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H5亚型禽流感病毒样颗粒的制备及其免疫原性的初步研究 被引量：2
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作者 高晓艺 蒋菲 +5 位作者 王传彬 王乃迪 李建峰 杨林 石玉祥 刘玉良 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期961-968,共8页
本研究采用RT-PCR方法扩增2.3.4.4分支H5亚型高致病性禽流感病毒HA、NA和M1基因,亚克隆至穿梭载体p FastBac1,然后转化至DH10Bac感受态细胞,筛选重组杆粒。将阳性重组杆粒共转染至sf9昆虫细胞,构建病毒样颗粒(VLPs),通过血凝和血凝抑制... 本研究采用RT-PCR方法扩增2.3.4.4分支H5亚型高致病性禽流感病毒HA、NA和M1基因,亚克隆至穿梭载体p FastBac1,然后转化至DH10Bac感受态细胞,筛选重组杆粒。将阳性重组杆粒共转染至sf9昆虫细胞,构建病毒样颗粒(VLPs),通过血凝和血凝抑制试验、透射电镜、Western-blot等方法鉴定。利用蔗糖密度梯度超速离心浓缩纯化VLPs,选择不同剂量VLPs免疫6周龄SPF鸡,评价其免疫原性。结果显示,成功构建重组杆粒,转染的sf9细胞出现皱缩、变形、融合、囊泡化等特征性病变;在细胞盲传3代后,含有VLPs的细胞上清液的血凝效价可达1∶27;Western-blot证实3个目的蛋白均成功表达;透射电镜观察结果表明,VLPs与天然禽流感病毒颗粒具有相似的形态特征;动物试验结果表明,二免后2周,血清抗体效价最高可达到1∶210,抗体亚型主要为Ig G1。本研究首次成功构建了2.3.4.4分支H5亚型禽流感VLPs,为开发新型、安全、高效的H5亚型禽流感疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 2.3.4.4分支 H5亚型禽流感 病毒样颗粒 杆状病毒表达系统
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