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牛传染性鼻气管炎病毒ERA-LFD检测方法的建立与应用
1
作者 郭衍冰 侯绪森 +8 位作者 孙兴忠 王军富 王改丽 郝良玉 董航 王雪磊 刘杰 王楠 曹利利 《动物医学进展》 北大核心 2025年第2期79-85,共7页
为建立可视化检测牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的酶促恒温扩增-侧向流动试纸(ERA-LFD)方法,根据IBRV gB基因的保守区域设计并筛选最佳引物和探针,通过优化反应条件建立IBRV ERA-LFD方法,并对其特异性、敏感性、重复性和符合性进行评估。... 为建立可视化检测牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的酶促恒温扩增-侧向流动试纸(ERA-LFD)方法,根据IBRV gB基因的保守区域设计并筛选最佳引物和探针,通过优化反应条件建立IBRV ERA-LFD方法,并对其特异性、敏感性、重复性和符合性进行评估。结果显示,采用建立的方法检测牛呼吸道合胞体病毒、牛病毒性腹泻病毒、牛冠状病毒、多杀性巴氏杆菌、弓形虫均无交叉反应,特异性强;建立方法最低检出IBRV阳性质粒的量为1.63×10^(1) copies/μL,比PCR方法高100倍,敏感性高;对相同样品进行批间和批内检测,结果均一致,重复性好;ERA-LFD与PCR方法检出的符合率为96%,且测序证实ERA-LFD检测结果无误。IBRV ERA-LFD的临床样本检测结果显示阳性率为2.08%,与PCR方法的结果相一致,说明IBRV ERA-LFD方法适于临床样品检测,为IBRV的临床快速检测和流行病学调查提供了工具。 展开更多
关键词 牛传染性鼻气管炎病毒 酶促恒温扩增 侧向流动试纸 检测方法
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新疆维吾尔自治区喀什地区某引种奶牛场新生犊牛的牛轮状病毒分子检测及遗传特征分析
2
作者 李平 张博文 +5 位作者 朱亚楠 苏朵朵 李静 井波 张振杰 齐萌 《畜牧与饲料科学》 2025年第1期114-119,共6页
[目的]了解引种奶牛场新生犊牛的牛轮状病毒感染情况和分子遗传特征。[方法]采集新疆维吾尔自治区喀什地区某引种奶牛场<3月龄犊牛粪便样本50份,采用RT-PCR方法检测牛轮状病毒感染情况,根据序列分析结果鉴定基因型并进行系统发育分析... [目的]了解引种奶牛场新生犊牛的牛轮状病毒感染情况和分子遗传特征。[方法]采集新疆维吾尔自治区喀什地区某引种奶牛场<3月龄犊牛粪便样本50份,采用RT-PCR方法检测牛轮状病毒感染情况,根据序列分析结果鉴定基因型并进行系统发育分析。[结果]基于VP6基因检测出6份样本呈牛轮状病毒阳性,该引种奶牛场犊牛的牛轮状病毒感染率为12.00%(6/50);基于牛轮状病毒VP7基因序列分析,6份阳性样本存在2种基因型,分别为G6(n=4)基因型和G8基因型(n=2);基于牛轮状病毒VP4基因序列分析,6份阳性样本均为P[5]型;鉴定该引种奶牛场牛轮状病毒基因型有2种,分别为G6P[5]型(n=4)和G8P[5]型(n=2)。系统发育进化分析显示,G6基因型与土耳其牛轮状病毒遗传距离较近,G8基因型与日本人轮状病毒遗传距离较近;P[5]基因型与伊朗牛轮状病毒遗传距离较近。[结论]该引种奶牛场犊牛携带的牛轮状病毒存在遗传多样性,G6P[5]型为优势基因型。首次发现新疆喀什地区牛轮状病毒存在G8P[5]型,研究结果为新疆南疆牛轮状病毒病的防控提供了参考。 展开更多
关键词 轮状病毒 检测 鉴定 遗传进化 牛
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牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白表达及间接ELISA抗体检测方法的建立与应用
3
作者 刘兵 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第5期68-75,共8页
为了建立一种牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)抗体检测方法,本研究对IBRV gD蛋白进行原核表达,以表达蛋白为包被抗原建立检测IBRV抗体的间接ELISA方法。结果显示:gD基因PCR扩增产物约945 bp,构建原核表达载体pET30a-gD,经IPTG诱导表达,Weste... 为了建立一种牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)抗体检测方法,本研究对IBRV gD蛋白进行原核表达,以表达蛋白为包被抗原建立检测IBRV抗体的间接ELISA方法。结果显示:gD基因PCR扩增产物约945 bp,构建原核表达载体pET30a-gD,经IPTG诱导表达,Western blot检测显示重组蛋白具有良好的反应活性,以纯化蛋白为包被抗原建立的间接ELISA方法检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛肠道病毒(BEV)、牛副流感病毒3型(BPIV-3)、牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)阳性血清均为阴性,检测IBRV阳性血清的最低抗体检出效价为1∶12800,与病毒中和试验方法的符合率为96.15%,批内与批间重复性试验的变异系数分别小于5%和8%,检测825份免疫疫苗牛血清样品和514份未免疫疫苗牛血清样品的阳性率分别为90.67%和7.39%。本研究建立的间接ELISA检测方法具有良好的特异性、敏感性、准确性、重复性,为IBRV的临床诊断、流行病学调查、免疫抗体监测、疫苗免疫效果评价等提供了一种简单快速的血清学检测方法。 展开更多
关键词 牛传染性鼻气管炎病毒 gD蛋白 原核表达 间接ELISA
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新疆部分规模化牛场犊牛腹泻病毒性病原检测与流行特点分析 被引量：5
4
作者 丁鼎 丁晓军 +7 位作者 穆萨·热合曼 甄杰 萨拉麦提·斯拉吉丁 李娜 孙亚伟 陈如龙 姚刚 马雪连 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第3期1272-1280,共9页
【目的】了解新疆养牛业主产区规模化牧场犊牛腹泻主要病毒性病原感染现状及动态变化,为制定精准防控措施提供流行病学调查依据。【方法】本试验采用PCR技术对新疆博乐、伊犁、喀什、昌吉4个地区11个规模化牧场367份腹泻样本进行牛病毒... 【目的】了解新疆养牛业主产区规模化牧场犊牛腹泻主要病毒性病原感染现状及动态变化,为制定精准防控措施提供流行病学调查依据。【方法】本试验采用PCR技术对新疆博乐、伊犁、喀什、昌吉4个地区11个规模化牧场367份腹泻样本进行牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)、牛诺如病毒(Bovine Norovirus,BNoV)、牛轮状病毒(Bovine rotavirus,BRV)、牛纽布病毒(Bovine nebovirus,BNeV)和牛冠状病毒(Bovine coronavirus,BCV)5种病毒性病原检测,分析不同季节、地区和不同用途犊牛的5种病原感染差异性。【结果】犊牛腹泻病毒性病原以BVDV检出率最高(26.7%);存在11种混合感染情况,其中二重感染5种,以BVDV+BNoV混合感染为主(11.4%);三重感染5种,以BVDV+BRV+BNoV混合感染为主(3.5%);四重感染仅为BVDV+BRV+BNoV+BNeV混合感染(0.2%)。春夏季BVDV、BRV和BNoV检出率均显著高于秋冬季(P<0.05),而BCV和BNeV检出率均显著低于秋冬季(P<0.05)。伊犁与昌吉地区5种病原均有检出,且伊犁地区BVDV检出率最高(92.3%),BNoV次之(52.7%)。昌吉地区以BNoV检出率最高(19.5%),BVDV次之(17.8%)。奶用犊牛仅BNeV检出率高于肉用犊牛(P<0.05),奶用犊牛以BNoV感染为主(18.6%);而肉用犊牛以BVDV感染为主(31.1%)。【结论】调查结果表明,新疆博乐、伊犁、喀什、昌吉4个地区5种腹泻病毒感染存在明显的季节、地区和不同用途牛之间的差异性。本研究结果为这些地区犊牛腹泻综合防治措施的制定提供了科学依据。 展开更多
关键词 犊牛腹泻 病毒性病原 混合感染 病毒检测
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青海海北地区牦牛病毒性腹泻病毒流行病学调查及5′-UTR遗传进化分析 被引量：2
5
作者 林伟山 马豆豆 +6 位作者 雷萌桐 魏斌 李国才 王光华 王戈平 简莹娜 李秀萍 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第3期1241-1249,共9页
【目的】了解青海省海北地区牦牛群中牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)的流行情况及遗传学分子特征。【方法】对采集自青海海北地区的148份腹泻牦牛粪便样品提取病毒RNA并反转录合成cDNA,以其为模板扩增BVDV 5′-UT... 【目的】了解青海省海北地区牦牛群中牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)的流行情况及遗传学分子特征。【方法】对采集自青海海北地区的148份腹泻牦牛粪便样品提取病毒RNA并反转录合成cDNA,以其为模板扩增BVDV 5′-UTR保守区域,建立特异性检测牦牛BVDV的实时荧光定量PCR方法,并以该方法对青海海北地区牦牛养殖场BVDV感染情况进行检测。选取4份BVDV阳性样品,对BVDV 5′-UTR区域序列进行PCR扩增和测序,与NCBI中不同亚型BVDV以及同属病毒毒株进行相似性比对,并基于BVDV 5′-UTR区域进行遗传进化分析。【结果】本研究基于BVDV 5′-UTR成功建立实时荧光定量PCR检测方法,标准曲线相关系数(R^(2))为0.997,标准品浓度为2.69×10^(2)~2.69×10^(9)拷贝/μL时具有良好的线性关系,最小检出限为2.69×10^(2)拷贝/μL。重复性试验结果显示,变异系数均<1.7%,具有良好的重复性和稳定性。采用建立的实时荧光定量PCR方法对青海省海北地区门源县、祁连县、海晏县和湟源县的腹泻牦牛粪便样品进行检测,结果显示,BVDV阳性率分别为45.00%、36.00%、30.77%和29.00%。BVDV 5′-UTR序列比对结果显示,分离获得的4株牦牛源BVDV与伊朗、美国的BVDV-1a亚型毒株聚集在同一个独立分支,核苷酸序列相似性为76.6%~99.7%。【结论】本研究明确了BVDV-1a型是导致青海省海北地区牦牛腹泻的重要病原之一,为该地区牦牛养殖场及时、有效地采取防控措施提供了科学依据,同时丰富了当地BVDV的分子流行病学调查数据,为该地区牛病毒性腹泻病的防控及疫苗研发提供了理论基础。 展开更多
关键词 牦牛 牛病毒性腹泻病毒(BVDV) 流行病学 实时荧光定量PCR 遗传进化分析
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犊牛腹泻的致病因素、诊断方法及防治措施研究进展 被引量：2
6
作者 袁洋 郭亚洲 +2 位作者 王亚洲 王建国 牛华锋 《动物医学进展》 北大核心 2025年第4期100-106,共7页
犊牛腹泻是指新生犊牛所发生的一种以消化不良、腹泻为主要症状的消化道疾病。由于犊牛的身体机能尚不完善,免疫系统未发育成熟,故易受到病毒、细菌、寄生虫等病原微生物的感染而发生腹泻。该病一年四季均可发生,气候多变季节多发,发病... 犊牛腹泻是指新生犊牛所发生的一种以消化不良、腹泻为主要症状的消化道疾病。由于犊牛的身体机能尚不完善,免疫系统未发育成熟,故易受到病毒、细菌、寄生虫等病原微生物的感染而发生腹泻。该病一年四季均可发生,气候多变季节多发,发病后常引起代谢性酸中毒、败血症和高钾血症等症状,严重影响犊牛的生长发育和生产性能。犊牛腹泻的诊断方法有常规检查和实验室检查,其中病原分离培养是诊断犊牛腹泻的金指标,此外,精准奶牛养殖技术的引入有助于更加精准的监测腹泻犊牛,提高犊牛福利。抗生素治疗是犊牛腹泻常见的治疗方式,但由于其耐药性和副作用的广泛出现,使得中药作为一种耐药性低、毒副作用小的选择逐渐引起关注,粪便微生物群移植对腹泻犊牛的成功案例也为其治疗提供了新的选择。论文就犊牛腹泻的致病因素、诊断方法和防治措施进行综述,以期为犊牛腹泻的综合防治提供参考。 展开更多
关键词 犊牛腹泻 致病因素 诊断方法 防治措施
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基于5’UTR基因的牛肠道病毒TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法的建立 被引量：1
7
作者 陆泳锟 张德雄 +7 位作者 王晓虎 陈晶 黄元 马惠海 李学泓 陈翔宇 黄淑坚 王刚 《病毒学报》 北大核心 2025年第5期1488-1498,共11页
为建立一种可快速、特异、高效检测牛肠道病毒(Bovine enterovirus,BEV)的实时荧光定量PCR检测方法,本研究根据GenBank数据库BEV流行毒株5’UTR保守基因序列设计合成特异性引物及探针,并以BEV阳性核酸5’UTR基因序列构建的标准质粒为模... 为建立一种可快速、特异、高效检测牛肠道病毒(Bovine enterovirus,BEV)的实时荧光定量PCR检测方法,本研究根据GenBank数据库BEV流行毒株5’UTR保守基因序列设计合成特异性引物及探针,并以BEV阳性核酸5’UTR基因序列构建的标准质粒为模板,采用矩阵法对引物和探针浓度、退火温度进行优化及绘制标准曲线,同时进行灵敏性、重复性及特异性验证和临床样本检测。结果表明,该检测方法在重组质粒标准品模板浓度为4.05×10^(2)~4.05×10^(9)拷贝/μL范围内呈现良好的线性关系,相关系数R^(2)为0.9975,线性方程斜率为3.4539,扩增效率为94.7%,最低检测限度为4.05×10^(2)拷贝/μL,比常规RT-PCR检测方法灵敏度高100倍;组内和组间的变异系数均小于0.8%;与牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea mucosal disease virus,BVDV)、轮状病毒(Rotavirus,RV)、牛传染性鼻气管炎病毒(Infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)和牛流行热病毒(Bovine ephemeral fever virus,BEFV)均无交叉反应。应用该检测方法对牛场采集的36份腹泻牛的粪便样品和24份肛拭子样品进行检测,检测阳性率分别为94.44%(34/36)和91.67%(22/24)。经试验验证表明,该检测方法具有较好的灵敏性、重复性及特异性,可应用于牛常规临床样本中BEV的鉴别诊断,为BEV的防控提供了有力的技术支持。 展开更多
关键词 牛肠道病毒 5’UTR基因 TaqMan探针法 实时荧光定量PCR
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2022—2024年中国部分地区牛病毒性腹泻病毒分子检测及基因分型
8
作者 安乐乐 任晓婷 +5 位作者 蓝秋菊 莫永利 曹小安 丁玉林 马忠仁 马晓霞 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第10期5328-5334,共7页
牛病毒性腹泻病毒(BVDV)是引起牛群中重要经济损失的病毒之一,尤其对幼牛的健康和发展造成了严重影响。本试验旨在建立通用型BVDV SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR(BVDV SYBR GreenⅠqPCR)方法并对中国部分地区散养牛群样本进行病原学检测... 牛病毒性腹泻病毒(BVDV)是引起牛群中重要经济损失的病毒之一,尤其对幼牛的健康和发展造成了严重影响。本试验旨在建立通用型BVDV SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR(BVDV SYBR GreenⅠqPCR)方法并对中国部分地区散养牛群样本进行病原学检测,掌握中国部分地区散养牛群BVDV感染情况、流行基因型及亚型。依据GenBank不同基因亚型BVDV 5′UTR序列建立通用型BVDV SYBR GreenⅠqPCR方法。使用该方法对2022年6月—2024年12月采集的712份散养牛血清样本及咳嗽、发烧、拉稀症状犊牛组织样本进行检测及遗传进化分析,同时对犊牛样本进行病毒分离、间接免疫荧光(IFA)鉴定和苏木精-伊红染色法(HE染色)观察。结果显示,建立的BVDV SYBR GreenⅠqPCR方法标准曲线的线性关系良好、敏感性高、特异性强和重复性好。散养牛血清样本阳性率为19.10%,并成功分离BVDV-24GS毒株。在5′UTR基因系统进化树分析中,BVDV基因亚型包括1c、1m、1o、1i、1q、1b和2。以上结果表明,成功建立通用型BVDV SYBR GreenⅠqPCR方法并实施初步检测,中国部分地区散养牛群中均存在不同程度BVDV感染,病毒基因分型鉴定丰富了BVDV的分子流行病学基础数据,为BVDV的科学防控、疫苗研制和免疫策略优化提供了依据。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR 分子检测 基因分型鉴定
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5种分子伴侣促进牛冠状病毒病毒样颗粒可溶性表达的研究
9
作者 郭晓旭 顾文源 +3 位作者 赵云环 张帅 范京惠 左玉柱 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第2期1-10,共10页
为了获得可溶性表达的牛冠状病毒病毒样颗粒疫苗,并对其进行免疫效果评价。本研究将5种分子伴侣pTf16、pG-Tf2、pG-KJE8、pGro7和pKJE7分别转入E.coli BL21(DE3)中制备伴侣感受态细胞,将携带乙肝病毒核心抗原的重组质粒pET-32a(+)-HBcAg... 为了获得可溶性表达的牛冠状病毒病毒样颗粒疫苗,并对其进行免疫效果评价。本研究将5种分子伴侣pTf16、pG-Tf2、pG-KJE8、pGro7和pKJE7分别转入E.coli BL21(DE3)中制备伴侣感受态细胞,将携带乙肝病毒核心抗原的重组质粒pET-32a(+)-HBcAg-BCoV S1+S2转化至制备好的5种分子伴侣感受态细胞中,各种共表达菌株通过双抗板筛选、诱导剂诱导表达后,通过SDS-PAGE检测上清液是否表达来筛选有效的伴侣质粒。纯化共表达的重组蛋白,利用透射电镜观察是否形成病毒样颗粒(VLPs)。用制备好的VLPs乳化成疫苗免疫小鼠,采用ELISA方法检测免疫后小鼠血清中的IgG特异性抗体及细胞因子IFN-γ、TNF-α和IL-4的水平。结果显示:成功制备上清液表达的BCoV VLPs,将VLPs乳化成疫苗后免疫小鼠,小鼠产生的BCoV IgG抗体水平和细胞因子水平均显著高于对照组(P<0.05)。结果表明,分子伴侣pG-KJE8在16℃条件下可以更好地促进牛冠状病毒病毒样颗粒的可溶性表达,且与分子伴侣共表达的BCoV VLPs具有免疫活性,对制备效价高、成本低的牛冠状病毒样颗粒疫苗具有重要意义。 展开更多
关键词 牛冠状病毒病毒样颗粒 可溶性表达 分子伴侣质粒
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宁夏地区部分规模化牛场牛病毒性腹泻病毒分离鉴定
10
作者 王雅诗 张祥胤 +5 位作者 张冯禧 舒金琪 王向阳 高娟 赵晓民 常玲玲 《动物医学进展》 北大核心 2025年第8期127-132,共6页
牛病毒性腹泻(Bovine viral diarrhea,BVD)是由牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)引起的一种传染病。为了解宁夏地区规模化牛场BVD的流行情况,2023年采集了宁夏地区53个牛场的血液及肛拭子样品共计963份,进行RT-PCR检... 牛病毒性腹泻(Bovine viral diarrhea,BVD)是由牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)引起的一种传染病。为了解宁夏地区规模化牛场BVD的流行情况,2023年采集了宁夏地区53个牛场的血液及肛拭子样品共计963份,进行RT-PCR检测,然后利用MDBK细胞对阳性样品分离纯化病毒。结果显示,宁夏地区BVDV的核酸阳性率为2.81%(27/963),牛场感染率为11.32%(6/53);5′UTR遗传进化分析结果显示主要有BVDV-1a、BVDV-1h、BVDV-1r和BVDV-1l共4种基因亚型。RT-PCR阳性样品经MDBK细胞盲传8代未出现细胞病变,荧光定量PCR测定病毒液Ct值,代入制定的BVDV标准曲线测得拷贝数为1.136×10^(6)copies/mL,间接免疫荧光呈BVDV E2蛋白抗原阳性。研究明确了宁夏地区牛场BVDV流行的主要基因亚型,并获得1株纯化的非细胞病变型BVDV-1a野毒株,为后续深入BVDV致病机制研究提供基础资料。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 分离 鉴定 规模化牛场
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牛副流感病毒3型Nano-PCR检测方法的建立及初步应用
11
作者 安瑞 侯冠欣 +6 位作者 孙欣艺 郭福强 刘小琛 段文龙 史秋梅 吴同垒 张志强 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2025年第7期77-82,共6页
为了建立一种特异性强、敏感性高、成本相对较低的牛副流感病毒3型(Bovine parainfluenza virus type 3,BPIV3)检测方法,试验基于临床分离株BPIV3 HB-1具有高保守性的HN基因序列设计特异性检测引物,在PCR扩增体系中添加纳米金颗粒(25 nm... 为了建立一种特异性强、敏感性高、成本相对较低的牛副流感病毒3型(Bovine parainfluenza virus type 3,BPIV3)检测方法,试验基于临床分离株BPIV3 HB-1具有高保守性的HN基因序列设计特异性检测引物,在PCR扩增体系中添加纳米金颗粒(25 nmol/L),对纳米金颗粒粒径与剂量、退火温度、引物体积进行优化,建立了BPIV3 Nano-PCR检测方法,对该方法进行特异性和敏感性检测,并采用该方法对58份临床牛鼻腔拭子样本进行检测。结果表明:当10 nm的纳米金颗粒(25 nmol/L)剂量为0.8μL、退火温度为56℃、引物体积为2μL时,扩增效果最佳;采用该方法对可引发牛呼吸道疾病综合征(bovine respiratory disease complex, BRDC)的5种病毒病原体[BPIV3、牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus, BVDV)、牛呼吸道合胞体病毒(Bovine respiratory syncytial virus, BRSV)、牛传染性鼻气管炎病毒(Bovine infectious rhinotracheitis virus, IBRV)、牛冠状病毒(Bovine coronavirus, BCoV)]进行检测,仅BPIV3呈阳性,其他病毒均呈阴性;该方法能检测到的质粒最低拷贝浓度为2.1×10^(2) copies/μL,敏感性是普通PCR检测方法的100倍;该方法临床样本检测结果与实时荧光定量PCR检测方法检测结果的符合率为100%。说明本研究建立的BPIV3 Nano-PCR检测方法特异性强、敏感性高,可用于BPIV3感染初期的快速检测。 展开更多
关键词 牛副流感病毒3型 HN基因 牛呼吸道疾病综合征 Nano-PCR 检测方法
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云南省G10P[11]基因型牛轮状病毒的分离鉴定及其遗传特征研究
12
作者 黄洁 朱沛 +7 位作者 李占鸿 王金萍 何于雯 喻建荣 徐心明 沙丽东 陈培富 姚俊 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第10期4930-4940,共11页
【目的】A型牛轮状病毒(Bovine rotavirus,BRV)是引起新生犊牛严重肠炎的重要病原,试验旨在了解云南省规模化牛场BRV流行毒株的基因型及分子特征,为牛场病毒性腹泻防控提供理论依据。【方法】采用RT-PCR方法对云南某规模肉牛场7份西门... 【目的】A型牛轮状病毒(Bovine rotavirus,BRV)是引起新生犊牛严重肠炎的重要病原,试验旨在了解云南省规模化牛场BRV流行毒株的基因型及分子特征,为牛场病毒性腹泻防控提供理论依据。【方法】采用RT-PCR方法对云南某规模肉牛场7份西门塔尔犊牛腹泻粪便样品进行病原检测,取BRV核酸呈阳性的样品通过MA-104细胞系对病毒进行连续传代分离;利用间接免疫荧光试验(IFA)检测病毒增殖情况,绘制病毒生长曲线;进一步对分离毒株全基因组进行测序,利用在线比对软件进行基因组分型,利用Mega 7.0软件分别绘制VP4、VP7基因遗传进化树,使用GeneDoc软件分析氨基酸突变情况。【结果】7份腹泻样品检测均为BRV阳性,分离获得1株BRV毒株,命名为YNLL-2023,其基因型为G10-P[11]-I2-R2-C2-M2-A3-N2-T6-E2-H2。分离毒株感染MA-104细胞12 h出现明显的细胞病变效应(CPE)。RT-PCR扩增获得分离毒株VP 6基因约300 bp的特征性片段;IFA显示分离毒株感染MA-104细胞后胞浆内出现特异性绿色荧光,生长曲线显示病毒滴度从接毒后6~54 h持续上升,达到峰值10^(5.57) TCID_(50)/100μL。遗传进化分析表明,分离毒株VP4基因核苷酸序列与RVA/Yak-tc/CHN/HB-3/2021/G10P[11]株(登录号:ON711387.1)处于同一分支,VP7基因核苷酸序列与RVA/Bovine-wt/CHN/JS31/2020/G10株(登录号:PQ332932.1)和RVA/Bovine-wt/CHN/SD1/2023/G10株(登录号:PQ332943.1)处于同一分支。氨基酸序列分析显示,分离株VP4氨基酸序列与P[11]型羊源疫苗株在中和表位区域存在7个氨基酸位点突变,VP7氨基酸序列与G10型人-牛重组疫苗株在中和表位区域存在2个氨基酸位点突变。【结论】本试验通过MA-104细胞成功分离获得1株G10P[11]型BRV,该毒株与中国牛源多个毒株相似性较高,但与同基因型疫苗株的中和表位存在差异。 展开更多
关键词 牛轮状病毒(BRV) 基因型 生物学特性 遗传特征
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牛肠道病毒E型和F型SYBR GreenⅠRT-qPCR检测方法的建立与应用
13
作者 刘禧贤 胡帅 +7 位作者 吴翠兰 贺会利 冯世文 钟舒红 彭昊 黄嫣 韦英益 李军 《广西农学报》 2025年第2期31-37,共7页
旨在建立牛肠道病毒(Bovine enterovirus,BEV)特异性的SYBR GreenⅠRT-qPCR检测方法。通过筛选BEV全基因组中的病毒高保守区(5‘UTR端)基因序列、运用NCBI线上Primer BLAST程序,选择G/C含量适宜和退火温度相近的靶基因设计1对引物并优... 旨在建立牛肠道病毒(Bovine enterovirus,BEV)特异性的SYBR GreenⅠRT-qPCR检测方法。通过筛选BEV全基因组中的病毒高保守区(5‘UTR端)基因序列、运用NCBI线上Primer BLAST程序,选择G/C含量适宜和退火温度相近的靶基因设计1对引物并优化引物浓度和反应条件,成功建立BEV E型和F型的SYBR GreenⅠRT-qPCR的快速检测方法。该方法最低检测限为4.30×10^(1)拷贝/μL,敏感性比普通PCR高100倍;仅对BEV产生扩增曲线和熔解曲线,与牛冠状病毒(Bovine coronavirus,BCoV)等其他病毒无交叉反应;批内和批间变异系数均小于2%,表明该方法具有敏感性高、特异性强和重复性好等特点。使用该方法与普通RT-PCR方法对广西地区108份牛粪便病料进行临床检测,结果显示,阳性率完全一致,表明所建的方法适用性良好,适用于BEV的大规模检测筛查、流行病学调查及病毒载量研究。 展开更多
关键词 牛肠道病毒 SYBR GreenⅠRT-qPCR 5'UTR
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牛传染性鼻气管炎病毒gE和gB基因荧光定量PCR检测方法的建立
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作者 王慧荣 刘艺 +4 位作者 刘文俊 杨丽华 董春光 韩文儒 武守艳 《动物医学进展》 北大核心 2025年第5期74-79,共6页
为了检测牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV),根据IBRV gE和gB基因保守序列分别设计一对特异性引物,构建重组质粒作为标准品,经优化反应体系和反应条件建立了IBRV gE和gB基因的SYBR GreenⅡ荧光定量PCR检测方法。以建立的荧光定量PCR方法检测... 为了检测牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV),根据IBRV gE和gB基因保守序列分别设计一对特异性引物,构建重组质粒作为标准品,经优化反应体系和反应条件建立了IBRV gE和gB基因的SYBR GreenⅡ荧光定量PCR检测方法。以建立的荧光定量PCR方法检测重组质粒标准品pUC57-gE、pUC57-gB,结果显示浓度在10^(8)~10^(4)拷贝/μL时与Ct值有良好的线性关系,线性相关系数R2分别为0.997、0.996;该方法对重组质粒标准品pUC57-gE、pUC57-gB的最低检测限分别为4.74×10^(2)拷贝/μL、2.60×10^(2)拷贝/μL,敏感性较高;利用该方法检测IBRV、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、伪狂犬病病毒(PRV)、牛冠状病毒(BCoV)、巴氏杆菌、大肠埃希氏菌,只有IBRV检测为阳性,说明该方法特异性强;重复性试验结果显示批内、批间变异系数均低于1.5%,稳定性高。利用该方法和荧光定量PCR试剂盒分别对58份牛鼻拭子样品进行检测,结果显示两种方法符合率达98.3%。该方法具有强稳定性和高敏感性的特点,能为IBRV的检测和鉴别IBRV野毒株与gE基因缺失苗株提供技术支撑。 展开更多
关键词 牛传染性鼻气管炎病毒 荧光定量PCR gB和gE基因 检测
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羊痘弱毒疫苗预防牛结节性皮肤病的有效性和安全性研究概况
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作者 田世俊 阿地力·阿不来提 华金玲 《动物医学进展》 北大核心 2025年第11期120-124,共5页
牛结节性皮肤病(Lumpy skin disease)作为一种由结节性皮肤病病毒所引发的严重传染性疾病,已在我国被明确归类为二类动物疫病范畴。这是一种影响牛和水牛的跨界疾病,临床症状除皮肤结节外,还出现母牛流产、不孕和公牛不育,严重影响牛业... 牛结节性皮肤病(Lumpy skin disease)作为一种由结节性皮肤病病毒所引发的严重传染性疾病,已在我国被明确归类为二类动物疫病范畴。这是一种影响牛和水牛的跨界疾病,临床症状除皮肤结节外,还出现母牛流产、不孕和公牛不育,严重影响牛业发展。预防主要用同源结节性皮肤病毒或异源羊痘病毒致弱活疫苗,无论哪种疫苗,都未评价生殖安全性。论文介绍了牛结节性皮肤病的传播方式和防控措施等,并评价羊痘弱毒活疫苗免疫牛后的有效性和安全性,为合理使用疫苗,控制牛结节性皮肤病的传播以及为牛结节性皮肤病疫苗的安全性评价提供理论指导。 展开更多
关键词 牛结节性皮肤病 羊痘疫苗 生殖道感染 防控技术
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牛结节性皮肤病病毒间接ELISA抗体检测方法的建立 被引量：1
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作者 李静 张蕾 +1 位作者 董春娜 肖进 《病毒学报》 北大核心 2025年第4期1037-1044,共8页
本研究基于实验室前期筛选鉴定出的牛结节性皮肤病毒L1R、A27L、A33R和P32上的4个优势抗原肽等量混合作为包被抗原建立了牛结节性皮肤病病毒间接ELISA抗体检测方法,并对其敏感性、特异性、重复性进行验证。结果显示,该方法灵敏度可检测... 本研究基于实验室前期筛选鉴定出的牛结节性皮肤病毒L1R、A27L、A33R和P32上的4个优势抗原肽等量混合作为包被抗原建立了牛结节性皮肤病病毒间接ELISA抗体检测方法,并对其敏感性、特异性、重复性进行验证。结果显示,该方法灵敏度可检测到1∶640稀释的阳性血清;对健康牛血清和其他病毒阳性血清的检测结果为阴性,特异性100%;批内变异系数在2.3%~11.9%,批间变异系数在3.4%~12.6%。和进口试剂盒对免疫不同时间点的牛血清进行对比检测,结果显示本研究的ELISA方法灵敏度高于进口试剂盒。综上结果表明该检测方法具有敏感性高、特异性好、重复性好等优势,可用于牛结节性皮肤病抗体检测。 展开更多
关键词 牛结节性皮肤病 合成肽 ELISA
原文传递
牛轮状病毒检测方法研究进展
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作者 孙兴忠 曹利利 +4 位作者 姚远 宋延来 王楠 董航 郭衍冰 《吉林畜牧兽医》 2025年第2期160-162,共3页
牛轮状病毒(BRV)是造成犊牛腹泻的主要病原之一,对新生犊牛易感,可引起严重的腹泻症状,重症可导致死亡,对养牛业造成巨大经济损失。该病与多种腹泻病症状相似,在临床上很难辨别,所以需借助实验室检测进行确诊。现阶段,BRV检测方法众多,... 牛轮状病毒(BRV)是造成犊牛腹泻的主要病原之一,对新生犊牛易感,可引起严重的腹泻症状,重症可导致死亡,对养牛业造成巨大经济损失。该病与多种腹泻病症状相似,在临床上很难辨别,所以需借助实验室检测进行确诊。现阶段,BRV检测方法众多,而每一种方法都有各自的优缺点,本文主要以病原学检测、免疫学检测和分子生物学检测对应的方法分别论述,为该病临床检测提供一定的方向。 展开更多
关键词 牛轮状病毒 犊牛腹泻 检测方法
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牛轮状病毒检测方法研究进展
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作者 王玮 郭亚男 +1 位作者 梁小军 李继东 《中南农业科技》 2025年第1期240-242,255,共4页
牛轮状病毒(Bovine rotavirus,BRV)是引起犊牛腹泻的主要病原。感染牛可引起的疾病具有发病率高、流行性广、危害性大等特点,对养牛业造成巨大经济损失。主要介绍了BRV基因组和重要编码蛋白以及BRV的流行情况,从病原分离及鉴定、电镜观... 牛轮状病毒(Bovine rotavirus,BRV)是引起犊牛腹泻的主要病原。感染牛可引起的疾病具有发病率高、流行性广、危害性大等特点,对养牛业造成巨大经济损失。主要介绍了BRV基因组和重要编码蛋白以及BRV的流行情况,从病原分离及鉴定、电镜观察、免疫学检测方法、分子生物学诊断方面概述了牛轮状病毒的检测技术,并提出了展望,为后期对BRV的诊断、检测及防控提供参考。 展开更多
关键词 牛轮状病毒(Bovine rotavirus BRV) 腹泻 流行病学 检测方法
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牛病毒性腹泻病的诊断及防控策略
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作者 卢基忠 胡积霞 +1 位作者 马超锋 李俊强 《中国牛业科学》 2025年第5期69-74,共6页
牛病毒性腹泻是由牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)感染引起的一种接触性传染病,在世界各国广泛流行,对养牛业危害巨大,目前为止尚无针对BVDV的特效药物。本文就国内外BVDV的流行特点、常用的诊断方法(如环介导等温... 牛病毒性腹泻是由牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)感染引起的一种接触性传染病,在世界各国广泛流行,对养牛业危害巨大,目前为止尚无针对BVDV的特效药物。本文就国内外BVDV的流行特点、常用的诊断方法(如环介导等温扩增法、CRISPR/Cas系统检测法、间接免疫荧光试验、酶联免疫吸附试验)、常用疫苗(如BVDV灭活疫苗、减毒活疫苗、亚单位疫苗、活载体疫苗等)进行了综述讨论。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻 诊断技术 疫苗接种 防控策略
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1种牛轮状病毒Taq-Man荧光定量RT-PCR检测方法的建立 被引量：1
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作者 王秀明 陈君彦 +1 位作者 础鲁 刘艳霞 《现代畜牧兽医》 2025年第3期11-15,共5页
试验旨在建立一种可简便、快速地检测牛轮状病毒(BRV)的Taq-Man荧光定量RT-PCR方法,试验通过分析比对NCBI下载的BRV VP7基因序列,在VP7基因的保守区设计两对特异性引物及Taq-Man探针,经反应条件优化,建立BRV的Taq-Man荧光定量RT-PCR方... 试验旨在建立一种可简便、快速地检测牛轮状病毒(BRV)的Taq-Man荧光定量RT-PCR方法,试验通过分析比对NCBI下载的BRV VP7基因序列,在VP7基因的保守区设计两对特异性引物及Taq-Man探针,经反应条件优化,建立BRV的Taq-Man荧光定量RT-PCR方法。利用建立的检测方法检测标准品,绘制标准曲线,检测方法的特异性、灵敏性和稳定性,并对临床样品及疫苗半成品进行检验。结果显示,建立的Taq-Man荧光定量RT-PCR方法的最低检测限为10 copies/μL,组内和组间重复变异系数(CV)均小于3.50%。检测临床样品和疫苗半成品,疫苗半成品均检测阳性,临床样品检测阳性率69%。研究表明,BRV Taq-Man荧光定量RTPCR检测方法操作简便、特异性强、灵敏度高,对BRV的诊断检测及疫苗生产具有重要的参考价值。 展开更多
关键词 牛轮状病毒(BRV) Taq-Man探针 荧光定量RT-PCR VP7基因
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