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口蹄疫病毒3D蛋白与宿主互作蛋白的筛选及鉴定
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作者 刘永杰 兰喜 +4 位作者 李玉星 张勇 何继军 尚佑军 郑海学 《中国兽医科学》 北大核心 2026年第1期13-19,共7页
口蹄疫是由口蹄疫病毒(FMDV)引起的猪、牛、羊等偶蹄类动物急性、热性,高度接触性传染病。FMDV 3D蛋白是病毒编码RNA的RNA依赖性聚合酶(3D^(pol)),是病毒RNA复制的重要蛋白,有关3D蛋白与宿主蛋白相互作用的报道较少。本研究应用PK-15细... 口蹄疫是由口蹄疫病毒(FMDV)引起的猪、牛、羊等偶蹄类动物急性、热性,高度接触性传染病。FMDV 3D蛋白是病毒编码RNA的RNA依赖性聚合酶(3D^(pol)),是病毒RNA复制的重要蛋白,有关3D蛋白与宿主蛋白相互作用的报道较少。本研究应用PK-15细胞cDNA酵母表达文库,利用酵母双杂交技术,最终获得与3D有潜在相互作用的15个宿主潜在蛋白,通过免疫共沉淀和共聚焦试验进一步验证,鉴定出宿主ataxin-3和voltage-dependent anion channel 1(VDAC1)与3D具有相互作用,研究结果为宿主蛋白与3D蛋白相互作用在病毒复制中的功能提供了数据支撑。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 3D蛋白 酵母双杂交技术 蛋白质相互作用
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猫杯状病毒感染性克隆的构建及拯救病毒的鉴定
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作者 朱雪敏 李鑫基 +7 位作者 华炯钢 陈柳 叶伟成 张传亮 朱寅初 付媛 张存 云涛 《中国兽医科学》 北大核心 2026年第1期20-26,共7页
旨在建立猫杯状病毒(FCV)反向遗传系统,以探究FCV的致病机制,为后续疫苗研发提供科学依据。以FCV HZ2024株为对象,构建DNA-launched感染性克隆系统。FCV全基因组的4个片段被依次插入pAY-CHS重组质粒后转染F81细胞并传代鉴定。结果显示,F... 旨在建立猫杯状病毒(FCV)反向遗传系统,以探究FCV的致病机制,为后续疫苗研发提供科学依据。以FCV HZ2024株为对象,构建DNA-launched感染性克隆系统。FCV全基因组的4个片段被依次插入pAY-CHS重组质粒后转染F81细胞并传代鉴定。结果显示,FCV HZ2024基因片段扩增后插入DNA-launched系统质粒,成功构建DNA-launched系统拯救病毒rFCV HZ2024-RE,转染细胞24 h后出现细胞病变效应,病毒滴度稳定在10^(7)~10^(8T)CID_(50)/m L。间接免疫荧光检测证实VP1蛋白抗原表位完全保留,重组病毒的衣壳蛋白成功表达。且重组病毒与亲本毒株的复制动力学高度相似,蚀斑形态无显著差异。Eco R V酶切及测序验证表明,突变位点(C7183T、A7186C)被精准引入且稳定遗传。总之,构建的DNA-launched系统实现了FCV高效拯救与精准遗传。 展开更多
关键词 猫杯状病毒 感染性克隆 反向遗传学 病毒拯救
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骆驼传染性脓疱病毒首次在阿勒泰地区双峰驼中流行
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作者 张秋玉 张格 +7 位作者 冯雅茹 王俊皓 杨梓纯 储岳峰 王世民 冉多良 陈刚粮 李斌 《中国兽医科学》 北大核心 2026年第1期90-96,共7页
2022年7月起,阿勒泰地区部分骆驼养殖场陆续出现疑似骆驼传染性脓疱病例并迅速传播。为鉴定此次疫情的病原,摸清其流行情况,从阿勒泰地区福海县、吉木乃县、哈巴河县采集10份患病骆驼唇部痂皮样品及2份唇部组织样品,提取样品DNA后分别... 2022年7月起,阿勒泰地区部分骆驼养殖场陆续出现疑似骆驼传染性脓疱病例并迅速传播。为鉴定此次疫情的病原,摸清其流行情况,从阿勒泰地区福海县、吉木乃县、哈巴河县采集10份患病骆驼唇部痂皮样品及2份唇部组织样品,提取样品DNA后分别以羊传染性脓疱病毒、山羊痘病毒、绵羊痘病毒、牛结节性皮肤病病毒、骆驼痘病毒、骆驼传染性脓疱病毒(CCEV)的检测引物进行PCR,对阳性样品测序分析;随后对骆驼唇部组织样品进行病理切片观察;最后,以临床观察法调查上述地区CCEV的感染情况。测序结果表明,10份痂皮样品中的病毒均为CCEV,且与苏丹分离株(MN701775)和沙特阿拉伯分离株(KR231670)的同源性最高。病理结果显示,唇部组织局部可见表皮及浅层真皮坏死,可见少量坏死的细胞碎片,伴有少量浸润的淋巴细胞和粒细胞。流行病学调查结果显示,阿勒泰地区骆驼平均感染率为16.69%(311/1863),其中成年驼的平均感染率为18.07%(281/1555),显著高于幼驼的平均感染率(9.74%,30/308)(P<0.05)。本研究结果表明CCEV已在阿勒泰地区广泛流行,须引起兽医工作者的重视。 展开更多
关键词 新疆 骆驼 传染性脓疱病毒 分离鉴定 流行病学调查
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基于牛病毒性腹泻病毒核心蛋白C间接ELISA抗体检测方法的建立
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作者 贾东鹭 阮武营 +11 位作者 刘飞飞 李星仪 杨澳飞 尹波 陈慧敏 陈建 魏颖 何雷 余祖华 马雪连 丁轲 陈松彪 《中国兽医科学》 北大核心 2026年第1期63-70,共8页
为建立基于牛病毒性腹泻病毒(BVDV)核心蛋白C的间接ELISA检测方法,通过PCR扩增出BVDV C基因,克隆至原核表达载体pET-32a,构建重组质粒pET-32a-C,经IPTG诱导表达纯化后免疫BABL/c小鼠制备多克隆抗体,以C蛋白为包被抗原,建立间接ELISA检... 为建立基于牛病毒性腹泻病毒(BVDV)核心蛋白C的间接ELISA检测方法,通过PCR扩增出BVDV C基因,克隆至原核表达载体pET-32a,构建重组质粒pET-32a-C,经IPTG诱导表达纯化后免疫BABL/c小鼠制备多克隆抗体,以C蛋白为包被抗原,建立间接ELISA检测方法。结果显示,pET-32a-C重组质粒构建成功,重组C蛋白大小约为30 k Da,能够以可溶形式表达,30℃、0.8 mmol/L IPTG诱导6 h可溶性表达最佳;该蛋白免疫BABL/c小鼠后制备血清抗体效价为1∶128000,能够特异性识别C蛋白。该ELISA检测方法的最适条件为:0.5μg/m L抗原37℃包被2 h,10 g/L BSA溶液37℃封闭3 h,1∶16000稀释血清孵育2 h,二抗孵育40 min,避光显色10 min,阴阳性临界值判定标准为0.224,具有良好的特异性和重复性。利用本方法对未免疫接种的疑似BVDV感染的牛血清进行检测,与RT-qPCR核酸检测方法相比,二者阳性符合率达94.73%。上述结果表明,基于C蛋白建立的间接ELISA抗体检测方法特异性强、灵敏度高、重复性好,为BVDV临床诊断及开发基于C蛋白的间接ELISA检测试剂盒奠定了基础。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 核心蛋白C 原核表达 多克隆抗体 间接ELISA
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猫传染性腹膜炎病毒对猫免疫功能的影响及甘露消毒丹和虫草素调节机制研究
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作者 郭昊彤 彭佳仪 +3 位作者 宋健 李佳 张倩 陈武 《中国兽医科学》 北大核心 2026年第1期1-12,共12页
旨在探究猫传染性腹膜炎病毒(FIPV)刺激对猫外周血单个核细胞(PBMC)免疫功能及磷酸二酯酶(PDE)相关基因表达的影响,为揭示FIPV引起的相关免疫机制和临床中药治疗积累数据。首先,分离猫PBMC并分为对照组、低浓度FIPV组和高浓度FIPV组。... 旨在探究猫传染性腹膜炎病毒(FIPV)刺激对猫外周血单个核细胞(PBMC)免疫功能及磷酸二酯酶(PDE)相关基因表达的影响,为揭示FIPV引起的相关免疫机制和临床中药治疗积累数据。首先,分离猫PBMC并分为对照组、低浓度FIPV组和高浓度FIPV组。通过流式细胞术、酶联免疫吸附试验(ELISA)观察FIPV刺激下免疫细胞、免疫球蛋白和一些免疫因子的变化;利用实时荧光定量PCR检测FIPV刺激下不同质量浓度虫草素与甘露消毒丹(GXM)对CRFK细胞和PBMC内的磷酸二酯酶1B(PDE1B)基因、磷酸二酯酶4B(PDE4B)基因相对表达量的影响;通过ELISA检测FIPV刺激下不同质量浓度虫草素与GXM作用后CRFK细胞和PBMC内环磷酸腺苷(cAMP)的含量。结果显示,低浓度的FIPV病毒液对CD4^(+)T细胞表现出一定的抑制作用,高剂量时转为促进作用。随着病毒量的递增,CD8^(+)T细胞受到显著抑制且CD4^(+)/CD8^(+)比值显著增高;FIPV刺激下PBMC表现出显著的免疫球蛋白M水平上调,免疫球蛋白G水平下调;FIPV刺激后,PBMC分泌肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-4增多,白细胞介素-2、白细胞介素-6减少;FIPV能通过下调PDE4B、PDE1B基因的表达来降低cAMP水平,而GXM和虫草素能上调两者的表达水平,促进cAMP恢复正常水平。综上所述,低浓度的FIPV刺激下细胞免疫较强于体液免疫,高浓度FIPV则相反;FIPV能降低PDE4B、PDE1B基因表达水平并减少cAMP的分泌;GXM和虫草素能上调PDE4B、PDE1B基因表达水平并促进cAMP恢复正常水平,有望成为临床猫传染性腹膜炎治疗药物。 展开更多
关键词 猫传染性腹膜炎 免疫 PDES 虫草素 甘露消毒丹
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牛病毒性腹泻病毒单克隆抗体的制备及抗原捕获ELISA检测方法的建立
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作者 赵嘉豪 李树凡 +4 位作者 薛凤 王君 张灿 刘文华 徐守振 《中国兽医科学》 北大核心 2026年第1期56-62,共7页
为了制备牛病毒性腹泻病毒(BVDV)单克隆抗体及建立抗原捕获ELISA检测方法,采用大肠杆菌原核表达的BVDV Erns截短蛋白免疫BALB/c小鼠,三免后利用细胞融合和杂交瘤筛选,选用效价高的单克隆抗体,通过条件优化建立BVDV抗原捕获ELISA检测方法... 为了制备牛病毒性腹泻病毒(BVDV)单克隆抗体及建立抗原捕获ELISA检测方法,采用大肠杆菌原核表达的BVDV Erns截短蛋白免疫BALB/c小鼠,三免后利用细胞融合和杂交瘤筛选,选用效价高的单克隆抗体,通过条件优化建立BVDV抗原捕获ELISA检测方法,对其特异性、敏感性和重复性进行了验证,并与IDEXX商品化试剂盒及RT-PCR进行临床样品符合。结果显示,获得2株效价较高的Ig G1型单克隆抗体杂交瘤细胞2B3、2B10,轻链均为κ链。选用效价更高的2B10单克隆抗体作为检测抗体,家兔源BVDV多克隆抗体作为捕获抗体,建立的BVDV抗原捕获ELISA与临床常见病原(牛轮状病毒、牛冠状病毒、牛副流感病毒3型、牛呼吸道合胞体病毒、牛支原体)无交叉反应,最低可检测102.53TCID50的BVDV病毒液,批内和批间变异系数均低于5%,与IDEXX试剂盒和RT-PCR的总体符合率分别为91.76%~93.33%和94.12%~96.67%。结果表明,基于2B10单克隆抗体建立的BVDV抗原捕获ELISA检测方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,为BVDV的检测和防控提供了借鉴和技术手段。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 Erns蛋白 单克隆抗体 ELISA
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鹅星状病毒ORF2蛋白多克隆抗体制备及鉴定
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作者 赵忠麒 邹蒙蒙 +5 位作者 张芸菁 何丽霞 武松山 张欣欣 杨桂君 李广兴 《中国畜牧兽医》 北大核心 2026年第1期368-377,共10页
【目的】采用原核表达系统表达鹅星状病毒(Goose astrovirus,GAstV)ORF2蛋白,并制备其兔抗多克隆抗体,为该病毒致病机制和诊断方法研究提供物质基础。【方法】构建重组原核表达质粒pGEX-6P-1-ORF2,并通过PCR和双酶切对重组质粒鉴定后,... 【目的】采用原核表达系统表达鹅星状病毒(Goose astrovirus,GAstV)ORF2蛋白,并制备其兔抗多克隆抗体,为该病毒致病机制和诊断方法研究提供物质基础。【方法】构建重组原核表达质粒pGEX-6P-1-ORF2,并通过PCR和双酶切对重组质粒鉴定后,将其转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,通过IPTG诱导蛋白表达并优化反应条件,获得GAstV ORF2蛋白。利用纯化的GAstV ORF2蛋白免疫新西兰大白兔,制备兔抗GAstV ORF2多克隆抗体。采用间接ELISA法测定多克隆抗体效价,通过Western blotting和间接免疫荧光(IFA)法检测多克隆抗体的免疫原性和特异性;为了明确GAstV在雏鹅组织中的嗜性和定位,利用制备的多克隆抗体,通过免疫组织化学(IHC)法检测感染雏鹅肝脏和肾脏组织中的病毒分布情况。【结果】PCR和双酶切鉴定表明成功构建重组原核表达质粒pGEX-6P-1-ORF2,通过原核表达成功获得GAstV ORF2蛋白,纯化后蛋白浓度为1.38 mg/mL。免疫新西兰大白兔后获得兔抗GAstV ORF2蛋白多克隆抗体,其效价达1∶100000。Western blotting结果显示,多克隆抗体与纯化后GAstV ORF2蛋白出现特异性反应条带;IFA结果显示,多克隆抗体与GAstV及真核表达GAstV ORF2蛋白产生特异性反应;IHC检测结果显示,GAstV在感染雏鹅的肝脏与肾脏广泛分布,GAstV特异性表达于实质细胞与炎性细胞的胞浆内。【结论】本研究成功构建重组原核表达质粒pGEX-6P-1-ORF2,并进行体外诱导表达制备了兔抗GAstV ORF2蛋白多克隆抗体,该多克隆抗体效价高、特异性强,可用于GAstV感染雏鹅体内病毒抗原检测。 展开更多
关键词 鹅星状病毒(GAstV) ORF2蛋白 原核表达 多克隆抗体
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猪盖塔病毒Cap蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备
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作者 魏炳燕 邢璐璐 +4 位作者 张璞 孙思祺 黄舒怡 刘天龙 董彦君 《中国兽医科学》 北大核心 2026年第1期83-89,共7页
为制备猪盖塔病毒(GETV)Cap蛋白多克隆抗体并探索其应用潜力,首先构建pCold-TF-Cap重组质粒,通过0.4 mmol/L IPTG诱导高效表达可溶性TF-Cap融合蛋白。经Ni-NTA亲和层析纯化后,利用SDS-PAGE鉴定重组蛋白纯度较高,BCA法测得蛋白浓度为22 m... 为制备猪盖塔病毒(GETV)Cap蛋白多克隆抗体并探索其应用潜力,首先构建pCold-TF-Cap重组质粒,通过0.4 mmol/L IPTG诱导高效表达可溶性TF-Cap融合蛋白。经Ni-NTA亲和层析纯化后,利用SDS-PAGE鉴定重组蛋白纯度较高,BCA法测得蛋白浓度为22 mg/m L。以纯化的融合蛋白与佐剂乳化后免疫6~8周龄BALB/c小鼠,成功制备效价达1∶128000的鼠源多克隆抗体。通过Western-blot分析与间接免疫荧光试验(IFA),证实该多克隆抗体能够特异性识别GETV感染的BHK-21细胞内源性Cap蛋白。此外,以制备的多克隆抗体为一抗、酶标羊抗鼠Ig G为二抗,建立了检测GETV感染小鼠脾和肝组织中Cap蛋白的免疫组织化学(IHC)检测方法。结果显示,阳性信号清晰定位于细胞质中,呈现明显的棕色信号。本研究成功制备了特异性强的GETV Cap蛋白多克隆抗体,并建立了配套IHC检测方法,为GETV的基础研究和临床诊断提供了可靠的免疫学工具。 展开更多
关键词 盖塔病毒 CAP蛋白 原核表达 多克隆抗体 免疫组织化学
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猪瘟病毒劫持ESCRT-Ⅲ与VPS4A调控线粒体自噬从而促进病毒复制的机制
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作者 《中国兽医科学》编辑部 周斌(审核人) 《中国兽医科学》 北大核心 2026年第1期141-142,共2页
猪瘟病毒(CSFV)感染可诱导线粒体自噬。内吞体分选转运复合物(ESCRT)在饥饿诱导的自噬过程中对吞噬泡闭合及自噬体-溶酶体融合起关键调控作用。2025年7月9日,南京农业大学周斌教授带领的研究团队在Autophagy杂志发表了题为“Classical s... 猪瘟病毒(CSFV)感染可诱导线粒体自噬。内吞体分选转运复合物(ESCRT)在饥饿诱导的自噬过程中对吞噬泡闭合及自噬体-溶酶体融合起关键调控作用。2025年7月9日,南京农业大学周斌教授带领的研究团队在Autophagy杂志发表了题为“Classical swine fever virus hijacks ESCRT-Ⅲand VPS4A to promote phagophore closure for accelerat ing mit ophagy”的研究论文,首次证实在CSFV诱导的线粒体自噬过程中,ESCRT-Ⅲ亚基(CHMP1A、CHMP1B和CHMP4B)及AAA-ATP酶VPS4A是CSFV诱导的线粒体自噬中吞噬泡闭合的关键调控因子,揭示了病毒操纵宿主细胞通路的新机制。 展开更多
关键词 自噬体 猪瘟病毒 内吞体分选转运复合体 线粒体自噬 吞噬泡闭合
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Rab27a及其效应分子SYTL1/4调控流感病毒膜蛋白转运
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作者 《中国兽医科学》编辑部 周红波(审核人) 《中国兽医科学》 北大核心 2026年第1期140-140,共1页
A型流感病毒(influenza A virus,IAV)完全依赖于宿主蛋白完成自身的生命周期。然而,调控其膜蛋白转运的分子机制尚不清楚。2025年7月8日,华中农业大学周红波教授带领的研究团队在Nature Communications上发表了题为“Rab27a regulates t... A型流感病毒(influenza A virus,IAV)完全依赖于宿主蛋白完成自身的生命周期。然而,调控其膜蛋白转运的分子机制尚不清楚。2025年7月8日,华中农业大学周红波教授带领的研究团队在Nature Communications上发表了题为“Rab27a regulates the transport of influenza virus membrane proteins to the plasma membrane”的研究论文,揭示了Rab27a及其效应分子SYTL1和SYTL4通过促进流感病毒膜蛋白转运从而有利于病毒粒子出芽的分子机制。 展开更多
关键词 流感病毒 膜蛋白转运 Rab27a SYTL1 SYTL4
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“卡盒式”非洲猪瘟病毒核酸一体化快检试剂的研制及应用
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作者 史喜菊 张伟 +8 位作者 赵相鹏 白子龙 赖平安 韦海涛 臧越鹏 汪琳 王素秋 杜思乐 高志强 《中国兽医科学》 北大核心 2026年第1期71-76,共6页
介绍了一种“卡盒式”非洲猪瘟病毒核酸快检试剂的研制及应用,该试剂将核酸提取和荧光PCR反应集成到完全封闭的“卡盒式”反应管中,在25 min内自动化完成样本处理和PCR反应。试剂性能参数测试结果显示,特异性为100%,敏感性达608.5 copie... 介绍了一种“卡盒式”非洲猪瘟病毒核酸快检试剂的研制及应用,该试剂将核酸提取和荧光PCR反应集成到完全封闭的“卡盒式”反应管中,在25 min内自动化完成样本处理和PCR反应。试剂性能参数测试结果显示,特异性为100%,敏感性达608.5 copies/m L,中浓度和低浓度样本的组内和组间变异系数均小于5%,重复性良好;经90份已知感染状态的样品验证和符合性测试结果显示,与WOAH推荐的非洲猪瘟病毒核酸荧光PCR(1.3.4法)相比,阳性样品的符合率为100%(41/41),阴性样品的符合率为97.96%(48/49),总符合率为98.89%(89/90)。从87份临床样品中,用“卡盒式”快检试剂筛查出14份阳性,检测敏感性高于WOAH推荐的荧光PCR法。结果表明,研发的“卡盒式”快检系统敏感性高、操作简便,适用于非洲猪瘟病毒现场快检。 展开更多
关键词 非洲猪瘟 现场快检 “卡盒式”一体化试剂
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猪急性腹泻综合征冠状病毒通过调控细胞胆固醇促进合胞体形成的机制
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作者 《中国兽医科学》编辑部 冯力(审核人) 石达(审核人) 《中国兽医科学》 北大核心 2026年第1期138-139,共2页
猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)是近年来新发现的一种猪肠道冠状病毒,其传播特性和致病机制尚未完全解析。2025年6月30日,中国农业科学院哈尔滨兽医研究所冯力团队在m Bio期刊上发表了题为“The swine acute diarrhea syndrome cor... 猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)是近年来新发现的一种猪肠道冠状病毒,其传播特性和致病机制尚未完全解析。2025年6月30日,中国农业科学院哈尔滨兽医研究所冯力团队在m Bio期刊上发表了题为“The swine acute diarrhea syndrome coronavirus spike protein promotes syncytial formation via upregulation of cellular cholesterol synthesis”的研究文章,从细胞水平上揭示了SADS-CoV通过利用宿主细胞膜的脂质成分参与复制的新机制。 展开更多
关键词 猪急性腹泻综合征冠状病毒 胆固醇 合胞体
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猪繁殖与呼吸综合征病毒生命周期的研究进展 被引量:3
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作者 刘爱军 张传亮 +1 位作者 黄晓兵 周彩琴 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第3期1027-1041,共15页
猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的以猪呼吸系统疾病和母猪繁殖障碍为主要特征的传染病,给全球... 猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的以猪呼吸系统疾病和母猪繁殖障碍为主要特征的传染病,给全球养猪业造成了巨大的经济损失。然而,PRRS至今仍没有安全有效的疫苗和药物进行防治。全面深入理解PRRSV生命周期可以为PRRS防控提供新的思路。因此,本文在简述PRRSV生命周期的基础上,重点对病毒侵入、复制与转录、翻译及翻译后修饰、组装等过程的研究进展进行综述,以期为PRRSV致病机制及防控研究提供参考。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 入侵 复制和转录 翻译及翻译后修饰 组装
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浙江省地方品种鸡禽白血病的流行病学调查与净化策略评估
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作者 倪征 卢磊 +7 位作者 朱寅初 陈柳 李鑫基 叶伟成 云涛 华炯钢 付媛 张存 《浙江农业学报》 北大核心 2025年第4期790-799,共10页
为了解浙江省部分地方品种鸡禽白血病病毒(ALV)的感染情况,并评估禽白血病(AL)净化效果,本研究于2021—2024年采集浙江省6种地方品种鸡的雏鸡胎粪、母鸡蛋清与公鸡血浆样本合计163453份,通过检测ALV p27抗原的阳性率分析ALV的感染情况,... 为了解浙江省部分地方品种鸡禽白血病病毒(ALV)的感染情况,并评估禽白血病(AL)净化效果,本研究于2021—2024年采集浙江省6种地方品种鸡的雏鸡胎粪、母鸡蛋清与公鸡血浆样本合计163453份,通过检测ALV p27抗原的阳性率分析ALV的感染情况,并进行连续3个世代的AL净化,评估净化效果。同时,对阳性样品进行病毒的分离鉴定和组织病理学检查,通过扩增分离株的囊膜糖蛋白gp 85基因,对分离的ALV进行了遗传进化分析。研究结果显示,被调查的6种地方品种鸡均存在ALV感染,p27抗原的群体平均阳性率为10.02%,其中,白耳黄鸡的阳性率最高,为43.87%。经过3个世代的净化,各样本的阳性率均明显下降,但不同品种的下降幅度差异明显,江山乌骨鸡的净化效果最优,3个世代后蛋清和血浆的阳性率均为0。从阳性样本中分离到2株ALV(ZJU2401和ZJU2402),经进化树分析均属于J亚群。研究结果表明,本净化方案切实可行,研究结果可为浙江省地方品种鸡群AL的净化和防控工作提供参考依据和数据支持。 展开更多
关键词 禽白血病 净化效果评估 gp 85基因 遗传进化
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一株塞内卡病毒A型的分离鉴定及演化分析
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作者 王淑娟 王东方 +6 位作者 马震原 赵雪丽 刘影 杨海波 柴茂 王翠 闫若潜 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第6期3041-3046,共6页
河南某免疫过口蹄疫疫苗的猪场出现水泡样疫病,疑似感染A型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)。本研究旨在分离鉴定该病毒,并进行遗传演化分析。将RT-PCR和FQ-PCR检测为核酸阳性的样品接种BHK-21细胞,并进行传代培养。通过间接免疫荧光试... 河南某免疫过口蹄疫疫苗的猪场出现水泡样疫病,疑似感染A型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)。本研究旨在分离鉴定该病毒,并进行遗传演化分析。将RT-PCR和FQ-PCR检测为核酸阳性的样品接种BHK-21细胞,并进行传代培养。通过间接免疫荧光试验、电镜观察、病毒全基因组序列测定等对该毒株进行鉴定,并进行演化分析。结果表明,该毒株为SVA,将其命名为HeNXX/swine/2017;电镜观察发现该病毒粒子呈典型的二十面体,直径30 nm左右;该毒株可在BHK-21细胞上高效增殖,病毒滴度最高为10^(9.5) TCID_(50)·mL^(-1);基因组全长7288 bp(不含PolyA),与美国毒株同源性最高。本研究成功分离到一株SVA,为相关疾病的进一步研究提供基础。 展开更多
关键词 A型塞内卡病毒 分离 鉴定 演化分析
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2020—2024年广西H3N2亚型禽流感病毒HA和NA基因分子特征分析
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作者 尹彦文 熊陈勇 +14 位作者 韦伟 施开创 郑敏 崔鹏飞 韦显凯 李致远 刘惠心 冯淑萍 卢春花 屈素洁 陆文俊 李雪珍 王睿敏 邓国华 欧长波 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第9期4358-4367,共10页
【目的】探究H3N2亚型禽流感病毒(AIV)广西毒株分子遗传进化特征。【方法】采集2020—2024年广西各地的家禽咽拭子和肛拭子病料,采用实时荧光定量RT-PCR方法鉴别检测H3N2亚型AIV,选取部分阳性样本经尿囊腔接种SPF鸡胚,收集鸡胚尿囊液,... 【目的】探究H3N2亚型禽流感病毒(AIV)广西毒株分子遗传进化特征。【方法】采集2020—2024年广西各地的家禽咽拭子和肛拭子病料,采用实时荧光定量RT-PCR方法鉴别检测H3N2亚型AIV,选取部分阳性样本经尿囊腔接种SPF鸡胚,收集鸡胚尿囊液,提取核酸后通过PCR扩增血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因并测序,进行序列相似性、系统发育、氨基酸变异位点及遗传进化速率分析。【结果】共获得43株HA和NA基因序列,编码区大小为1 701和1 410 bp。相似性比对分析显示,本研究获得的HA和NA基因之间核苷酸序列相似性分别为86.0%~99.9%和89.7%~99.9%,与GenBank中禽源、人源、猪源和犬源核苷酸序列相似性分别为78.4%~99.7%和78.1%~99.1%。广西H3N2亚型AIV毒株HA和NA基因属于欧亚谱系,与禽源亲缘关系最近,与人源/猪源最远。HA蛋白在第18—20、22—24、38—40、54—56、61—63、181—183、301—303和499—501位氨基酸处出现糖基化,NA蛋白在第61—63、69—71、86—88、143—145、146—148、200—202、234—236、313—315和402—404位氨基酸处出现糖基化,部分氨基酸位点发生变异;HA蛋白裂解位点为340PEKQTR↓GLF348和340PERQTR↓GLF348。遗传进化速率估算结果显示,HA和NA基因遗传进化速率分别为3.26×10^(-3)和3.67×10^(-3)替换/(位点·年),HA基因种群规模在不同时间段表现出不同的动态进化特征。【结论】H3N2亚型AIV广西流行毒株与同种流行毒株亲缘性较近,部分HA和NA蛋白发生特有氨基酸突变,不同种属毒株进化趋势不一致,具有遗传多样性特征。试验结果为防控H3N2亚型AIV提供基础数据。 展开更多
关键词 禽流感病毒 H3N2亚型 遗传进化 相似性
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鸭瘟病毒疫苗株UL35缺失株的构建及其免疫保护效果评价
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作者 陈柳 相生瑞 +5 位作者 云涛 倪征 华炯钢 朱寅初 张存 叶伟成 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第8期3933-3941,共9页
为研究鸭瘟病毒(duck enteritis virus,DEV)UL35基因缺失DEV疫苗株的生物学特性和对强毒株攻击的免疫保护效果,本研究在鸭瘟病毒疫苗株感染性克隆pDEV-EF1基础上,通过“Red E/T两步重组”技术,构建了UL35基因缺失的pDEV-ΔVP26突变体克... 为研究鸭瘟病毒(duck enteritis virus,DEV)UL35基因缺失DEV疫苗株的生物学特性和对强毒株攻击的免疫保护效果,本研究在鸭瘟病毒疫苗株感染性克隆pDEV-EF1基础上,通过“Red E/T两步重组”技术,构建了UL35基因缺失的pDEV-ΔVP26突变体克隆,并转染鸡胚成纤维细胞(CEFs)获得了重组病毒rDEV-ΔVP26,进而对重组病毒细胞生物学特性和免疫保护能力进行了评估。病毒一步生长曲线测定表明,rDEV-ΔVP26的滴度从24~84 h稳步上升,达到峰值10^(5.36)TCID_(50)·0.1 mL^(-1)。在此期间,rDEV-ΔVP26滴度较亲本毒株rDEV-EF1相比有所降低。蚀斑面积测定发现rDEV-ΔVP26蚀斑面积较亲本株rDEV-EF1减少了10.60%,说明UL35基因缺失会轻微影响病毒扩散并降低病毒滴度。动物试验表明,1×10^(6)TCID_(50)的rDEV-ΔVP26对30日龄麻鸭无致病作用,且1×10^(5)TCID_(50)滴度的rDEV-ΔVP26免疫组在强毒株攻击下的保护率与相同剂量的rDEV-EF1对照组一致。该研究表明,UL35为DEV复制非必需基因,且当接种合适剂量的病毒液时,UL35缺失不影响鸭瘟病毒疫苗株的免疫保护效果。该研究为研发用于区分疫苗免疫和野毒感染的DEV鉴别诊断疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 鸭瘟病毒 VP26 非必需基因 鉴别诊断
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猪流行性腹泻病毒感染对仔猪肠道损伤及肠道细胞巨泡式死亡的影响
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作者 陈琳琳 著龙祥 +6 位作者 祖少坡 陈红英 李庆豪 金鑫 李艺雷 马世杰 魏战勇 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第12期6271-6280,共10页
为了探讨猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)新型野毒株对初生仔猪肠道损伤及肠道细胞巨泡式死亡的影响,选取8头5日龄的健康仔猪,随机分为空白对照组(Mock组)和PEDV感染组,病毒感染后记录临床症状并在2 d后实施安... 为了探讨猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)新型野毒株对初生仔猪肠道损伤及肠道细胞巨泡式死亡的影响,选取8头5日龄的健康仔猪,随机分为空白对照组(Mock组)和PEDV感染组,病毒感染后记录临床症状并在2 d后实施安乐死,之后分别采集十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠和直肠的组织样品。采用苏木精-伊红(HE)染色、免疫组织化学(IHC)染色、RT-qPCR和Western blot技术检测PEDV感染仔猪后各肠段的组织病理学变化、病毒在肠道中的定位及对巨泡式死亡的影响。HE染色结果显示,PEDV对仔猪各肠段黏膜结构均有不同程度的损伤,其中对空肠的损伤最为严重。RT-qPCR结果证实PEDV感染仔猪后,空肠中病毒载量最高。IHC染色发现PEDV主要分布在小肠黏膜的上皮层中,其中在空肠中阳性信号最多,与RT-qPCR结果一致。深入研究揭示PEDV感染组的空肠组织中巨泡式死亡相关基因Rac1(Ras相关C3肉毒菌毒素底物1)、Rab7(Ras相关蛋白7)和LAMP1(溶酶体相关膜蛋白1)的表达量显著上调,Western blot试验也进一步证实了这一发现。以上结果表明,PEDV新型野毒株感染仔猪后主要定位于小肠,对空肠的损伤最严重,并使空肠发生巨泡式死亡。本研究可为深入理解PEDV的感染发病机制提供可靠的参考依据。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 空肠 病理损伤 巨泡式死亡
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携带FPV VP2基因的重组减毒鼠伤寒沙门菌口服疫苗免疫原性研究
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作者 陈慧敏 王文婕 +7 位作者 韩新雨 贾钰航 余祖华 贾艳艳 廖成水 丁轲 尚珂 陈松彪 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第7期947-952,共6页
本试验旨在评价表达泛猫白细胞减少综合症病毒(FPV)VP2蛋白的重组减毒鼠伤寒沙门菌SL1344ΔcrpΔasd口服疫苗的免疫原性。将重组菌按照10^(6)CFU/只的剂量口服免疫6周龄雌性KM小鼠,在免疫后第7、14、21、28、35和42天进行称重,检测VP2... 本试验旨在评价表达泛猫白细胞减少综合症病毒(FPV)VP2蛋白的重组减毒鼠伤寒沙门菌SL1344ΔcrpΔasd口服疫苗的免疫原性。将重组菌按照10^(6)CFU/只的剂量口服免疫6周龄雌性KM小鼠,在免疫后第7、14、21、28、35和42天进行称重,检测VP2特异性Ig G抗体、中和抗体、IL-4和IFN-γ水平的变化。同时口服免疫8周龄健康田园猫,检测疫苗的攻毒保护效果。结果显示,与对照组相比,重组菌免疫后对小鼠体重无明显影响(P>0.05);重组菌免疫小鼠后能够显著诱导血清中针对VP2特异性抗体和中和抗体水平(P<0.05);IL-4和IFN-γ细胞因子水平显著升高(P<0.05),且在免疫后第28天达到峰值;重组菌免疫猫后对FPV感染具有一定程度的免疫保护效果,可明显降低实验猫致死率并且延缓发病时间和发病程度。以上结果表明,构建的FPV VP2重组减毒鼠伤寒沙门菌口服疫苗能够有效刺激机体产生免疫应答且具有较好的免疫保护效力,为进一步研发FPV新型疫苗奠定了良好基础。 展开更多
关键词 泛猫白细胞减少综合症病毒 VP2 SL1344ΔcrpΔasd 口服疫苗 免疫原性
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猫传染性腹膜炎病毒S和3c基因遗传进化分析及其S蛋白免疫原性研究
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作者 张婷 刘童通 +6 位作者 李春雨 姚孟 李炜 杨勃 孙子龙 牛胜 张鼎 《动物医学进展》 北大核心 2025年第6期18-25,共8页
猫传染性腹膜炎病毒(FIPV)属于冠状病毒属成员,是引起猫传染性腹膜炎(FIP)发生的病原体。FIPV感染给猫健康造成巨大威胁,阐明FIPV遗传变异特征及主要抗原蛋白免疫原性对FIP防控具有重要意义。扩增4株FIPV山西株S和3c基因,分析FIPV山西... 猫传染性腹膜炎病毒(FIPV)属于冠状病毒属成员,是引起猫传染性腹膜炎(FIP)发生的病原体。FIPV感染给猫健康造成巨大威胁,阐明FIPV遗传变异特征及主要抗原蛋白免疫原性对FIP防控具有重要意义。扩增4株FIPV山西株S和3c基因,分析FIPV山西株同源性和遗传进化特征。结果显示,4株FIPV山西株间S基因相似性为89.6%~91.9%,与已公布的Ⅰ型猫冠状病毒(FCoV)相似性为85.9%~92.7%。FIPV山西株间3c基因相似性为91.5%~95.3%,与公布的Ⅰ型FCoV参考株相似性为90.9%~95.9%。S、3c基因遗传进化分析显示,4株FIPV山西株均属于Ⅰ型FCoV。将表达、纯化的FIPV S蛋白免疫Balb/c小鼠,间接ELISA检测小鼠血清S蛋白抗体水平,结果显示FIPV S蛋白具有良好的免疫原性,为FIPV感染的诊断与防控提供了重要科学依据。 展开更多
关键词 猫传染性腹膜炎病毒 遗传进化分析 刺突蛋白 3c蛋白 免疫原性
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