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鸡传染性喉气管炎弱毒株FJ19株的关键基因遗传演化分析及作为候选疫苗株的安全性、有效性评价
1
作者 王晨燕 张巍嘉 +4 位作者 柳珊 李亚杰 赵丽霞 刘云涛 侯博 《畜牧兽医学报》 北大核心 2026年第2期994-1007,共14页
本研究旨在分析鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)弱毒株FJ19株的部分关键抗原基因及毒力基因的遗传演化特点,评估FJ19株对SPF鸡的安全性和免疫原性,为ILTV FJ19株弱毒活疫苗的开发提供参考依据。通过将FJ19株进行多次尿囊腔途径接种适应后,... 本研究旨在分析鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)弱毒株FJ19株的部分关键抗原基因及毒力基因的遗传演化特点,评估FJ19株对SPF鸡的安全性和免疫原性,为ILTV FJ19株弱毒活疫苗的开发提供参考依据。通过将FJ19株进行多次尿囊腔途径接种适应后,对其关键抗原和毒力基因进行测序分析,点眼或口服接种14日龄SPF鸡观察其安全性,并且通过点眼或口服途径免疫14日龄SPF鸡21 d后用ILTV强毒株攻毒评价保护效果,测定免疫持续期等验证FJ19株作为弱毒活疫苗的潜力。结果显示:将FJ19株在10日龄SPF鸡胚以尿囊腔途径接种连续传代适应后,收获P0、P1、P2、P3代病毒液的EID50分别为10^(5.0)、10^(6.5)、10^(6.9)、10^(6.5)·mL^(-1)。核酸序列分析结果表明:FJ19株主要免疫原性基因gB-gC-gD-UL32和毒力相关基因gE-gI-TK-ICP4-gG-gH-gK-gL-gM-gN与弱毒株K317、Nobilis Laringovac®、LT Blen、Poulvac ILT®、Laryngo Vac和我国2009年分离株LJS09株、2012年分离株ck/CH/LHLJ/120305株、2019年分离强毒株WF03的亲缘关系较近。安全性试验显示,FJ19株以104.0EID50·羽-1的剂量(10羽份)点眼接种14日龄SPF鸡后有40%出现轻度眼炎症状,而口服接种SPF鸡未表现出明显的临床症状;当以104.0EID50·羽-1的剂量气管途径接种21日龄SPF鸡时有30%鸡出现一过性的呼吸道反应,未发生严重的ILTV感染典型症状。免疫后强毒攻毒结果显示,FJ19株以0.2羽份或1羽份的剂量点眼或口服途径免疫14日龄SPF鸡21d后,采用ILTV强毒株以104.0EID50·只-1的剂量气管攻毒后,所有免疫组的鸡均获得了至少90%的保护,未观察到明显的临床症状,而未免疫攻毒组至少有90%的鸡出现了严重的ILTV感染典型症状,FJ19株免疫后的免疫持续期至少可达6个月。ILTV FJ19株采用尿囊腔途径接种可获得高滴度病毒含量,其主要抗原基因和毒力基因与我国早期分离株和疫苗株相比未发生明显变异,通过动物试验证实点眼或口服该弱毒株对14日龄SPF鸡具有良好的安全性和免疫有效性,且免疫持续期可达6个月,通过口服接种不影响其安全性和免疫有效性。因此,ILTV弱毒株FJ19株不仅适应尿囊腔接种途径收获病毒,且具备良好的安全性和免疫有效性,还可适应口服接种途径进行免疫,是一株理想的具有潜力的弱毒疫苗候选毒株。 展开更多
关键词 传染性喉气管炎 弱毒株 遗传进化 安全性 有效性
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口蹄疫病毒3D蛋白与宿主互作蛋白的筛选及鉴定
2
作者 刘永杰 兰喜 +4 位作者 李玉星 张勇 何继军 尚佑军 郑海学 《中国兽医科学》 北大核心 2026年第1期13-19,共7页
口蹄疫是由口蹄疫病毒(FMDV)引起的猪、牛、羊等偶蹄类动物急性、热性,高度接触性传染病。FMDV 3D蛋白是病毒编码RNA的RNA依赖性聚合酶(3D^(pol)),是病毒RNA复制的重要蛋白,有关3D蛋白与宿主蛋白相互作用的报道较少。本研究应用PK-15细... 口蹄疫是由口蹄疫病毒(FMDV)引起的猪、牛、羊等偶蹄类动物急性、热性,高度接触性传染病。FMDV 3D蛋白是病毒编码RNA的RNA依赖性聚合酶(3D^(pol)),是病毒RNA复制的重要蛋白,有关3D蛋白与宿主蛋白相互作用的报道较少。本研究应用PK-15细胞cDNA酵母表达文库,利用酵母双杂交技术,最终获得与3D有潜在相互作用的15个宿主潜在蛋白,通过免疫共沉淀和共聚焦试验进一步验证,鉴定出宿主ataxin-3和voltage-dependent anion channel 1(VDAC1)与3D具有相互作用,研究结果为宿主蛋白与3D蛋白相互作用在病毒复制中的功能提供了数据支撑。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 3D蛋白 酵母双杂交技术 蛋白质相互作用
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猫杯状病毒感染性克隆的构建及拯救病毒的鉴定
3
作者 朱雪敏 李鑫基 +7 位作者 华炯钢 陈柳 叶伟成 张传亮 朱寅初 付媛 张存 云涛 《中国兽医科学》 北大核心 2026年第1期20-26,共7页
旨在建立猫杯状病毒(FCV)反向遗传系统,以探究FCV的致病机制,为后续疫苗研发提供科学依据。以FCV HZ2024株为对象,构建DNA-launched感染性克隆系统。FCV全基因组的4个片段被依次插入pAY-CHS重组质粒后转染F81细胞并传代鉴定。结果显示,F... 旨在建立猫杯状病毒(FCV)反向遗传系统,以探究FCV的致病机制,为后续疫苗研发提供科学依据。以FCV HZ2024株为对象,构建DNA-launched感染性克隆系统。FCV全基因组的4个片段被依次插入pAY-CHS重组质粒后转染F81细胞并传代鉴定。结果显示,FCV HZ2024基因片段扩增后插入DNA-launched系统质粒,成功构建DNA-launched系统拯救病毒rFCV HZ2024-RE,转染细胞24 h后出现细胞病变效应,病毒滴度稳定在10^(7)~10^(8T)CID_(50)/m L。间接免疫荧光检测证实VP1蛋白抗原表位完全保留,重组病毒的衣壳蛋白成功表达。且重组病毒与亲本毒株的复制动力学高度相似,蚀斑形态无显著差异。Eco R V酶切及测序验证表明,突变位点(C7183T、A7186C)被精准引入且稳定遗传。总之,构建的DNA-launched系统实现了FCV高效拯救与精准遗传。 展开更多
关键词 猫杯状病毒 感染性克隆 反向遗传学 病毒拯救
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鸭星状病毒1型信阳株全基因组扩增及遗传进化分析
4
作者 张敏 李迎晓 +5 位作者 张璐璐 何书海 曲哲会 秦东升 刘纪成 焦凤超 《中国畜牧兽医》 北大核心 2026年第2期959-972,共14页
【目的】了解信阳地区鸭星状病毒1型(Duck astrovirus type 1,DAstV1)流行株基因组的演化特征,为进一步研究信阳地区DAstV1的流行、遗传进化及致病特性提供参考依据。【方法】对某养殖场送检的病鸭进行禽腺病毒、禽星状病毒和鸭甲型肝... 【目的】了解信阳地区鸭星状病毒1型(Duck astrovirus type 1,DAstV1)流行株基因组的演化特征,为进一步研究信阳地区DAstV1的流行、遗传进化及致病特性提供参考依据。【方法】对某养殖场送检的病鸭进行禽腺病毒、禽星状病毒和鸭甲型肝炎病毒等12种常见病毒的PCR/RT-PCR筛查。采集病鸭肝脏组织,无菌处理后经卵黄囊途径接种10日龄SPF鸭胚,连续传代4次,并逐代收集尿囊液进行DAstV RT-PCR鉴定。对分离到的病毒进行全基因组测序,并对ORF1a、ORF1b和ORF2基因序列及其编码蛋白的氨基酸变异位点进行比对分析。【结果】送检病料筛查结果显示,禽星状病毒呈阳性。第1~4代鸭胚尿囊液中均呈DAstV1阳性,将该病毒命名为HN24XY06。第4代接种鸭胚全部死亡,死亡胚体发育不良且体表出血。HN24XY06基因组全长7 755 nt,包含ORF1a、ORF1b和ORF2 3个开放阅读框。序列比对和系统发育分析表明,HN24XY06属于DAstV1毒株,与山东分离株DAstV-SDZZ和DAstV-SDWF亲缘关系较近。ORF1a、ORF1b和ORF2蛋白的氨基酸序列分析显示,存在不同程度的突变,多发生在ORF1a编码的氨基酸序列中。【结论】本研究分离到了1株DAstV1,丰富了信阳地区DAstV1的分子流行病学资料,并为进一步研究DAstV1的致病机制奠定了基础。 展开更多
关键词 鸭星状病毒1型(DAstV1) 病毒分离与鉴定 全基因组扩增 遗传进化分析
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猪圆环病毒2型微滴数字PCR检测方法的建立及临床应用
5
作者 刘武函 唐小明 +8 位作者 彭志 张坤 谢怡灵 范仲鑫 王卫国 尚玲 张梦凡 杨青 胡巧云 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2026年第1期120-125,共6页
为建立一种特异性强、敏感性高、重复性好的猪圆环病毒2型(PCV-2)微滴数字PCR检测方法,试验基于PCV-2 ORF1保守区域设计引物和探针,通过优化引物浓度、探针浓度和退火温度及特异性、敏感性和重复性试验建立微滴数字PCR方法,并采用该方法... 为建立一种特异性强、敏感性高、重复性好的猪圆环病毒2型(PCV-2)微滴数字PCR检测方法,试验基于PCV-2 ORF1保守区域设计引物和探针,通过优化引物浓度、探针浓度和退火温度及特异性、敏感性和重复性试验建立微滴数字PCR方法,并采用该方法对90份临床样本进行检测。结果表明:建立的PCV-2微滴数字PCR检测方法的最佳引物和探针浓度分别为18μmol/L和9μmol/L,退火温度为61℃;能特异性检出PCV-2,与多种常见猪病原[猪圆环病毒3型(PCV-3)、伪狂犬病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、非洲猪瘟病毒(ASFV)、猪瘟病毒(CSFV)和猪流行性腹泻病毒(PEDV)]无交叉反应;最低检测限为3.48 copies/μL;重复性试验中扩增后的拷贝数组内与组间变异系数范围分别在0.91%~6.13%和1.44%~8.53%之间,均小于10%。90份临床样本中,建立的微滴数字PCR方法检出PCV-2阳性样本43份,检出率为47.78%,经统计微滴数字PCR方法检出的阳性样本包含了实时荧光定量PCR方法检出的所有阳性样本,与实时荧光定量PCR方法的符合率为88.89%。说明本研究建立的PCV-2微滴数字PCR检测方法特异性强、敏感性高、重复性好,适用于临床样本(特别是低病毒载量样本)的检测。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 微滴数字PCR 病毒检测 检测方法 特异性试验 敏感性试验 重复性试验
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一株猪流行性腹泻病毒G2b亚型细胞适应性毒株的复制特性及致病性
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作者 杨帆 胡国芳 +5 位作者 魏子文 周莹珊 宋厚辉 何海健 董婉玉 王晓杜 《畜牧兽医学报》 北大核心 2026年第2期955-964,共10页
旨在探究猪流行性腹泻病毒(PEDV)流行株细胞适应后的复制特性及致病性,本研究将分离自某规模化猪场的PEDV流行毒株在Vero细胞中连续传代至不同代次,分别评价该毒株在细胞上的生物学特性,并将第25代和第141代病毒接种至3日龄仔猪,以比较... 旨在探究猪流行性腹泻病毒(PEDV)流行株细胞适应后的复制特性及致病性,本研究将分离自某规模化猪场的PEDV流行毒株在Vero细胞中连续传代至不同代次,分别评价该毒株在细胞上的生物学特性,并将第25代和第141代病毒接种至3日龄仔猪,以比较其致病性差异。结果表明:临床病料接种液盲传至第4代时,在Vero细胞上形成PEDV典型合胞体病变;传代至25代时,细胞病变形态与病毒滴度趋于稳定;传代至141代时,病毒滴度显著提高,并诱发更快速的细胞病变效应。间接免疫荧光试验(IFA)可特异性检出PEDV N蛋白表达,序列分析表明该毒株为G2b型。仔猪攻毒试验表明,与亲本低代次毒株(YJH/2017/F25)相比,YJH/2017/F141接种组未出现明显临床症状或组织病理损伤,且肛拭子病毒排放量显著减少,各项指标与DMEM对照组无显著差异,该毒株的致病性较低而具有较好安全性。以上结果说明该流行毒株在体外连续传代后获得了更好的细胞适应性且对新生仔猪的致病性降低,本研究为PEDV弱毒疫苗研发提供新的候选毒株,其全基因组序列和生物学特征也为后续重组病毒研究奠定了基础。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 G2b型 细胞适应毒株 生物学特性
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羊口疮病毒ORF011蛋白B细胞抗原表位的生物信息学分析及其多克隆抗体的制备
7
作者 杨毅 阿安拉木 +13 位作者 王成财 杨佩瑶 王小龙 杜新潮 陈韵 窦永喜 任善会 张学勇 李志 付永 沈秀英 郭志宏 高小龙 朵红 《中国兽医科学》 北大核心 2026年第2期184-192,共9页
本试验旨在制备抗羊口疮病毒(ORFV)ORF011蛋白的多克隆抗体,为研究ORFV的致病机制及疫苗防控策略提供生物学材料。利用SVMTriP和IEDB网站在线生物信息学分析软件预测ORFV ORF011蛋白序列的B细胞抗原表位,发现ORFV ORF011蛋白存在多个B... 本试验旨在制备抗羊口疮病毒(ORFV)ORF011蛋白的多克隆抗体,为研究ORFV的致病机制及疫苗防控策略提供生物学材料。利用SVMTriP和IEDB网站在线生物信息学分析软件预测ORFV ORF011蛋白序列的B细胞抗原表位,发现ORFV ORF011蛋白存在多个B细胞抗原表位。PCR扩增ORFV ORF011全长基因,连接至经Bam HⅠ和Eco RⅠ双酶切后的载体pET-28a上构建原核表达重组质粒,将构建成功的重组质粒(pET28a-ORFV-ORF011)转化感受态细胞Rosetta,经IPTG诱导成功表达ORF011蛋白,该蛋白主要以包涵体形式存在。ORF011蛋白的最佳诱导表达条件:诱导温度为37℃,IPTG最佳浓度为0.5 mmol/L,最佳诱导时间为12 h。目的蛋白经变性、复性纯化后免疫小鼠获得的多克隆抗体具有良好的特异性,效价可达1∶256000,中和抗体效价可达1∶400。本试验证实ORFV ORF011蛋白是良好的抗原和免疫原,能够诱导BALB/c小鼠产生具有中和活性的多克隆抗体,在羊口疮诊断试剂和疫苗研制中具有重要应用价值。 展开更多
关键词 羊口疮病毒 ORFV ORF011蛋白 B细胞表位 多克隆抗体
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N-脱乙酰/N-硫酸化酶1对口蹄疫病毒入侵CHO-K1细胞的影响
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作者 郭海洋 蔡梦婷 +12 位作者 袁红 王涛 包慧芳 翁涵 赵俊芳 付元芳 李平花 李坤 孙普 曹轶梅 赵志荀 卢曾军 白兴文 《中国兽医科学》 北大核心 2026年第2期143-151,共9页
高度硫酸化的硫酸乙酰肝素(HS)作为受体分子调控多种病原体的感染,通过分析HS生物合成修饰酶在病毒入侵中的作用,可以鉴定何种酶催化的反应是HS发挥受体功能的关键。N-脱乙酰/N-硫酸化酶1(NDST1)介导HS的N-硫酸化修饰,本研究分析了NDST... 高度硫酸化的硫酸乙酰肝素(HS)作为受体分子调控多种病原体的感染,通过分析HS生物合成修饰酶在病毒入侵中的作用,可以鉴定何种酶催化的反应是HS发挥受体功能的关键。N-脱乙酰/N-硫酸化酶1(NDST1)介导HS的N-硫酸化修饰,本研究分析了NDST1对口蹄疫病毒(FMDV)入侵CHO-K1细胞的影响。利用蚀斑试验筛选高效感染CHO-K1细胞的FMDV,构建pLOV-NDST1重组质粒以及设计靶向NDST1的特异性siRNA,通过Western-blot和RT-qPCR分析NDST1过表达以及敲低对FMDV复制、吸附和内化的影响。结果表明,FMDV O/NX/92能够明显感染CHO-K1细胞,NDST1过表达显著促进FMDV O/NX/92在CHO-K1细胞中的复制、吸附和内化,特异性siRNA介导的NDST1敲低显著抑制FMDV O/NX/92在CHO-K1细胞中的复制、吸附和内化。本研究在CHO-K1细胞中证实NDST1催化的N-硫酸化修饰可明显增强FMDV的入侵能力,为HS的受体功能机制解析及抗病毒靶点开发提供了理论依据。 展开更多
关键词 NDST1 口蹄疫病毒 硫酸乙酰肝素 入侵
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基于EVM009基因的鼠痘病毒荧光定量检测方法建立
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作者 赵立磊 任善会 +11 位作者 王会宝 高小龙 姚威 杨雪 张红强 王小龙 张强蓉 喇萍 叶国荣 陈豪泰 孙跃峰 樊江峰 《动物医学进展》 北大核心 2026年第1期9-14,共6页
为建立一种快速测定鼠痘病毒(ECTV)含量的检测方法,针对鼠痘病毒的基因序列,建立了靶向ECTV EVM009基因的荧光定量PCR检测方法。根据ECTV全基因序列,设计出4对qPCR引物并评价其特异性及敏感性。最终通过筛选得到靶向于ECTV EVM009基因... 为建立一种快速测定鼠痘病毒(ECTV)含量的检测方法,针对鼠痘病毒的基因序列,建立了靶向ECTV EVM009基因的荧光定量PCR检测方法。根据ECTV全基因序列,设计出4对qPCR引物并评价其特异性及敏感性。最终通过筛选得到靶向于ECTV EVM009基因的一对特异性高、灵敏度强的荧光定量PCR引物。利用构建的pCAGGS-EVM009真核表达质粒绘制标准曲线获得标准曲线y=-3.5099 x+41.30,线性相关系数R^(2)=0.9992。扩增效率达到92.7%;对重组质粒标准品的最低检测限为4.91×10^(0)拷贝/μL;组内与组间的重复试验变异系数均小于2%;仅能有效检测ECTV,与VACV、GPTV、SPPV、ORFV和LSDV均无交叉反应。结果表明,建立的荧光定量检测方法特异性强、敏感性高及重复性好,可以用于ECTV感染小鼠模型中病理组织中病毒载量的测定。 展开更多
关键词 鼠痘病毒 EVM009基因 荧光定量PCR 小鼠模型
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冠状病毒辅助蛋白功能研究进展
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作者 赵秀美 赵海娜 +3 位作者 华姝 程旭 陈祥 姜逸 《畜牧兽医学报》 北大核心 2026年第1期96-107,共12页
冠状病毒RNA基因组由多个开放阅读框组成,除了表达结构蛋白和非结构蛋白外,还可以表达辅助蛋白。冠状病毒辅助蛋白具有种属特异性,不同冠状病毒编码数量不等的辅助蛋白。冠状病毒辅助蛋白不是病毒复制所必需的,但是部分辅助蛋白参与宿... 冠状病毒RNA基因组由多个开放阅读框组成,除了表达结构蛋白和非结构蛋白外,还可以表达辅助蛋白。冠状病毒辅助蛋白具有种属特异性,不同冠状病毒编码数量不等的辅助蛋白。冠状病毒辅助蛋白不是病毒复制所必需的,但是部分辅助蛋白参与宿主免疫反应,在病毒发病机制和病毒毒力中起重要作用。冠状病毒辅助蛋白研究为开发治疗药物提供新的潜在靶点,为疾病预防和治疗提供理论指导。本文对几种具有代表性冠状病毒的辅助蛋白的功能进行综述,重点介绍辅助蛋白与病毒-宿主相互作用的关系,包括辅助蛋白在促进宿主细胞凋亡、宿主天然免疫调节,以及在宿主体内致病性的作用,有助于了解冠状病毒的感染和发病机制,为研制新型疫苗和抗病毒药物提供参考。 展开更多
关键词 冠状病毒 辅助蛋白 细胞凋亡 天然免疫 致病性 疫苗
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过表达KLHL34基因的HEK-293T细胞系的构建及对水疱性口炎病毒增殖的影响
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作者 陈创伟 张伟 +7 位作者 邵文华 吴魏 牛艺璇 刘泓屹 赵晓义 曹伟军 郑海学 杨帆 《中国兽医科学》 北大核心 2026年第2期168-174,共7页
旨在探索Kelch样蛋白34(KLHL34)对水疱性口炎病毒(VSV)复制和Ⅰ型干扰素(IFN-Ⅰ)信号通路下游干扰素刺激基因(ISGs)转录的影响。首先,扩增KLHL34基因,构建重组质粒,并与辅助质粒pMD2.G和psPAX2共转染至HEK-293T细胞进行慢病毒包装,然后... 旨在探索Kelch样蛋白34(KLHL34)对水疱性口炎病毒(VSV)复制和Ⅰ型干扰素(IFN-Ⅰ)信号通路下游干扰素刺激基因(ISGs)转录的影响。首先,扩增KLHL34基因,构建重组质粒,并与辅助质粒pMD2.G和psPAX2共转染至HEK-293T细胞进行慢病毒包装,然后将包装好的慢病毒感染HEK-293T细胞,并通过嘌呤霉素筛选获得过表达KLHL34基因的阳性细胞系,经荧光显微镜观察,用蛋白免疫印迹(Western-blot)、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和病毒滴度测定(TCID50)等方法,比较VSV在过表达KLHL34/HEK-293T细胞系和野生型HEK-293T细胞中的复制差异,并分析过表达KLHL34基因对VSV诱导的IFN-Ⅰ和ISGs的影响。结果表明,经双酶切和测序鉴定,慢病毒表达质粒pLV-puro-3×Flag-KLHL34成功构建;内外源Western-blot验证了在70 kDa左右KLHL34蛋白的表达,即过表达KLHL34/HEK-293T细胞系成功建立;而后,荧光图像、Western-blot、RT-qPCR及TCID50显示,在过表达KLHL34/HEK-293T细胞系中,VSV的复制能力显著降低,且该细胞系在VSV诱导下ISGs的转录水平较野生型HEK-293T细胞显著升高。本研究构建的过表达KLHL34/HEK-293T细胞系能显著抑制VSV的增殖并促进IFN-Ⅰ信号通路,为深入研究KLHL34的功能及其在抗病毒天然免疫信号通路中的作用提供了生物材料。 展开更多
关键词 Kelch样蛋白34 水疱性口炎病毒 慢病毒包装 过表达细胞系 干扰素
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赤羽病病毒间接免疫荧光检测方法的建立与应用
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作者 左妤祺 周学慧 +9 位作者 郁蕾 刘霞 徐婷婷 焦震浩 刘言言 尚佳富 杨晓伟 倪兴维 王艳 赵光伟 《中国兽医科学》 北大核心 2026年第2期225-234,共10页
为建立赤羽病病毒(AKAV)的间接免疫荧光检测方法(IFA),本试验利用大肠杆菌原核表达系统将AKAV的N蛋白进行表达,蛋白纯化后免疫小鼠制备多克隆抗体,以AKAV感染后的BHK-21细胞作为抗原,小鼠抗N蛋白多克隆抗体为一抗,FITC-山羊抗小鼠Ig G... 为建立赤羽病病毒(AKAV)的间接免疫荧光检测方法(IFA),本试验利用大肠杆菌原核表达系统将AKAV的N蛋白进行表达,蛋白纯化后免疫小鼠制备多克隆抗体,以AKAV感染后的BHK-21细胞作为抗原,小鼠抗N蛋白多克隆抗体为一抗,FITC-山羊抗小鼠Ig G为二抗,建立AKAV的IFA检测方法,优化筛选抗体的最佳孵育浓度和孵育时间,评估所建立方法的特异性、敏感性和重复性。最后,利用该方法对临床样品进行检测,并与荧光定量PCR方法进行符合性验证。结果显示,N蛋白可在大肠杆菌中高效表达,4次免疫小鼠后多克隆抗体效价可达1∶51200;经优化筛选,在一抗稀释浓度1∶200、孵育2 h,二抗稀释浓度1∶500、孵育1.5 h条件下,IFA检测效果最佳;敏感性试验显示,所建方法对25 TCID50的AKAV可有效检出;特异性试验显示与其他病原无交叉反应,且重复性良好。该方法对24份临床山羊血液样本进行检测,共检出8份阳性、16份阴性样本,与荧光定量PCR方法检测结果相比,二者的符合率为95.8%。本试验为AKAV实验室诊断技术及产品的开发提供了技术支持,同时为深入研究AKAV感染机制奠定了基础。 展开更多
关键词 赤羽病病毒 多克隆抗体 间接免疫荧光 检测方法 N蛋白
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骆驼传染性脓疱病毒首次在阿勒泰地区双峰驼中流行
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作者 张秋玉 张格 +7 位作者 冯雅茹 王俊皓 杨梓纯 储岳峰 王世民 冉多良 陈刚粮 李斌 《中国兽医科学》 北大核心 2026年第1期90-96,共7页
2022年7月起,阿勒泰地区部分骆驼养殖场陆续出现疑似骆驼传染性脓疱病例并迅速传播。为鉴定此次疫情的病原,摸清其流行情况,从阿勒泰地区福海县、吉木乃县、哈巴河县采集10份患病骆驼唇部痂皮样品及2份唇部组织样品,提取样品DNA后分别... 2022年7月起,阿勒泰地区部分骆驼养殖场陆续出现疑似骆驼传染性脓疱病例并迅速传播。为鉴定此次疫情的病原,摸清其流行情况,从阿勒泰地区福海县、吉木乃县、哈巴河县采集10份患病骆驼唇部痂皮样品及2份唇部组织样品,提取样品DNA后分别以羊传染性脓疱病毒、山羊痘病毒、绵羊痘病毒、牛结节性皮肤病病毒、骆驼痘病毒、骆驼传染性脓疱病毒(CCEV)的检测引物进行PCR,对阳性样品测序分析;随后对骆驼唇部组织样品进行病理切片观察;最后,以临床观察法调查上述地区CCEV的感染情况。测序结果表明,10份痂皮样品中的病毒均为CCEV,且与苏丹分离株(MN701775)和沙特阿拉伯分离株(KR231670)的同源性最高。病理结果显示,唇部组织局部可见表皮及浅层真皮坏死,可见少量坏死的细胞碎片,伴有少量浸润的淋巴细胞和粒细胞。流行病学调查结果显示,阿勒泰地区骆驼平均感染率为16.69%(311/1863),其中成年驼的平均感染率为18.07%(281/1555),显著高于幼驼的平均感染率(9.74%,30/308)(P<0.05)。本研究结果表明CCEV已在阿勒泰地区广泛流行,须引起兽医工作者的重视。 展开更多
关键词 新疆 骆驼 传染性脓疱病毒 分离鉴定 流行病学调查
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基于牛病毒性腹泻病毒核心蛋白C间接ELISA抗体检测方法的建立
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作者 贾东鹭 阮武营 +11 位作者 刘飞飞 李星仪 杨澳飞 尹波 陈慧敏 陈建 魏颖 何雷 余祖华 马雪连 丁轲 陈松彪 《中国兽医科学》 北大核心 2026年第1期63-70,共8页
为建立基于牛病毒性腹泻病毒(BVDV)核心蛋白C的间接ELISA检测方法,通过PCR扩增出BVDV C基因,克隆至原核表达载体pET-32a,构建重组质粒pET-32a-C,经IPTG诱导表达纯化后免疫BABL/c小鼠制备多克隆抗体,以C蛋白为包被抗原,建立间接ELISA检... 为建立基于牛病毒性腹泻病毒(BVDV)核心蛋白C的间接ELISA检测方法,通过PCR扩增出BVDV C基因,克隆至原核表达载体pET-32a,构建重组质粒pET-32a-C,经IPTG诱导表达纯化后免疫BABL/c小鼠制备多克隆抗体,以C蛋白为包被抗原,建立间接ELISA检测方法。结果显示,pET-32a-C重组质粒构建成功,重组C蛋白大小约为30 k Da,能够以可溶形式表达,30℃、0.8 mmol/L IPTG诱导6 h可溶性表达最佳;该蛋白免疫BABL/c小鼠后制备血清抗体效价为1∶128000,能够特异性识别C蛋白。该ELISA检测方法的最适条件为:0.5μg/m L抗原37℃包被2 h,10 g/L BSA溶液37℃封闭3 h,1∶16000稀释血清孵育2 h,二抗孵育40 min,避光显色10 min,阴阳性临界值判定标准为0.224,具有良好的特异性和重复性。利用本方法对未免疫接种的疑似BVDV感染的牛血清进行检测,与RT-qPCR核酸检测方法相比,二者阳性符合率达94.73%。上述结果表明,基于C蛋白建立的间接ELISA抗体检测方法特异性强、灵敏度高、重复性好,为BVDV临床诊断及开发基于C蛋白的间接ELISA检测试剂盒奠定了基础。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 核心蛋白C 原核表达 多克隆抗体 间接ELISA
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猫传染性腹膜炎病毒对猫免疫功能的影响及甘露消毒丹和虫草素调节机制研究
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作者 郭昊彤 彭佳仪 +3 位作者 宋健 李佳 张倩 陈武 《中国兽医科学》 北大核心 2026年第1期1-12,共12页
旨在探究猫传染性腹膜炎病毒(FIPV)刺激对猫外周血单个核细胞(PBMC)免疫功能及磷酸二酯酶(PDE)相关基因表达的影响,为揭示FIPV引起的相关免疫机制和临床中药治疗积累数据。首先,分离猫PBMC并分为对照组、低浓度FIPV组和高浓度FIPV组。... 旨在探究猫传染性腹膜炎病毒(FIPV)刺激对猫外周血单个核细胞(PBMC)免疫功能及磷酸二酯酶(PDE)相关基因表达的影响,为揭示FIPV引起的相关免疫机制和临床中药治疗积累数据。首先,分离猫PBMC并分为对照组、低浓度FIPV组和高浓度FIPV组。通过流式细胞术、酶联免疫吸附试验(ELISA)观察FIPV刺激下免疫细胞、免疫球蛋白和一些免疫因子的变化;利用实时荧光定量PCR检测FIPV刺激下不同质量浓度虫草素与甘露消毒丹(GXM)对CRFK细胞和PBMC内的磷酸二酯酶1B(PDE1B)基因、磷酸二酯酶4B(PDE4B)基因相对表达量的影响;通过ELISA检测FIPV刺激下不同质量浓度虫草素与GXM作用后CRFK细胞和PBMC内环磷酸腺苷(cAMP)的含量。结果显示,低浓度的FIPV病毒液对CD4^(+)T细胞表现出一定的抑制作用,高剂量时转为促进作用。随着病毒量的递增,CD8^(+)T细胞受到显著抑制且CD4^(+)/CD8^(+)比值显著增高;FIPV刺激下PBMC表现出显著的免疫球蛋白M水平上调,免疫球蛋白G水平下调;FIPV刺激后,PBMC分泌肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-4增多,白细胞介素-2、白细胞介素-6减少;FIPV能通过下调PDE4B、PDE1B基因的表达来降低cAMP水平,而GXM和虫草素能上调两者的表达水平,促进cAMP恢复正常水平。综上所述,低浓度的FIPV刺激下细胞免疫较强于体液免疫,高浓度FIPV则相反;FIPV能降低PDE4B、PDE1B基因表达水平并减少cAMP的分泌;GXM和虫草素能上调PDE4B、PDE1B基因表达水平并促进cAMP恢复正常水平,有望成为临床猫传染性腹膜炎治疗药物。 展开更多
关键词 猫传染性腹膜炎 免疫 PDES 虫草素 甘露消毒丹
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牛病毒性腹泻病毒单克隆抗体的制备及抗原捕获ELISA检测方法的建立
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作者 赵嘉豪 李树凡 +4 位作者 薛凤 王君 张灿 刘文华 徐守振 《中国兽医科学》 北大核心 2026年第1期56-62,共7页
为了制备牛病毒性腹泻病毒(BVDV)单克隆抗体及建立抗原捕获ELISA检测方法,采用大肠杆菌原核表达的BVDV Erns截短蛋白免疫BALB/c小鼠,三免后利用细胞融合和杂交瘤筛选,选用效价高的单克隆抗体,通过条件优化建立BVDV抗原捕获ELISA检测方法... 为了制备牛病毒性腹泻病毒(BVDV)单克隆抗体及建立抗原捕获ELISA检测方法,采用大肠杆菌原核表达的BVDV Erns截短蛋白免疫BALB/c小鼠,三免后利用细胞融合和杂交瘤筛选,选用效价高的单克隆抗体,通过条件优化建立BVDV抗原捕获ELISA检测方法,对其特异性、敏感性和重复性进行了验证,并与IDEXX商品化试剂盒及RT-PCR进行临床样品符合。结果显示,获得2株效价较高的Ig G1型单克隆抗体杂交瘤细胞2B3、2B10,轻链均为κ链。选用效价更高的2B10单克隆抗体作为检测抗体,家兔源BVDV多克隆抗体作为捕获抗体,建立的BVDV抗原捕获ELISA与临床常见病原(牛轮状病毒、牛冠状病毒、牛副流感病毒3型、牛呼吸道合胞体病毒、牛支原体)无交叉反应,最低可检测102.53TCID50的BVDV病毒液,批内和批间变异系数均低于5%,与IDEXX试剂盒和RT-PCR的总体符合率分别为91.76%~93.33%和94.12%~96.67%。结果表明,基于2B10单克隆抗体建立的BVDV抗原捕获ELISA检测方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,为BVDV的检测和防控提供了借鉴和技术手段。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 Erns蛋白 单克隆抗体 ELISA
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基于转录组学探究PCV2引起宿主细胞免疫抑制的作用机制
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作者 柏晶晶 陈奇 +6 位作者 黄昌巧 袁海峰 何颖 于美玲 韦英益 杨剑 胡庭俊 《动物医学进展》 北大核心 2026年第1期55-64,共10页
旨在通过转录组学技术筛选出猪圆环病毒感染宿主细胞的差异表达基因(DEGs),为揭示猪圆环病毒2型(PCV2)引起猪宿主免疫细胞产生免疫抑制的分子机制提供理论依据。以断奶仔猪脾脏为试验材料,制成猪脾淋巴细胞悬液,PCV2体外感染细胞,通过... 旨在通过转录组学技术筛选出猪圆环病毒感染宿主细胞的差异表达基因(DEGs),为揭示猪圆环病毒2型(PCV2)引起猪宿主免疫细胞产生免疫抑制的分子机制提供理论依据。以断奶仔猪脾脏为试验材料,制成猪脾淋巴细胞悬液,PCV2体外感染细胞,通过转录组学测序技术筛选DEGs,进行基因本体论(GO)、京都基因与基因组百科全书(KEGG)功能分析,对关键通路采用基因集富集分析(GSEA)和进行通路标色,挑选差异表达的基因,通过RT-qPCR验证转录组测序结果的准确性,使用Western blot技术检测重要基因的蛋白表达水平。转录组测序结果显示,PCV2感染后共捕获到15926个差异基因,其中305个差异基因表达显著上调,163个差异基因表达显著下调;GO和KEGG富集结果显示,差异基因与免疫应答等相关,主要富集在细胞因子-细胞因子受体相互作用、IL-17信号通路、风湿性关节炎、TNF信号通路、趋化因子信号通路、JAK-STAT、Toll样受体信号通路等;GSEA富集分析发现,IL-17信号通路富集于78个基因,主要包括AMCF-II、IL17F、IL13、CXCL10、CCL17等34个显著不同的基因,整体通路发生上调,TNF信号通路富集于95个基因,主要包括LTA、CXCL10、MMP9、CXCL2、CCL2等40个显著不同的基因,整体通路发生上调;RT-qPCR结果与测序结果一致,表明测序可靠;Western blot检测结果显示,PCV2感染后IL-17、TNF-α水平显著升高(P<0.05),CXCL2、IL-6水平也有所升高。转录组测序结果及后续试验结果表明,PCV2能通过上调宿主细胞IL-17、TNF等信号通路基因和蛋白表达水平影响下游炎症通路,进而引起机体产生免疫抑制。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 免疫抑制 转录组学 差异表达基因
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基于CRISPR/Cas9技术构建猪GRSF1基因敲除细胞系及其对细胞活性的影响分析
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作者 杜鹏飞 彭听雨 +3 位作者 范双旗 郑海学 朱紫祥 陈金顶 《中国兽医科学》 北大核心 2026年第2期161-167,共7页
利用CRISPR/Cas9技术构建鸟嘌呤富含序列因子1(GRSF1)基因敲除的PK-15细胞并探究GRSF1基因敲除对于细胞活性的影响。首先,设计了4条靶向猪源GRSF1基因的sgRNAs(sgRNA-1、sgRNA-2、sgRNA-3和sgRNA-4),经退火后与慢病毒载体质粒(Lenti-CRI... 利用CRISPR/Cas9技术构建鸟嘌呤富含序列因子1(GRSF1)基因敲除的PK-15细胞并探究GRSF1基因敲除对于细胞活性的影响。首先,设计了4条靶向猪源GRSF1基因的sgRNAs(sgRNA-1、sgRNA-2、sgRNA-3和sgRNA-4),经退火后与慢病毒载体质粒(Lenti-CRISPR v2)连接。随后将构建成功的慢病毒载体与辅助质粒pMD2.G和psPAX2共转染人胚胎肾细胞(HEK-293T),获得慢病毒并感染PK-15细胞。最终经嘌呤霉素筛选和梯度稀释法获得GRSF1敲除的PK-15单克隆细胞系。通过Western-blot及测序验证GRSF1的敲除效率,然后进行单克隆细胞活性检测及IL-6水平检测。结果表明,本研究成功获得3株GRSF1基因敲除成功的PK-15单克隆细胞系,并证实GRSF1基因敲除影响PK-15细胞中IL-6表达的上调,为后续研究猪GRSF1的生物学功能提供细胞模型。 展开更多
关键词 GRSF1 PK-15 CRISPR/Cas9 基因敲除
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猪繁殖与呼吸综合征病毒NADC30like毒株NSP4蛋白晶体结构及功能解析
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作者 周雨 赵飞帆 +4 位作者 赵贺盛 闫利明 李祥敏 娄智勇 钱平 《畜牧兽医学报》 北大核心 2026年第2期922-932,共11页
猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是一种严重危害全球养猪业的重要病原体,其非结构蛋白NSP4作为3C样丝氨酸蛋白酶(3CLSP),在其他保守的结构域间连接处切割病毒多蛋白,在病毒的转录复制过程中发挥着关键作用。本研究旨在解析NSP4蛋白、结... 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是一种严重危害全球养猪业的重要病原体,其非结构蛋白NSP4作为3C样丝氨酸蛋白酶(3CLSP),在其他保守的结构域间连接处切割病毒多蛋白,在病毒的转录复制过程中发挥着关键作用。本研究旨在解析NSP4蛋白、结构特征及酶活性,为靶向NSP4的抗病毒小分子药物研发提供理论依据。本研究以PRRSV NADC30 like毒株为研究对象,通过克隆PRRSV nsp4基因至pGEX-6p载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达并纯化获得高纯度蛋白。利用悬滴法筛选结晶条件,结合X射线晶体学技术解析了NSP4的1.47Å高分辨率晶体结构,并通过荧光共振能量转移体外测定其酶活性。结果显示,PRRSV NSP4由三个结构域组成:N端β桶结构域(Ⅰ,残基12-69)、中间β桶结构域(Ⅱ,残基89-153)和C端α/β结构域(Ⅲ,残基159-190)。进一步通过活性位点预测,明确了NSP4的底物结合口袋由Ser-19、Met-20、His-39等关键残基构成,为基于结构的抑制剂设计提供了靶点。体外酶活试验表明,PRRSV NADC30 like毒株NSP4对底物的催化效率Kcat/Km为411.38 L·(mol·s)^(-1),且底物亲和力Km=23.28μmol·L^(-1)。本研究报道了PRRSV NADC30 like毒株NSP4的高分辨率结构及酶动力学特征,为基于结构的抗病毒药物设计与筛选奠定了重要基础。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 非结构蛋白 晶体结构 酶活性
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表达γ干扰素的重组乳酸菌治疗猫瘟的效果评价
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作者 王威 王瑜琪 +6 位作者 郭飞 孙培文 王煜煜 庞坤 吕长荣 华进联 李娜 《动物医学进展》 北大核心 2026年第1期14-17,共4页
七月龄布偶猫,因近期出现精神沉郁,食欲减退,有轻微拒食和呕吐现象,拉黄色水样粪便,有轻微便血而送动物医院诊疗。经临床检查其基本生命体征未见异常,血常规检验发现病猫白细胞数量显著降低,结合临床症状和猫瘟热试纸检测结果,确诊其患... 七月龄布偶猫,因近期出现精神沉郁,食欲减退,有轻微拒食和呕吐现象,拉黄色水样粪便,有轻微便血而送动物医院诊疗。经临床检查其基本生命体征未见异常,血常规检验发现病猫白细胞数量显著降低,结合临床症状和猫瘟热试纸检测结果,确诊其患有猫瘟。通过每日灌服表达γ干扰素的乳酸菌配合常规药物进行治疗,治疗第3天后患猫的粪便由水样逐渐变为糊状,治疗第5天时,粪便成型,且血常规检测中各项指标基本恢复正常。 展开更多
关键词 猫瘟 Γ干扰素 乳酸菌
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