【目的】探究牛巴贝斯虫(Babesia bovis)SBP2蛋白(spherical body protein 2,SBP2)的生物信息学特征并进行原核表达及多克隆抗体制备,为牛巴贝斯虫疫苗和诊断抗原筛选提供理论依据。【方法】对牛巴贝斯虫SBP2基因进行扩增和克隆,运用Meg...【目的】探究牛巴贝斯虫(Babesia bovis)SBP2蛋白(spherical body protein 2,SBP2)的生物信息学特征并进行原核表达及多克隆抗体制备,为牛巴贝斯虫疫苗和诊断抗原筛选提供理论依据。【方法】对牛巴贝斯虫SBP2基因进行扩增和克隆,运用Mega7.0构建牛巴贝斯虫SBP2蛋白系统进化树,利用IEDB Analysis Resource等生物信息学方法对牛巴贝斯虫SBP2蛋白的磷酸化位点和B细胞抗原表位进行预测分析;对SBP2蛋白与弓形虫致密颗粒蛋白(GRA)的氨基酸序列比对分析;构建原核表达载体p ET-28a-SBP2,诱导表达SBP2重组蛋白并进行蛋白纯化,通过Western blotting验证SBP2重组蛋白反应原性;以SBP2重组蛋白为免疫原,免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,并利用间接ELISA方法检测其效价。【结果】系统进化树显示,本研究牛巴贝斯虫SBP2蛋白与泰国株(OM46855)的氨基酸序列亲缘关系最近。生物信息学分析显示,SBP2蛋白包含17个B细胞抗原表位和31个磷酸化位点,其中包括12个丝氨酸位点、14个苏氨酸位点及5个酪氨酸位点。牛巴贝斯虫SBP2蛋白氨基酸序列与弓形虫GRA蛋白之间有很强的相关性。成功构建了重组质粒p ET-28a-SBP2;Western blotting结果显示,SBP2重组蛋白分子质量大小约为35ku,具有良好的反应原性;制备的多克隆抗体效价为1∶204800。【结论】本研究通过预测牛巴贝斯虫SBP2蛋白生物学特性,加深了对SBP2蛋白的认识,利用原核表达系统成功获得牛巴贝斯虫SBP2重组蛋白,并获得其小鼠源多克隆抗体,为进一步研究SBP2功能及其在牛巴贝斯虫致病机制中的作用奠定了基础。展开更多
[目的]弓形虫(Toxoplasma gondii)是一种可以寄生于几乎所有温血动物有核细胞内的原生动物寄生虫,其感染可导致宿主脾脏和外周血T细胞耗竭关键分子T细胞免疫球蛋白粘蛋白-3(T cell immunoglobulin and mucin domain-containing protein ...[目的]弓形虫(Toxoplasma gondii)是一种可以寄生于几乎所有温血动物有核细胞内的原生动物寄生虫,其感染可导致宿主脾脏和外周血T细胞耗竭关键分子T细胞免疫球蛋白粘蛋白-3(T cell immunoglobulin and mucin domain-containing protein 3,TIM-3)表达上调,进而抑制免疫应答。已有研究证实α-乳糖能特异性调节TIM-3与其配体半乳糖凝集素9(Galectin-9,Gal-9)的相互作用,进而减弱其抑制功能,增强机体抗感染能力。评估α-乳糖通过竞争性结合TIM-3配体Gal-9对感染弓形虫不同毒力株(RH株和ME49株)小鼠的免疫病理的干预效果,以期为弓形虫感染的免疫调节治疗提供新策略。[方法]利用弓形虫感染小鼠模型,皮下注射α-乳糖后,分析小鼠生存率、脾指数及肺脏、脾脏组织病理学变化,并通过流式细胞术检测小鼠外周血淋巴细胞亚群的比例及其表面免疫检查点分子含免疫球蛋白(Immunoglobulin,Ig)及ITIM结构域的T细胞免疫受体(T cell immunoreceptor with Ig and ITIM domains,TIGIT)的表达情况。[结果]α-乳糖处理虽延长弓形虫感染小鼠的存活时间,但对脾指数及肺、脾组织的病理损伤无改善作用。此外,感染弓形虫后,小鼠外周血中不同淋巴细胞亚群(包括CD8⁺T细胞、NK细胞等)的TIGIT表达均未因α-乳糖处理而出现显著升高。[结论]α-乳糖对感染弓形虫的小鼠无显著影响,这可能与虫株毒力及宿主免疫衰竭状态相关。展开更多
文摘[目的]弓形虫(Toxoplasma gondii)是一种可以寄生于几乎所有温血动物有核细胞内的原生动物寄生虫,其感染可导致宿主脾脏和外周血T细胞耗竭关键分子T细胞免疫球蛋白粘蛋白-3(T cell immunoglobulin and mucin domain-containing protein 3,TIM-3)表达上调,进而抑制免疫应答。已有研究证实α-乳糖能特异性调节TIM-3与其配体半乳糖凝集素9(Galectin-9,Gal-9)的相互作用,进而减弱其抑制功能,增强机体抗感染能力。评估α-乳糖通过竞争性结合TIM-3配体Gal-9对感染弓形虫不同毒力株(RH株和ME49株)小鼠的免疫病理的干预效果,以期为弓形虫感染的免疫调节治疗提供新策略。[方法]利用弓形虫感染小鼠模型,皮下注射α-乳糖后,分析小鼠生存率、脾指数及肺脏、脾脏组织病理学变化,并通过流式细胞术检测小鼠外周血淋巴细胞亚群的比例及其表面免疫检查点分子含免疫球蛋白(Immunoglobulin,Ig)及ITIM结构域的T细胞免疫受体(T cell immunoreceptor with Ig and ITIM domains,TIGIT)的表达情况。[结果]α-乳糖处理虽延长弓形虫感染小鼠的存活时间,但对脾指数及肺、脾组织的病理损伤无改善作用。此外,感染弓形虫后,小鼠外周血中不同淋巴细胞亚群(包括CD8⁺T细胞、NK细胞等)的TIGIT表达均未因α-乳糖处理而出现显著升高。[结论]α-乳糖对感染弓形虫的小鼠无显著影响,这可能与虫株毒力及宿主免疫衰竭状态相关。
