为建立一种快速准确的藏羊巨型住肉孢子虫(Sarcocystis gigantea)的临床检测方法,本研究基于巨型住肉孢子虫SPFH-SG基因,通过缓殖子荧光定量标准曲线的建立,敏感性、重复性、特异性试验验证,成功建立了SYBR Green Ⅰ的荧光定量PCR(qPCR...为建立一种快速准确的藏羊巨型住肉孢子虫(Sarcocystis gigantea)的临床检测方法,本研究基于巨型住肉孢子虫SPFH-SG基因,通过缓殖子荧光定量标准曲线的建立,敏感性、重复性、特异性试验验证,成功建立了SYBR Green Ⅰ的荧光定量PCR(qPCR)检测方法并检测了423份藏羊样本。结果表明,该诊断方法特异性较强、灵敏度较高且重复性好,血液与食道肌样品的检测结果符合率达98.9%,能够准确地进行藏羊巨型住肉孢子虫的生前快速检测和诊断。展开更多
【目的】探究牛巴贝斯虫(Babesia bovis)SBP2蛋白(spherical body protein 2,SBP2)的生物信息学特征并进行原核表达及多克隆抗体制备,为牛巴贝斯虫疫苗和诊断抗原筛选提供理论依据。【方法】对牛巴贝斯虫SBP2基因进行扩增和克隆,运用Meg...【目的】探究牛巴贝斯虫(Babesia bovis)SBP2蛋白(spherical body protein 2,SBP2)的生物信息学特征并进行原核表达及多克隆抗体制备,为牛巴贝斯虫疫苗和诊断抗原筛选提供理论依据。【方法】对牛巴贝斯虫SBP2基因进行扩增和克隆,运用Mega7.0构建牛巴贝斯虫SBP2蛋白系统进化树,利用IEDB Analysis Resource等生物信息学方法对牛巴贝斯虫SBP2蛋白的磷酸化位点和B细胞抗原表位进行预测分析;对SBP2蛋白与弓形虫致密颗粒蛋白(GRA)的氨基酸序列比对分析;构建原核表达载体p ET-28a-SBP2,诱导表达SBP2重组蛋白并进行蛋白纯化,通过Western blotting验证SBP2重组蛋白反应原性;以SBP2重组蛋白为免疫原,免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,并利用间接ELISA方法检测其效价。【结果】系统进化树显示,本研究牛巴贝斯虫SBP2蛋白与泰国株(OM46855)的氨基酸序列亲缘关系最近。生物信息学分析显示,SBP2蛋白包含17个B细胞抗原表位和31个磷酸化位点,其中包括12个丝氨酸位点、14个苏氨酸位点及5个酪氨酸位点。牛巴贝斯虫SBP2蛋白氨基酸序列与弓形虫GRA蛋白之间有很强的相关性。成功构建了重组质粒p ET-28a-SBP2;Western blotting结果显示,SBP2重组蛋白分子质量大小约为35ku,具有良好的反应原性;制备的多克隆抗体效价为1∶204800。【结论】本研究通过预测牛巴贝斯虫SBP2蛋白生物学特性,加深了对SBP2蛋白的认识,利用原核表达系统成功获得牛巴贝斯虫SBP2重组蛋白,并获得其小鼠源多克隆抗体,为进一步研究SBP2功能及其在牛巴贝斯虫致病机制中的作用奠定了基础。展开更多
文摘为建立一种快速准确的藏羊巨型住肉孢子虫(Sarcocystis gigantea)的临床检测方法,本研究基于巨型住肉孢子虫SPFH-SG基因,通过缓殖子荧光定量标准曲线的建立,敏感性、重复性、特异性试验验证,成功建立了SYBR Green Ⅰ的荧光定量PCR(qPCR)检测方法并检测了423份藏羊样本。结果表明,该诊断方法特异性较强、灵敏度较高且重复性好,血液与食道肌样品的检测结果符合率达98.9%,能够准确地进行藏羊巨型住肉孢子虫的生前快速检测和诊断。
