制定净化广西牛结核病防制策略提供参考。【方法】2008～2011年采用皮内变态反应和γ-干扰素ELISA检测方法联合对广西奶牛及水牛开展结核病流行病学调查，共检疫5478头奶牛和1580头奶水牛。【结果】2008～2011年从广西南宁、柳州、北海、钦州、桂林等市累积检测出皮内变态反应阳性奶牛63头、水牛17头，阳性检出率分别为1.15％和1.08％，总体上广西奶牛及水牛结核病阳性率呈现逐年降低的趋势。通过采用自制水γ－干扰素EusA检测试剂盒和Bovigam牛结核分枝杆菌γ-干扰素检测试剂盒对牛结核病进行检测，发现γ-干扰素ELISA检测的牛结核病阳性率低于皮内变态反应，且准确度高。【结论】对牛群进行结核病检测时，先以变态反应检疫牛群，再结合γ-干扰素ELISA检测进行综合判断，更有利于牛结核病的检测与净化。 展开更多
关键词 牛结核病 γ-干扰素ELISA 皮内变态反应 流行病学调查 阳性率 广西
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高分辨率熔解曲线技术用于结核分枝杆菌临床分离株异烟肼耐药性的快速检测 被引量：14
9
作者 杨彩虹 杨敏 +4 位作者 于璐 包海洋 吴长新 曹旭东 陈创夫 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期403-412,共10页
目的评价高分辨率熔解曲线分析技术(high-resolution melting curve,HRM)检测结核分枝杆菌异烟肼耐药性的应用价值。方法 1)通过传统比例法药敏实验对本实验室保存的49株结核分枝杆菌进行异烟肼耐药性分析。2)进一步对该结核分枝杆菌进... 目的评价高分辨率熔解曲线分析技术(high-resolution melting curve,HRM)检测结核分枝杆菌异烟肼耐药性的应用价值。方法 1)通过传统比例法药敏实验对本实验室保存的49株结核分枝杆菌进行异烟肼耐药性分析。2)进一步对该结核分枝杆菌进行异烟肼耐药相关基因KatG基因和inhA基因进行异烟肼耐药决定区测序分析,筛查突变位点。3)根据筛查到的突变位点设计高分辨率熔解曲线分析所用的特异性引物,对异烟肼耐药基因耐药决定区进行高分辨率熔解曲线分析检测DNA突变,评估用高分辨率熔解曲线分析技术对结核分枝杆菌异烟肼耐药性检测的效率。结果 1)比例法药敏结果显示,49株实验菌株中20株为异烟肼耐药株,29株为异烟肼敏感株。2)测序分析结果显示:(1)KatG基因出现了4种突变形式,分别是234单位点突变;234、315双位点突变;234、463双位点突变;234、315、463三位点联合突变。(2)inhA基因检测到3种突变,即-8位、-15位、-152位。3)(1)对耐药株的基因突变进行分析发现:20株异烟肼耐药株中11株存在KatG基因第315位密码子的突变、占异烟肼耐药株的55%;6株存在inhA基因-15(4株)位碱基、-8(1株)位碱基、-152(1株)位碱基的突变,共占异烟肼耐药株的30%;2株同时存在基因KatG315密码子和inhA-15位碱基的突变,占异烟肼耐药株的10%;1株均未检测到KatG基因和inhA基因的突变,占异烟肼耐药株的5%。通过基因突变检测结核分枝杆菌异烟肼耐药性的敏感性为95%、特异性为100%。(2)用高分辨率溶解曲线检测实验菌株耐药基因突变的结果显示,18株存在基因突变,24株不存在基因突变,检测的灵敏度为94.7%、特异性为80%。(3)以高分辨率熔解曲线检测到突变为耐药的判断标准,检出19株为耐药株,24株为敏感株。以比例法药敏结果为参照,检测的灵敏度为95%、特异性为82.76%。结论高分辨率溶解曲线用于结核分枝杆菌对异烟肼耐药性的检测具有较好的灵敏度,耗时短,在异烟肼耐药结核病的快速诊断方面具有一定的应用价值。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 高分辨率熔解曲线(HRM) DNA测序 耐药性 异烟肼
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牛结核病诊断方法的研究进展 被引量：19
10
作者 王金果 刘爱林 +5 位作者 周向梅 苑方重 尹晓敏 杨建民 杨利峰 赵德明 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第7期194-198,共5页
牛结核病是由牛分支杆菌、结核分支杆菌、禽分支杆菌等引起的一类慢性消耗性疾病,是牛各种传染病中致死率最高的疾病之一,该病在人畜之间可以相互传染,很难根治,是影响养牛业和全人类健康的重大疾病,因此控制本病的传播和蔓延迫在眉睫... 牛结核病是由牛分支杆菌、结核分支杆菌、禽分支杆菌等引起的一类慢性消耗性疾病,是牛各种传染病中致死率最高的疾病之一,该病在人畜之间可以相互传染,很难根治,是影响养牛业和全人类健康的重大疾病,因此控制本病的传播和蔓延迫在眉睫。控制牛结核病的主要措施是及时检疫和根除病牛,定期对牛群进行检疫监控。近年来,随着生命科学的发展,进一步将传统细菌检测法、免疫学检测法和分子生物学检测法3种方法相结合,特别是分子水平上科学技术的发展,使牛结核病的诊断方法逐渐得到完善,同时获得了许多牛分支杆菌的特异性抗原及其基因,对于阐明结核分支杆菌和牛分支杆菌的分子进化和遗传变异规律等方面都具有重要的流行病学意义。 展开更多
关键词 牛结核病 分支杆菌 诊断方法
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应用TaqMan荧光定量PCR检测牛分枝杆菌 被引量：6
11
作者 王春雨 王振国 +4 位作者 刘金华 宋战昀 周亮 高宏伟 王全凯 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期133-136,共4页
为建立快速检测牛分枝杆菌(M.bovis)的TaqMan荧光定量PCR方法,本研究以GenBank登录的M.bovis特有229 bp基因为研究对象,设计并合成引物及探针。该方法具有较好的特异性,与标准质控菌株呈阳性反应,与其他微生物样品呈阴性反应;灵敏性最... 为建立快速检测牛分枝杆菌(M.bovis)的TaqMan荧光定量PCR方法,本研究以GenBank登录的M.bovis特有229 bp基因为研究对象,设计并合成引物及探针。该方法具有较好的特异性,与标准质控菌株呈阳性反应,与其他微生物样品呈阴性反应;灵敏性最低检测值可达1 pg/mL;对20阳性临床样品进行荧光定量PCR检测,均为阳性;而对培养为阴性的20份临床样品进行检测,6份为阳性。该研究结果表明,建立的方法特异性强,敏感性高,稳定性好,能够用于M.bovis的鉴别检测,对牛分枝杆菌病的快速检测和早期诊断具有重要意义。 展开更多
关键词 牛分枝杆菌病 鉴别检测 牛型结核杆菌 荧光定量PCR
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佐剂DDA和MPL对提高结核杆菌组合DNA疫苗免疫效果的比较研究 被引量：8
12
作者 余大海 蔡宏 朱玉贤 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第8期765-770,共6页
编码结核杆菌3种抗原Ag85B,MPT64,MPT83的基因片段插入真核表达载体作为组合疫苗免疫小鼠,DDA和MPL作为佐剂分别提高了此三价苗的免疫原性和免疫保护效果,且相比之下DDA优于MPL.添加DDA后,Ag85B,MPT64,MPT83抗原特异的IFN-γ含量分别为(... 编码结核杆菌3种抗原Ag85B,MPT64,MPT83的基因片段插入真核表达载体作为组合疫苗免疫小鼠,DDA和MPL作为佐剂分别提高了此三价苗的免疫原性和免疫保护效果,且相比之下DDA优于MPL.添加DDA后,Ag85B,MPT64,MPT83抗原特异的IFN-γ含量分别为(265.37±79.2)U/ml,(185.31±58.3)U/ml,(108.13±54.4)U/ml,分别比非佐剂组的高16U/ml,45U/ml和2U/ml,与MPL组3种抗原特异性IFN-γ的含量无显著差异.IL-4的含量在各组中无显著差异.攻毒后细菌计数结果显示,添加佐剂的三价苗组小鼠的肺脏和脾脏的载菌量分别比空载体组降低了2￣3个数量级,且佐剂DDA组显著优于佐剂MPL组和未加佐剂组.病理切片结果与载菌量数据相一致,添加佐剂组,特别是DDA组小鼠肺部淋巴细胞相对减少,巨噬细胞增多.因此,DDA作为佐剂能显著提高核酸疫苗的免疫效率,佐剂MPL不能提高结核杆菌多价核酸疫苗的免疫效率. 展开更多
关键词 结核分支杆菌 组合疫苗 佐剂 DDA MPL 免疫效果
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山东省规模化奶牛场结核病与副结核病流行病学调查研究 被引量：12
13
作者 韩猛 张亮 +5 位作者 王基隆 丁家波 刘来兴 谷祖烨 葛利江 杨宏军 《中国农学通报》 CSCD 2014年第14期10-13,共4页
近年来,随着中国奶业的快速发展,奶牛结核与副结核病越来越严重地威胁到行业的健康发展,牛结核与副结核病的防控也日益受到重视。缺乏牛结核与副结核病流行病学数据及有效的疫苗是中国控制牛结核与副结核病的最大障碍。由此本试验利用... 近年来,随着中国奶业的快速发展,奶牛结核与副结核病越来越严重地威胁到行业的健康发展,牛结核与副结核病的防控也日益受到重视。缺乏牛结核与副结核病流行病学数据及有效的疫苗是中国控制牛结核与副结核病的最大障碍。由此本试验利用牛型提纯结核菌素、提纯副结核菌素对牛群进行皮内变态反应试验,筛选出阳性牛和可疑牛,以进一步开展γ-干扰素释放试验,从而对山东省规模化奶牛场逐步开展分子流行病学调查。2010-2012年共随机抽检了山东省不同地区的1678头样本。结果表明,牛结核与副结核病的阳性率从2010年的35.42%和29.34%下降至2012年的25%和14.93%。这说明,通过系统的监测及无害化处理阳性牛、隔离可疑牛等措施能够使牛群结核与副结核病逐步得到控制,进而实现净化。 展开更多
关键词 奶牛 结核病 副结核病 流行病学调查
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牛结核病诊断技术的研究进展 被引量：12
14
作者 杨金生 刘云志 +1 位作者 柴方红 黄海楠 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第11期201-203,共3页
牛结核病是一种严重的人兽共患病。近年来随着分子生物学和免疫学技术的迅速发展,结核病诊断技术研究取得了很大进展。文章就细菌学、免疫学、分子生物学等诊断方法及其优缺点作了概述,以期为该病的诊治与防控提供依据。
关键词 牛结核病 诊断技术 研究进展
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两种奶牛结核病检测方法的比较 被引量：15
15
作者 徐贤坤 黄小武 +5 位作者 蓝纪 黄胜斌 熊毅 刘棋 韦正吉 黄益泓 《畜牧与兽医》 北大核心 2010年第2期29-33,共5页
本研究中采用常规皮内变态反应(TST)对广西南宁、柳州共计2 818头黑白花奶牛进行牛结核病检测,采用抗原特异性IFN-γ试验方法对PPD检测结果为阳性、可疑的牛以及部分阴性牛进行复检。将抗原特异性IFN-γ试验与TST检测结果相比,其敏感性... 本研究中采用常规皮内变态反应(TST)对广西南宁、柳州共计2 818头黑白花奶牛进行牛结核病检测,采用抗原特异性IFN-γ试验方法对PPD检测结果为阳性、可疑的牛以及部分阴性牛进行复检。将抗原特异性IFN-γ试验与TST检测结果相比,其敏感性为53.33%,特异性为70.49%,符合率为67.11%。本研究证实单独使用PPD皮内变态反应方法在牛结核病的诊断方面存在非特异性强等缺点,易造成假阳性牛的误杀;用抗原特异性IFN-γ试验对TST试验阳性和可疑牛进行复检可以提高特异性,该方法在临床上有重要应用价值。 展开更多
关键词 奶牛结核病 皮内变态反应 抗原特异性IFN-γ试验
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排除牛结核变态反应中禽结核干扰的研究 被引量：4
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作者 李金岭 徐青元 +1 位作者 周宇 何昭阳 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期352-355,共4页
以牛型结核菌素和禽型结核菌素对黑龙江省部分地区300头牛进行牛结核病检测,按OIE、中国和欧共体对皮内变态反应判定标准进行结果判定,同时以ELISA方法对牛血清进行检测。不同方法不同标准检测结果的比较分析结果表明:在牛结核的检疫中... 以牛型结核菌素和禽型结核菌素对黑龙江省部分地区300头牛进行牛结核病检测,按OIE、中国和欧共体对皮内变态反应判定标准进行结果判定,同时以ELISA方法对牛血清进行检测。不同方法不同标准检测结果的比较分析结果表明:在牛结核的检疫中存在禽结核的干扰,采用牛型结核菌素和禽型结核菌素皮内变态反应结合ELISA方法进行检疫可排除禽结核的干扰。 展开更多
关键词 牛结核 禽结核 变态反应 ELISA 干扰
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应用Alamar Blue法与试管法测定α-倒捻子素和8-甲氧基补骨脂素体外抗结核杆菌活性 被引量：3
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作者 赵全民 于录 +3 位作者 邓旭明 王春雨 曾凡丽 王全凯 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期71-73,共3页
选取传统中药提取单体化合物α-倒捻子素和8-甲氧基补骨脂素,通过2种药物敏感性实验方法MABA(Microdilution Alamar Blue Assay)分析与试管法分别测定了两种化合物对结核分枝杆菌H37Rv(ATCC27294)和H37Ra(ATCC25177)的体外抗菌活性,同... 选取传统中药提取单体化合物α-倒捻子素和8-甲氧基补骨脂素,通过2种药物敏感性实验方法MABA(Microdilution Alamar Blue Assay)分析与试管法分别测定了两种化合物对结核分枝杆菌H37Rv(ATCC27294)和H37Ra(ATCC25177)的体外抗菌活性,同时还测定了9种阳性抗结核药物对这两种结核菌的最低抑菌浓度(MIC),比较2种方法的检测结果。结果表明:α-倒捻子素对结核分枝杆菌H37Rv(ATCC27294)和H37Ra(ATCC25177)的最低抑菌浓度均为6.25μg/mL,而8-甲氧基补骨脂素对结核分枝杆菌H37Rv(ATCC27294)和H37Ra(ATCC25177)的最低抑菌浓度均为128μg/mL。Alamar B1ue法与试管法相比较,完全符合率是90%(9/11),具有较好的一致性。本研究结果表明Mamar B1ue法是一种快速、简便测定药物对结核分枝杆菌MIC的方法。本研究为α-倒捻子素和8-甲氧基补骨脂素的进一步开发利用和抗分枝杆菌机制研究打下了基础。 展开更多
关键词 α-倒捻子素 8-甲氧基补骨脂素 结核分枝杆菌 最低抑菌浓度 活性
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某规模化奶牛场牛肺外结核的病理学诊断 被引量：4
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作者 许芳 田莉莉 +4 位作者 刘朋 孙翔翔 曾巧英 刘思当 范伟兴 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期2402-2407,共6页
验证牛结核菌素阳性反应牛的结核病变及其病变的组织分布及病变特征,追踪感染源及传播途径,为奶牛场结核检疫净化提供技术支持。在新疆某规模化奶牛场应用牛结核菌素皮内变态反应(SIT)、IFN-γ试验、PPD点眼反应、ELISA抗体检测4种方法... 验证牛结核菌素阳性反应牛的结核病变及其病变的组织分布及病变特征,追踪感染源及传播途径,为奶牛场结核检疫净化提供技术支持。在新疆某规模化奶牛场应用牛结核菌素皮内变态反应(SIT)、IFN-γ试验、PPD点眼反应、ELISA抗体检测4种方法联合检疫,综合判定感染牛23头,全部扑杀并进行系统剖检,采集病料,进行病理组织学和细菌学诊断。剖检结果表明,23头牛中14头牛在肝、脾、淋巴结等肺外组织器官发现眼观结核病变而未见肺脏结核病变,仅有2头发现肺脏及肺门淋巴结病变,7头牛在全身组织器官未能发现眼观结核病变;病理组织学检查结果表明,剖检的23头牛均呈现早、中、后期典型结核结节病变,11头牛的病料分离培养到牛分枝杆菌。该奶牛场结核主要表现为肺外结核,经典肺结核较少,这可能是该奶牛场在以往扑杀的阳性牛中很少发现肺脏结核病变的原因。 展开更多
关键词 奶牛 肺外结核 病理学诊断 细菌学诊断
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结核分枝杆菌临床分离株链霉素耐药性的检测及耐药基因突变位点分析 被引量：7
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作者 杨彩虹 曹旭东 +5 位作者 史静雪 姬祥 于璐 袁俐 吴长新 陈创夫 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 2017年第2期169-175,共7页
为检测结核分枝杆菌链霉素(streptomycin,SM)耐药性,分析耐药基因突变,探讨DNA测序分析技术在结核分枝杆菌链霉素耐药性检测中的应用价值。采用方法:1、用传统的比例法药敏试验对49株结核分枝杆菌临床分离株进行链霉素耐药性检测。2、用... 为检测结核分枝杆菌链霉素(streptomycin,SM)耐药性,分析耐药基因突变,探讨DNA测序分析技术在结核分枝杆菌链霉素耐药性检测中的应用价值。采用方法:1、用传统的比例法药敏试验对49株结核分枝杆菌临床分离株进行链霉素耐药性检测。2、用DNA测序分析技术对49株结核分枝杆菌临床分离株进行链霉素耐药相关基因Rpsl和rrs的突变位点分析,筛查耐药相关突变位点。3、探讨DNA测序分析技术对结核分枝杆菌临床分离株进行链霉素耐药性检测的效率。结果:1、传统比例法药敏试验结果显示,49株实验菌株中16株为链霉素耐药株,33株为链霉素敏感株。2、Rpsl基因DNA测序。结果显示:Rpsl基因只存在一个突变位点,为第43位密码子AAG的突变,突变形式为AAG→AGG,氨基酸由赖氨酸(Lys)变为精氨酸(Arg)。rrs基因DNA测序结果发现:rrs基因共存在5个突变位点,分别为第513位碱基A突变为G、第523位碱基A缺失、第598位碱基A突变为G、第599位碱基A缺失、第612位碱基A缺失,其中第513位碱基突变只存在于链霉素耐药株中,其余4个突变位点在耐药株和敏感株中均存在。即初步认为Rpsl基因第43位密码子的突变及rrs基因第513位碱基的突变与结核分枝杆菌链霉素耐药性有关。3、分析Rpsl基因和rrs基因突变与结核分枝杆菌链霉素耐药性之间的关系,结果显示:16株链霉素耐药株中13株存在Rpsl基因第43位密码子的突变,1株存在rrs基因第513位碱基的突变。以传统的比例法药敏结果为参照,以DNA测序分析Rpsl基因或rrs基因发现Ppsl基因发生第43位密码子或rrs基因第513位碱基突变为判断菌株耐药的标准,DNA测序分析技术对结核分枝杆菌链霉素耐药性检测的敏感性为87.5%,特异性为96.97%。由此可知,初步认为Rpsl基因第43位密码子的突变及rrs基因第513位碱基的突变与结核分枝杆菌链霉素耐药性有关。用DNA测序分析结核分枝杆菌Rpsl基因和rrs基因链霉素耐药相关突变,判断结核杆菌链霉素耐药性具有较好的灵敏度和特异性,耗时短,在链霉素耐药结核病的快速诊断方面具有一定的应用价值。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 链霉素 DNA测序 耐药性
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野生动物结核病研究进展 被引量：11
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作者 孙泉云 王根龙 陈琦 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2010年第8期93-97,共5页
野外和圈养野生动物的结核病疫情呈现增高的趋势,不但造成重大经济损失,而且影响到公共卫生安全。野生动物的结核病主要是由结核分支杆菌和牛分支杆菌所引发,其感染宿主谱很广,已知可感染灵长类、野牛、鹿、大象、鹦鹉、负鼠、獾、貘等... 野外和圈养野生动物的结核病疫情呈现增高的趋势,不但造成重大经济损失,而且影响到公共卫生安全。野生动物的结核病主要是由结核分支杆菌和牛分支杆菌所引发,其感染宿主谱很广,已知可感染灵长类、野牛、鹿、大象、鹦鹉、负鼠、獾、貘等动物,并具有或潜在具有传播给人类的能力。论文重点对非人灵长类动物、大象、鸟类、野猪和野鹿等的结核病感染状况进行了综述,表明这些动物均能易感并表现不同的结核病临床病症。由于野生动物结核病的发生与家畜和人的结核病防控密切相关,必须予以关注。 展开更多
关键词 结核病 野生动物 感染
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