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猪囊尾蚴丝氨酸蛋白酶抑制剂B6和4848优势抗原表位的分析与鉴定
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作者 段蕊 王思睿 +4 位作者 赵昱源 王梦奇 陆沪江 何沛霞 孙树民 《中国兽医科学》 北大核心 2026年第1期40-49,共10页
针对猪囊尾蚴丝氨酸蛋白酶抑制剂B6(Ts-serpin B6)和4848(Ts-serpin 4848)抗原表位暴露不充分,缺乏高特异性问题,拟通过筛选关键抗原表位增强抗原特异性。首先对Ts-serpin B6和Ts-serpin 4848基因序列进行生物信息学表位分析,筛选出优... 针对猪囊尾蚴丝氨酸蛋白酶抑制剂B6(Ts-serpin B6)和4848(Ts-serpin 4848)抗原表位暴露不充分,缺乏高特异性问题,拟通过筛选关键抗原表位增强抗原特异性。首先对Ts-serpin B6和Ts-serpin 4848基因序列进行生物信息学表位分析,筛选出优势抗原表位,设计特异性引物后经PCR分别扩增靶基因片段。将纯化的PCR产物连接到pET-28a(+)载体后转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞,构建pET28a(+)-Tsserpin B6、pET28a(+)-Ts-serpin 4848的分段原核表达载体,转入大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,目的蛋白纯化后进行SDS-PAGE鉴定和Western-blot分析。SDS-PAGE结果显示,成功表达纯化了6个重组目的蛋白Ts-serpin B6(a)、Ts-serpin B6(b)、Ts-serpin B6(c)和Ts-serpin 4848(a)、Ts-serpin 4848(b)、Tsserpin 4848(c),其在大肠杆菌中主要以包涵体形式存在。Western-blot和ELISA结果表明重组蛋白Ts-serpin B6(a)和Ts-serpin 4848(a)与其他分段重组蛋白相比具有更强的反应原性和特异性。结论:明确Ts-serpin B6(a)和Ts-serpin 4848(a)是抗原的优势表位,为猪囊尾蚴病特异性诊断试剂研发提供了依据。 展开更多
关键词 猪囊尾蚴 丝氨酸蛋白酶抑制剂 优势抗原表位 鉴定表达
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多头带绦虫具有黏附活性新蛋白的功能鉴定
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作者 李文卉 岳龙 +8 位作者 曲自刚 张念章 李立 闫鸿斌 贾万忠 殷宏 付宝权 次旦欧珠 米平 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第10期1357-1366,共10页
为了挖掘多头带绦虫功能性新基因,分别以多头带绦虫基因组DNA和cDNA为模板,依据多头带绦虫基因组数据设计引物,利用PCR扩增具有FNⅢ结构域的基因序列,利用生物信息学软件对该基因进行序列分析。分别将扩增的基因片段连接至原核表达载体p... 为了挖掘多头带绦虫功能性新基因,分别以多头带绦虫基因组DNA和cDNA为模板,依据多头带绦虫基因组数据设计引物,利用PCR扩增具有FNⅢ结构域的基因序列,利用生物信息学软件对该基因进行序列分析。分别将扩增的基因片段连接至原核表达载体pGEX4T-1进行原核表达,利用Western-blot分析该重组蛋白的抗原性,验证其细胞黏附活性及进行组织定位,并开展了绵羊免疫攻虫试验。结果表明,成功克隆了4个分别命名为TmAdh1~TmAdh4长度约为1 800 bp的序列,均由3个外显子和2个内含子组成;序列分析发现4个基因含有N端信号肽和1个FNⅢ结构域,基因进化分析发现TmAdh1~TmAdh4蛋白属于带科绦虫抗原性蛋白家族的一个新的亚类。分别构建重组质粒并转化大肠杆菌BL21感受态细胞,成功表达了约39.0、38.1、38.9和37.8 k Da的重组蛋白。Western-blot结果表明rTmAdh3蛋白能被脑多头蚴病绵羊血清识别。细胞黏附活性试验表明rTmAdh1~r TmAdh4对CHO和NRK细胞都具有黏附活性。免疫组化结果表明,TmAdh1~TmAdh4主要分布于原头节的顶突。重组蛋白免疫绵羊保护性试验结果显示,rTmAdh1、rTm Adh3和rTmAdh4免疫绵羊后抗体水平上升,三免后达到峰值,攻虫后抗体水平逐渐下降。用多头带绦虫虫卵感染绵羊后,rTmAdh1、rTmAdh3、rTmAdh4免疫组绵羊的脑包囊数较对照组分别减少61.71%、53.17%、50.76%。本研究为多头带绦虫新基因功能性研究奠定了基础。 展开更多
关键词 多头带绦虫 纤连蛋白三型(FNⅢ)结构域 黏附活性 组织定位 免疫保护
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细粒棘球绦虫EgBAL蛋白的生物信息学分析及原核表达
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作者 赵文卿 薄新文 +6 位作者 普娜 张玉霞 陈旭珂 张艳艳 孙艳 齐萌 王正荣 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第2期801-810,共10页
[目的]探究细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus)胆盐活化脂肪酶(EgBAL)的生物信息学特征并进行原核表达,检测EgBAL重组蛋白的免疫原性,为囊性棘球蚴病疫苗抗原筛选提供理论依据。[方法]从NCBI数据库获取细粒棘球绦虫EgBAL基因序列(Ge... [目的]探究细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus)胆盐活化脂肪酶(EgBAL)的生物信息学特征并进行原核表达,检测EgBAL重组蛋白的免疫原性,为囊性棘球蚴病疫苗抗原筛选提供理论依据。[方法]从NCBI数据库获取细粒棘球绦虫EgBAL基因序列(GenBank登录号:HM748917),设计特异性引物,以细粒棘球绦虫原头蚴cDNA为模板,通过PCR扩增并克隆EgBAL基因。使用Mega 7.0软件,通过邻接法(NJ)构建系统进化树,运用生物信息学软件对EgBAL蛋白理化性质和结构特征进行预测分析。构建含EgBAL基因重组pET-22b质粒,并转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞诱导表达EgBAL重组蛋白,通过SDS-PAGE检测蛋白表达情况,并进行纯化。利用Western blotting分析重组蛋白的免疫原性。[结果]细粒棘球绦虫EgBAL基因片段大小为1 020 bp。系统进化树显示,EgBAL蛋白与中华树鼩EgBAL蛋白处于同一分支,进化距离较近,相似性高达99.60%。生物信息学分析显示,EgBAL基因全长1 014 bp,编码337个氨基酸,EgBAL蛋白分子质量为37 089.59 u,理论等电点为4.77,不稳定指数为44.72,为不稳定蛋白,脂肪系数为66.11,亲水性为-0.429,为亲水性蛋白,无跨膜区域及信号肽。EgBAL蛋白具有14个潜在B细胞抗原表位,二级结构包括α-螺旋、延伸链、β-转角和无规则卷曲,分别占27.90%、12.76%、12.76%和56.08%。此外,EgBAL蛋白含有35个磷酸化位点,其中包括12个丝氨酸磷酸化位点、16个苏氨酸磷酸化位点和7个酪氨酸磷酸化位点。本研究成功构建重组pET-22b-EgBAL质粒,诱导表达得到EgBAL重组蛋白大小约38 ku。Western blotting结果显示,该重组蛋白可被细粒棘球绦虫感染的昆明小鼠和犬的阳性血清识别,具有良好的免疫原性。[结论]本研究成功克隆了细粒棘球绦虫EgBAL基因、表达了EgBAL重组蛋白,并初步证实重组EgBAL蛋白具有较好的免疫原性,提示其有作为囊型棘球蚴病疫苗或诊断候选抗原的潜力,为进一步研究EgBAL蛋白的功能提供了科学依据。 展开更多
关键词 细粒棘球绦虫 EgBAL基因 生物信息学分析 原核表达
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细粒棘球绦虫MAPⅡ生物信息学分析及其在虫体不同阶段表达差异研究
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作者 陈旭珂 普娜 +8 位作者 张玉霞 赵文卿 赵家欣 黄俊程 魏琳颖 张艳艳 孙艳 薄新文 王正荣 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第7期3286-3296,共11页
【目的】研究甲硫氨酸氨基肽酶Ⅱ(methionine aminopeptidaseⅡ,MAPⅡ)的分子特征、反应原性及其在虫体不同发育阶段的表达情况,提供一种对终末宿主具有保护作用的疫苗候选抗原。【方法】对MAPⅡ蛋白进行生物信息学分析,包括系统进化树... 【目的】研究甲硫氨酸氨基肽酶Ⅱ(methionine aminopeptidaseⅡ,MAPⅡ)的分子特征、反应原性及其在虫体不同发育阶段的表达情况,提供一种对终末宿主具有保护作用的疫苗候选抗原。【方法】对MAPⅡ蛋白进行生物信息学分析,包括系统进化树构建、理化性质分析及信号肽、跨膜区、抗原表位、磷酸化和糖基化位点、二级结构、三级结构预测。通过原核系统表达MAPⅡ蛋白并验证重组蛋白的抗原性,同时进行虫体不同发育阶段转录水平分析。【结果】细粒棘球绦虫MAPⅡ蛋白与终末宿主犬、中间宿主绵羊中MAPⅡ蛋白亲缘关系较远。MAPⅡ蛋白由453个氨基酸组成,分子质量为51023.75 u,不稳定系数为36.6,为稳定蛋白;平均疏水性指数为-0.609,亲水性较好。不存在信号肽与跨膜区。MAPⅡ蛋白具有良好的B细胞线性表位,共有38个磷酸化位点,1个N-糖基化位点。MAPⅡ蛋白二级结构以α-螺旋和无规则卷曲为主,占比分别为33.55%和51.88%;三级结构预测显示其为单体蛋白,GMQE值为0.85。通过原核系统表达出的MAPⅡ重组蛋白能与感染细粒棘球绦虫犬的阳性血清结合,抗原性良好。MAPⅡ蛋白在原头蚴阶段和成虫阶段均有表达,且成虫阶段表达量显著高于原头蚴阶段(P<0.05)。【结论】MAPⅡ蛋白结构稳定,具有优势抗原表位,MAPⅡ重组蛋白免疫原性良好,其在细粒棘球绦虫不同发育阶段特别是成虫阶段发挥着重要作用,可作为细粒棘球绦虫终末宿主疫苗候选抗原。 展开更多
关键词 细粒棘球绦虫 甲硫氨酸氨基肽酶Ⅱ(MAPⅡ) 生物信息学 原核表达 转录水平
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细粒棘球绦虫EgM123表面展示型酿酒酵母菌株的构建及免疫原性初步评价
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作者 贾新月 马静 +6 位作者 普娜 赵文卿 陈旭珂 张艳艳 孙艳 薄新文 王正荣 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第1期378-391,共14页
旨在构建并制备细粒棘球绦虫EBY100/pYD1-EgM123表面展示型酿酒酵母口服活载体菌株,并初步评价其免疫效果,以期为细粒棘球绦虫终末宿主酿酒酵母活载体口服疫苗的研发提供理论基础。克隆细粒棘球绦虫EgM123基因,构建EBY100/pYD1-EgM123... 旨在构建并制备细粒棘球绦虫EBY100/pYD1-EgM123表面展示型酿酒酵母口服活载体菌株,并初步评价其免疫效果,以期为细粒棘球绦虫终末宿主酿酒酵母活载体口服疫苗的研发提供理论基础。克隆细粒棘球绦虫EgM123基因,构建EBY100/pYD1-EgM123表面展示型酿酒酵母菌株。诱导培养表面展示型酿酒酵母EBY100/pYD1-EgM123,并进行体外分析,通过免疫荧光分析以及BCA蛋白定量法对EgM123蛋白进行定位鉴定及定量分析。诱导表达表面展示型酿酒酵母EBY100/pYD1-EgM123菌株并免疫BALB/c小鼠。通过检测小鼠血清中抗体及细胞因子水平变化评价细粒棘球绦虫EgM123口服酵母活载体菌株的免疫效果。结果成功克隆了细粒棘球绦虫EgM123的ORF序列,长度为594 bp。PCR检测以及酶切鉴定结果表明,成功构建EBY100/pYD1-EgM123表面展示型酿酒酵母菌株。免疫荧光结果显示,EBY100/pYD1-EgM123表面具有绿色荧光,BCA蛋白定量法测定50 OD_(600 nm)EBY100/pYD1-EgM123诱导72 h后蛋白的表达量为15.59μg,浓度为0.31μg/OD_(600 nm)。抗体水平检测结果表明,EBY100/pYD1-EgM123免疫组特异IgG、IgA、IgM抗体的分泌均高于PBS组、EBY100组及EBY100/pYD1组(P<0.05)。细胞因子检测发现,EBY100/pYD1-EgM123免疫组对小鼠细胞因子IL-17、IFN-γ的分泌量显著加强(P<0.001)。综上所述,通过对细粒棘球绦虫EBY100/pYD1-EgM123表面展示型酿酒酵母口服活载体菌株免疫效果的初步评价,发现该口服活载体菌株具有免疫原性,可以刺激小鼠产生特异性免疫应答,进一步说明其具有成为终末宿主抗囊型包虫候选疫苗的潜力。 展开更多
关键词 细粒棘球绦虫 EgM123 表面展示型酿酒酵母 口服疫苗
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骨桥蛋白和p38MAPK信号通路在多房棘球蚴原头节发育中的作用
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作者 徐刚 毛艺 +6 位作者 胡帅 葛宇飞 徐志 张玉梦 谢士伟 张宏伟 张示杰 《动物医学进展》 北大核心 2025年第1期9-15,共7页
为明确骨桥蛋白(OPN)和多房棘球蚴(Echinococcus multilocularis,Em)p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路在Em发育过程的作用,剖检感染Em 4~6月的长爪沙鼠,提取Em原头节后,分别用不同浓度的p38MAPK抑制剂(SB202190)处理Em原头节,选... 为明确骨桥蛋白(OPN)和多房棘球蚴(Echinococcus multilocularis,Em)p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路在Em发育过程的作用,剖检感染Em 4~6月的长爪沙鼠,提取Em原头节后,分别用不同浓度的p38MAPK抑制剂(SB202190)处理Em原头节,选取合适的SB202190浓度后在体外将原头节分为DMSO组、anti-p38MAPK组、PBS组、OPN组、OPN+anti-p38MAPK组,采用伊红染色、caspase-3试剂盒检测caspase-3、EDU和Hoechst染色、活性氧(ROS)检测探针检测原头节的活性、凋亡和增殖情况。结果显示,抑制Em的SB202190适宜浓度为20μmol/L,SB202190增加Em的伊红染色率、caspase-3水平,减少EDU阳性、ROS水平,OPN可减少Em伊红染色率、caspase-3水平,增加EDU阳性率、ROS水平,且SB202190可逆转OPN对Em的结果,这些结果表明SB202190可抑制Em的活性和增殖、促进凋亡并与浓度正相关,而OPN可促进Em的活性和增殖、抑制凋亡,且SB202190可逆转OPN对Em的作用。研究结果为OPN和p38MAPK信号通路可能成为治疗多房棘球蚴病的新分子靶点提供证据。 展开更多
关键词 多房棘球蚴 多房棘球蚴病 骨桥蛋白 P38丝裂原活化蛋白激酶
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青海省高原鼠兔源囊尾蚴的分子鉴定与进化分析
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作者 陈澳 张海宁 +3 位作者 李志 孟茹 张学勇 付永 《中国农业大学学报》 北大核心 2025年第2期107-114,共8页
为鉴定青海省高原鼠兔源绦虫囊尾蚴种类,本研究对囊尾蚴样本进行体式显微镜观察,对其线粒体COI基因进行扩增并测序比对分析,同时利用Iqtree和BEAST v2.6.2等软件对测序所得的COI基因进行系统发育及分化时间分析。结果表明:1)体式显微镜... 为鉴定青海省高原鼠兔源绦虫囊尾蚴种类,本研究对囊尾蚴样本进行体式显微镜观察,对其线粒体COI基因进行扩增并测序比对分析,同时利用Iqtree和BEAST v2.6.2等软件对测序所得的COI基因进行系统发育及分化时间分析。结果表明:1)体式显微镜下该囊尾蚴的形态特征与带科囊尾蚴相似。2)测序结果发现该序列与GenBank中的才氏绦虫(Taenia caixuepengi)基因序列(MT882036)同源,序列相似性达到98.52%,表明该囊尾蚴属于Taenia caixuepengi囊尾蚴。3)系统发育树显示,才氏囊尾蚴与和豆状带绦虫(T.pisiformis)亲缘关系最近,两者形成微小分支。4)分化时间分析表明才氏囊尾蚴与豆状带绦虫在5.79 Mya(95%置信区间,3.15~6.87 Mya)左右分化形成,自展值为100%。综上,经鉴定青海省高原鼠兔源囊尾蚴为才氏囊尾蚴;利用该囊尾蚴线粒体COI基因进行的系统发育及分化时间分析表明该囊尾蚴与豆状带绦虫亲缘关系更近。本研究对青海省高原鼠兔源才氏囊尾蚴进行了鉴定与遗传进化分析,为才氏绦虫的分类、鉴定及分子流行病学调查提供理论依据。 展开更多
关键词 高原鼠兔 才氏囊尾蚴 分子鉴定 系统发育
原文传递
多房棘球蚴通过调控宿主lncRNA gm40262促进肝纤维化和寄生虫生长的机制研究取得进展 被引量:2
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作者 《中国兽医科学》编辑部 骆学农 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第6期851-852,共2页
多房棘球蚴病(泡球蚴病,AE)是世界范围内的重要公共卫生问题,我国是人AE病例最多的国家。肝脏纤维化是AE发展进程中的一个必经阶段,而过度纤维化可导致肝功能丧失、肝硬化、肝癌,甚至死亡。此外,虫体周围的纤维板大大限制了苯并咪唑类... 多房棘球蚴病(泡球蚴病,AE)是世界范围内的重要公共卫生问题,我国是人AE病例最多的国家。肝脏纤维化是AE发展进程中的一个必经阶段,而过度纤维化可导致肝功能丧失、肝硬化、肝癌,甚至死亡。此外,虫体周围的纤维板大大限制了苯并咪唑类药物的疗效。2025年2月25日,中国农业科学院兰州兽医研究所骆学农研究员领导的科研团队在mBio杂志发表了题为“LncRNA gm40262 promotes liver fibrosis and parasite growth through the gm40262-miR-193b-5p-TLR4/Col1α1 axis”的研究论文。该研究发现,gm40262在多房棘球蚴感染小鼠肝星状细胞(HSCs)中显著上调,并与肝纤维化相关分子的表达正相关。进一步研究表明,gm40262可靶向miR-193b-5p激活HSCs,进而通过TGF-β依赖的方式促进其增殖,并通过gm40262-mi R-193b-5p-Col1α1轴上调Col1α1表达,增加细胞外基质的产生。此外,gm40262还通过gm40262-miR-193b-5p-TLR4轴参与肝脏炎症反应的调节。体内研究证实,敲低小鼠gm40262可减轻多房棘球蚴引发的肝纤维化,并能抑制虫体生长。这些结果表明,gm40262在多房棘球蚴诱导的肝纤维化调控中发挥重要作用,可作为肝纤维化治疗的潜在靶点。 展开更多
关键词 多房棘球蚴 长链非编码RNA 肝纤维化 治疗靶标
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贝氏莫尼茨绦虫和扩展莫尼茨绦虫的分子鉴定与遗传进化分析
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作者 简莹娜 马利青 +2 位作者 李秀萍 王光华 张学勇 《青海畜牧兽医杂志》 2025年第5期12-17,共6页
为了鉴定分离出的绦虫种类及其遗传进化特征,本研究对该绦虫进行了形态学特征观察,并采用PCR方法进行扩增测序,丰富了贝氏莫尼茨绦虫和扩展莫尼茨绦虫的分子生物学数据。实验分别克隆了贝氏莫尼茨绦虫和扩展莫尼茨绦虫的cox1基因和18S r... 为了鉴定分离出的绦虫种类及其遗传进化特征,本研究对该绦虫进行了形态学特征观察,并采用PCR方法进行扩增测序,丰富了贝氏莫尼茨绦虫和扩展莫尼茨绦虫的分子生物学数据。实验分别克隆了贝氏莫尼茨绦虫和扩展莫尼茨绦虫的cox1基因和18S rRNA基因,将测序结果应用Clustal Omega程序进行比对,然后用MEGA软件的Neighbor-Joining法构建cox1基因和18S rRNA基因系统发育树。结果表明,克隆的莫尼茨绦虫的cox1基因和18S rRNA基因序列长度分别为1488 bp和1120 bp,两个基因的A+T(G+C)含量相差很大;扩展莫尼茨绦虫和贝氏莫尼茨绦虫的cox1和18S rRNA基因序列的种间比对显示,两条序列种间变异明显较高,cox1基因序列的种间变异碱基为175个(12.09%),18S rRNA基因序列的种间变异碱基为71个(6.57%)。应用cox1和18S rRNA基因序列所构建的NJ系统发育分析表明,贝氏莫尼茨绦虫和扩展莫尼茨绦虫分别位于两个分支上,且与相应的莫尼茨绦虫分离株聚在一个分支上,cox1基因和18S rRNA基因序列可作为莫尼茨绦虫虫种间鉴定的遗传标记。本研究为寄生虫病的防治奠定了坚实基础。 展开更多
关键词 贝氏莫尼茨绦虫 扩展莫尼茨绦虫 cox1基因 18S rRNA基因 种系发育分析
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空间转录组学研究揭示了多房棘球蚴感染小鼠免疫应答的时空变化规律 被引量:1
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作者 《中国兽医科学》编辑部 闫鸿斌(审核) 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第9期1274-1275,共2页
多房棘球蚴病是由多房棘球蚴感染引起的危害严重的人兽共患病,其肿瘤样生长可导致患者高死亡率。目前,该病的早期诊断和治疗仍然面临挑战。2025年2月22日,中国农业科学院兰州兽医研究所/兰州大学动物医学与生物安全学院畜禽重要人兽共... 多房棘球蚴病是由多房棘球蚴感染引起的危害严重的人兽共患病,其肿瘤样生长可导致患者高死亡率。目前,该病的早期诊断和治疗仍然面临挑战。2025年2月22日,中国农业科学院兰州兽医研究所/兰州大学动物医学与生物安全学院畜禽重要人兽共患病团队联合北京华大生命科学研究院,在Advanced Science期刊上发表题了为“Spatiotemporal transcriptomic profiling reveals the dynamic immunological landscape of alveolar echinococcosis”的研究论文。该研究基于多房棘球蚴病小鼠感染模型,采集了感染后第0~15个月的多个时间点的小鼠肝脏样本,整合RNA-seq、scRNA-seq和空间转录组学技术,从空间和时间上揭示了宿主对多房棘球蚴的免疫反应机制,首次绘制了多房棘球蚴感染灶微环境的高分辨率时空图谱,揭示了中性粒细胞、巨噬细胞和成纤维细胞在疾病进展中的功能和作用及其相互作用。 展开更多
关键词 多房棘球蚴 中性粒细胞 巨噬细胞 空间转录组 单细胞转录组
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全基因组分析揭示细粒棘球绦虫狭义种复杂的种群动态与寄生适应性 被引量:1
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作者 《中国兽医科学》编辑部 闫鸿斌 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第8期1135-1136,共2页
细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus sensu stricto)是导致囊性棘球蚴病(CE)的主要病原体,对全球人类和家畜构成重大健康风险。以往对该寄生虫的研究依赖线粒体DNA进行基因型鉴定和遗传多样性分析,但无法全面揭示其进化动态和适应策... 细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus sensu stricto)是导致囊性棘球蚴病(CE)的主要病原体,对全球人类和家畜构成重大健康风险。以往对该寄生虫的研究依赖线粒体DNA进行基因型鉴定和遗传多样性分析,但无法全面揭示其进化动态和适应策略的复杂性。2025年4月10日,中国农业科学院兰州兽医研究所畜禽重要人兽共患病团队在国际学术期刊m Bio发表了题为“Whole-genomic comparison reveals complex population dynamics and parasitic adaptation of Echinococcus granulosus sensu stricto”的研究论文,首次通过全基因组测序,揭示了该寄生虫的种群遗传特征、进化历史及寄生相关基因的适应性进化,为制定更有效的防控策略提供了依据。 展开更多
关键词 细粒棘球绦虫 种群基因组学 线粒体-核基因组不一致 基因流 平衡选择
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拉萨某地犬细粒棘球绦虫的分离鉴定及驱虫效果评价
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作者 冯青 郝力力 +3 位作者 索朗晋美 郝世钊 袁东波 杨涛 《四川畜牧兽医》 2025年第3期25-27,30,共4页
为鉴定拉萨某地犬细粒棘球绦虫的虫种或基因型,了解新型研制的犬细粒棘球绦虫驱虫药物——吡喹酮饼干和牛肉味吡喹酮咀嚼片的驱虫效果,选取拉萨市墨竹工卡县271只家犬,采用PCR方法检测驱虫前后犬只的粪便样本,对所得PCR阳性产物进行测序... 为鉴定拉萨某地犬细粒棘球绦虫的虫种或基因型,了解新型研制的犬细粒棘球绦虫驱虫药物——吡喹酮饼干和牛肉味吡喹酮咀嚼片的驱虫效果,选取拉萨市墨竹工卡县271只家犬,采用PCR方法检测驱虫前后犬只的粪便样本,对所得PCR阳性产物进行测序、BLAST比对及进化树构建,从而确定细粒棘球绦虫的虫种或基因型,并评价吡喹酮咀嚼片和吡喹酮饼干的驱虫效果。结果表明,从试验犬中检出的细粒棘球绦虫基因型均为G5型(奥氏棘球绦虫);吡喹酮饼干和吡喹酮咀嚼片两种驱虫药对犬细粒棘球绦虫的驱虫效果良好,投药后阳性率显著低于投药前;第二次投喂后,吡喹酮饼干组的驱虫效果不稳定,阳性率不降反升,吡喹酮咀嚼片组的驱虫效果较好,阳性率持续降低。 展开更多
关键词 家犬 细粒棘球绦虫 吡喹酮 驱虫 PCR检测
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EgM9与EGr_09888重组蛋白对细粒棘球绦虫原头蚴体外发育的影响
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作者 慕永辉 赵莉 +8 位作者 吾力江·卡马力 刘帅 班万里 王冰洁 喀迪尔丁·艾尔肯 穆尼拉·特列吾汗 权晨曦 潘星羽 张壮志 《动物医学进展》 北大核心 2025年第5期17-22,共6页
探究细粒棘球绦虫生殖相关基因EgM9和EGr_09888对细粒棘球绦虫原头蚴(PSCs)体外发育的影响。确定最适宜SDS与PSCs共培养浓度;设置2.5%和5%的蛋白共培养液加入量,Ⅰ组含20%胎牛血清(阴性对照组),Ⅱ组含0.1%SDS EgM9蛋白共培养液,Ⅲ组含0.... 探究细粒棘球绦虫生殖相关基因EgM9和EGr_09888对细粒棘球绦虫原头蚴(PSCs)体外发育的影响。确定最适宜SDS与PSCs共培养浓度;设置2.5%和5%的蛋白共培养液加入量,Ⅰ组含20%胎牛血清(阴性对照组),Ⅱ组含0.1%SDS EgM9蛋白共培养液,Ⅲ组含0.1%SDS EGr_09888蛋白共培养液,通过RT-qPCR确定最适加入量;设置Ⅰ~Ⅲ组与体外培养7 d PSCs共培养,收集7 d、21 d的虫体,RT-qPCR、Immunoblotting分析结果。结果表明,0.1%SDS是与PSCs共培养的最适浓度,重组蛋白共培养液的加入量为5%;RT-qPCR分析表明重组蛋白EgM9和EGr_09888对虫体的相应基因均有显著性调控(P<0.01),免疫印迹分析,以EgM9鼠血清为一抗时,7 d和21 d的Ⅲ组在35.0 ku出现条带,以EGr_09888鼠血清为一抗时,在21 d时Ⅲ组在35.0 ku出现条带。研究证实EgM9、EGr_09888重组蛋白分别对细粒棘球绦虫相应基因有显著性调控,对虫体中EGr_09888相应蛋白调控作用更为显著。 展开更多
关键词 细粒棘球绦虫 原头蚴体外培养 EgM9重组蛋白 EGr_09888重组蛋白
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云南省迪庆州间断双线绦虫线粒体基因序列多态性分析
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作者 徐翠蓉 谢昕言 +7 位作者 闫大龙 杨建岭 马君 贺君君 杨忠文 杨继生 杨建发 邹丰才 《动物医学进展》 北大核心 2025年第4期40-45,共6页
为分析间断双线绦虫(Digramma interrupta)的线粒体基因(mtDNA)序列的遗传多态性,探讨其作为分子标记的应用潜力,于云南省迪庆州获得的短须裂腹鱼体内分离出21条间断双线绦虫,分别提取基因组DNA,扩增ATP酶亚基6(p atp 6)、烟酰胺腺嘌呤... 为分析间断双线绦虫(Digramma interrupta)的线粒体基因(mtDNA)序列的遗传多态性,探讨其作为分子标记的应用潜力,于云南省迪庆州获得的短须裂腹鱼体内分离出21条间断双线绦虫,分别提取基因组DNA,扩增ATP酶亚基6(p atp 6)、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶亚基5(p nad 5)、核糖体RNA小亚基(p rrn S)部分基因,并进行序列分析。基于这3个基因,以多房棘球绦虫为外群,采用贝叶斯法构建进化树,分析间断双线绦虫与其他绦虫之间的系统发育关系。结果发现,p atp 6、p nad 5和p rrn S扩增产物的长度分别为543 bp、628 bp和1133 bp,种内差异依次为0~1.1%、0~1.4%和0~0.4%,在进化树上与间断双线绦虫与舌状绦虫亲缘关系最近。结果表明,3个mtDNA序列变异程度从低到高依次为p rrn S<p atp 6<p nad 5,p nad 5是研究间断双线绦虫遗传多样性的理想线粒体分子标记。 展开更多
关键词 间断双线绦虫 线粒体DNA 序列分析 进化分析
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基于线粒体cox1和Cyt b基因对四川地区多头带绦虫的种群遗传多样性研究 被引量:23
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作者 郝桂英 杨应东 +1 位作者 周英姿 杨光友 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期631-638,共8页
为研究四川地区多头带绦虫的种群遗传多样性和系统发生关系,用线粒体cox1基因和Cyt b基因全序列分析了20株四川山羊源多头蚴(11株寄生于脑,9株寄生于肌间)的遗传变异,并构建了系统发育树。结果显示:20株多头蚴cox1和Cyt b基因全序列长... 为研究四川地区多头带绦虫的种群遗传多样性和系统发生关系,用线粒体cox1基因和Cyt b基因全序列分析了20株四川山羊源多头蚴(11株寄生于脑,9株寄生于肌间)的遗传变异,并构建了系统发育树。结果显示:20株多头蚴cox1和Cyt b基因全序列长度分别为1 623和1 068bp,分别有59个和9个变异位点,其碱基变异率分别为0.1%~2.5%和0.1%~0.7%;分别检测到17个和6个单倍型,总的单倍型多样性分别为0.968±0.033和0.737±0.068,核苷酸多样性分别为0.005 98±0.001 33和0.003 06±0.000 79,平均遗传距离分别为0.006和0.003。构建的系统进化树均显示来源于脑部和肌间的20株四川山羊源多头蚴与多头带绦虫同在一个支系,均为多头带绦虫,且多头带绦虫四川分离株与伊朗、土耳其分离株亲缘关系较近,而与中国甘肃、中国广州、意大利分离株亲缘关系较远。研究结果表明线粒体cox1和Cyt b基因均可作为检测多头带绦虫种群遗传多样性的有效分子标记,且Cyt b基因的多样性水平低于cox1基因。 展开更多
关键词 多头带绦虫 cox1基因 CYT B基因 遗传多样性 四川
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羊细粒棘球蚴病抗体间接ELISA检测方法的建立 被引量:17
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作者 贾红 刘丹 +3 位作者 侯绍华 于琳琳 柏丽华 朱鸿飞 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期65-70,共6页
本研究旨在通过建立检测羊细粒棘球蚴病抗体的间接酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,为羊细粒棘球蚴病的检测提供快速、简便的手段。作者利用DNAStar软件对GenBank上发表的细粒棘球蚴EG95蛋白的氨基酸序列进行分析,筛选出高度亲水的优势表位... 本研究旨在通过建立检测羊细粒棘球蚴病抗体的间接酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,为羊细粒棘球蚴病的检测提供快速、简便的手段。作者利用DNAStar软件对GenBank上发表的细粒棘球蚴EG95蛋白的氨基酸序列进行分析,筛选出高度亲水的优势表位区EG95s,对该区域编码基因进行克隆并表达。以纯化的重组融合蛋白为包被抗原,按常规方法建立检测羊细粒棘球蚴病抗体的间接ELISA,并对各种条件进行优化。SDS-PAGE结果表明成功获得了可溶性好、表达效率高、纯化简便的重组融合蛋白GST-1EG95s和HIS-1EG95s,Western blot检测结果表明表达产物具有较好的反应原性。间接ELISA方法优化结果显示:HIS-1EG95s作为包被抗原效果优于GST-1EG95s。经统计学分析,确定间接ELISA方法的判定标准:OD450nm值≥0.235时判定为阳性,OD450nm值≤0.191时判定为阴性,介于二者之间则为可疑。分别对采自新疆的70份羊包虫阳性血清和70份阴性血清进行检测,结果表明该方法与新西兰Wallaceville动物研究中心提供的间接ELISA方法符合率为100%,阻断试验结果显示与其他蛋白无交叉反应,批内变异系数介于3.8%~5.6%,批间变异系数介于5.7%~8.5%,结果表明该方法特异性强、敏感性高、重复性好。作者所建立的羊细粒棘球蚴病抗体的间接ELISA检测方法有望为羊细粒棘球蚴病的检测提供快速、简便的手段。 展开更多
关键词 羊细粒棘球蚴病 EG95s 重组融合蛋白 间接ELISA 检测
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湖南省猬迭宫绦虫的线粒体cox1和nad1基因的序列测定及种系发育分析 被引量:16
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作者 刘自逵 刘国华 +4 位作者 戴荣四 刘伟 李芬 胡涛 刘毅 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期463-468,共6页
本研究旨在阐明猬迭宫绦虫湖南分离株线粒体细胞色素c氧化酶第I亚基(cox1)基因部分序列(pcox1)和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)脱氢酶亚单位l基因(nad1)部分序列(pnad1)的遗传变异情况,并用pcox1和pnad1序列重构猬迭宫绦虫与其它绦虫的种... 本研究旨在阐明猬迭宫绦虫湖南分离株线粒体细胞色素c氧化酶第I亚基(cox1)基因部分序列(pcox1)和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)脱氢酶亚单位l基因(nad1)部分序列(pnad1)的遗传变异情况,并用pcox1和pnad1序列重构猬迭宫绦虫与其它绦虫的种群遗传关系。利用聚合酶链反应(PCR)扩增猬迭宫绦虫的pcox1和pnad1,应用ClustalX1.81程序对序列进行比对,再用Phylip3.67程序MP法和Mage4.0程序NJ法绘制种系发育树,并用Puzzle5.2程序构建最大似然树,同时利用DNAStar5.0中的Megalign程序进行同源性分析。结果显示所获得各样品株的pcox1和pnad1序列长度一致,分别为396和566bp,湖南分离株与已知猬迭宫绦虫位于同一分枝。由于猬迭宫绦虫pcox1和pnad1序列种内相对保守,种间差异较大,故均可作为种间遗传变异研究的标记,从而为猬迭宫绦虫的种群体遗传学研究和其相关疾病的诊断奠定基础。 展开更多
关键词 猬迭宫绦虫 线粒体DNA cox1基因 nad1基因 种系发育关系
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猪带绦虫六钩蚴TSOL18基因疫苗表达载体的构建及其免疫原性研究 被引量:16
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作者 郭爱疆 才学鹏 +3 位作者 房永祥 贾万忠 骆学农 刘红霞 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期945-949,共5页
为研制新型猪囊尾蚴疫苗,将猪带绦虫六钩蚴阶段编码TSOL18的基因定向克隆于真核表达质粒pVAX1,经筛选、鉴定及DNA序列分析正确后,将重组质粒pVAX1/TSOL18转染BHK-21细胞,通过SDS-PAGE、Western blotting、免疫荧光试验等方法检测细胞中... 为研制新型猪囊尾蚴疫苗,将猪带绦虫六钩蚴阶段编码TSOL18的基因定向克隆于真核表达质粒pVAX1,经筛选、鉴定及DNA序列分析正确后,将重组质粒pVAX1/TSOL18转染BHK-21细胞,通过SDS-PAGE、Western blotting、免疫荧光试验等方法检测细胞中表达的TSOL18抗原。结果表明,重组真核质粒pVAX1/TSOL18可在BHK-21细胞中表达TSOL18目的蛋白,表达蛋白能被猪囊尾蚴病阳性血清所识别。动物免疫试验表明,真核表达载体能有效地诱导机体产生细胞免疫和体液免疫应答,这为猪囊尾蚴病基因疫苗的研究奠定了良好基础。 展开更多
关键词 猪带绦虫 TSOL18基因 基因疫苗表达载体 免疫原性
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猪带绦虫六钩蚴cDNA文库的构建及免疫原基因的筛选与克隆 被引量:6
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作者 景志忠 郭爱疆 +2 位作者 海岗 宗瑞谦 才学鹏 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期391-396,共6页
研究避开庞大的猪带绦虫基因组DNA,以构建六钩蚴发育阶段的cDNA表达文库为策略,利用pSPORT1质粒表达载体首次成功构建了表达文库。经库容量、重组率和代表性测定,库容量达5.0×106,重组率100%,用特异性引物能扩增出六钩蚴发育阶段1... 研究避开庞大的猪带绦虫基因组DNA,以构建六钩蚴发育阶段的cDNA表达文库为策略,利用pSPORT1质粒表达载体首次成功构建了表达文库。经库容量、重组率和代表性测定,库容量达5.0×106,重组率100%,用特异性引物能扩增出六钩蚴发育阶段10ku基因、18ku基因和45W基因家族的A型、B型、C型转录本,说明文库质量高,代表性强。应用快速筛选质粒表达文库和克隆免疫原基因的技术,成功地筛选和克隆到TsO1基因,其完整阅读框架(ORF)为393bp。将其登录到GenBank(AY327451),经BLAST分析,证实是猪带绦虫六钩蚴发育阶段的1个新免疫原基因。 展开更多
关键词 猪带绦虫 六钩蚴 免疫原 cDNA文库 克隆 构建 CDNA表达文库 基因组DNA 发育阶段 质粒表达载体 特异性引物 BLAST 基因家族 快速筛选 库容量 代表性 重组率 转录本
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细粒棘球绦虫原头蚴蛋白表达谱分析 被引量:10
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作者 王正荣 薄新文 +3 位作者 张艳艳 马勋 王智欣 卢平萍 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第8期1519-1528,共10页
旨在探索细粒棘球绦虫原头蚴蛋白表达特性,揭示在此发育阶段虫体主要的功能蛋白以及信号通路,为揭示虫体的发育调控、筛选疫苗以及药物靶标奠定基础。本试验采用LC-MS/MS技术对虫体原头蚴表达的蛋白质进行研究,然后对获得数据进行GO、KO... 旨在探索细粒棘球绦虫原头蚴蛋白表达特性,揭示在此发育阶段虫体主要的功能蛋白以及信号通路,为揭示虫体的发育调控、筛选疫苗以及药物靶标奠定基础。本试验采用LC-MS/MS技术对虫体原头蚴表达的蛋白质进行研究,然后对获得数据进行GO、KOG以及KEGG等分析;最后采用qRT-PCR和原位杂交技术对鉴定得到的Wnt信号通路的关键基因β-catenin进行了差异表达和组织定位研究。结果显示,本研究共鉴定得到7 172个肽段,1 197个蛋白质,其中包括多个潜在的抗原蛋白质,如四跨膜蛋白超家族、6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶、表皮抗原蛋白和烯醇酶等。信号通路分析结果显示其中632个蛋白参与276个调控通路,诸如与虫体发育紧密相关的Wnt、Notch、Hedgehog、NF-κB、cAMP以及胆酸盐信号通路。对β-catenin的验证结果显示,此基因分布于细粒棘球绦虫原头蚴顶突的小刺以及散在的细胞中,同时其相对转录量在体外培养0~10d的过程中呈递减趋势。综上,本研究解析了细粒棘球绦虫原头蚴的蛋白质表达元件,揭示了原头蚴主要的调控信号通路,为虫体的生长发育机制以及包虫病的有效防控提供了理论依据。 展开更多
关键词 细粒棘球绦虫 原头蚴 蛋白 表达谱 信号通路
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