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2023年河南省禽流感抗体与病原监测 被引量：1
1
作者 刘敏 宋丹 +4 位作者 朱前磊 赵美雪 张利平 刘礼杰 闫若潜 《动物医学进展》 北大核心 2025年第4期131-135,共5页
为有效防范风险,扎实做好河南省高致病性禽流感(HPAI)的监测工作,全面掌握HPAI的感染状况和流行趋势,对全省部分种禽场、商品禽场、活禽交易市场、禽屠宰场、野鸟栖息地等场点开展了HPAIV专项监测,主要通过血凝抑制试验和RT-PCR方法分... 为有效防范风险,扎实做好河南省高致病性禽流感(HPAI)的监测工作,全面掌握HPAI的感染状况和流行趋势,对全省部分种禽场、商品禽场、活禽交易市场、禽屠宰场、野鸟栖息地等场点开展了HPAIV专项监测,主要通过血凝抑制试验和RT-PCR方法分别检测采集样本的免疫抗体水平与病毒核酸。统计结果显示,HPAIV H5亚型Re-13株、H5亚型Re-14株、H7N9亚型Re-4株平均免疫抗体合格率分别为94.12%、96.62%、95.95%,平均场群合格率分别为93.96%、95.97%、95.30%,且种禽场免疫抗体合格率普遍高于商品场,鸡场免疫抗体合格率高于鹅场、鸭场,不同区域的免疫抗体合格率在91.48%~99.29%之间,8个不同疫苗生产厂家生产的疫苗免疫抗体合格率均在90%以上;全省未检出HPAIV H5亚型和H7N9亚型病毒核酸阳性样品,但检测到其他亚型低致病禽流感病毒(LPAIV)的存在,将检测到的禽流感病毒(AIV)核酸样品(91份、8个群体)用荧光RT-PCR试验方法进一步分析得到均为LPAIV H9亚型,阳性样本均来自于鸡,且分布于商品禽场(0.5%)、屠宰场(7.50%)、市场(8.25%)等多种场点类型。表明河南省HPAI整体免疫效果较好,近期省内发生HPAI的风险较低,但仍需关注LPAIV在多个群体间的传播和低水平的流行。 展开更多
关键词 高致病性禽流感 监测 评估 免疫抗体 病毒核酸 亚型
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新型鸭呼肠孤病毒的分离鉴定及细胞适应性研究
2
作者 孔冬妮 邓永 +7 位作者 陈孟姣 薛麒 王嘉 杨飞 毛娅卿 刘丹 黄小洁 周明旭 《动物医学进展》 北大核心 2025年第5期48-52,共5页
对广西某鸭场临床疑似由新型鸭呼肠孤病毒(Novel duck reovirus,NDRV)感染的雏鸭进行RT-PCR鉴定、NDRV分离、毒株细胞培养特性、雏鸭致病性、S1基因序列测定和遗传进化分析等研究。结果显示,RT-PCR检测组织病料为NDRV阳性,组织样品处理... 对广西某鸭场临床疑似由新型鸭呼肠孤病毒(Novel duck reovirus,NDRV)感染的雏鸭进行RT-PCR鉴定、NDRV分离、毒株细胞培养特性、雏鸭致病性、S1基因序列测定和遗传进化分析等研究。结果显示,RT-PCR检测组织病料为NDRV阳性,组织样品处理后接种SPF鸭胚,鸭胚出现发育迟缓、死亡,胚体全身及多脏器出血等症状;用鸭胚尿囊液接种雏鸭后出现脾脏坏死的特异性病变。S1基因的同源性与进化树分析结果显示,GX2022株与公布的部分NDRV毒株核苷酸序列相似性为93.7%~98.9%,而与鸭呼肠孤病毒(Muscovy duck reovirus,MDRV)GX2010株、GX110058株、S1133株,与禽呼肠孤病毒(Avian reovirus,ARV)815株、ZJM2000M株同源性很低,在21.8%~28.4%之间。进化树分析显示,该毒株与我国流行的NDRV处在同一个分支上,与MDRV和ARV的距离较远,说明分离到的毒株是新型鸭呼肠孤病毒。毒株接种LMH、CEF、Vero细胞后均产生空泡和细胞崩解等细胞病变。该新型鸭呼肠孤病毒临床感染的致病特征研究,有助于新型鸭呼肠病毒病的防控及疫苗的研发。 展开更多
关键词 新型鸭呼肠孤病毒(NDRV) 分离鉴定 S1基因 遗传进化
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一种基于HDR-CRISPR/Cas9技术快速构建重组鸭肠炎病毒的方法的建立 被引量：1
3
作者 贾文凤 蒋香香 +3 位作者 陶慧丽 王安平 吴植 朱善元 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第1期298-309,共12页
[目的]本研究通过优化试验条件,建立基于HDR-CRISPR/Cas9基因编辑技术快速、准确地将外源基因定向插入鸭肠炎病毒(Duck enteritis virus, DEV)基因组的方法,为以DEV为载体的重组疫苗的研制奠定基础。[方法]分离并扩繁DEV疫苗株,测定其... [目的]本研究通过优化试验条件,建立基于HDR-CRISPR/Cas9基因编辑技术快速、准确地将外源基因定向插入鸭肠炎病毒(Duck enteritis virus, DEV)基因组的方法,为以DEV为载体的重组疫苗的研制奠定基础。[方法]分离并扩繁DEV疫苗株,测定其病毒滴度。根据DEV疫苗株UL26、UL27基因间非编码区序列,设计合成向导RNA(gRNA),经双链退火获得目的片段,通过基因克隆技术将其插入PX459-V2.0载体获得gRNA-Cas9质粒。同时,通过常规基因克隆技术将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因插入PVAX-1载体,构建含有真核表达盒P_(CMV)-EGFP-BGH pA的重组表达质粒。以DEV疫苗株基因组为模板,扩增gRNA上、下游同源臂序列,通过融合PCR将同源臂序列与真核表达盒P_(CMV)-EGFP-BGH pA进行连接并克隆至PUC19载体获得供体质粒PUC19-UP-EGFP-DOWN。采用先转染质粒后感染亲本DEV的策略构建重组病毒rDEV-EGFP,通过控制单一变量法优化重组病毒构建的试验条件,根据不同条件下绿色荧光蚀斑数量确定最佳条件。利用有限稀释法筛选并纯化表达绿色荧光的蚀斑,获得重组病毒rDEV-EGFP,并对其进行遗传稳定性及体外复制能力的评估。[结果]PCR扩增及测序结果显示,成功构建靶向DEV基因组UL27与UL26基因间非编码区序列的gRNA-Cas9质粒及包含EGFP真核表达盒的供体质粒。鸡胚成纤维细胞(chick embryo fibroblast, CEF)中转染gRNA-Cas9及供体质粒后感染DEV,在荧光显微镜下可观察到绿色荧光蚀斑,表明成功利用HDR-CRISPR/Cas9基因编辑技术将EGFP报告基因敲入DEV基因组。优化后的最佳试验条件为:DEV感染复数(MOI)为0.2、gRNA-Cas9质粒与供体DNA转染比例为1∶2、供体DNA的转染形式为DNA片段、转染与感染时间间隔为6 h、重组病毒收取时间为DEV感染后48 h,优化后EGFP报告基因的敲入效率显著提高(P<0.05)。重组病毒rDEV-EGFP在CEF中连续传代15次,EGFP真核表达盒仍稳定整合在UL26与UL27基因之间的非编码区,具有良好的遗传稳定性。生长曲线结果显示,重组病毒rDEV-EGFP在CEF中的复制能力与DEV疫苗株无明显差异,生长趋势一致,具有良好的体外复制能力。[结论]本研究建立了一种基于HDR-CRISPR/Cas9基因编辑技术快速构建重组DEV的方法,成功构建了具有良好遗传稳定性及体外复制能力的重组病毒rDEV-EGFP,为重组DEV载体疫苗候选株的研制提供了理论依据及技术平台。 展开更多
关键词 鸭肠炎病毒 CRISPR/Cas9基因编辑 重组载体
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3株FAdV-Ⅰ在LMH细胞上的培养特性及不同病毒传代方法的比较
4
作者 黄小洁 吴华伟 +8 位作者 吴思谦 薛麒 廖晓光 陈政谕 孔冬妮 邓永 苏佳 赵炜 刘丹 《福建农林大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第4期495-501,共7页
【目的】研究Ⅰ群禽腺病毒(FAdV-Ⅰ)不同毒株在鸡肝癌(LMH)细胞上的培养特性,比较不同病毒传代方法的优劣,为FAdV-Ⅰ提供更好的传代方法。【方法】将3株FAdV-Ⅰ毒株CELO、GY、TR22-CK8接种在LMH细胞上,并带毒进行传代,通过观察细胞病变... 【目的】研究Ⅰ群禽腺病毒(FAdV-Ⅰ)不同毒株在鸡肝癌(LMH)细胞上的培养特性,比较不同病毒传代方法的优劣,为FAdV-Ⅰ提供更好的传代方法。【方法】将3株FAdV-Ⅰ毒株CELO、GY、TR22-CK8接种在LMH细胞上,并带毒进行传代,通过观察细胞病变,确定带毒连续传代代次;分别用常规方法和冻融方法收获病毒,并测定半数组织细胞感染剂量(TCID50);在鸡传染性支气管炎病毒(IBV)尿囊液中添加不同含量的FAdV-Ⅰ,分别经带毒连续传代和冻融继代方法扩繁病毒后,采用间接免疫荧光(IFA)方法检测IBV活疫苗中的FAdV-Ⅰ含量。【结果】接种后,3株FAdV-Ⅰ毒株CELO、GY、TR22-CK8均能在LMH细胞上产生禽腺病毒特征性的细胞病变,但细胞病变产生时间和病变程度不同;带毒传代会导致细胞病变加重,且带毒传代次数不超过3次;冻融继代扩繁的FAdV-Ⅰ含量更高,细胞不易脱落。【结论】FAdV-Ⅰ不同毒株在LMH细胞上的适应性和培养特性不同,冻融继代更适合作为FAdV-Ⅰ的扩繁方法。 展开更多
关键词 禽腺病毒Ⅰ群 鸡肝癌细胞 细胞培养特性 细胞病变 病毒传代
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鸡传染性法氏囊病病毒直接免疫荧光检测方法的建立及初步应用
5
作者 姜艳平 孙健 +8 位作者 刘薇 李博龙 白慧涛 杨景 李佳璇 崔文 周晗 韩建春 唐丽杰 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第9期4368-4378,共11页
【目的】利用R-藻红蛋白荧光素(R-PE)标记鸡传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus, IBDV)单克隆抗体,建立快速检测组织和细胞中IBDV的直接免疫荧光方法。【方法】试验取单克隆抗体细胞4C12复苏后,免疫小鼠制备单克隆抗... 【目的】利用R-藻红蛋白荧光素(R-PE)标记鸡传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus, IBDV)单克隆抗体,建立快速检测组织和细胞中IBDV的直接免疫荧光方法。【方法】试验取单克隆抗体细胞4C12复苏后,免疫小鼠制备单克隆抗体腹水,用层析柱进行纯化,通过间接免疫荧光法和ELISA方法对其进行鉴定,并测定抗体效价;通过偶联试剂盒对单克隆抗体进行标记,建立直接免疫荧光法并优化反应条件,检测其特异性、敏感性及稳定性。利用建立的方法对感染IBDV的鸡法氏囊和脾脏进行检测。【结果】纯化的4C12单克隆抗体腹水效价为1∶10^(8);用R-PE标记4C12单克隆抗体,成功建立了直接免疫荧光检测方法,确定最佳反应条件为:IBDV感染DT40细胞48 h、4%多聚甲醛和无水乙醇为固定剂进行双重固定、R-PE-4C12株单克隆抗体工作浓度为24μg/mL、抗体孵育90 min,此条件下荧光效果最佳。建立的直接免疫荧光方法与禽白血病病毒(ALV)、禽网状内皮组织增生症病毒(REV)、禽脑脊髓炎病毒(AEV)和减蛋综合症病毒(EDSV)不发生交叉反应,特异性较好;该方法在病毒含量为10^(3)鸡胚半数感染量(ELD_(50))时仍能检测到阳性信号,灵敏性较好;稳定性试验显示,R-PE-4C12在4℃保存21 d后,仍能产生稳定的荧光信号。建立的直接免疫荧光方法中R-PE-4C12能与感染组织中IBDV结合产生特异性红色荧光;与间接免疫荧光法相比,两者荧光效果没有明显差异。【结论】本研究建立的直接免疫荧光方法具有较好的特异性、敏感性和稳定性,可以用于组织和细胞中IBDV的检测,为实验室IBDV检测提供一种快速有效的检测方案。 展开更多
关键词 鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV) 直接免疫荧光法 单克隆抗体 R-藻红蛋白荧光素
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禽副黏病毒生物学特性及野鸟在其传播中的作用研究进展
6
作者 李乔乔 韩姝伊 +4 位作者 王业 王继谱 高思潮 何宏轩 李文超 《动物医学进展》 北大核心 2025年第8期86-90,共5页
禽副黏病毒(Avian paramyxoviruses,APMV)在环境中的进化潜力较大,新的血清型和基因型不断从野生动物中被发现。其强毒株禽副黏病毒1型,又称新城疫病毒,因严重危害家禽养殖业而受到广泛研究,但目前缺乏对APMV弱毒株及其在野鸟中传播方... 禽副黏病毒(Avian paramyxoviruses,APMV)在环境中的进化潜力较大,新的血清型和基因型不断从野生动物中被发现。其强毒株禽副黏病毒1型,又称新城疫病毒,因严重危害家禽养殖业而受到广泛研究,但目前缺乏对APMV弱毒株及其在野鸟中传播方面的研究。随着病毒监测范围的扩大,在野鸟或其他野生动物群体中不断发现一些新APMV血清型和基因型,且这些低致病性毒株在家禽体内经几次传代后可变成高致病性毒株。因此,关于野鸟在禽副黏病毒传播中的作用及跨种传播机制研究非常有意义。论文全面回顾了APMV的发现与流行、基因组及编码蛋白特性、毒力与致病机制及野鸟在APMV传播中的作用等方面的进展,为APMV的研究以及科学防控等提供参考。 展开更多
关键词 禽副黏病毒 流行 基因组 致病机制 野鸟
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F亚群禽白血病病毒SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法的建立
7
作者 潘洪艳 李锦群 +2 位作者 李琪 袁伊琳 曹伟胜 《广东畜牧兽医科技》 2025年第2期23-29,共7页
为精准检测F亚群禽白血病病毒(ALV⁃F),该研究针对ALV⁃F流行毒株env基因设计了一对特异性引物F1/F2,建立了ALV⁃F的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法。条件优化试验结果显示,该方法最适退火温度为64.5℃,最适引物浓度为0.4μM。利用最适... 为精准检测F亚群禽白血病病毒(ALV⁃F),该研究针对ALV⁃F流行毒株env基因设计了一对特异性引物F1/F2,建立了ALV⁃F的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法。条件优化试验结果显示,该方法最适退火温度为64.5℃,最适引物浓度为0.4μM。利用最适反应条件建立的标准曲线方程为y=-3.303x+42.525,R2=0.997,扩增效率E=100.8%,重组质粒标准品拷贝数与Ct值具有良好的线性关系。特异性试验结果表明,该方法仅能特异性检测ALV⁃F,对ALV⁃A、ALV⁃B、ALV⁃J、ALV⁃K、禽流感病毒(AIV)、马立克病毒(MDV)、网状内皮组织增生病病毒(REV)和鸡传染性贫血病病毒(CIAV)无交叉反应;敏感试验结果表明,该方法最低检测限度为4.67×10^(2)拷贝/μL,敏感性是普通PCR的1000倍;稳定性试验结果表明,批间和批内稳定性试验的变异系数均小于2%。利用该方法、ALV p27 ELISA和普通PCR方法分别对23份七彩山鸡胚所制备的原代细胞(PEF)样品进行检测,结果显示该方法和普通PCR方法阳性检出率均为95.65%(22/23),而ALV p27 ELISA阳性检出率仅为39.13%(9/23),该方法与普通PCR总符合率为100%,与ALV p27 ELISA总符合率为43.48%;进一步利用该方法、病毒分离法(结合ALV p27 ELISA)和普通PCR方法分别对20份七彩山鸡抗凝血样品进行检测,结果显示该方法和普通PCR方法阳性检出率分别为100.00%(20/20)和75.00%(15/20),两者总符合率为75.00%,而病毒分离法阳性检出率为0.00%(0/20)。本研究建立的方法具有良好的特异性、敏感性和稳定性,能够有效检测临床样品,可以为ALV⁃F的精准检测提供技术支持。 展开更多
关键词 禽白血病 ALV⁃F SYBR GreenⅠ荧光定量PCR
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农村散养鸡新城疫抗体效价存在的问题及对策
8
作者 陆辉 《广西畜牧兽医》 2025年第6期253-255,共3页
鸡新城疫(Newcastle disease,ND),是由鸡城疫病毒引起的急性高度接触性传染病[1],主要是通过呼吸道及消化道途径传播。鸡在感染后第二天、出现症状以及病愈后,通过从呼吸道呼出的气体中排出病毒,并可持续数天。有些学者以为,1971年-197... 鸡新城疫(Newcastle disease,ND),是由鸡城疫病毒引起的急性高度接触性传染病[1],主要是通过呼吸道及消化道途径传播。鸡在感染后第二天、出现症状以及病愈后,通过从呼吸道呼出的气体中排出病毒,并可持续数天。有些学者以为,1971年-1972年英国的鸡新城疫流行与风的传播有关[2],我国流行的新城疫多属于多里氏型,即亚州型或内脏型新城疫[3]。鸡新城疫的症状由于病毒的毒力不同分为四型[4],根据鸡新城疫感染病程的长短也可以分为最急性型、急性型、亚急性型、慢性型。最急性型的鸡只一般没有任何临床表现就突然死亡,急性型鸡新城疫鸡只表现出典型的发现病症状,刚出现症状的时候,体温急速升高,可达43℃~44℃,精神不佳,食欲不振,鸡冠呈紫红色或发绀,过后出现呼吸道症状由呼吸道分泌有黏液引起,黏液在呼吸的过程中会在呼吸道中将薄膜形成,随后会破裂,形成啰音,嗉囊出现较多的黏液,倒立病鸡,嗉囊中会流出较多的黏液,气味酸臭,病鸡摇头时容易将口腔和鼻腔内的液体甩出,鸡新城疫病毒可致各种年龄段的鸡群感染,有的病例可呈急性感染经过,致死率高[5],鸡新城疫感染发病鸡食欲明显下降,被毛粗乱,呆立,腹泻,拉水样绿色粪便下痢,有时带血。 展开更多
关键词 感染类型 亚急性型 农村散养鸡 消化道 抗体效价
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新型鸭呼肠孤病毒σC蛋白遗传进化分析及多克隆抗体制备
9
作者 钟日成 林寅盛 张济培 《广东畜牧兽医科技》 2025年第2期30-36,共7页
新型呼肠孤病毒(Novel duck reovirus,NDRV)是可引起番鸭、北京鸭和鹅等多种水禽,发生肝脏、脾脏不规则出血和坏死的传染性疾病,近年来广东地区水禽中该病的发病率呈上升趋势。为了解广东地区新型呼肠孤病毒遗传进化特征,该试验从广东... 新型呼肠孤病毒(Novel duck reovirus,NDRV)是可引起番鸭、北京鸭和鹅等多种水禽,发生肝脏、脾脏不规则出血和坏死的传染性疾病,近年来广东地区水禽中该病的发病率呈上升趋势。为了解广东地区新型呼肠孤病毒遗传进化特征,该试验从广东佛山某鸭场发病番鸭中分离得到一株试验毒株,通过对该毒株σC基因序列分析,结果表明该试验毒株与NDRV同处于一个分支,并且核苷酸相似性达95.1%-99.6%;而与典型MDRV和ARV遗传距离较远,且相似性均低于50%。与SH12和DH13毒株相比,该试验毒株出现了15个氨基酸残基的变异。为了解该试验毒株σC蛋白的抗原性,进一步构建了pET32a⁃σC质粒,并建立了重组σC蛋白在BL21(DE3)内稳定表达的方法,通过Western blot鉴定该蛋白能够与NDRV阳性血清和兔多克隆抗体发生特异性结合。为进一步了解NDRV在广东地区水禽中的遗传进化特征以及基因工程疫苗的研发提供参考。 展开更多
关键词 新型鸭呼肠孤病毒 σC蛋白 遗传进化分析 多克隆抗体制备
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抗新型鹅星状病毒Cap蛋白单克隆抗体的制备与鉴定 被引量：1
10
作者 代格 章丽娇 +7 位作者 黄欣梅 杨靖 刘青涛 韩凯凯 刘宇卓 李银 薛峰 赵冬敏 《江苏农业科学》 北大核心 2024年第21期204-208,共5页
制备抗新型鹅星状病毒Cap蛋白的单克隆抗体,为建立基于病毒Cap蛋白的快速诊断方法奠定基础。构建pET-32a-ORF2重组质粒,转化BL21、IPTG诱导,原核表达出新型鹅星状病毒Cap蛋白,并对其分别进行SDS-PAGE和Western Blot鉴定。结果表明,重组... 制备抗新型鹅星状病毒Cap蛋白的单克隆抗体,为建立基于病毒Cap蛋白的快速诊断方法奠定基础。构建pET-32a-ORF2重组质粒,转化BL21、IPTG诱导,原核表达出新型鹅星状病毒Cap蛋白,并对其分别进行SDS-PAGE和Western Blot鉴定。结果表明,重组蛋白主要以包涵体的形式表达且具有一定的免疫学活性。以原核表达的Cap蛋白为免疫原,免疫6~8周龄BALB/c雌性小鼠,对免疫后血清效价为阳性的小鼠取其脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合。做间接ELISA筛选出阳性克隆,并以有限稀释法连续进行3次亚克隆,成功筛选出1株分泌抗新型鹅星状病毒Cap蛋白抗体的杂交瘤细胞株,命名为1D7,采用腹水法大量制备单克隆抗体,效价可达1∶64 000。鉴定出1D7的亚型为IgM。1D7分别与重组Cap蛋白和接种新型鹅星状病毒的LMH细胞进行Western Blot分析,发现该单抗既能识别重组Cap蛋白又能与新型鹅星状病毒发生特异性反应。 展开更多
关键词 鹅星状病毒 CAP蛋白 原核表达 单克隆抗体
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鸡新城疫商业化疫苗研究进展 被引量：8
11
作者 王蒙蒙 金鑫 《动物医学进展》 北大核心 2024年第5期103-108,共6页
新城疫(Newcastle disease,ND)是由新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)引起的以鸡、火鸡为感染对象的一种急性、烈性、败血性传染病。NDV是一种有囊膜的负链RNA病毒,其中F蛋白与HN蛋白为免疫保护性抗原,决定了病毒的毒力大小。ND... 新城疫(Newcastle disease,ND)是由新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)引起的以鸡、火鸡为感染对象的一种急性、烈性、败血性传染病。NDV是一种有囊膜的负链RNA病毒,其中F蛋白与HN蛋白为免疫保护性抗原,决定了病毒的毒力大小。ND的发病率以及病死率高,对全球养鸡业造成巨大的经济损失。目前随着现代生物工程技术和疫苗学的发展,已经有安全有效的商业化ND疫苗大范围使用。论文旨在总结ND商业化疫苗如灭活疫苗、减毒活疫苗以及病毒载体活疫苗的研究进展以及疫苗商业化所遇到的科学难题,并对其他正处于试验阶段的疫苗的良好前景进行简要阐述,同时提出ND纳米疫苗的可能性,以期为ND的疫苗研发提供一定的参考。 展开更多
关键词 鸡 新城疫 商业化疫苗
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六株鹅源新城疫病毒全基因序列分析及对雏鹅的致病性 被引量：1
12
作者 张丹琳 王超 +2 位作者 朱婉君 张济培 陈济铛 《广东畜牧兽医科技》 2024年第5期61-69,共9页
为了解广东地区鹅源新城疫病毒(NDV)遗传进化及致病性情况,于2019年从广东肇庆、佛山地区疑似NDV感染鹅的组织病料中进行鹅源NDV分离鉴定并选取一株MDT最小的毒株进行病毒对雏鹅的致病性试验。结果显示:共分离6株Ⅻb亚型鹅源NDV毒株,6... 为了解广东地区鹅源新城疫病毒(NDV)遗传进化及致病性情况,于2019年从广东肇庆、佛山地区疑似NDV感染鹅的组织病料中进行鹅源NDV分离鉴定并选取一株MDT最小的毒株进行病毒对雏鹅的致病性试验。结果显示:共分离6株Ⅻb亚型鹅源NDV毒株,6株毒株间核苷酸和氨基酸相似性最高,但与基因Ⅶ型、La Sota等常用疫苗株相似性较低。F蛋白和HN蛋白部分功能位点氨基酸残基出现不同程度的变异。致病性试验结果表明基因Ⅻb亚型Goose/GD/F424/2019毒株对雏鹅有较强的致病性,死亡率高达87.5%,并出现脾脏肿大,呈“树枝状”样充血、腺胃乳头出血、十二指肠黏膜出血、胰脏变性出血、脑组织充血及水肿等典型病理变化症状。研究表明:从广东地区分离的6株鹅源NDV均是Ⅻb亚型且对雏鹅有较强的致病性,为进一步研究广东地区鹅源NDV流行、进化及相关疾病的防控奠定基础。 展开更多
关键词 鹅源新城疫病毒 基因Ⅻb亚型 遗传进化分析 致病性试验
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一株血清8a型禽腺病毒的分离鉴定及致病性分析 被引量：1
13
作者 谢涛 黄宝钦 +2 位作者 谢逸天 罗忠宝 吴异健 《福建农林大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期364-370,共7页
【目的】研究福建南平地区禽腺病毒(FAdV)血清8a型分离株的遗传演化情况及致病性,旨在为防控血清8a型FAdV感染提供参考。【方法】2022年8月,采集福建南平地区部分肉鸡养殖场出现的以包涵体肝炎为特征的肝脏病料,采用PCR技术检测FAdV核酸... 【目的】研究福建南平地区禽腺病毒(FAdV)血清8a型分离株的遗传演化情况及致病性,旨在为防控血清8a型FAdV感染提供参考。【方法】2022年8月,采集福建南平地区部分肉鸡养殖场出现的以包涵体肝炎为特征的肝脏病料,采用PCR技术检测FAdV核酸,将获得的阳性样品接种在无特定病原体(SPF)鸡胚上进行病原的分离纯化,利用hexon基因测序及序列分析等方法进行病毒鉴定,并在测定分离株毒力的基础上进行动物致病性试验。【结果】接种10 d后,鸡胚死亡,肝脏肿大、出血、坏死、呈土黄色;PCR鉴定和hexon基因序列分析表明,分离株与GenBank上的FAdV E型8a血清型澳大利亚TR59毒株的序列同源性高达99.5%,将该分离株命名为FJNP。FJNP株对1日龄SPF鸡的致死率为44%(11/25);剖检显示,感染鸡肝脏肿大、出血、边缘钝圆、呈土黄色、出现白色坏死点,脾脏和肾脏也出现肿大、出血等症状;肝脏组织病理学检查结果显示,感染鸡肝细胞大量变性坏死,肝细胞核可见嗜碱性包涵体及大量淋巴细胞浸润。实时荧光定量PCR检测显示,感染鸡体内多个组织器官均检测到病毒,且主要分布在肝脏,攻毒3、5、7、14、21 d在泄殖腔中均能检测到病毒。【结论】本研究从临床表现为包涵体肝炎的病鸡肝脏病料中分离到一株具有较强致病性的血清8a型FAdV。 展开更多
关键词 血清8a型禽腺病毒 分离鉴定 致病性 hexon基因
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鹅星状病毒RdRp蛋白对细胞因子转录水平的影响
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作者 饶丹 尹磊 +4 位作者 吴佩 王媛媛 何书海 张宁 董建国 《江苏农业科学》 北大核心 2024年第7期164-168,共5页
为了解鹅星状病毒(GAstV)RdRp蛋白对细胞因子转录水平的影响,试验将构建的pCMV-RdRp真核质粒转染293细胞,并于转染后12、24、36 h收集细胞,提取核酸检测细胞内CCL2、CCL5、IL-1β、IFN-α、TNF-α、IFITM1和IFITM2的转录水平。结果发现,... 为了解鹅星状病毒(GAstV)RdRp蛋白对细胞因子转录水平的影响,试验将构建的pCMV-RdRp真核质粒转染293细胞,并于转染后12、24、36 h收集细胞,提取核酸检测细胞内CCL2、CCL5、IL-1β、IFN-α、TNF-α、IFITM1和IFITM2的转录水平。结果发现,GAstV RdRp蛋白于12、24、36 h极显著抑制CCL2转录,12 h极显著促进CCL5表达,24、36 h极显著抑制CCL5表达(P<0.01);GAstV RdRp蛋白于24、36 h极显著促进IL-1β转录(P<0.01);GAstV RdRp蛋白于12 h极显著促进IFN-α的转录,于24、36 h极显著抑制IFN-α转录(P<0.01);GAstV RdRp蛋白于12、24、36 h显著或极显著抑制TNF-α转录(P<0.01);GAstV RdRp蛋白于24 h极显著抑制IFITM1转录(P<0.01),于36 h显著抑制IFITM1转录(P<0.05),于12、36 h极显著促进IFITM2转录(P<0.01),于24 h极显著抑制IFITM2的转录(P<0.01)。表明GAstV RdRp蛋白过表达能够诱导IL-1β的转录,抑制CCL2、TNF-α和IFITM1的转录;GAstV RdRp蛋白早期促进CCL5和IFN-α的转录,后期抑制CCL5和IFN-α的转录;GAstV RdRp蛋白早期和晚期促进IFITM2转录,中期抑制IFITM2转录。 展开更多
关键词 鹅星状病毒 细胞因子 转录 RdRp蛋白
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鹅星状病毒capsid蛋白对细胞因子的影响
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作者 饶丹 陈明睿 +5 位作者 刘佳音 高赛楠 何书海 张宁 董建国 无 《江苏农业科学》 北大核心 2024年第4期193-196,共4页
为了解鹅星状病毒(GAstV)capsid蛋白对细胞因子的影响,试验将构建的pCMV-capsid真核质粒转染293细胞,并于转染后12、24、36h收集细胞,提取核酸检测细胞内CCL2、CCL5、IL-1β、TNF-α、IFITM1和IFITM2的转录水平。结果显示,capsid蛋白于1... 为了解鹅星状病毒(GAstV)capsid蛋白对细胞因子的影响,试验将构建的pCMV-capsid真核质粒转染293细胞,并于转染后12、24、36h收集细胞,提取核酸检测细胞内CCL2、CCL5、IL-1β、TNF-α、IFITM1和IFITM2的转录水平。结果显示,capsid蛋白于12、36h显著抑制CCL2转录,12h显著促进CCL5表达,24h显著抑制CCL5表达;capsid蛋白于24、36h显著促进IL-1β的转录;capsid蛋白于24、36h显著抑制IFN-α的转录;capsid蛋白于36h显著促进TNF-α的转录;capsid蛋白于24h显著抑制IFITM1的转录,于36h显著促进IFITM1和IFITM2的转录。结果表明,GAstVcapsid蛋白过表达能够诱导IL-1β、TNF-α和IFITM的转录,抑制CCL2和IFN-α的转录;对于CCL5,capsid蛋白早期促进CCL5的转录,后期抑制CCL5的转录;对于IFITM1,capsid蛋白早期抑制IFITM1转录,后期促进IFITM1转录。 展开更多
关键词 鹅星状病毒 细胞因子 转录 RdRp蛋白
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2022年我国鸡传染性法氏囊病病毒遗传进化分析 被引量：1
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作者 郑玉闯 徐环 +3 位作者 冯敬敬 付旭彬 金天明 唐荣宏 《动物医学进展》 北大核心 2024年第11期70-75,共6页
近年来,由传染性法氏囊病病毒(IBDV)变异株引起的非典型传染性法氏囊病(IBD)给我国养禽业带来了新的威胁。为了解IBDV变异株流行规律,对2022年全国范围内的3000份疑似IBD样品进行分子流行病学调查,结果表明16.9%(507/3000)检测为IBDV阳... 近年来,由传染性法氏囊病病毒(IBDV)变异株引起的非典型传染性法氏囊病(IBD)给我国养禽业带来了新的威胁。为了解IBDV变异株流行规律,对2022年全国范围内的3000份疑似IBD样品进行分子流行病学调查,结果表明16.9%(507/3000)检测为IBDV阳性,随机选择354份阳性样本进行基因型鉴定,变异株占比达89.0%(315/354)。选择5株代表毒株VP2基因进行遗传进化分析,结果表明代表毒株与国内外流行变异毒株处于同一遗传进化分支,与新型变异株SHG19的氨基酸同源性高达98.9%~99.3%;且FJ220325-1毒株氨基酸关键位点在七肽区326位由丝氨酸变异为亮氨酸,提示IBD流行特征正在发生变化,但抗原性及毒力是否发生变化需要进一步验证。研究丰富了IBDV变异株的流行病学数据,可为做好相关防控工作提供理论参考。 展开更多
关键词 传染性法氏囊病 VP 2基因 分子流行病学调查 遗传进化分析 鸡
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致雏鹅痛风新型鹅星状病毒研究进展 被引量：2
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作者 向勇 唐铮 +2 位作者 李林林 徐志宏 孙敏华 《广东畜牧兽医科技》 2024年第2期1-7,共7页
鹅星状病毒(Gooseastrovirus,GAstV)是我国近年来新发现的一种星状病毒属成员,主要危害3周龄以下雏鹅。雏鹅感染后以内脏器官表面和关节腔中显著的尿酸盐沉积为特征;其感染率高达80%,死亡率可达50%;未死亡雏鹅则出现生长抑制和免疫水平... 鹅星状病毒(Gooseastrovirus,GAstV)是我国近年来新发现的一种星状病毒属成员,主要危害3周龄以下雏鹅。雏鹅感染后以内脏器官表面和关节腔中显著的尿酸盐沉积为特征;其感染率高达80%,死亡率可达50%;未死亡雏鹅则出现生长抑制和免疫水平降低等现象,更易受到其他病原的侵害。GAstV既够能通过粪口途径水平传播,也可垂直传播,同时还具备跨宿主传播的能力。目前该病毒致病机制的研究进展较为缓慢且尚无针对该病的商品化生物制品,使得在制定该病的科学防控措施时仍缺乏充分的理论依据和健全的药物配套,导致该疾病的防控形势依然严峻,给我国养鹅业造成了巨大的经济损失。该文围绕GAstV的病原学、流行情况、致病性、免疫应答及其致病机制等方面进行了简要综述,以期为GAstV的深入研究和防控措施的初步制定提供参考。 展开更多
关键词 鹅星状病毒 病原学 流行病学 致病性 免疫应答 致病机制
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三种消毒剂对鹅星状病毒杀灭效果的评价 被引量：1
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作者 邝瑞欢 黄允真 +7 位作者 李林林 向勇 翟颀 孙敏华 李珂 信爱国 李海贤 董嘉文 《广东畜牧兽医科技》 2024年第3期88-92,共5页
为了解不同成分的消毒剂对鹅星状病毒的杀灭效果,该试验选择复方戊二醛、二氯异氰脲酸钠粉、聚维酮碘溶液进行杀灭效果评估,以指导临床实践中的消毒灭源工作。经对三种消毒剂在10℃、25℃、37℃下不同稀释比例、不同作用时间对鹅星状病... 为了解不同成分的消毒剂对鹅星状病毒的杀灭效果,该试验选择复方戊二醛、二氯异氰脲酸钠粉、聚维酮碘溶液进行杀灭效果评估,以指导临床实践中的消毒灭源工作。经对三种消毒剂在10℃、25℃、37℃下不同稀释比例、不同作用时间对鹅星状病毒的杀灭效果进行实验室评价,结果显示:在室温环境下(25℃),作用时间为1 min、5 min和10 min,复方戊二醛1∶80倍稀释可完全杀灭鹅星状病毒(104.0 EID50),而复方戊二醛1∶300倍稀释及其他两种消毒剂在推荐使用浓度下均未能有效杀灭鹅星状病毒。对于尿囊液里高含量(104.0 EID50)的鹅星状病毒,1∶80倍稀释的复方戊二醛溶液在10℃时需要作用10 min才能有效杀灭星状病毒,但尿囊液里低含量(103.0 EID50)的鹅星状病毒在此浓度下作用1 min就能被完全杀灭。当温度达到25℃时,1∶80倍稀释的复方戊二醛溶液1 min即可杀灭鹅星状病毒;1:160倍稀释的复方戊二醛溶液则需要10 min才能完全杀灭鹅星状病毒。继续升高温度至37℃,1∶80和1∶160倍稀释的复方戊二醛溶液与鹅星状病毒作用1 min即可起到有效杀灭效果。综上所述,采用1∶80倍稀释的复方戊二醛杀灭鹅星状病毒(104.0 EID50),在10℃、25℃和37℃作用的最短时间分别是10 min、1 min和1 min。该研究明确了三种不同消毒剂首次用于消毒,在不同温度和作用时间下对鹅星状病毒的杀灭效果,为鹅星状病毒的生物安全防控提供参考。 展开更多
关键词 鹅星状病毒 消毒 复方戊二醛 异氰脲酸钠 聚维酮碘
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抗水禽呼肠孤病毒σC蛋白抗体间接ELISA方法的建立及鹅群血清学调查 被引量：1
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作者 陈稼龙 何莉 +3 位作者 郑炜鸿 朱婉君 张济培 陈济铛 《广东畜牧兽医科技》 2024年第6期8-15,共8页
为提供水禽呼肠孤病毒病早期诊断的精准快速检测方法,该试验通过BL21(DE3)原核表达系统稳定表达水禽呼肠孤病毒σC蛋白,并将纯化的重组σC蛋白包被ELISA酶标板,经进一步反应条件优化。结果显示,该试验建立的ELISA检测方法最优反应条件是... 为提供水禽呼肠孤病毒病早期诊断的精准快速检测方法,该试验通过BL21(DE3)原核表达系统稳定表达水禽呼肠孤病毒σC蛋白,并将纯化的重组σC蛋白包被ELISA酶标板,经进一步反应条件优化。结果显示,该试验建立的ELISA检测方法最优反应条件是:抗原包被含量为1μg/孔,待检血清最佳稀释度为1∶50,孵育时间为45 min,酶标二抗最佳稀释度为1∶500,孵育时间为30 min,最佳底物显色时间为20 min,OD_(450)值≥0.3判定为阳性。该方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,对水禽呼肠孤病毒基因Ⅰ型和基因Ⅱ型血清具有一定的交叉反应。对105份临床健康鹅群血清样品进行检测,阳性率高达77.33%。该研究提供了一种敏感高效的快速检测水禽呼肠孤病毒中和抗体的方法,为鹅群临床血清大规模检测提供方法,为研发商品化的ELISA检测试剂盒提供基础。 展开更多
关键词 水禽呼肠孤病毒 σC蛋白 间接ELISA方法 血清学调查
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H5亚型禽流感疫苗诱导下鹅TLR4及相关免疫因子表达分析
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作者 王权锜 许冬梅 +2 位作者 徐笑 邢波建 刘玉芬 《广东畜牧兽医科技》 2024年第4期17-23,42,共8页
进一步明确TLR4及其相关免疫因子在禽类疫苗免疫过程中的表达变化。采用荧光定量RT-PCR方法和免疫组织化学技术,在注射H5亚型禽流感疫苗24 h后,对三花鹅TLR4及相关免疫因子在不同组织中的表达情况进行检测并分析。在H5亚型禽流感疫苗诱... 进一步明确TLR4及其相关免疫因子在禽类疫苗免疫过程中的表达变化。采用荧光定量RT-PCR方法和免疫组织化学技术,在注射H5亚型禽流感疫苗24 h后,对三花鹅TLR4及相关免疫因子在不同组织中的表达情况进行检测并分析。在H5亚型禽流感疫苗诱导下,实验组TLR4 mRNA在肝脏和骨髓中显著高于对照组(P<0.05),在脾脏、法氏囊以及胸腺中极显著高于对照组(P<0.01);IL-1β、IFN-α以及IFN-γ在肝脏和胸腺中极显著高于对照组(P<0.01),IL-6和IFN-α在脾脏中与对照组相比为极显著(P<0.01),但IL-1β在脾脏和法氏囊中只是显著高于对照组的水平(P<0.05)。免疫组织化学检测结果显示,TLR4在脾脏和法氏囊中与对照组相比极显著(P<0.01),在肝脏中为显著差异(P<0.05),与转录水平一致。在H5亚型禽流感疫苗诱导下,三花鹅体内能够激活TLR4及其相关免疫因子,但在不同组织中表达具有一定差异性。 展开更多
关键词 TLR4 细胞因子 表达特征 三花鹅
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