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表达γ干扰素的重组乳酸菌治疗猫瘟的效果评价
1
作者 王威 王瑜琪 +6 位作者 郭飞 孙培文 王煜煜 庞坤 吕长荣 华进联 李娜 《动物医学进展》 北大核心 2026年第1期14-17,共4页
七月龄布偶猫,因近期出现精神沉郁,食欲减退,有轻微拒食和呕吐现象,拉黄色水样粪便,有轻微便血而送动物医院诊疗。经临床检查其基本生命体征未见异常,血常规检验发现病猫白细胞数量显著降低,结合临床症状和猫瘟热试纸检测结果,确诊其患... 七月龄布偶猫,因近期出现精神沉郁,食欲减退,有轻微拒食和呕吐现象,拉黄色水样粪便,有轻微便血而送动物医院诊疗。经临床检查其基本生命体征未见异常,血常规检验发现病猫白细胞数量显著降低,结合临床症状和猫瘟热试纸检测结果,确诊其患有猫瘟。通过每日灌服表达γ干扰素的乳酸菌配合常规药物进行治疗,治疗第3天后患猫的粪便由水样逐渐变为糊状,治疗第5天时,粪便成型,且血常规检测中各项指标基本恢复正常。 展开更多
关键词 猫瘟 Γ干扰素 乳酸菌
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1株犬细小病毒的分型鉴定及VP2蛋白生物信息学分析
2
作者 刘琪 赵福庆 +4 位作者 韩彦飞 万玲 姚卫东 高锋 荀挚峰 《现代畜牧兽医》 2026年第2期20-25,共6页
研究旨在分析1株辽宁营口地区犬细小病毒(CPV)的亚型及其VP2蛋白的生物信息学特征。收集1例CPV感染的患犬粪便,提取病毒DNA,对CPV VP2基因进行PCR扩增及测序,比较VP2蛋白关键氨基酸位点确定CPV亚型,之后使用MegAlign和MEGA 6.0软件分析... 研究旨在分析1株辽宁营口地区犬细小病毒(CPV)的亚型及其VP2蛋白的生物信息学特征。收集1例CPV感染的患犬粪便,提取病毒DNA,对CPV VP2基因进行PCR扩增及测序,比较VP2蛋白关键氨基酸位点确定CPV亚型,之后使用MegAlign和MEGA 6.0软件分析该CPV株VP2核苷酸的同源性及遗传进化情况,生物信息学软件分析CPV VP2蛋白理化性质、跨膜结构及高级结构等。结果显示:分离得到的CPV-LN1株VP2基因全长1755 bp,编码584个氨基酸,属于CPV-2c亚型。CPV-LN1 VP2基因与参考毒株的CPV VP2基因的核苷酸同源性为98.9%~99.9%,与CPC-2c 855_CPV_HU株处于独立小分支。CPV-LN1 VP2蛋白为亲水性蛋白,无跨膜结构;含有6个潜在N-糖基化位点和53个磷酸化位点;主要分布于细胞质(43.5%)、细胞核(34.8%)和线粒体(21.7%);其二级结构α-螺旋、无规则卷曲、延伸链分别占4.62%、76.54%、18.84%;含有19个抗原决定簇。研究表明,CPV-LN1株属于CPV-2c亚型,其VP2蛋白为亲水性、非跨膜稳定蛋白,存在12个氨基酸数目≥7的抗原表位。 展开更多
关键词 犬细小病毒 基因分型 遗传进化 生物信息学
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基于转录组学探究PCV2引起宿主细胞免疫抑制的作用机制
3
作者 柏晶晶 陈奇 +6 位作者 黄昌巧 袁海峰 何颖 于美玲 韦英益 杨剑 胡庭俊 《动物医学进展》 北大核心 2026年第1期55-64,共10页
旨在通过转录组学技术筛选出猪圆环病毒感染宿主细胞的差异表达基因(DEGs),为揭示猪圆环病毒2型(PCV2)引起猪宿主免疫细胞产生免疫抑制的分子机制提供理论依据。以断奶仔猪脾脏为试验材料,制成猪脾淋巴细胞悬液,PCV2体外感染细胞,通过... 旨在通过转录组学技术筛选出猪圆环病毒感染宿主细胞的差异表达基因(DEGs),为揭示猪圆环病毒2型(PCV2)引起猪宿主免疫细胞产生免疫抑制的分子机制提供理论依据。以断奶仔猪脾脏为试验材料,制成猪脾淋巴细胞悬液,PCV2体外感染细胞,通过转录组学测序技术筛选DEGs,进行基因本体论(GO)、京都基因与基因组百科全书(KEGG)功能分析,对关键通路采用基因集富集分析(GSEA)和进行通路标色,挑选差异表达的基因,通过RT-qPCR验证转录组测序结果的准确性,使用Western blot技术检测重要基因的蛋白表达水平。转录组测序结果显示,PCV2感染后共捕获到15926个差异基因,其中305个差异基因表达显著上调,163个差异基因表达显著下调;GO和KEGG富集结果显示,差异基因与免疫应答等相关,主要富集在细胞因子-细胞因子受体相互作用、IL-17信号通路、风湿性关节炎、TNF信号通路、趋化因子信号通路、JAK-STAT、Toll样受体信号通路等;GSEA富集分析发现,IL-17信号通路富集于78个基因,主要包括AMCF-II、IL17F、IL13、CXCL10、CCL17等34个显著不同的基因,整体通路发生上调,TNF信号通路富集于95个基因,主要包括LTA、CXCL10、MMP9、CXCL2、CCL2等40个显著不同的基因,整体通路发生上调;RT-qPCR结果与测序结果一致,表明测序可靠;Western blot检测结果显示,PCV2感染后IL-17、TNF-α水平显著升高(P<0.05),CXCL2、IL-6水平也有所升高。转录组测序结果及后续试验结果表明,PCV2能通过上调宿主细胞IL-17、TNF等信号通路基因和蛋白表达水平影响下游炎症通路,进而引起机体产生免疫抑制。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 免疫抑制 转录组学 差异表达基因
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2020—2024年广西H3N2亚型禽流感病毒HA和NA基因分子特征分析
4
作者 尹彦文 熊陈勇 +14 位作者 韦伟 施开创 郑敏 崔鹏飞 韦显凯 李致远 刘惠心 冯淑萍 卢春花 屈素洁 陆文俊 李雪珍 王睿敏 邓国华 欧长波 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第9期4358-4367,共10页
【目的】探究H3N2亚型禽流感病毒(AIV)广西毒株分子遗传进化特征。【方法】采集2020—2024年广西各地的家禽咽拭子和肛拭子病料,采用实时荧光定量RT-PCR方法鉴别检测H3N2亚型AIV,选取部分阳性样本经尿囊腔接种SPF鸡胚,收集鸡胚尿囊液,... 【目的】探究H3N2亚型禽流感病毒(AIV)广西毒株分子遗传进化特征。【方法】采集2020—2024年广西各地的家禽咽拭子和肛拭子病料,采用实时荧光定量RT-PCR方法鉴别检测H3N2亚型AIV,选取部分阳性样本经尿囊腔接种SPF鸡胚,收集鸡胚尿囊液,提取核酸后通过PCR扩增血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因并测序,进行序列相似性、系统发育、氨基酸变异位点及遗传进化速率分析。【结果】共获得43株HA和NA基因序列,编码区大小为1 701和1 410 bp。相似性比对分析显示,本研究获得的HA和NA基因之间核苷酸序列相似性分别为86.0%~99.9%和89.7%~99.9%,与GenBank中禽源、人源、猪源和犬源核苷酸序列相似性分别为78.4%~99.7%和78.1%~99.1%。广西H3N2亚型AIV毒株HA和NA基因属于欧亚谱系,与禽源亲缘关系最近,与人源/猪源最远。HA蛋白在第18—20、22—24、38—40、54—56、61—63、181—183、301—303和499—501位氨基酸处出现糖基化,NA蛋白在第61—63、69—71、86—88、143—145、146—148、200—202、234—236、313—315和402—404位氨基酸处出现糖基化,部分氨基酸位点发生变异;HA蛋白裂解位点为340PEKQTR↓GLF348和340PERQTR↓GLF348。遗传进化速率估算结果显示,HA和NA基因遗传进化速率分别为3.26×10^(-3)和3.67×10^(-3)替换/(位点·年),HA基因种群规模在不同时间段表现出不同的动态进化特征。【结论】H3N2亚型AIV广西流行毒株与同种流行毒株亲缘性较近,部分HA和NA蛋白发生特有氨基酸突变,不同种属毒株进化趋势不一致,具有遗传多样性特征。试验结果为防控H3N2亚型AIV提供基础数据。 展开更多
关键词 禽流感病毒 H3N2亚型 遗传进化 相似性
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携带FPV VP2基因的重组减毒鼠伤寒沙门菌口服疫苗免疫原性研究
5
作者 陈慧敏 王文婕 +7 位作者 韩新雨 贾钰航 余祖华 贾艳艳 廖成水 丁轲 尚珂 陈松彪 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第7期947-952,共6页
本试验旨在评价表达泛猫白细胞减少综合症病毒(FPV)VP2蛋白的重组减毒鼠伤寒沙门菌SL1344ΔcrpΔasd口服疫苗的免疫原性。将重组菌按照10^(6)CFU/只的剂量口服免疫6周龄雌性KM小鼠,在免疫后第7、14、21、28、35和42天进行称重,检测VP2... 本试验旨在评价表达泛猫白细胞减少综合症病毒(FPV)VP2蛋白的重组减毒鼠伤寒沙门菌SL1344ΔcrpΔasd口服疫苗的免疫原性。将重组菌按照10^(6)CFU/只的剂量口服免疫6周龄雌性KM小鼠,在免疫后第7、14、21、28、35和42天进行称重,检测VP2特异性Ig G抗体、中和抗体、IL-4和IFN-γ水平的变化。同时口服免疫8周龄健康田园猫,检测疫苗的攻毒保护效果。结果显示,与对照组相比,重组菌免疫后对小鼠体重无明显影响(P>0.05);重组菌免疫小鼠后能够显著诱导血清中针对VP2特异性抗体和中和抗体水平(P<0.05);IL-4和IFN-γ细胞因子水平显著升高(P<0.05),且在免疫后第28天达到峰值;重组菌免疫猫后对FPV感染具有一定程度的免疫保护效果,可明显降低实验猫致死率并且延缓发病时间和发病程度。以上结果表明,构建的FPV VP2重组减毒鼠伤寒沙门菌口服疫苗能够有效刺激机体产生免疫应答且具有较好的免疫保护效力,为进一步研发FPV新型疫苗奠定了良好基础。 展开更多
关键词 泛猫白细胞减少综合症病毒 VP2 SL1344ΔcrpΔasd 口服疫苗 免疫原性
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猪细小病毒NS1蛋白单链抗体库的构建及筛选
6
作者 张丽萌 李闰婷 +6 位作者 宋月 聂晓宁 孔莉 单靖微 许盈盈 王林青 陈龙欣 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第7期3276-3285,共10页
【目的】筛选特异性抗猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)非结构蛋白NS1的单链抗体(scFv),为后续研究PPV奠定基础。【方法】通过原核表达系统诱导表达并纯化PPV NS1蛋白,利用重组NS1蛋白进行动物免疫,检测血清效价水平后,采集小鼠脾脏... 【目的】筛选特异性抗猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)非结构蛋白NS1的单链抗体(scFv),为后续研究PPV奠定基础。【方法】通过原核表达系统诱导表达并纯化PPV NS1蛋白,利用重组NS1蛋白进行动物免疫,检测血清效价水平后,采集小鼠脾脏提取总RNA并逆转录成cDNA,以其为模板扩增抗体重链可变区(variable domain of heavy chains,VH)和轻链可变区(variable domain of light chains,VL)序列;通过重叠延伸PCR扩增获得scFv基因,将其与酶切的pSEXRTL2噬菌体载体连接并电转化大肠杆菌XLⅠ-Blue感受态细胞,构建鼠源性抗PPV NS1的scFv抗体文库,并测定文库质量及库容量;利用噬菌体展示技术筛选对NS1蛋白具有特异性的scFv,通过ELISA和Western blotting检测抗原与阳性噬菌体克隆的亲和力。【结果】本试验成功表达纯化获得可溶性PPV NS1重组蛋白;构建的鼠源抗NS1 scFv文库的库容量为2.7×10^(7) CFU/mL,文库阳性率为87.5%;通过4轮“吸附-洗脱-富集”噬菌体筛选,最终获得2株与PPV NS1蛋白特异性结合的亲和力较高的scFv。【结论】本研究通过原核表达纯化重组蛋白NS1,成功构建鼠源抗PPV NS1蛋白的scFv噬菌体文库,利用噬菌体展示技术筛选获得了可与NS1重组蛋白特异性结合的scFv。试验结果为进一步研发抗PPV药物及诊断试剂提供依据。 展开更多
关键词 猪细小病毒(PPV) 单链抗体(scFv) NS1蛋白 噬菌体文库
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河南省猪圆环病毒4型的分子检测与遗传进化分析
7
作者 文英会 李豪 +5 位作者 陈曦艋 王坤丽 赵丽 马世杰 闫志浩 陈红英 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第8期3865-3876,共12页
【目的】猪圆环病毒4型(Porcinecir covirus type4,PCV4)是近年来新发现的与猪呼吸道疾病、腹泻及皮炎肾病综合征相关的一种猪圆环病毒。本研究旨在调查河南省猪场中PCV4的流行态势与遗传变异情况。【方法】对2020年1月至2023年8月从河... 【目的】猪圆环病毒4型(Porcinecir covirus type4,PCV4)是近年来新发现的与猪呼吸道疾病、腹泻及皮炎肾病综合征相关的一种猪圆环病毒。本研究旨在调查河南省猪场中PCV4的流行态势与遗传变异情况。【方法】对2020年1月至2023年8月从河南省采集的504份疑似PCV4感染的猪血清和组织样品,采用PCR方法进行PCV4检测,对PCV4阳性样品进行全基因组扩增并测序。使用DNAStar软件中Meg Align程序对PCV4全基因组序列进行相似性比对,通过Meg Align和Bio Edit软件对Rep、Cap蛋白氨基酸序列进行比对分析。【结果】504份样品中PCV4检出率为15.28%(77/504),除了信阳地区未检出PCV4外,其他地区均检出PCV4。获得了15条PCV4全基因组序列,它们之间的核苷酸序列相似性为97.7%~99.9%,与Gen Bank收录的51条PCV4基因组序列相似性为97.7%~100%。氨基酸序列分析显示,Rep蛋白主要氨基酸突变为V239L,Cap蛋白主要氨基酸突变为S27N、R28G和L212M。遗传进化分析显示,PCV4归为圆环病毒科圆环病毒属,与水貂圆环病毒亲缘性最高。15株PCV4中有10株属于PCV4a,3株属于PCV4b,2株属于PCV4c。【结论】PCV4在河南省猪场中已广泛存在,且PCV4a已成为河南地区主要流行毒株。试验结果丰富了河南地区PCV4的流行病学数据,为PCV4的防控和进一步研究提供参考。 展开更多
关键词 猪圆环病毒4型(PCV4) 分子检测 全基因组 遗传进化
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非洲猪瘟病毒基因缺失株和野毒株荧光定量PCR检测方法的建立
8
作者 江青东 周明浩 李新锋 《动物医学进展》 北大核心 2025年第12期17-23,共7页
非洲猪瘟病毒(ASFV)根据基因型可分为野毒株和基因缺失株,而目前实验室针对ASFV的检测多为通用型试剂盒,因此建立一种能够针对野毒株和基因缺失株的检测方法十分必要。根据文献和专利搜集P72、B646L、MGF360-505R、I177L、F778R等基因... 非洲猪瘟病毒(ASFV)根据基因型可分为野毒株和基因缺失株,而目前实验室针对ASFV的检测多为通用型试剂盒,因此建立一种能够针对野毒株和基因缺失株的检测方法十分必要。根据文献和专利搜集P72、B646L、MGF360-505R、I177L、F778R等基因的引物序列,经过验证之后合成引物,并通过胶回收获取阳性标准品,之后通过SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法对5种基因型进行敏感性、特异性和重复性试验并绘制标准曲线。5种基因型随着阳性标准品的梯度稀释,呈现梯度性扩增曲线,线性回归方法和相关系数分别为P72:y=-3.5451x+65.768,R^(2)=0.9924;B646L:y=-2.9648x+56.883,R^(2)=0.9939;MGF360-505R:y=-4.1002x+73.599,R^(2)=0.9849;I177L:y=-4.0943x+74.364,R^(2)=0.9876;F778R:y=-3.156x+63.305,R^(2)=0.9947;组内重复的变异系数则为0.06%~1.99%。而组间重复的变异系数为0.20%~1.28%,证明该方法重复性较好。通过特异性试验,这5种基因型与猪繁殖与呼吸综合征病毒、伪狂犬病病毒、猪圆环病毒2型、犬瘟热病毒、犬细小病毒、犬冠状病毒均无交叉反应,可用于鉴别野毒株与基因缺失株,特异性好。初步建立的荧光定量PCR方法具备良好的灵敏性、特异性和重复性,为后续建立一种用于同时鉴别野毒株和基因缺失株的多重荧光定量PCR方法奠定了基础。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 荧光定量PCR 野毒株 基因缺失株
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鸽圆环病毒荧光定量PCR检测方法的建立及应用 被引量：1
9
作者 王星月 杨志远 +5 位作者 林健 张紫萱 周雨婷 程慧敏 刘月焕 胡格 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第1期335-342,共8页
为实现对鸽圆环病毒(pigeon circovirus, PiCV)的快速检测,建立了针对Cap基因的PiCV荧光定量PCR检测方法,并应用该方法进行PiCV分子流行病学调查。本研究针对PiCV核衣壳蛋白Cap基因的保守序列设计一对特异性引物,并通过优化反应条件,成... 为实现对鸽圆环病毒(pigeon circovirus, PiCV)的快速检测,建立了针对Cap基因的PiCV荧光定量PCR检测方法,并应用该方法进行PiCV分子流行病学调查。本研究针对PiCV核衣壳蛋白Cap基因的保守序列设计一对特异性引物,并通过优化反应条件,成功建立了荧光定量PCR检测方法。此外,还对该方法的灵敏度、特异性、重复性进行了全面评估。利用建立的荧光定量PCR方法对华北和西北部分地区147份临床样本进行检测,并对阳性代表样本的Cap全长序列进行遗传演化分析。结果表明,所建立的荧光定量PCR方法在1×10^(4)至1×10^(8)拷贝·μL^(-1)范围内显示出良好的线性关系,最低检测限达到1×10^(1)拷贝·μL^(-1),显著高于传统PCR方法。此方法具有良好的重复性,且不与其他常见鸽病病原产生交叉反应。采用本试验方法检测的147份华北和西北部分地区肉鸽和信鸽临床样本PiCV阳性率为85.0%,阳性样本的Cap全长序列分析及遗传演化分析结果显示,6株分离株相似性在89.8%~97.5%之间,与PiCV HeBeiTS2021株在同一个分支,亲缘关系较近。建立的PiCV荧光定量PCR方法具备灵敏、特异和稳定等优点,可用于PiCV的快速检测,同时流行病学调查结果表明,2022—2023年华北和西北部分地区PiCV感染率较高,为我国PiCV的防控研究提供数据支撑。 展开更多
关键词 鸽圆环病毒 Cap基因 荧光定量PCR 分子流行病学 遗传演化分析
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猪细小病毒TaqMan实时荧光定量PCR方法的建立与应用 被引量：1
10
作者 帅文娜 郭子强 +8 位作者 李佳乐 罗梦 李丽薇 周艳君 姜一峰 童武 童光志 李兆龙 高飞 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第1期80-85,共6页
本研究通过对猪细小病毒(PPV)1型非结构蛋白NS1基因保守序列进行设计,建立了PPV的TaqMan实时荧光定量PCR方法,实现了对PPV1的快速检测。结果显示,该检测方法的Ct值与标准品质粒在1.0×10^(10)copies/μL~1.0×10^(4)copies/μL... 本研究通过对猪细小病毒(PPV)1型非结构蛋白NS1基因保守序列进行设计,建立了PPV的TaqMan实时荧光定量PCR方法,实现了对PPV1的快速检测。结果显示,该检测方法的Ct值与标准品质粒在1.0×10^(10)copies/μL~1.0×10^(4)copies/μL范围内具有良好的线性关系,曲线回归方程为y=-3.6186x+42.01,R^(2)=0.99,扩增效率为189%;重复性好,组内与组间变异系数均低于1.0898%;敏感性好,最低检测限为1.0×10^(1)copies/μL;特异性强,不与猪圆环病毒2型、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病病毒、猪传染性胃肠炎病毒、非洲猪瘟病毒发生交叉反应,并用该方法对临床样品与病毒拷贝数进行了检测。表明本研究建立的方法重复性好、敏感性高、特异性强,适用于对PPV进行临床检测与诊断。 展开更多
关键词 猪细小病毒 NS1蛋白 TaqMan实时荧光定量PCR
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近年湖南省猪圆环病毒2型感染状况的调查及遗传演化分析 被引量：2
11
作者 范杰 邰易润 +7 位作者 朱艳丽 陈志雄 胡巧云 陈智 刘甜甜 李欣 范仲鑫 葛猛 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第3期1376-1385,共10页
本研究旨在掌握近期湖南省各地区猪圆环病毒2型(PCV2)最新的感染和遗传演化情况。本研究运用qPCR方法对2021-2023年采集自湖南省长沙市、岳阳市、怀化市、常德市、株洲市等14个地级市的1244份肥猪的淋巴结、拭子、脑组织及血样通过qPCR... 本研究旨在掌握近期湖南省各地区猪圆环病毒2型(PCV2)最新的感染和遗传演化情况。本研究运用qPCR方法对2021-2023年采集自湖南省长沙市、岳阳市、怀化市、常德市、株洲市等14个地级市的1244份肥猪的淋巴结、拭子、脑组织及血样通过qPCR进行了病毒核酸检测,筛选出PCV2阳性样品,再通过PCR扩增及测序对PCV2的ORF2基因序列进行分析。结果显示,1244份样品中有778份为PCV2阳性,总阳性率达62.54%,其中邵阳市的PCV2阳性率最高,达92.55%(87/94),郴州市最低,为18.28%(17/93);57株PCV2 ORF2基因测序结果表明,PCV2a、PCV2b和PCV2d占比分别为12.28%、7.02%和80.70%;测序毒株间的ORF2基因核苷酸、氨基酸序列相似性分别为88.5%~100.0%和86.3%~100.0%,存在45个氨基酸差异位点,PCV2d间存在15个差异氨基酸位点,选择压力分析表明,PCV2存在3个阳性选择位点。研究表明:目前,PCV2的突变速率较快,各毒株之间存在较多的氨基酸位点差异,与既往报道相同,本研究中PCV2d已成为绝对优势的流行毒株,PCV2的这些变异可能使现有疫苗保护效果减弱,应予以重视。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 分子流行病学调查 遗传变异 ORF2基因 选择压力
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鸽圆环病毒可视化LAMP检测方法的建立与应用 被引量：2
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作者 赵谜 徐飞飞 +5 位作者 郑丹阳 赵治钤 程瑞 熊超 王军 穆杨 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第1期39-47,共9页
以鸽圆环病毒(PiCV)Rep基因高度保守区为靶标设计环介导等温扩增(LAMP)引物,以甲酚红为指示剂,经条件优化和特异性、敏感性评价等,建立了PiCV的可视化LAMP检测方法,并采用建立的PiCV可视化LAMP方法和常规PCR方法分别对35份鸽临床样品进... 以鸽圆环病毒(PiCV)Rep基因高度保守区为靶标设计环介导等温扩增(LAMP)引物,以甲酚红为指示剂,经条件优化和特异性、敏感性评价等,建立了PiCV的可视化LAMP检测方法,并采用建立的PiCV可视化LAMP方法和常规PCR方法分别对35份鸽临床样品进行PiCV检测并对检测结果进行对比。采用建立的方法在64℃反应60 min后再85℃作用10 min,即可通过目测反应液颜色变化判定检测结果。阳性反应管的反应液由紫红色变为橙色,阴性管反应液颜色不变。采用建立的方法检测鸽腺病毒、鸽疱疹病毒、鸽痘病毒和鸽Ⅰ型副黏病毒等均未出现交叉反应;该方法的最低检测限为17.4 copies/μL重组质粒,表明该方法的灵敏度是常规PCR方法的100倍。采用建立的方法检出PiCV阳性样品16份,常规PCR方法检出阳性样品15份,说明本研究中建立的PiCV可视化LAMP方法可应用于临床检测,为方便快捷地诊断鸽圆环病毒病提供了技术支持。 展开更多
关键词 鸽圆环病毒 可视化 环介导等温扩增 甲酚红 建立
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牛细小病毒2型SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立与应用
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作者 杨澳飞 刘飞飞 +10 位作者 陈慧敏 余祖华 韩新雨 贾东鹭 贾钰航 陈建 魏颖 何雷 马雪连 陈松彪 丁轲 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第3期362-368,共7页
本试验旨在建立一种牛细小病毒2型(bovine parvovirus,BPV-2)的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法。首先参考数据库中不同BPV-2序列,设计VP2基因保守区域特异性引物,优化反应体系,初步建立一种BPV-2特异性SYBRGreenⅠ荧光定量PCR(qPCR)... 本试验旨在建立一种牛细小病毒2型(bovine parvovirus,BPV-2)的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法。首先参考数据库中不同BPV-2序列,设计VP2基因保守区域特异性引物,优化反应体系,初步建立一种BPV-2特异性SYBRGreenⅠ荧光定量PCR(qPCR)方法。结果显示,扩增VP2基因片段长度约156 bp,符合目的基因片段大小,经鉴定所构建的重组质粒正确。用该质粒测得SYBR GreenⅠ荧光定量PCR的最低检测限为3.32×10^(1)copies/μL,而常规PCR方法检测限为3.32×10^(3)copies/μL,表明本研究方法敏感性较高。用该方法检测牛细小病毒Ⅰ型、牛病毒性腹泻病毒、牛轮状病毒、牛冠状病毒、牛疱疹病毒I型时结果均为阴性,表明本方法特异性强。重复性试验结果表明,组内和组间重复变异率均小于1%,表明该方法具有良好的重复性。分别采用本研究所建立的方法和文献中发表的方法对80份腹泻牛粪便进行检测比较。结果显示,两种方法的阳性检出率均为11%(9/80),总符合率达100%。以上结果表明本研究建立基于BPV-2 VP2基因的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法具有良好特异性、灵敏性、重复性,为BPV-2的临床流行病学调查及快速检测提供了新的技术支撑。 展开更多
关键词 牛细小病毒2型 VP2基因 SYBR GreenⅠ荧光定量PCR 建立 应用
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表达PPV VP2蛋白的重组PRRSV基因工程活载体疫苗株的构建与免疫原性评价
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作者 帅文娜 唐银保 +11 位作者 郭子强 李佳乐 罗梦 曾一凡 李丽薇 周艳君 姜一峰 童武 李兆龙 杨倩 童光志 高飞 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第12期1608-1618,共11页
为获得能够有效预防猪繁殖与呼吸综合征和猪细小病毒(PPV)感染的重组活载体疫苗,利用猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)活疫苗的反向遗传操作平台,将PPV的保护性抗原蛋白VP2的基因插入PRRSV的结构蛋白与非结构蛋白之间,构建pPRRSV-PPV-VP2... 为获得能够有效预防猪繁殖与呼吸综合征和猪细小病毒(PPV)感染的重组活载体疫苗,利用猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)活疫苗的反向遗传操作平台,将PPV的保护性抗原蛋白VP2的基因插入PRRSV的结构蛋白与非结构蛋白之间,构建pPRRSV-PPV-VP2的全长感染性克隆,经过Marc-145细胞上的病毒拯救获得重组病毒rPRRSV-PPV-VP2,并比较其与亲本病毒的空斑形态学差异、遗传稳定性、病毒增殖动力学等,同时,将其免疫仔猪以评价其激发猪体免疫反应的效果。结果显示,PPV的VP2基因能够在重组病毒rPRRSV-PPV-VP2中稳定遗传并高效表达;用重组病毒rPRRSV-PPV-VP2免疫的仔猪临床表现正常、剖检与病理切片显示各组织器官无异常病理变化,表明该重组病毒对仔猪具有良好的安全性,同时,其能诱导仔猪同时产生抗PRRSV与PPV的特异性抗体,表明该重组病毒具有良好的免疫原性。检测免疫后第0、7、14、21、28、35天所有试验猪的血清样本,VP2蛋白抗体水平与N蛋白抗体水平均于免疫后第7天转为阳性,同时两种抗体水平分别于第21天与28天达到峰值。以上结果表明,rPRRSV-PPV-VP2是一种具有前瞻性的针对PRRSV与PPV的病毒活载体疫苗。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪细小病毒 重组病毒 活载体疫苗
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猪圆环病毒2型病毒样颗粒三倍轴区域嵌合猪细小病毒抗原表位的展示策略及免疫原性
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作者 蔡云凤 李宏 +8 位作者 黄小铭 何庆 丁振宇 余婉婷 罗施乐 陈方志 王乃东 杨毅 湛洋 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第1期307-318,共12页
为了探索猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2, PCV2)病毒样颗粒三倍轴区域展示外源抗原表位的潜力,本研究借助结构模拟和蛋白质的三维结构展示,分析了PCV2核衣壳表面氨基酸残基突变后的结构差异。通过分析不同cap基因突变质粒在... 为了探索猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2, PCV2)病毒样颗粒三倍轴区域展示外源抗原表位的潜力,本研究借助结构模拟和蛋白质的三维结构展示,分析了PCV2核衣壳表面氨基酸残基突变后的结构差异。通过分析不同cap基因突变质粒在大肠杆菌表达系统中所表达的突变体蛋白的可溶性和纯化难易程度,确定合适的外源表位嵌合区。将嵌合PPV抗原表位的Cap蛋白经体外组装获得重组的病毒样颗粒,将此病毒样颗粒免疫小鼠,通过抗体检测来评价其免疫原性。结果显示,PCV2核衣壳表面三倍轴区域存在两个适合用于展示外源表位的氨基酸区域(分别命名为Motif A和Motif B),相同表达条件下,Motif A区域的突变蛋白均以可溶性表达为主,且能一步纯化获得目的蛋白,而Motif B区域的突变蛋白多以包涵体形式存在;Motif A区域嵌合PPV表位后,纯化的重组蛋白能在体外组装成cVLPs,并通过间接免疫荧光试验证明其保留有野生型VLPs内化PK15细胞的能力;形成的cVLPs能刺激小鼠机体产生分别针对PCV2 VLPs、B5-E1表位和PPV VP2蛋白的抗体。综上表明,PCV2 Cap蛋白Loop GH区域Motif A能够将外源表位展示在病毒样颗粒外表面,并且能够被机体免疫细胞识别产生特异性抗体。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 病毒样颗粒 三倍轴区域 外源表位
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用于传染性支气管炎病毒核酸检测的N蛋白基因装甲RNA质控品的制备
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作者 熊曜宇 刘丹 +6 位作者 高建帅 李慧彤 张博源 丁家波 蒋卉 范学政 沈青春 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第11期5770-5777,共8页
旨在研制可应用于传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus, IBV)核酸检测的质控品。本研究选取IBV较为保守的N蛋白基因作为目标靶序列,将其与MS2噬菌体衣壳蛋白基因、包装位点序列等克隆到载体pET-28a(+)中,经诱导表达和纯化,... 旨在研制可应用于传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus, IBV)核酸检测的质控品。本研究选取IBV较为保守的N蛋白基因作为目标靶序列,将其与MS2噬菌体衣壳蛋白基因、包装位点序列等克隆到载体pET-28a(+)中,经诱导表达和纯化,获得内部包含有IBV的N蛋白基因序列RNA的类病毒颗粒,用电镜观察其物理特征,数字PCR对拷贝数进行精确定量,使用现行国家标准GB/T23197—2022中的实时荧光定量RT-PCR方法对纯化后的装甲RNA进行了检测验证,对RNase酶抵御能力以及保存稳定性也进行了检验。综上,本研究成功构建、表达组装出了包含IBV N基因的装甲RNA,耐RNase酶的降解,可在37℃下可稳定保存15 d以上。制备的装甲RNA具备成为IBV阳性质控品的潜力,可实现对该RNA病毒检测全过程的质控。 展开更多
关键词 禽传染性支气管炎 N蛋白 质控样品 核酸检测 装甲RNA
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一株具有多位点核苷酸替换的新型猪圆环病毒2d亚型毒株的分离与鉴定
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作者 陈云龙 樊港 +4 位作者 樊心怡 郭永超 张鑫淼 王妍 张仕强 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第6期3032-3040,共9页
猪圆环病毒(porcine circovirus,PCV)是引起猪圆环病毒相关性疾病(porcine circovirus associated diseases,PCVAD)的主要病原。患病猪表现为发育不良、呼吸困难、生殖障碍等症状。目前,PCV多种亚型在中国流行,给养猪业造成了巨大经济... 猪圆环病毒(porcine circovirus,PCV)是引起猪圆环病毒相关性疾病(porcine circovirus associated diseases,PCVAD)的主要病原。患病猪表现为发育不良、呼吸困难、生殖障碍等症状。目前,PCV多种亚型在中国流行,给养猪业造成了巨大经济损失。为了鉴定一株疑似新型PCV2感染死亡的猪病料,本研究采集疑似PCV感染的病料组织并对病毒进行分离培养,通过PCR,免疫荧光染色和序列测定分析对病毒进行鉴定。并对阳性样品进行全基因组扩增,测序后与GenBank上其他不同国家和地区来源的28株PCV的同源性、系统发育树和重组特性进行分析。使用6周龄BALB/c小鼠模型,感染毒株后观察不同组织病理切片。使用第5代病毒液滴鼻和颈部肌肉注射两种方式感染14周龄健康猪,观察和分析试验猪的体温、增重、病毒血症、各组织病毒载量等评价该毒株的致病性。结果显示,本试验分离到一株PCV2d亚型毒株,命名为SD02,该毒株全基因组大小为1767 bp(GenBank登录号为OQ730503),其中ORF2大小为705 bp,共编码234个氨基酸。SD02相较于其他已报道的PCV2d毒株,在ORF2编码的Cap蛋白羧基末端增加了1个赖氨酸。SD02株与参考毒株基因全序列的核苷酸同源性为94.2%~99.1%,与22625-33毒株(PCV2d)相似性最高,为99.1%。该毒株感染的小鼠出现明显间质性肺炎和坏死性肝炎等症状。该毒株感染后会引起猪消瘦和生长缓慢等现象,病毒血症存在时间超过21 d,并且具有广泛的组织嗜性,其中各淋巴结病毒载量更高,会引起机体的免疫抑制。本研究为PCV流行病学研究和疫苗开发提供了新的参考。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 分离鉴定 遗传变异分析 致病性
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水獭源犬圆环病毒的全基因组序列分析
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作者 匡尹之 徐凤培 周沛 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第4期1989-1994,共6页
犬圆环病毒(canine circovirus, CanineCV)是一种与犬消化道疾病相关的病毒,该病毒于2012年在美国首次从犬中鉴定。随后,研究人员相继在狼、獾、北极狐、赤狐、豺中检测到了CanineCV。2016年,我国首次报道从犬中检测到CanineCV,然而,关... 犬圆环病毒(canine circovirus, CanineCV)是一种与犬消化道疾病相关的病毒,该病毒于2012年在美国首次从犬中鉴定。随后,研究人员相继在狼、獾、北极狐、赤狐、豺中检测到了CanineCV。2016年,我国首次报道从犬中检测到CanineCV,然而,关于CanineCV在我国野生动物中的感染情况尚不清楚。采集一病死水獭的组织病料,利用PCR进行CanineCV的检测;设计CanineCV全基因组引物,对CanineCV阳性样本进行全基因组扩增、测序和基因序列分析。结果显示:通过PCR检测,发现1份水獭组织样本CanineCV阳性;通过全基因组扩增、测序、拼接,成功获得一条长度为2 063 nt的CanineCV全基因组序列;核苷酸同源性分析显示,该毒株与GenBank中其他毒株的基因序列同源性为84.6%~98.2%;遗传进化树分析发现,该毒株属于CanineCV-3型。首次在水獭中鉴定出CanineCV的感染,并成功获得了我国首条野生动物源CanineCV全基因组序列及其遗传进化信息。以上结果表明CanineCV感染水獭的潜在危害及其感染更多其他动物的可能性,从而提示人们应加强CanineCV感染不同动物的监测。 展开更多
关键词 犬圆环病毒 水獭 流行病学 遗传进化分析
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猪圆环病毒2型、3型和4型检测的三重荧光定量PCR建立及Cap基因变异分析
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作者 王鑫雨 李佳妮 +6 位作者 薄惠文 马琛琛 武文娟 于永乐 杨海燕 马清霞 张传美 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第11期5789-5800,共12页
旨在建立一种快速简便、可同时检测猪圆环病毒(porcine circovirus,PCV)2型、3型和4型三种病原的三重荧光定量PCR检测方法,并应用建立的方法对临床疑似感染PCV的样本进行PCV2、PCV3及PCV4的检测和分子流行病学分析。根据PCV2及PCV3的Re... 旨在建立一种快速简便、可同时检测猪圆环病毒(porcine circovirus,PCV)2型、3型和4型三种病原的三重荧光定量PCR检测方法,并应用建立的方法对临床疑似感染PCV的样本进行PCV2、PCV3及PCV4的检测和分子流行病学分析。根据PCV2及PCV3的Rep蛋白(replicase protein,Rep)基因序列、PCV4的Cap蛋白(capsid protein,Cap)基因序列,设计合成3对特异性引物和3种不同荧光基团标记的TaqMan探针,进行反应体系和反应条件的优化,构建阳性质粒及标准曲线,评价方法的特异性、敏感性和重复性。结果表明,建立的PCV三重荧光定量PCR检测方法特异性强,不同亚型PCV和常见猪病原体均无交叉反应;检测下限均为1.0×10^(2)copies·μL^(-1),批内和批间变异系数均小于2.0%,重复性良好。对检测为阳性的样品进行Cap蛋白基因序列扩增、克隆和测序,获得41条序列,其中11条PCV2a,8条PCV2b,15条PCV2d及7条PCV3a。34条PCV2 Cap蛋白相似性为96.7%~99.7%,7条PCV3 Cap蛋白相似性为97.2%~99.9%。本试验成功建立了一种PCV三重荧光定量PCR,且可检测出不同基因型的猪圆环病毒的混合感染,PCV2d、PCV3a当前依然为国内优势基因型,为临床PCV的准确诊断提供了更快速更精准的检测方法。 展开更多
关键词 猪圆环病毒 荧光定量PCR Cap基因 遗传进化分析
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保定地区猫泛白细胞减少症病毒VP2基因的遗传进化分析
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作者 邹畅 胡月 +1 位作者 李海花 乔家运 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第2期823-831,共9页
[目的]了解保定地区猫泛白细胞减少症病毒(Feline panleukopenia virus,FPV)的流行情况以及其VP2基因遗传变异情况。[方法]从保定市多家宠物医院随机采集20例疑似患猫泛白细胞减少症(feline panleukopenia,FP)的猫粪便和鼻腔分泌物样本... [目的]了解保定地区猫泛白细胞减少症病毒(Feline panleukopenia virus,FPV)的流行情况以及其VP2基因遗传变异情况。[方法]从保定市多家宠物医院随机采集20例疑似患猫泛白细胞减少症(feline panleukopenia,FP)的猫粪便和鼻腔分泌物样本,利用PCR扩增、测序获得FPV VP2全基因序列并对其进行分析,利用Mega 7.0软件构建系统进化树,采用MegAlign软件对其核苷酸序列相似性及关键氨基变异位点进行分析。[结果]20例患猫粪便样品中扩增出16条长度为1755 bp的FPV VP2特异性条带,序列分析表明,FPV VP2基因全长为1755 bp,分离获得的FPV均属于G1分型,与日本分离株V211(登录号:AB054227)亲缘关系较近,与FPV标准株CU-4(登录号:M38246)亲缘关系较远,16条FPV VP2基因之间核苷酸序列相似性为99.1%~100%。16条VP2蛋白序列的13个关键氨基酸位点均相同,与FPV标准株CU-4相比,在第101位氨基酸处出现I-T突变;与5个参考毒株CPV VP2的关键氨基酸位点进行比对,仅第101位氨基酸位点相同,其他位点均存在不同程度变异。[结论]保定区主要流行G1型FPV,且其VP2基因遗传稳定性较强。研究结果丰富了FPV的流行病学资料,为保定地区FPV预防提供了理论依据。 展开更多
关键词 猫泛白细胞减少症病毒(FPV) VP2基因 遗传进化 氨基酸位点
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