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非鸡胚源禽流感疫苗技术研究进展
1
作者 程旭 陈祥 +4 位作者 高明燕 张笛 龚建森 俞燕 姜逸 《中国家禽》 北大核心 2026年第4期148-154,共7页
禽流感病毒不断变异给家禽养殖业及公共卫生安全带来巨大威胁,研发有效的禽流感疫苗至关重要。鸡胚生产禽流感疫苗对控制流感发挥了重要作用,但也存在局限性。鸡胚消耗量大,生产流程繁琐,人工成本偏高,同时鸡胚可能携带外源病原污染风... 禽流感病毒不断变异给家禽养殖业及公共卫生安全带来巨大威胁,研发有效的禽流感疫苗至关重要。鸡胚生产禽流感疫苗对控制流感发挥了重要作用,但也存在局限性。鸡胚消耗量大,生产流程繁琐,人工成本偏高,同时鸡胚可能携带外源病原污染风险。随着分子生物学和细胞培养技术的发展,基因工程疫苗和哺乳动物细胞苗在禽流感疫苗的生产中引起重视。文章综述了DNA疫苗、病毒性颗粒疫苗、mRNA疫苗、植物表达疫苗、哺乳动物细胞疫苗等技术在禽流感疫苗中的应用进展,以期为禽流感非鸡胚源疫苗的研发提供参考。 展开更多
关键词 禽流感 DNA疫苗 病毒性颗粒疫苗 mRNA疫苗 植物表达疫苗 哺乳动物细胞疫苗
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非洲猪瘟病毒pB602L蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立
2
作者 张向阳 矫健 +8 位作者 黄培 焦翠翠 张梦瑶 黄静波 龚志远 李海伦 李媛媛 张海丽 王化磊 《病毒学报》 北大核心 2026年第1期126-134,共9页
目的为了建立非洲猪瘟病毒(African Swine fever virus,ASFV)pB602L蛋白抗体间接ELISA检测方法。方法本研究利用大肠杆菌表达系统表达了His-pB602L重组蛋白,并以纯化的His-pB602L重组蛋白为包被抗原,以表达pB602L的重组狂犬病病毒免疫... 目的为了建立非洲猪瘟病毒(African Swine fever virus,ASFV)pB602L蛋白抗体间接ELISA检测方法。方法本研究利用大肠杆菌表达系统表达了His-pB602L重组蛋白,并以纯化的His-pB602L重组蛋白为包被抗原,以表达pB602L的重组狂犬病病毒免疫后的小鼠阳性血清和ASFV猪阳性血清为一抗,辣根过氧化物酶(HRP)标记的葡萄球菌A蛋白(SPA)作为广谱二抗,采用棋盘滴定法优化各反应条件,建立针对pB602L蛋白的间接ELISA抗体检测方法,并对其特异性、敏感性和重复性进行评价。结果ASFV pB602L蛋白间接ELISA抗体检测方法的最优反应条件为:抗原包被浓度为4μg/mL,4℃包被16 h~18 h,5%脱脂奶粉37℃封闭0.5 h,待检血清孵育0.5 h,SPA-HRP 1:10000倍稀释后37℃孵育0.5 h。该方法仅对ASFV阳性血清检测结果为阳性,与猪瘟病毒、猪蓝耳病毒、猪细小病毒、猪伪狂犬病毒、猪乙型脑炎病毒和猪圆环病毒2型阳性血清均无交叉反应,具有良好的特异性;该方法检测稀释度为1∶6400的猪ASFV临床阳性血清时仍呈现阳性,检测分别稀释3200倍和1600倍的ASFVⅠ型和Ⅱ型阳性血清均为阳性;批内重复和批间重复变异系数均小于10%。结论本研究建立的ASFV pB602L蛋白间接ELISA抗体检测方法不仅可用于ASF的临床诊断和流行病学调查,亦能够为ASF疫苗研发过程中免疫动物的特异性抗体评价提供技术支持。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 pB602L蛋白 pB602L抗体 间接ELISA
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细胞焦亡及其调控动物病毒感染的研究进展
3
作者 范秋雨 高鹏 +6 位作者 周琼琼 周磊 盖新娜 韩军 郭鑫 张永宁 杨汉春 《中国兽医杂志》 北大核心 2026年第1期85-96,共12页
细胞焦亡(Pyroptosis)是一种由消皮素(GSDMs)家族蛋白介导的程序性细胞死亡方式,其典型特征为GSDMs家族蛋白(除GSDMF外)的N端(NT)结构域在细胞膜上形成孔道,导致细胞渗透压失衡、细胞膜完整性丧失和促炎因子释放,在宿主抗病毒免疫应答... 细胞焦亡(Pyroptosis)是一种由消皮素(GSDMs)家族蛋白介导的程序性细胞死亡方式,其典型特征为GSDMs家族蛋白(除GSDMF外)的N端(NT)结构域在细胞膜上形成孔道,导致细胞渗透压失衡、细胞膜完整性丧失和促炎因子释放,在宿主抗病毒免疫应答中扮演着“双刃剑”角色。本文系统综述了细胞焦亡、细胞焦亡效应分子、细胞焦亡的生物标志和检测方法、细胞焦亡调控动物病毒感染的研究进展、开展细胞焦亡调控动物病毒感染科学研究的意义;重点阐述了动物源性病毒(如非洲猪瘟病毒、猪肠道冠状病毒、塞内卡病毒A、口蹄疫病毒和狂犬病病毒)在调控宿主细胞焦亡领域的研究进展:一方面病毒通过抑制焦亡以逃逸宿主防御,促进病毒复制;另一方面病毒通过激活焦亡诱导炎症反应,加剧组织损伤。这些研究进展不仅深化了对病毒-宿主相互作用分子机制的认识,更为抗病毒治疗领域提供了多重干预靶点。此外,本文还前瞻性地探讨了靶向调控细胞焦亡通路在抗病毒药物设计、新型疫苗佐剂开发和炎症风暴控制中的应用前景,旨在为病毒性传染病的综合防控提供新的理论支撑和策略思路。 展开更多
关键词 细胞焦亡 消皮素(GSDMs) 病毒感染 炎症 免疫逃逸 抗病毒策略
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基于湖北省传染病监测预警与应急指挥平台的呼吸道传染病和症候群监测分析
4
作者 刘红慧 李诺 +3 位作者 石萌 郑立国 朱可 童叶青 《中华疾病控制杂志》 北大核心 2026年第2期243-248,共6页
目的 对湖北省传染病监测预警与应急指挥信息平台(简称湖北省统筹平台)呼吸系统传染病及症候群病例开展流行病学分析和数据质量评估,为完善传染病防控策略提供科学依据。方法 采用描述性研究分析湖北省统筹平台2023年1月1日―2025年3月1... 目的 对湖北省传染病监测预警与应急指挥信息平台(简称湖北省统筹平台)呼吸系统传染病及症候群病例开展流行病学分析和数据质量评估,为完善传染病防控策略提供科学依据。方法 采用描述性研究分析湖北省统筹平台2023年1月1日―2025年3月13日流行性感冒(简称流感)、呼吸道合胞病毒感染等传染病,以及发热呼吸道症候群、发热伴出疹症候群等五大症候群病例就诊、住院病例流行特征,并基于Pearson相关分析对流感报告卡病例和就诊、住院量在时间、空间分布上的一致性开展评价。结果 湖北省统筹平台可实现对呼吸道合胞病毒等非法定报告传染病、症候群等监测分析。流感报告卡病例与湖北省平台监测病例在时间分布上高度一致,Pearson相关系数为0.86(95%CI:0.85~0.86,P<0.001)。时间相关性方面,超70%的月度相关性为强相关及以上;空间相关性方面,除黄冈市(r=0.26, 95%CI:0.19~0.33,P<0.001)、荆门市(r=0.46, 95%CI:0.40~0.52,P<0.001)外,其他市州均为强相关及以上。结论 湖北省统筹平台在数据质量、监测模式、监测对象上呈现出一定优势,能有效实现对非法定传染病和症候群的常态化实时监测评估。 展开更多
关键词 呼吸道传染病 症候群 监测分析 相关系数
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云南地区血清7型猪胸膜肺炎放线杆菌的分离鉴定及生物学特性分析
5
作者 李富祥 宋建领 李占鸿 《中国畜牧兽医》 北大核心 2026年第1期499-508,共10页
【目的】研究云南地区猪源胸膜肺炎放线杆菌的生物学特性。【方法】从云南红河州某猪场患呼吸道疾病猪肺脏中分离细菌,采用生化试验、16S rDNA序列分析和PCR扩增鉴定分离菌,并分析分离菌的血清型、致病性、药物敏感性和耐药基因等生物... 【目的】研究云南地区猪源胸膜肺炎放线杆菌的生物学特性。【方法】从云南红河州某猪场患呼吸道疾病猪肺脏中分离细菌,采用生化试验、16S rDNA序列分析和PCR扩增鉴定分离菌,并分析分离菌的血清型、致病性、药物敏感性和耐药基因等生物学特性。【结果】从病猪肺脏样品中分离到1株革兰阴性小球杆菌,将其编号为YN240724。生化鉴定结果显示,分离菌分解葡萄糖、果糖、蔗糖、木糖和甘露醇产酸,氧化酶、尿素酶及硝酸盐还原试验呈阳性,其生化特性与胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae)参考株相同。16S rDNA基因序列分析结果显示,分离菌与胸膜肺炎放线杆菌模式菌株ATCC 27088T和其他胸膜肺炎放线杆菌参考株间的16S rDNA序列相似性分别为100%和99.6%~100%;分离菌株与全部胸膜肺炎放线杆菌参考株形成同一个进化分支;基于上述特征分离菌YN24074被鉴定为胸膜肺炎放线杆菌。血清型鉴定结果显示,该分离菌为胸膜肺炎放线杆菌血清7型。耐药基因检测结果显示,分离菌携带β-内酰胺内耐药基因blaCIT和blaTEM以及四环素类耐药基因tetM。药敏试验结果显示,分离菌对氨基糖苷类(庆大霉素和阿米卡星)、喹诺酮类(氧氟沙星)、酰胺醇类(氟苯尼考)、四环素类(四环素)、磺胺类(磺胺甲噁唑)以及头孢类(头孢噻肟和头孢呋辛)敏感,对青霉素类(青霉素、氨苄西林和哌拉西林)以及糖肽类(万古霉素)耐药。致病性试验结果显示,分离菌对小鼠的半数致死量(LD_(50))为7.5×10^(4)CFU,致病性较强。【结论】本研究从云南地区分离获得1株猪源血清7型胸膜肺炎放线杆菌,其携带耐药基因blaCIT、blaTEM及tetM,对多种抗菌药物表现耐药,致病性较强。试验结果可为云南地区猪场猪传染性胸膜肺炎的治疗和免疫防控提供重要参考。 展开更多
关键词 猪 胸膜肺炎放线杆菌 分离鉴定 血清型 致病性
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禽呼肠孤病毒流行现状及检测
6
作者 张艳 冯登侦 《四川畜牧兽医》 2026年第3期61-63,共3页
1病毒特征禽呼肠孤病毒(ARV)是一种全球性感染鸟类的病毒,属于呼肠孤病毒属。ARV直径约80 nm,二十面体,无囊膜,核酸23.42 kb,双层衣壳结构。其10个双链RNA基因组片段分为大(L)、中(M)、小(S)三类,进一步细分为L1-L3、M1-M3及S1-S4。L1... 1病毒特征禽呼肠孤病毒(ARV)是一种全球性感染鸟类的病毒,属于呼肠孤病毒属。ARV直径约80 nm,二十面体,无囊膜,核酸23.42 kb,双层衣壳结构。其10个双链RNA基因组片段分为大(L)、中(M)、小(S)三类,进一步细分为L1-L3、M1-M3及S1-S4。L1基因编码的ARV结构蛋白λA对病毒复制与组装至关重要,该蛋白在多数ARV毒株中高度保守,是疫苗和抗病毒药物开发的首选靶标。 展开更多
关键词 ARV 二十面体 病毒特征 禽呼肠孤病毒
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牛传染性鼻气管炎病毒的研究进展 被引量：1
7
作者 周明 孙芬 +4 位作者 张亮 陈九 杨少华 闫滨 杨宏军 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2026年第1期44-50,共7页
牛传染性鼻气管炎病毒(Infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)是一种包膜DNA病毒,属于疱疹病毒科γ亚群,是牛的一种重要病原体。该病毒主要引起呼吸道症状,并伴有结膜炎、乳腺炎等多系统病变,对全球养牛业造成了严重的经济损... 牛传染性鼻气管炎病毒(Infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)是一种包膜DNA病毒,属于疱疹病毒科γ亚群,是牛的一种重要病原体。该病毒主要引起呼吸道症状,并伴有结膜炎、乳腺炎等多系统病变,对全球养牛业造成了严重的经济损失。目前IBRV在国内广泛流行,因尚无特效治疗药物,疫苗接种是其主要的防控措施。本文结合了近年来关于IBRV在病原学、流行病学、检测技术及防控措施方面的研究进展,旨在深入了解该病的致病机制、传播规律及防控策略,为制定更为科学合理的防控方案提供理论依据和实践参考。 展开更多
关键词 牛传染性鼻气管炎病毒 病原学 流行病学 检测技术 防控措施
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三种中草药提取物对鸡皮刺螨的杀灭效果研究 被引量：1
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作者 冉崇儒 张思宇 +4 位作者 杨子木 秦建华 左玉柱 王传文 王路 《中国家禽》 北大核心 2026年第1期155-160,共6页
为筛选出有效、低毒杀灭鸡皮刺螨的植物源药物,试验评估了荆芥、辛夷、紫苏3种中草药的乙醇和蒸馏水提取物对鸡皮刺螨的杀灭效果。试验采用浸渍触杀法,检测0.25 g/mL、0.5 g/mL、1 g/mL的3种中草药提取物在30、60、120、180 min的杀螨... 为筛选出有效、低毒杀灭鸡皮刺螨的植物源药物,试验评估了荆芥、辛夷、紫苏3种中草药的乙醇和蒸馏水提取物对鸡皮刺螨的杀灭效果。试验采用浸渍触杀法,检测0.25 g/mL、0.5 g/mL、1 g/mL的3种中草药提取物在30、60、120、180 min的杀螨率。结果显示:在乙醇提取物中,浓度为0.25 g/mL时,荆芥和辛夷180 min杀螨率分别为66.68%和53.57%,极显著高于紫苏(P<0.01);在0.5 g/mL时,荆芥180 min杀螨率极显著高于紫苏(P<0.01);在1 g/mL时,荆芥30 min杀螨率极显著高于辛夷和紫苏(P<0.01),在120 min时各处理组的杀螨率达到100%。在蒸馏水提取物中,浓度为0.25 g/mL时,各处理组30~180 min杀螨率均低于60%;在0.5 g/mL时,荆芥60 min和180 min的杀螨率均极显著高于紫苏(P<0.01);在1 g/mL时,荆芥30 min、60 min杀螨率均极显著高于辛夷和紫苏(P<0.01),并在120 min达到100%。荆芥和辛夷的蒸馏水提取物在120 min显著低于其乙醇提取物(P<0.05)。研究表明:荆芥、辛夷、紫苏均具有杀螨活性,荆芥是3种中草药中最有效的杀螨药物,其乙醇提取物在0.5 g/mL浓度下即可达到较好杀螨效果。 展开更多
关键词 鸡皮刺螨 中草药 杀虫剂 杀螨活性
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宿主因子FLJ31868对盖塔病毒复制的抑制作用研究
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作者 齐凯丽 翟晓凤 焦厚琪 《畜牧与兽医》 北大核心 2026年第3期88-93,共6页
旨在验证宿主限制因子FLJ31868作为盖塔病毒(GETV)新型抗病毒因子的潜力。首先针对人源FLJ31868基因设计引物,将其构建至pCAGGS载体中,将成功构建的过表达重组质粒转染HEK293T细胞和HeLa细胞,感染GETV,通过Westernblot、实时荧光定量PCR... 旨在验证宿主限制因子FLJ31868作为盖塔病毒(GETV)新型抗病毒因子的潜力。首先针对人源FLJ31868基因设计引物,将其构建至pCAGGS载体中,将成功构建的过表达重组质粒转染HEK293T细胞和HeLa细胞,感染GETV,通过Westernblot、实时荧光定量PCR(RTqPCR)和组织培养半数感染剂量(TCID50)等方法综合检测FLJ31868对GETV复制的影响。结果:在HEK293T以及HeLa细胞中,FLJ31868显著抑制GETV的复制,进一步研究表明FLJ31868通过蛋白酶体途径降解GETV的包膜蛋白E来发挥抗病毒功能。本研究揭示了FLJ31868对GETV的抑制功能和机制,为开发防控GETV感染的策略提供了新的思路。 展开更多
关键词 盖塔病毒 抗病毒研究 FLJ31868蛋白
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动物病原微生物宏基因组高通量测序技术规范专家共识
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作者 中国兽医协会兽医实验室检测分会 田克恭 原霖 《中国兽医杂志》 北大核心 2026年第1期8-12,共5页
宏基因组高通量测序(mNGS)技术作为一项新兴的、通用的微生物检测方法,可以识别所有微生物,在动物病原微生物临床检测中发挥了重要作用,被广泛应用于动物多病原检测、未知病原诊断、疫病流行病学调查、病原溯源等多种场景。但在兽医检... 宏基因组高通量测序(mNGS)技术作为一项新兴的、通用的微生物检测方法,可以识别所有微生物,在动物病原微生物临床检测中发挥了重要作用,被广泛应用于动物多病原检测、未知病原诊断、疫病流行病学调查、病原溯源等多种场景。但在兽医检测行业,mNGS技术尚未形成一致性、规范性认识。本文从实验室建设及管理、实验操作、生物信息学分析、结果判定、质量控制、报告审核等方面阐述了mNGS技术在动物病原微生物临床检测中应用的专家共识,并提出规范性要求和建议。 展开更多
关键词 宏基因组高通量测序(mNGS) 动物病原微生物 专家共识
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灭活鸭肠炎病毒UL31基因定性标准样品研制及初步试用
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作者 姜怀玉 张媛 +11 位作者 史莉圆 穆颖 张晶晶 周梦棋 顾小雪 邵红霞 秦爱建 叶家美 王传彬 李琦 刘玉良 格日勒图 《中国家禽》 北大核心 2026年第4期61-68,共8页
为研制灭活鸭肠炎病毒(Duck enteritis virus,DEV)UL31基因定性标准样品,研究以DEV VAC株为原料,接种SPF鸭胚,经病毒鉴定、灭活处理以及冷冻干燥等技术流程,采用荧光定量PCR(qPCR)方法对所制备的标准样品进行均匀性检验、稳定性监测和评... 为研制灭活鸭肠炎病毒(Duck enteritis virus,DEV)UL31基因定性标准样品,研究以DEV VAC株为原料,接种SPF鸭胚,经病毒鉴定、灭活处理以及冷冻干燥等技术流程,采用荧光定量PCR(qPCR)方法对所制备的标准样品进行均匀性检验、稳定性监测和评估,并委托不同单位进行协作定值和试用。结果显示:该标准样品纯净、均匀,无外源病毒污染;稳定性良好,在4℃、25℃、37℃环境中可至少稳定保存14 d、7 d、5 d,在-20℃环境中可至少稳定保存12个月,且冻融10次后仍稳定;9家单位协作定值和3家试用结果均显示为鸭肠炎病毒UL31基因核酸阳性。研究表明,研制的灭活鸭肠炎病毒UL31基因定性标准样品可作为DEV核酸检测阳性质控品,用于DEV核酸检测质量控制、检测能力比对验证以及试剂盒检测效果评价等工作。 展开更多
关键词 鸭肠炎病毒 UL31基因 标准样品 核酸检测 荧光定量PCR 质量控制
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Cpx系统基因缺失对多杀性巴氏杆菌环境响应及免疫保护性的影响
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作者 黄佳琪 高丽旭 +7 位作者 张璇 黄麟 张金格 杨旭霞 何芳 赵光夫 彭远义 李能章 《西南大学学报(自然科学版)》 北大核心 2026年第3期32-46,共15页
CpxA/R是一种细菌双组份调控因子,在细菌毒力、环境适应和抗生素耐药性等方面发挥着重要调控作用,利用同源重组方法分别构建牛源A型多杀性巴氏杆菌CQ2株(PmCQ2)cpxA及cpxA/R基因缺失株,结果发现:cpxA及cpxA/R基因缺失对PmCQ2的生长繁殖... CpxA/R是一种细菌双组份调控因子,在细菌毒力、环境适应和抗生素耐药性等方面发挥着重要调控作用,利用同源重组方法分别构建牛源A型多杀性巴氏杆菌CQ2株(PmCQ2)cpxA及cpxA/R基因缺失株,结果发现:cpxA及cpxA/R基因缺失对PmCQ2的生长繁殖、毒力及耐药性等方面并无显著影响,对菌株适应不同金属离子浓度、氧化应激、抗菌肽处理及营养方面也无明显影响,但却能显著增强菌株对高温、酸应激和盐应激的耐受性;与此同时,cpxA及cpxA/R基因缺失赋予了菌株较好的交叉免疫保护性,小鼠模型中,其缺失株灭活苗对牛源A型、B型和F型多杀性巴氏杆菌感染的免疫保护率可分别达100%、50%、50%,显著优于野毒株PmCQ2。 展开更多
关键词 多杀性巴氏杆菌 Cpx双组份调控系统 基因缺失 环境响应 交叉免疫保护性
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猪肉中常见的人畜共患细菌和寄生虫多重荧光PCR检测方法的建立与初步应用
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作者 韩亚星 赵格 +7 位作者 赵建梅 宋时萍 高玉斌 刘娜 黄秀梅 王琳 王君玮 黄娟 《动物医学进展》 北大核心 2026年第4期54-63,共10页
为了建立快速、敏感、可同时检测猪肉中多种病原的多重荧光定量PCR,本研究针对猪肉中13种重要病原的特异基因保守序列,分别设计了引物及不同荧光基团标记的TaqMan探针,构建了含有目的基因的重组质粒,并用其进行反应体系优化,以及敏感性... 为了建立快速、敏感、可同时检测猪肉中多种病原的多重荧光定量PCR,本研究针对猪肉中13种重要病原的特异基因保守序列,分别设计了引物及不同荧光基团标记的TaqMan探针,构建了含有目的基因的重组质粒,并用其进行反应体系优化,以及敏感性、特异性和重复性验证。结果显示,建立的3组三重与1组四重荧光定量PCR法能够在同一反应条件下2 h内完成对13种病原的特异性检测,反应体系中的多条引物探针间不发生交叉反应;最低检出限:致病性大肠埃希氏菌、沙门氏菌均为1拷贝/μL,单增李斯特菌为10拷贝/μL,结肠弯曲杆菌、金黄色葡萄球菌、志贺菌均为10~2拷贝/μL,住肉孢子虫、猪丹毒杆菌、弓形虫、囊尾蚴、蜡样芽胞杆菌、产气荚膜梭菌、小肠结肠炎耶尔森菌均为10~3拷贝/μL;重复性试验变异系数均在2.33%以下。多重荧光PCR和普通PCR法对30份猪肉样品的病原总体检出率分别为83%(25/30)和56.7%(17/30),二者总体符合率达到66.7%~100%。猪肉中常见13种病原的三重/四重荧光定量PCR检测方法的成功建立,为猪肉病原学检测和流行病学调查提供技术支撑,有助于保障猪肉食品安全。 展开更多
关键词 猪肉 病原菌 寄生虫 病原检测 多重荧光定量PCR
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LSDV感染对牛环鸟苷酸-腺苷酸合成酶表达的影响及其细胞定位研究
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作者 罗逸青 吴瑞瑞 +8 位作者 景伟 苏洋 李小明 陈国华 房永祥 景志忠 何小兵 翟军军 张艳 《动物医学进展》 北大核心 2026年第2期54-60,共7页
为明确牛环鸟苷酸-腺苷酸合成酶(bovine cyclic GMP-AMP synthase,bcGAS)遗传进化、细胞定位、组织和细胞表达谱,研究克隆了bcGAS基因,用MEGA-X软件构建了遗传进化树,随后将其连接到pCAGGS-HA和pCAGGS-GFP真核表达载体上,通过激光共聚... 为明确牛环鸟苷酸-腺苷酸合成酶(bovine cyclic GMP-AMP synthase,bcGAS)遗传进化、细胞定位、组织和细胞表达谱,研究克隆了bcGAS基因,用MEGA-X软件构建了遗传进化树,随后将其连接到pCAGGS-HA和pCAGGS-GFP真核表达载体上,通过激光共聚焦显微镜检测其在HEK-293T和MDBK细胞中的定位情况,通过荧光定量PCR和Western blot,分别从mRNA和蛋白水平评价bcGAS在牛结节性皮肤病病毒(LSDV)感染不同组织和细胞中的表达差异,通过激光共聚焦显微镜检测其在HEK-293T和MDBK细胞中的定位情况。结果显示,bcGAS的基因全长为1542 bp,在遗传进化关系上相对保守,其中与家牛、水牛的亲缘关系最近,与绵羊、山羊和猪的亲缘关系较近,与鸡、草鱼和中华蟾蜍等亲缘关系较远;bcGAS主要定位于HEK-293T和MDBK细胞的细胞质内;bcGAS在不同组织和细胞的转录和表达水平均存在差异,其中在小肠、淋巴结和肺脏较高,在肝脏、心脏、肾脏和肌肉较低,在MDBK和BT细胞中较高,在BSC和BK细胞中较低;bcGAS主要定位于HEK-293T和MDBK细胞的细胞质内。本研究为进一步解析并阐明bcGAS的模式识别和抗病毒天然免疫机制研究奠定一定的理论基础。 展开更多
关键词 牛cGAS 基因克隆 细胞定位 表达谱 牛结节性皮肤病病毒
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川渝地区羊源溶血性曼氏杆菌分离株的流行特征、耐药性、毒力基因与致病性分析
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作者 杨振 闫晓阳 +5 位作者 张素辉 苗永强 沈克飞 付利芝 徐登峰 余远迪 《中国畜牧兽医》 北大核心 2026年第4期2167-2180,共14页
【目的】明确川渝地区羊呼吸道疫病的主要致病菌,并探究其流行特征、致病性及耐药性,为相关疾病防控提供参考。【方法】从川渝地区12家规模化羊场采集出现典型呼吸道症状羊的鼻拭子、肺脏等组织样品共63份,随后进行细菌分离培养。通过... 【目的】明确川渝地区羊呼吸道疫病的主要致病菌,并探究其流行特征、致病性及耐药性,为相关疾病防控提供参考。【方法】从川渝地区12家规模化羊场采集出现典型呼吸道症状羊的鼻拭子、肺脏等组织样品共63份,随后进行细菌分离培养。通过形态学观察、生化反应、溶血性检测及16S rRNA基因PCR扩增对分离菌株进行鉴定,运用分子分型方法分析菌株血清型分布与lktA基因亚型;采用K-B纸片扩散法检测药物敏感性,采用PCR技术分析毒力基因携带情况;通过昆明小鼠攻毒模型评估菌株致病性。【结果】①共分离到16株溶血性曼氏杆菌(Mannheimia haemolytica,Mh),其菌落呈光滑、湿润、灰白色半透明状,氧化酶阳性、脲酶阴性,具有β-溶血活性,16S rRNA基因PCR扩增出1022 bp目的条带。血清型以A2为主(15株),另检出1株A6型;l ktA基因亚型包括lktA1、lktA2、lktA3和lktA8共4种。②药敏试验结果显示,分离株对β-内酰胺类、喹诺酮类药物较敏感,对链霉素、林可霉素、替米考星、克林霉素的耐药率均高于93.75%。③毒力基因检测结果表明,gcp、lktC等9种基因携带率为100%,t bpB等基因的携带率为6.25%~93.75%,存在菌株间差异。④小鼠致病性试验中,12株分离株对小鼠具致病性,其中Mh-3-1(A2型)和Mh-27(A6型)为高致病力菌株;Mh-3-1灭活后免疫小鼠,攻毒保护率达85%。【结论】川渝地区羊源Mh以A2血清型为优势菌型,多数菌株对林可酰胺类和氨基糖苷类抗菌药耐药性强,普遍携带gcp、l ktC等毒力基因,且多数对小鼠具有致病性;Mh-3-1菌株免疫原性良好,具备疫苗研发潜力。本研究结果为国内羊源Mh的流行病学监测、临床合理用药及疫苗研制提供了数据与菌株资源。 展开更多
关键词 溶血性曼氏杆菌 分离鉴定 血清型 药敏试验 毒力因子
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牛干扰素基因刺激因子STING的基因克隆、细胞定位与表达差异分析
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作者 吴瑞瑞 罗逸青 +8 位作者 景伟 苏洋 李小明 房永祥 陈国华 景志忠 张艳 何小兵 翟军军 《动物医学进展》 北大核心 2026年第3期32-39,共8页
为探究牛干扰素基因刺激因子(boSTING)的分子特征、细胞定位及差异表达。用RT-PCR方法获得boSTING基因,其全长为1137 bp,编码378个氨基酸,且N端存在5个跨膜结构域;通过遗传进化分析发现,家牛(Bos taurus)的boSTING与野牛、印度瘤牛、牦... 为探究牛干扰素基因刺激因子(boSTING)的分子特征、细胞定位及差异表达。用RT-PCR方法获得boSTING基因,其全长为1137 bp,编码378个氨基酸,且N端存在5个跨膜结构域;通过遗传进化分析发现,家牛(Bos taurus)的boSTING与野牛、印度瘤牛、牦牛及杂牛的亲缘关系最近,与树袋熊、鸭嘴兽等的亲缘关系较远;通过双酶切、间接免疫荧光试验、qPCR及Western blot检测显示,成功构建了pCAGGS-HA-STING和pCAGGS-GFP-STING的重组真核表达质粒且能在细胞中正确表达;用qPCR、Western blot和激光共聚焦检测boSTING的细胞定位及其在牛结节性皮肤病病毒(LSDV)感染牛不同组织和细胞中的表达水平,结果显示,该分子定位于细胞质,且高表达于心脏和肾脏组织及牛肾传代细胞。本研究明确了boSTING的分子特性、细胞定位与差异表达模式,为探索其在机体抵抗LSDV等DNA病毒感染中的分子机制提供了一定的理论依据。 展开更多
关键词 牛干扰素基因刺激因子 基因克隆 细胞定位 表达谱 牛结节性皮肤病病毒
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腐败梭菌α毒素单克隆抗体的制备及竞争ELISA方法的建立
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作者 马祎芳 赵佳慧 +4 位作者 马清龙 高鹏程 曾巧英 李学瑞 储岳峰 《中国兽医杂志》 北大核心 2026年第2期31-39,共9页
为方便临床上检测腐败梭菌血清样本,以及评价腐败梭菌疫苗对动物的免疫效果,本试验利用大肠杆菌表达系统诱导α毒素重组蛋白的表达,经纯化后免疫BALB/c小鼠,制备α毒素单克隆抗体。以筛选的单抗为捕获抗体,通过棋盘滴定法优化反应条件,... 为方便临床上检测腐败梭菌血清样本,以及评价腐败梭菌疫苗对动物的免疫效果,本试验利用大肠杆菌表达系统诱导α毒素重组蛋白的表达,经纯化后免疫BALB/c小鼠,制备α毒素单克隆抗体。以筛选的单抗为捕获抗体,通过棋盘滴定法优化反应条件,建立腐败梭菌α毒素抗体的竞争性酶联免疫吸附试验(ELISA)检测方法,利用该方法检测绵羊血清样本的阴阳性临界值,并评估其重复性、灵敏度、特异性和符合率,同时检测牛血清样本的阴阳性临界值。结果显示,成功诱导表达和纯化出约65 kDa的目的蛋白;通过杂交瘤技术筛选获得1株稳定分泌特异性抗体的单抗8H2;竞争ELISA最佳抗原包被条件为300 ng/孔、16 h,血清稀释度为1∶1,单抗稀释度为1∶2000,封闭条件为1%牛血清白蛋白(BSA)、90 min,血清和单抗竞争时间为90 min,二抗稀释度为1∶15000、孵育30 min,显色时间为15 min;该方法检测绵羊血清样本的阳性临界值为27.19%,阴性临界值为22.59%;批间和批内变异系数均低于10%,重复性良好;标准阳性血清稀释度为1∶16时仍为阳性;与产气荚膜梭菌、布鲁氏菌和鼠伤寒沙门菌均无交叉反应,特异性良好;利用该方法检测100份绵羊血清样本,与间接ELISA的检测总符合率为89.00%(89/100);检测牛血清样本的阳性临界值为20.00%,阴性临界值为16.30%。本试验成功制备了1株腐败梭菌α毒素特异性单抗,并构建了抗体竞争ELISA检测方法,为腐败梭菌病的早期诊断和疫苗免疫效果评价提供了技术支撑。 展开更多
关键词 腐败梭菌 Α毒素 单克隆抗体 竞争ELISA
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猫源细小病毒上海株的分离鉴定及VP2基因遗传进化分析
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作者 唐聪圣 刘健 +9 位作者 常晓静 夏炉明 张忠海 白艺兰 范玉凤 朱亭仪 桂亚萍 夏琦琦 王建 赵洪进 《中国畜牧兽医》 北大核心 2026年第4期2071-2081,共11页
【目的】了解上海地区猫源细小病毒VP2基因遗传进化情况,丰富猫源细小病毒的流行病学,为其新型疫苗研究提供技术支持。【方法】对采自上海地区的14份疑似细小病毒感染的猫粪便拭子样品进行病毒分离,采用PCR扩增、间接免疫荧光试验(IFA)... 【目的】了解上海地区猫源细小病毒VP2基因遗传进化情况,丰富猫源细小病毒的流行病学,为其新型疫苗研究提供技术支持。【方法】对采自上海地区的14份疑似细小病毒感染的猫粪便拭子样品进行病毒分离,采用PCR扩增、间接免疫荧光试验(IFA)、病毒粒子形态学观察等方法对分离株进行鉴定,并对分离株VP2基因进行测序和遗传进化分析,进一步对VP2蛋白进行生物信息学分析。【结果】从14份样品中分离到4株病毒,PCR扩增序列与犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)CH-AH-D5、猫细小病毒(Feline parvovirus,FPV)cat-2、FPV HN1806和FPV BFPV-1株VP2基因部分序列相似性达100%,分别命名为CPV/SH/CHN/01/2022/New CPV-2a、FPV/SH/CHN/01/2022、FPV/SH/CHN/02/2022和FPV/SH/CHN/03/2022。其中1株鉴定为CPV New CPV-2a亚型,另外3株鉴定为FPV。相似性比对显示,CPV/SH/CHN/01/2022/New CPV-2a株与FPV疫苗株CU-4、Purevax核苷酸序列相似性分别为98.2%和98.3%;相比标准株,分离株14个关键氨基酸位点均未发生变化,但是相比FPV疫苗株,CPV/SH/CHN/01/2022/New CPV-2a株VP2蛋白中有12个关键氨基酸位点发生突变。遗传进化分析显示,CPV/SH/CHN/01/2022/New CPV-2a株属于CPV分支,与CPV中国株06/09、CPV-G15同属一个亚分支;3株FPV分离株均属FPV分支,但是处于不同亚分支。相比FPV疫苗株,CPV/SH/CHN/01/2022/New CPV-2a株的抗原决定簇存在2个氨基酸位点突变,分别位于第93(K-N)和300位(A-G)氨基酸处;相比CPV疫苗株,CPV/SH/CHN/01/2022/New CPV-2a株抗原决定簇存在1个氨基酸位点差异,位于第300位氨基酸处(A-G);3株FPV分离株与FPV疫苗株抗原决定簇7个位点均保持一致。【结论】本研究从上海地区分离获得4株猫源细小病毒,其中1株为CPV New CPV-2a亚型,3株为FPV。研究结果为CPV New CPV-2a亚型感染猫提供了佐证,丰富了猫源细小病毒的流行病学,也为其新型疫苗研究提供了参考资料。 展开更多
关键词 细小病毒 分离鉴定 VP2基因 遗传进化
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荧光定量PCR检测珍珠鸡Tva与ALV-A gp85基因方法的建立及应用
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作者 宁宇航 李喜月 +7 位作者 王扬扬 马晨曦 李鑫鹏 荣晴 何雷 余祖华 丁轲 陈建 《中国家禽》 北大核心 2026年第1期70-78,共9页
研究旨在探讨体内水平下珍珠鸡各组织器官中A亚群禽白血病病毒(ALV-A)组织载量与维生素_(B12)(V_(B12))的含量、Tva基因转录水平之间的关系。试验通过建立检测珍珠鸡ALV-A gp85和Tva基因的荧光定量PCR方法,定量感染ALV-A的珍珠鸡不同组... 研究旨在探讨体内水平下珍珠鸡各组织器官中A亚群禽白血病病毒(ALV-A)组织载量与维生素_(B12)(V_(B12))的含量、Tva基因转录水平之间的关系。试验通过建立检测珍珠鸡ALV-A gp85和Tva基因的荧光定量PCR方法,定量感染ALV-A的珍珠鸡不同组织中ALV-A gp85基因和Tva基因表达水平,并通过ELISA测定珍珠鸡组织中V_(B12)浓度,分析ALV-A gp85表达水平与V_(B12)组织含量和Tva基因表达水平之间的关系。结果显示:研究建立的珍珠鸡Tva基因荧光定量PCR方法灵敏度较常规PCR提升1个数量级(10倍),ALV-A gp85基因检测灵敏度提高2个数量级(100倍),仅靶基因出现特异性扩增且批内及批间变异系数均小于2%,血浆样本ALV-A阳性检出率明显高于PCR和ELISA方法,具有良好的灵敏度、特异性和稳定性。皮尔逊相关性分析显示,珍珠鸡组织器官中V_(B12)浓度与ALV-A gp85转录水平均呈负相关,而ALV-A gp85与Tva基因转录水平整体上符合正相关关系,推测V_(B12)可能通过占据Tva受体干扰ALV-A感染宿主细胞。研究表明,试验成功建立一种定量检测珍珠鸡ALV-A gp85基因和Tva基因的方法,并确定珍珠鸡中V_(B12)组织含量与ALV-A组织载量以及Tva基因表达水平之间的关系,为禽白血病的防控奠定基础。 展开更多
关键词 A亚群禽白血病病毒 TVA gp85 QRT-PCR 珍珠鸡 维生素B_(12)
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鸡滑液囊支原体的分离鉴定及全基因组特征分析
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作者 李琪 方焕新 +5 位作者 胡俊 温家明 顾嘉运 王占新 覃健萍 蔺文成 《中国家禽》 北大核心 2026年第1期79-88,共10页
研究旨在解析鸡滑液囊支原体(Mycoplasma synoviae,MS)全基因组特征及其功能。试验对广东地区疑似感染MS的鸡进行病原分离,对病原进行致病性试验和药物敏感性试验,并进一步解析其基因组特征。结果显示:成功分离一株MS,命名为H12株;肌肉... 研究旨在解析鸡滑液囊支原体(Mycoplasma synoviae,MS)全基因组特征及其功能。试验对广东地区疑似感染MS的鸡进行病原分离,对病原进行致病性试验和药物敏感性试验,并进一步解析其基因组特征。结果显示:成功分离一株MS,命名为H12株;肌肉攻毒10~8 CCU/mL H12株能引起30日龄SPF鸡跛行、肿腿的临床症状;H12株对截短侧耳素类药物高度敏感,但对四环素类耐药性强;H12株基因组存在多个毒力因子,有助于MS感染宿主,其携带CRISPR-Cas系统及高保守DNA修复基因(如recA),表明其对不同环境具有适应潜力;在KEGG、COG、GO数据库分别注释到381、1 410、48个基因;多位点序列分型(MLST)为ST34,与我国主要流行株遗传谱系一致。研究表明,分离株H12属于国内主要流行的ST34型,携带CRISPR-Cas系统、多个毒力因子(adh、ef-tu、pdhb等)及耐药基因(parC、gyrB),具备较强环境适应性与致病性,并对四环素类耐药。 展开更多
关键词 鸡滑液囊支原体 全基因组测序 微量稀释法 MLST分型 毒力因子
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