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禽白血病病毒p27蛋白单克隆抗体制备及抗原表位的鉴定 被引量：1
1
作者 陈桂娥 容芳 +3 位作者 苟鑫 孙荣航 李作生 陈瑞爱 《动物医学进展》 北大核心 2025年第1期23-28,共6页
为制备禽白血病病毒(ALV)p27蛋白特异性单克隆抗体,利用原核表达系统表达并纯化ALV p27蛋白,将其作为免疫原免疫注射Balb/c小鼠,用杂交瘤细胞融合和ELISA等筛选出阳性单克隆抗体细胞,对制备的单克隆抗体的抗体亚型、效价及特异性进行鉴... 为制备禽白血病病毒(ALV)p27蛋白特异性单克隆抗体,利用原核表达系统表达并纯化ALV p27蛋白,将其作为免疫原免疫注射Balb/c小鼠,用杂交瘤细胞融合和ELISA等筛选出阳性单克隆抗体细胞,对制备的单克隆抗体的抗体亚型、效价及特异性进行鉴定,将目的蛋白截短成4段,初步鉴定单克隆抗体识别的抗原表位区域。结果表明,共筛选出4株单克隆细胞,其抗体亚类皆为IgG1型,其中3A1抗体效价为1∶64000,3B2为1∶256000,5F1为1∶128000,5G2为1∶8000;4株单克隆抗体识别的抗原表位在1-60 aa之间。研究结果为进一步建立ALV相关免疫学检测方法提供了重要的材料。 展开更多
关键词 禽白血病病毒 P27蛋白 单克隆抗体 抗原表位
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两株J亚型禽白血病病毒分离鉴定及全基因序列分析
2
作者 夏琦琦 桂亚萍 +12 位作者 刘健 杨显超 陈琦 沈莉萍 冯桂丹 向蒙 徐平 唐聪圣 卫龙兴 洪云超 石慧花 王建 赵洪进 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第12期6326-6338,共13页
为了探究禽白血病病毒(ALV)的进化趋势和分子特征,本研究从上海市某鸡场采集了1600份血液样品,接种鸡成纤维细胞系(DF-1)分离病毒,通过PCR扩增gp85基因序列进行亚群分型,进一步通过间接免疫荧光试验(IFA)和多步生长曲线对其生物学特性... 为了探究禽白血病病毒(ALV)的进化趋势和分子特征,本研究从上海市某鸡场采集了1600份血液样品,接种鸡成纤维细胞系(DF-1)分离病毒,通过PCR扩增gp85基因序列进行亚群分型,进一步通过间接免疫荧光试验(IFA)和多步生长曲线对其生物学特性进行鉴定,并将分离株和ALV各亚群毒株的编码区和非编码区进行序列比对和分子构象分析。结果显示,通过PCR和IFA鉴定本研究共分离到了6株ALV-J亚群毒株,其中ALV-J-345株和ALV-J-480株序列存在明显差异,且ALV-J-480株在DF-1细胞上比ALV-J-345株具有更强的复制能力,进一步比对两株分离株和ALV-J其他毒株的序列发现,两株分离株的gp85和gp37蛋白之间共存在46个差异氨基酸位点,且ALV-J-480株和其他ALV-J毒株的相似性更低,除此之外ALV-J-480株pol基因在第866个氨基酸位置提前产生一个终止密码子,使其缩短了8个氨基酸,在非编码区位置上ALV-J-345株在3′UTR的E(XSR)元件区缺失了7个核苷酸,而ALV-J-480株在5′UTR的第358~376位置处多插入了19 nt的核苷酸,这些位置上的序列差异,可能是导致ALV-J-480株具有更强复制能力的原因,这使得其在鸡群中有成为新的流行毒株的竞争优势。因此本研究提供了关于ALV-J分子特征的最新数据,这将有助于揭示ALV-J的进化趋势,并为制定相关的防控措施提供参考。 展开更多
关键词 禽白血病病毒 分离鉴定 gp85 序列分析 基因变异
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J、K亚群禽白血病病毒血液核酸快速筛查技术的建立
3
作者 王红梅 周婉怡 +7 位作者 罗鑫杰 陈荟琳 陈钦玺 舒雪利 张金玉 苏桐 廖明 曹伟胜 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第12期6316-6325,共10页
为了缩短J、K亚群禽白血病病毒(subgroup J/K avian leukosis virus,ALV-J/K)净化检测周期,加快禽白血病(avian leukosis,AL)净化进程,本研究建立了一种适用于ALV-J/K低流行率场景下的血液核酸快速筛查技术(ALV-J/K blood quantitative ... 为了缩短J、K亚群禽白血病病毒(subgroup J/K avian leukosis virus,ALV-J/K)净化检测周期,加快禽白血病(avian leukosis,AL)净化进程,本研究建立了一种适用于ALV-J/K低流行率场景下的血液核酸快速筛查技术(ALV-J/K blood quantitative polymerase chain reaction,ALV-J/K-B-qPCR)。选取ALV-J、ALV-K保守区域设计特异性引物和TaqMan探针,并优化反应条件,建立了ALV-J/K TaqMan qPCR方法。以细胞病毒分离鉴定为ALV-J/K的阳性血液为实验材料,制备抗凝血DNA、血细胞DNA和血浆cDNA,进行ALV-J/K TaqMan qPCR检测,筛选最佳检测模板;使用血液室温裂解试剂盒和通用型柱式基因组DNA提取试剂盒提取核酸,筛选核酸提取方法;探索阳性样品不同稀释倍数对检测结果的影响,评估混合样本检测的可行性。运用ALV-J/K-B-qPCR进行预期流行率为1%~2%的血液核酸筛查模拟试验,并与病毒分离法比较。结果显示:ALV-J/K TaqMan qPCR特异性、灵敏性和重复性试验结果显示,该方法仅能特异性扩增ALV-J和ALV-K,对阳性标准品的检测下限分别为8.95×10^(1)copies·μL^(-1)、8.16×10^(1)copies·μL^(-1),比普通PCR灵敏性高100倍,批内和批间变异系数均<2%。96份临床样本检测结果显示,ALV-J/K TaqMan qPCR检出率为21.9%,高于普通PCR(15.6%)和ALV p27 ELISA(18.8%)。检测模板筛选试验中,抗凝血DNA为最佳检测模板。核酸提取方法筛选试验中,通用型柱式基因组DNA提取试剂盒提取核酸检测效果最好。混合样本检测可行性评估试验中,本研究建立的检测方法混合样本数量<10时,可检测低病毒载量样本。预期流行率为1%~2%的血液核酸筛查模拟试验结果显示,ALV-J/K-B-qPCR检出率为4%,比病毒分离法高2.5%。本研究建立的ALV-J/K-B-qPCR技术具有同时检测并鉴别ALV-J和ALV-K、检测效率高和节约成本的优势,以期为种禽场AL净化提供新技术。 展开更多
关键词 J亚群禽白血病病毒 K亚群禽白血病病毒 qPCR 核酸筛查 混样检测
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SUN2调控稳定表达绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白的OAR-L1细胞的恶性转化能力的研究
4
作者 鲍安玉 杜晓悦 +3 位作者 陈思旭 段续接 张培 刘淑英 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第5期669-677,共9页
为了探究SAD1/UN84结构域蛋白-2(SAD1/UNC84 domain protein-2,SUN2)在绵羊肺腺瘤病(ovine pulmonary adenocarcnoma,OPA)肿瘤细胞恶性转化中的功能,本试验利用实验室保存的JSRV env慢病毒感染绵羊肺成纤维细胞(OAR-L1),建立了OAR-L1-En... 为了探究SAD1/UN84结构域蛋白-2(SAD1/UNC84 domain protein-2,SUN2)在绵羊肺腺瘤病(ovine pulmonary adenocarcnoma,OPA)肿瘤细胞恶性转化中的功能,本试验利用实验室保存的JSRV env慢病毒感染绵羊肺成纤维细胞(OAR-L1),建立了OAR-L1-Env稳转株。通过qPCR和Western-blot检测JSRV Env和SUN2的表达情况,使用CCK-8、划分愈合试验和软琼脂糖集落形成试验检测细胞的恶性转化能力。此外,分别构建SUN2过表达和干扰质粒,并转染OAR-L1-Env稳转株,利用qPCR和Western-blot检测其SUN2的表达情况,通过CCK-8和划分愈合试验检测细胞的增殖和迁移能力。结果显示,OAR-L1-Env稳转株成功建立,且SUN2表达量显著下调(P<0.05),CCK-8、划分愈合试验和软琼脂糖集落形成试验表明OAR-L1-Env稳转株发生恶性转化。OAR-L1-Env稳转株中过表达SUN2可抑制细胞的增殖和迁移能力(P<0.05),而干扰SUN2则促进细胞的增殖和迁移能力(P<0.05)。综上所述,本研究表明SUN2参与调控JSRV Env诱导的细胞恶性转化,提示其可能对OPA肿瘤生成有抑制作用。本研究为进一步探究SUN2在OPA中的细胞增殖等生物学作用的研究提供了一定的参考资料。 展开更多
关键词 稳转株 囊膜蛋白 SUN2 增殖 迁移
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内源性绵羊肺腺瘤病毒LTR转录调控元件的筛选
5
作者 马鑫淇 杜晓悦 +3 位作者 段续接 张培 陈思旭 刘淑英 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第6期813-819,共7页
为了筛选内源性绵羊肺腺瘤病毒(enJSRV)长末端重复序列(LTR)转录调控的元件,本研究利用同源重组技术以本实验室保存的pGL4.10/enJSRV LTR为模板构建enJSRV LTR截短突变质粒,利用双荧光素酶报告基因系统筛选出enJSRV LTR启动子核心区域,... 为了筛选内源性绵羊肺腺瘤病毒(enJSRV)长末端重复序列(LTR)转录调控的元件,本研究利用同源重组技术以本实验室保存的pGL4.10/enJSRV LTR为模板构建enJSRV LTR截短突变质粒,利用双荧光素酶报告基因系统筛选出enJSRV LTR启动子核心区域,通过生物信息学软件预测enJSRV LTR启动子核心区域潜在转录因子结合位点并构建其真核表达质粒,利用双荧光素酶报告基因系统分别检测其对enJSRV LTR启动子活性的影响。测序结果表明,pGL4.10/enJSRV LTR截短突变质粒构建成功;荧光素酶活性检测结果表明,p GL4.10/enJSRV LTR在-118 bp~-44 bp区域启动子活性显著下降(P<0.001);提示该区域存在LTR启动子正调控元件;Flag/SOX17、Flag/EZH2、Flag/FOXM1、Flag/ZNF143真核表达质粒构建成功,其中,过表达SOX17可显著提高enJSRV LTR的启动子活性(P<0.001)。上述结果表明,本研究鉴定了enJSRV LTR核心启动子区域,并确定转录因子SOX17可直接促进enJSRV LTR转录。这些发现为enJSRV转录调控的分子机制研究提供了依据,并促进了JSRV研究领域的深入研究。 展开更多
关键词 内源性绵羊肺腺瘤病毒 长末端重复序列 双荧光素酶报告基因系统 SOX17
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种蛋中内源性禽白血病病毒的检测和鉴定 被引量：20
6
作者 徐海鹏 孟凡峰 +2 位作者 董宣 赵鹏 崔治中 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期1317-1323,共7页
某祖代种鸡群临床表现正常,在开产后用商品化禽白血病抗体检测试剂盒(ALV-Ab)和禽白血病抗原检测试剂盒检测发现血清抗体阳性率及蛋清抗原阳性率均显著高于正常水平,但对种蛋中抗原阳性的23只种鸡分别接种DF1细胞和SPF鸡胚来源的成纤维... 某祖代种鸡群临床表现正常,在开产后用商品化禽白血病抗体检测试剂盒(ALV-Ab)和禽白血病抗原检测试剂盒检测发现血清抗体阳性率及蛋清抗原阳性率均显著高于正常水平,但对种蛋中抗原阳性的23只种鸡分别接种DF1细胞和SPF鸡胚来源的成纤维细胞(CEF)后均未分离到病毒。为探明该鸡群是否存在内源性禽白血病病毒(ALV—E)以及能否干扰商品化抗体检测试剂盒的结果判定,将23只种鸡所产种蛋分别孵化后逐一制备成CEF培养,盲传3代后检测到其中1只鸡的细胞培养上清抗原检测为阳性。从该细胞培养上清液提取RNA,RTPCR扩增其gp85基因,序列分析证明该检出病毒为E亚群ALV。将该E亚群ALV接种SPF鸡胚来源CEF后又可检出p27抗原,显示该内源性ALV具备传染性。同时,对该病毒gp85基因进行了原核表达,表达产物免疫鸡后部分鸡血清经ALV—Ab抗体检测试剂盒检测为阳性。本研究分离到1株对CEF具备传染性的内源性ALV-E,并证明其诱导产生的抗体能够干扰对外源性ALV的鉴别诊断,提示在进行临床类似情况的判定时要结合鸡群实际表现做全面分析。 展开更多
关键词 种鸡 E亚群禽白血病病毒 GP85基因 血清交叉反应 P27抗原
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3种ELISA试剂盒检测不同亚型外源性鸡白血病病毒的比较 被引量：19
7
作者 郭慧君 李中明 +4 位作者 李宏梅 柴家前 马诚泰 王洪进 崔治中 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期310-314,共5页
为建立一种稳定、快速从感染鸡体内检测或分离外源性鸡白血病病毒(ALV)的简易方法,作者使用A亚型(ALV-A)、C亚型(ALV-C)以及2株J亚型(ALV-J-PY和ALV-J-WS)鸡白血病病毒(ALV)按高、中、低(即100、10、1μL)3种接种量人工接种DF1细胞,在... 为建立一种稳定、快速从感染鸡体内检测或分离外源性鸡白血病病毒(ALV)的简易方法,作者使用A亚型(ALV-A)、C亚型(ALV-C)以及2株J亚型(ALV-J-PY和ALV-J-WS)鸡白血病病毒(ALV)按高、中、低(即100、10、1μL)3种接种量人工接种DF1细胞,在接种后不同时间用A、B、C 3种ELISA试剂盒检测ALV抗原(P27)。结果表明,对ALV-A和ALV-J-PY,高剂量接种时,用A试剂盒在接种后第3天即可检测出;低剂量接种时,第7天可检出。使用B试剂盒,2株病毒的检出时间延长(高剂量组分别为第7天和第5天;低剂量组分别为第15天和第13天);使用C试剂盒,所需检出时间最长(接种后第13天)。对ALV-C和ALV-J-WS毒株,A试剂盒对高剂量组,分别能够在接种后第5天和第9天检出,其它中、低接种量组15 d内均没有检出;而B、C2个试剂盒对3个接种剂量组均没有检测出。从以上结果看出,3种ELISA试剂盒对3种亚型ALV毒株的检出时间存在明显不同,A试剂盒灵敏度最高,能最早作出检测;B试剂盒灵敏度次之。同时,无论使用哪种试剂盒ALVs的检出时间与病毒接种量间存在很大的相关性。本研究结果为外源性ALV的检测及病毒分离研究提供一定的科学依据。 展开更多
关键词 禽白血病病毒(ALV) 酶联免疫吸附试验(ELISA) 外源性 DF1细胞
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817肉杂鸡肉瘤组织分离出A、J亚型禽白血病病毒 被引量：31
8
作者 刘绍琼 王波 +3 位作者 张振杰 王健 孙淑红 崔治中 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期396-401,共6页
山东某地饲养的36日龄817肉杂鸡生长迟缓并发生颈部肉瘤。取肉瘤组织上清液接种CEF,培养12d,用IFA试验进行病毒鉴定。检测结果表明,从该肉瘤组织分离到A亚型与J亚型禽白血病病毒(ALV-A、ALV-J),命名为SD1005株。取肉瘤组织上清液人工感... 山东某地饲养的36日龄817肉杂鸡生长迟缓并发生颈部肉瘤。取肉瘤组织上清液接种CEF,培养12d,用IFA试验进行病毒鉴定。检测结果表明,从该肉瘤组织分离到A亚型与J亚型禽白血病病毒(ALV-A、ALV-J),命名为SD1005株。取肉瘤组织上清液人工感染817肉杂鸡与SPF鸡进行动物回归试验,结果复制出同样肉瘤。用复制出的新鲜肉瘤分别制备肉瘤细胞与肉瘤组织触片,IFA试验再次验证出ALV-A与ALV-J均为阳性,而且发现ALV-A与ALV-J分别共感染同一个组织细胞。同时,通过PCR方法用针对ALV-A、ALV-J的2对引物扩增并鉴定出肉瘤组织中含有ALV-A、ALV-J。对扩增的ALV-J囊膜糖蛋白(env)基因1 710bp片段进行的遗传变异分析结果显示,SD1005株与14株国内外参考株之间的同源性为88.5%～94.0%,其中与来自白羽肉鸡的美国参考株0661(AF247566)、ADOL-Hc1(AF097731)的同源性最高,分别为94.0%、93.8%。本研究显示,来自817肉杂鸡的肉瘤组织上清液接种鸡可诱发急性肉瘤,其中既检出ALV-A,又检出ALV-J,但急性肉瘤由单个病毒诱发还是与共感染相关有待于进一步研究。 展开更多
关键词 A、J亚型禽白血病病毒 共感染 分离鉴定
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表现腺胃炎的蛋用型鸡J亚群-白血病病毒的分离与鉴定 被引量：27
9
作者 孙淑红 柴家前 +3 位作者 王波 孙洪磊 王晓云 崔治中 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期251-254,共4页
从表现腺胃炎的尼克珊瑚粉商品代蛋鸡中分离到J亚群-白血病病毒(ALV-J)。将病料或鸡白细胞接种于CEF,培养12 d,分别采用单克隆抗体间接免疫荧光试验检测,结果10只鸡中有9只鸡分离到ALV-J,其中有4只鸡还存在与禽网状内皮增生病病毒(REV)... 从表现腺胃炎的尼克珊瑚粉商品代蛋鸡中分离到J亚群-白血病病毒(ALV-J)。将病料或鸡白细胞接种于CEF,培养12 d,分别采用单克隆抗体间接免疫荧光试验检测,结果10只鸡中有9只鸡分离到ALV-J,其中有4只鸡还存在与禽网状内皮增生病病毒(REV)的共感染。通过PCR扩增gp85基因,与已发表的20株ALV-J进行同源性比较。结果表明,与来自白羽肉鸡的HPRS103的同源性为97.8%,而与来自蛋用型鸡的SD07LK1株的同源性为93.0%。本研究发现,在某些仅仅发生腺胃炎的鸡也可能普遍存在ALV-J感染,再次显示了腺胃炎病料中病毒感染的多样性。ALV-J可能成为致腺胃炎的病原之一,但其致病作用有待进一步研究。 展开更多
关键词 腺胃炎 蛋用型鸡 J亚群-禽白血病病毒
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J亚群禽白血病病毒SCAU-0901株的分离鉴定 被引量：14
10
作者 张小桃 卢受昇 +4 位作者 张贺楠 陈平洁 赖汉漳 廖明 曹伟胜 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期674-678,共5页
在组织病理学观察的基础上,经接种DF-1细胞系、ELISA抗原检测、聚合酶链式反应(PCR)以及亚群特异性免疫荧光试验(IFA),从送检的疑似禽白血病感染的麻黄肉种鸡中分离并鉴定出1株J亚群禽白血病病毒(ALV-J),命名为SCAU-0901。利用特异性引... 在组织病理学观察的基础上,经接种DF-1细胞系、ELISA抗原检测、聚合酶链式反应(PCR)以及亚群特异性免疫荧光试验(IFA),从送检的疑似禽白血病感染的麻黄肉种鸡中分离并鉴定出1株J亚群禽白血病病毒(ALV-J),命名为SCAU-0901。利用特异性引物分别扩增出长度为545 bp和2.2×103bp的目的片段,并对目的片段进行了克隆测序。序列分析发现,SCAU-0901株的gp85基因与国内外各ALV-J毒株相应核苷酸序列的相似性为86.1%～95.1%,其中与BJ0303株的相似性最高(95.1%),与ADOL-7501株的相似性最低(86.1%)。系统遗传进化分析表明,SCAU-0901株的gp85基因片段与BJ0303株的亲缘关系最近。 展开更多
关键词 禽白血病 J亚群禽白血病病毒 GP85基因 分离 鉴定
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商品蛋鸡成髓细胞瘤、血管瘤型J亚群白血病病毒特性的研究 被引量：17
11
作者 孟祥凯 刘青 +4 位作者 王海伦 张洪海 邱波 刘功振 成子强 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1544-1547,共4页
2007年7月山东某蛋鸡场150日龄海兰褐蛋鸡发病，前期经病理学和免疫组织化学检测证明和ALV—J密切相关。取4只病鸡的肝组织处理后接种鸡胚成纤维细胞（CEF）培养，用ALV—J单抗G2-3进行间接免疫荧光检测，结果呈现强阳性，将反应为阳性... 2007年7月山东某蛋鸡场150日龄海兰褐蛋鸡发病，前期经病理学和免疫组织化学检测证明和ALV—J密切相关。取4只病鸡的肝组织处理后接种鸡胚成纤维细胞（CEF）培养，用ALV—J单抗G2-3进行间接免疫荧光检测，结果呈现强阳性，将反应为阳性的4株病毒分别命名为WS0701、WS0702、WS0703和WS0704；根据ALV-J原型株HPRS-103的序列设计1对针对外源性ALV—J的引物P1和P2，提取阳性CEF基因组DNA作为模板，PCR扩增后，得到长度为924bp的片段；PCR扩增产物测序结果显示，与HPRS-103的同源性为95．0％～97．5％，与国内分离株的同源性为92．0％～95．9％；遗传变异分析结果表明成髓细胞瘤型、血管瘤型ALV-J与国内毒株的同源性较远，而与HPRS-103的同源性最近，这说明ALV—J在蛋鸡体内复制的过程中有返祖现象，并呈现了新的肿瘤学特征。 展开更多
关键词 商品蛋鸡 J亚群白血病 免疫学 病毒学
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鸡的J亚群白血病病毒的分离及部分序列比较 被引量：141
12
作者 杜岩 崔治中 +2 位作者 秦爱建 R.F.Silva L.F.Lee 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期341-346,共6页
通过接种鸡胚成纤维细胞、聚合酶链式反应 (PCR)技术及特异性单抗的间接荧光抗体反应 (IFA) ,从某大型肉用型种鸡场的疑似J亚群白血病的病鸡中 ,以及 2 5个临床健康的商品代肉鸡群的 2群中 ,分离鉴定出J亚群禽白血病病毒 (ALV J)。在用... 通过接种鸡胚成纤维细胞、聚合酶链式反应 (PCR)技术及特异性单抗的间接荧光抗体反应 (IFA) ,从某大型肉用型种鸡场的疑似J亚群白血病的病鸡中 ,以及 2 5个临床健康的商品代肉鸡群的 2群中 ,分离鉴定出J亚群禽白血病病毒 (ALV J)。在用抗ALV Jgp85单克隆抗体JE9的IFA中 ,来自病鸡群的两株病毒SD990 1和SD990 2呈强阳性反应 ,来自临床健康肉鸡群的YZ990 1和YZ990 2株呈弱阳性反应。对YZ990 1株和SD990 2株的PCR产物直接测序结果表明 ,这二个中国株的囊膜蛋白 gp85的氨基酸组成与原型株HPRS 10 3及美国分离株ADOL Hcl有 89%～ 93%的同源性 ,它们相互间的同源性是 92 %。其 3′端LTR区与原型株HPRS 10 3则有 95 %～ 97%的同源性 ,但中国的两株病毒在紧靠 3′端LTR的“E”成分中 ,出现了一个 139个碱基的缺失性突变 ,而代之以一个 11个碱基的插入序列。 展开更多
关键词 肉鸡 J亚群白血病病毒 序列比较
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山羊地方性鼻内肿瘤病毒ENTV-SC株基因组cDNA文库的构建及生物信息学分析 被引量：14
13
作者 冯迎春 颜其贵 +2 位作者 郭万柱 王小玉 舒蕾 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期126-130,共5页
根据山羊地方性鼻内肿瘤病毒(ENTV-2)基因组序列设计5对引物,通过RT-PCR技术从山羊地方性鼻内肿瘤自然感染病例的鼻液中分段扩增获得了ENTV的基因组,构建了ENTV的cDNA文库,并对基因组序列进行了生物信息学分析。结果显示,获得的序列全长... 根据山羊地方性鼻内肿瘤病毒(ENTV-2)基因组序列设计5对引物,通过RT-PCR技术从山羊地方性鼻内肿瘤自然感染病例的鼻液中分段扩增获得了ENTV的基因组,构建了ENTV的cDNA文库,并对基因组序列进行了生物信息学分析。结果显示,获得的序列全长7 168bp,包含相互重叠的gag-pro-pol-env编码区及部分5′端非编码区,属B/D型病毒粒子。ENTV-SC与ENTV-2(2003年测序)高度相似,LTR、gag、pro、pol、env基因的相似性分别为91.0%、88.0%、88.6%、89.3%和91.0%。ENTV-SC与EN-TV-1及绵羊肺腺瘤病毒相似,主要差异存在于gag、env的跨膜区及LTR。 展开更多
关键词 山羊 地方性鼻内肿瘤病毒 CDNA文库 生物信息学分析
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皖南黄肉种鸡种蛋中禽白血病病毒的感染状态检测 被引量：12
14
作者 王波 李清源 +3 位作者 刘绍琼 张永光 崔治中 孙淑红 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期224-227,共4页
本研究首次通过检测种蛋中禽白血病病毒（ALV）评价了皖南黄父母代肉种鸡的ALV感染状态。收集该鸡群的120枚鸡蛋,取40枚鸡蛋孵化至9~11 d后分别制备CEF,培养10 d,取细胞上清用ELISA试剂盒检测ALV p27抗原。另取80枚鸡蛋卵白直接检测p27... 本研究首次通过检测种蛋中禽白血病病毒（ALV）评价了皖南黄父母代肉种鸡的ALV感染状态。收集该鸡群的120枚鸡蛋,取40枚鸡蛋孵化至9~11 d后分别制备CEF,培养10 d,取细胞上清用ELISA试剂盒检测ALV p27抗原。另取80枚鸡蛋卵白直接检测p27抗原,同时分别将80枚鸡蛋卵白接种CEF（DF1）,培养10 d后取细胞上清检测p27抗原。比较p27阳性检出率的结果表明,受精蛋孵化9~11 d后制备CEF,再培养10 d的细胞上清检出率（10/36）高于直接检测卵白（17/80）与卵白接种CEF（DF1）的细胞上清（7/80）。将经DF1培养后p27抗原阳性样品,用针对ALV-J的单抗JE9做IFA,ALV-J的阳性率为6/7。检测该80枚鸡蛋的卵黄抗体,ALV-J、ALV-AB的抗体阳性率分别为18/80、1/80。结果表明,该皖南黄父母代肉种鸡群存在的外源性ALV感染主要为ALV-J。该研究为ALV的净化提供了可行性检测方法。 展开更多
关键词 皖南黄肉种鸡 种蛋 禽白血病病毒 感染状态
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用单抗介导的免疫荧光试验检测组织切片中的禽网状内皮组织增生病病毒 被引量：20
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作者 张志 王锡乐 +1 位作者 庄国庆 崔治中 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期122-124,共3页
以禽网状内皮组织增生病病毒 (Reticuloendotheliosis virus,REV)的单克隆抗体 1 1B1 5 4作为一抗 ,建立了从组织病理切片中检测 REV的免疫荧光技术 (Mc- IFA)。运用该技术对人工接种 REV的肉鸡和疑似 REV病鸡的肝脏、脾脏、心脏和肾脏... 以禽网状内皮组织增生病病毒 (Reticuloendotheliosis virus,REV)的单克隆抗体 1 1B1 5 4作为一抗 ,建立了从组织病理切片中检测 REV的免疫荧光技术 (Mc- IFA)。运用该技术对人工接种 REV的肉鸡和疑似 REV病鸡的肝脏、脾脏、心脏和肾脏等器官的组织切片进行了检测 ,并与病毒分离和斑点杂交试验的敏感性和特异性进行了比较。结果表明 ,在人工接种的感染肉鸡中 ,3种方法均为阳性 ;在 30份疑似 REV的病料中 ,用 Mc- IFA可以检测出 1 0份阳性 ,而病毒分离只有 8份样品为阳性。由此表明 ,Mc- IFA的特异性和敏感性均较高 ,完全可以用于 展开更多
关键词 禽网状内皮组织增生病病毒 单克隆抗体 免疫荧光试验 组织切片
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可视化的RT-LAMP方法检测禽白血病病毒 被引量：14
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作者 刘业兵 张磊 +3 位作者 孙跃辉 毛娅卿 李俊平 宁宜宝 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期150-156,共7页
本研究旨在建立一种快速检测禽白血病病毒(ALV)的RT-LAMP方法。根据GenBank中ALV序列,在其保守序列区域设计了多套LAMP引物,通过LAMP Real-time Turbidimeter仪对ALV的LAMP引物、反应体系及反应进程进行监测和分析,以评价该方法的特异... 本研究旨在建立一种快速检测禽白血病病毒(ALV)的RT-LAMP方法。根据GenBank中ALV序列,在其保守序列区域设计了多套LAMP引物,通过LAMP Real-time Turbidimeter仪对ALV的LAMP引物、反应体系及反应进程进行监测和分析,以评价该方法的特异性和敏感性,并对加入SYBR GreenⅠ肉眼判定与仪器监测结果进行比对。结果表明:建立的RT-LAMP方法在63℃水浴中36min可对ALV核酸进行高效扩增,在反应结束后加入SYBR GreenⅠ肉眼判断结果与Real-time Turbidimeter仪检测结果一致;该方法具有很强特异性,对其它相关鸡病病原检测结果均为阴性;其检出限量为14.2pg.μL-1,显示出很高的敏感性;用建立的LAMP方法对24个样品进行检测,结果表明LAMP法与其原检测结果基本一致;本研究建立了可对ALV进行快速检测并可肉眼判定结果的可视化RT-LAMP方法,其操作简便、无需昂贵设备,适用于ALV的快速检测。 展开更多
关键词 禽白血病病毒 环介导等温扩增技术(LAMP) 检测
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上海地区商品代蛋鸡J亚群禽白血病的病理学观察 被引量：14
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作者 齐新永 刘佩红 +2 位作者 孙泉云 沈莉萍 鞠躬纳 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期798-801,共4页
对上海地区2个规模化商品蛋鸡场疑似禽白血病病例进行了组织病理学观察和ELISA检测,发现发病鸡群中血管瘤占50%,纤维肉瘤占37.5%,髓细胞瘤占12.5%,J亚群禽白血病的血清抗体阳性率分别达25%和15%。血管瘤主要见于脚部和翅膀,组织病理学... 对上海地区2个规模化商品蛋鸡场疑似禽白血病病例进行了组织病理学观察和ELISA检测,发现发病鸡群中血管瘤占50%,纤维肉瘤占37.5%,髓细胞瘤占12.5%,J亚群禽白血病的血清抗体阳性率分别达25%和15%。血管瘤主要见于脚部和翅膀,组织病理学观察表明为海绵状血管瘤,纤维肉瘤主要见于肌肉组织内,对弥漫性肝、脾肿大的病例观察表明肿瘤组织为髓细胞瘤。证实该鸡群感染了J亚群禽白血病病毒,并表现为以髓细胞瘤、血管瘤和纤维肉瘤为主的多种肿瘤性传染病。 展开更多
关键词 商品蛋鸡 J亚群禽白血病 组织病理学观察
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网状内皮组织增生病病毒HLJR0901株全基因组的克隆及序列分析 被引量：10
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作者 邓小芸 祁小乐 +5 位作者 高宏雷 高玉龙 秦立廷 高立 王永强 王笑梅 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期667-672,共6页
以网状内皮组织增生病病毒(REV)东北分离株HLJR0901基因组为模板,分别用6对引物扩增其全基因组,最终通过拼接和比对确定HLJR0901株的全基因组长8284bp,其基因组结构为LTR-PBS-gag-pol-env-PPT-LTR,GenBank登录号为GQ415646。运用软件将... 以网状内皮组织增生病病毒(REV)东北分离株HLJR0901基因组为模板,分别用6对引物扩增其全基因组,最终通过拼接和比对确定HLJR0901株的全基因组长8284bp,其基因组结构为LTR-PBS-gag-pol-env-PPT-LTR,GenBank登录号为GQ415646。运用软件将其序列与已知的其他REV全基因组进行比较。结果显示,HLJR0901株不仅与中国台湾和美国的REV毒株有较高的同源性,而且与鹅、野鸟及插入到鸡痘病毒中的REV前病毒有较近的亲缘关系,而与我国南方毒株HA9901的亲缘关系较远,表明我国流行的REV存在多样性。 展开更多
关键词 网状内皮组织增生病病毒 HLJR0901 基因组 序列分析
原文传递
血管瘤相关J亚群禽白血病病毒ZH-08株的分离与全基因组序列测定 被引量：10
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作者 张小桃 史伟伟 +4 位作者 刘红波 张贺楠 廖明 辛朝安 曹伟胜 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期193-199,共7页
本研究从临床表现为典型血管瘤型禽白血病病例的广东某肉种鸡场的病鸡中,分离到1株J亚群禽白血病病毒(ALV-J),命名为ZH-08。利用ELISA抗原检测、PCR和间接免疫荧光试验对分离株进行鉴定,结果都呈阳性。依据ALV-J原型株HPRS-103前病毒全... 本研究从临床表现为典型血管瘤型禽白血病病例的广东某肉种鸡场的病鸡中,分离到1株J亚群禽白血病病毒(ALV-J),命名为ZH-08。利用ELISA抗原检测、PCR和间接免疫荧光试验对分离株进行鉴定,结果都呈阳性。依据ALV-J原型株HPRS-103前病毒全基因组序列设计并合成3对引物,采用分段扩增的方法完成了分离株的全基因组序列测定。结果显示该分离株基因组序列全长7 597 bp,与已公开的全基因组序列大小比较略有差异,但符合典型的复制完全型反转录病毒的基因组结构,基因序列中不含已知致癌基因。将该分离株的亚群特异性gp85基因序列与国内外各参考株相应序列进行相似性比较,发现ZH-08与YZ9901株相似性最高(93.7%)。基于gp85核苷酸序列的系统进化分析表明:ZH-08株与SD07LK1株的亲缘关系最近。本研究为该毒株的生物学特性以及致病机制研究奠定了基础。 展开更多
关键词 血管瘤 J亚群禽白血病病毒 全基因组序列 gp85
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山东五大地方鸡禽白血病病毒主要流行亚型鉴定及其分离株gp85基因的分子特征分析 被引量：9
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作者 陈静 王波 +3 位作者 王海明 程合刚 武星辰 孙淑红 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期451-457,共7页
通过对山东五大地方鸡(寿光鸡、芦花鸡、百日鸡、琅琊鸡、鲁西斗鸡)不同亚型禽白血病病毒(ALV)分离株鉴定及gp85基因序列分析,探究山东五大地方鸡ALV的主要流行亚型及gp85基因分子特征。分别将寿光鸡、百日鸡、芦花鸡的无菌抗凝血和琅... 通过对山东五大地方鸡(寿光鸡、芦花鸡、百日鸡、琅琊鸡、鲁西斗鸡)不同亚型禽白血病病毒(ALV)分离株鉴定及gp85基因序列分析,探究山东五大地方鸡ALV的主要流行亚型及gp85基因分子特征。分别将寿光鸡、百日鸡、芦花鸡的无菌抗凝血和琅琊鸡、鲁西斗鸡的卵白接种CEF培养9~10d,常规方法提取感染细胞的cDNA,用针对J亚型ALV(ALV-J)gp85基因(924bp)的引物和A^J(含囊膜蛋白env基因,2 400bp)的群引物进行PCR扩增、克隆、测序并分析其特点。本研究发现,2009—2011年间,山东五大地方鸡均存在ALV-J感染,5个ALV-J分离株gp85基因之间的相似性为98.4%~99.9%,与原型毒株HPRS-103相似性为97.8%~98.3%;均扩出内源性ALV(ALV-E)片段,与不能产生传染性病毒粒子的ev-1、ev-3、ev-6毒株相似性最高,推测为鸡基因组所携带;同时还发现,琅琊鸡、芦花鸡存在A亚型ALV(ALV-A)的感染。研究结果表明,2009—2011年间的山东五大地方鸡已经普遍存在ALV-J,两大品系中存在ALV-A和ALV-J共感染,同时ALV-E的片段广泛存在,这一结论揭示出山东地方鸡的禽白血病净化工作更加具有挑战性。 展开更多
关键词 地方鸡 禽白血病病毒(ALV) GP85基因 分子特征
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