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非洲猪瘟病毒pB602L蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立
1
作者 张向阳 矫健 +8 位作者 黄培 焦翠翠 张梦瑶 黄静波 龚志远 李海伦 李媛媛 张海丽 王化磊 《病毒学报》 北大核心 2026年第1期126-134,共9页
目的为了建立非洲猪瘟病毒(African Swine fever virus,ASFV)pB602L蛋白抗体间接ELISA检测方法。方法本研究利用大肠杆菌表达系统表达了His-pB602L重组蛋白,并以纯化的His-pB602L重组蛋白为包被抗原,以表达pB602L的重组狂犬病病毒免疫... 目的为了建立非洲猪瘟病毒(African Swine fever virus,ASFV)pB602L蛋白抗体间接ELISA检测方法。方法本研究利用大肠杆菌表达系统表达了His-pB602L重组蛋白,并以纯化的His-pB602L重组蛋白为包被抗原,以表达pB602L的重组狂犬病病毒免疫后的小鼠阳性血清和ASFV猪阳性血清为一抗,辣根过氧化物酶(HRP)标记的葡萄球菌A蛋白(SPA)作为广谱二抗,采用棋盘滴定法优化各反应条件,建立针对pB602L蛋白的间接ELISA抗体检测方法,并对其特异性、敏感性和重复性进行评价。结果ASFV pB602L蛋白间接ELISA抗体检测方法的最优反应条件为:抗原包被浓度为4μg/mL,4℃包被16 h~18 h,5%脱脂奶粉37℃封闭0.5 h,待检血清孵育0.5 h,SPA-HRP 1:10000倍稀释后37℃孵育0.5 h。该方法仅对ASFV阳性血清检测结果为阳性,与猪瘟病毒、猪蓝耳病毒、猪细小病毒、猪伪狂犬病毒、猪乙型脑炎病毒和猪圆环病毒2型阳性血清均无交叉反应,具有良好的特异性;该方法检测稀释度为1∶6400的猪ASFV临床阳性血清时仍呈现阳性,检测分别稀释3200倍和1600倍的ASFVⅠ型和Ⅱ型阳性血清均为阳性;批内重复和批间重复变异系数均小于10%。结论本研究建立的ASFV pB602L蛋白间接ELISA抗体检测方法不仅可用于ASF的临床诊断和流行病学调查,亦能够为ASF疫苗研发过程中免疫动物的特异性抗体评价提供技术支持。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 pB602L蛋白 pB602L抗体 间接ELISA
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猪肠道病毒和猪捷申病毒双重荧光RT-PCR检测方法的建立
2
作者 莫玲 于新友 +5 位作者 吕素芳 毕艳丽 张颖 李天芝 Ashenafi Kiros Wubshet 王文秀 《动物医学进展》 北大核心 2026年第2期49-53,共5页
为建立同时检测猪肠道病毒(PEV)和猪捷申病毒(PTV)的荧光RT-PCR方法,根据NCBI中PEV VP1(NCBI AF363453)和PTV VP1(NCBI GQ293092)基因序列,分别设计特异性引物和探针,通过优化反应体系和扩增程序,建立了一种无需提取核酸即可同时检测PEV... 为建立同时检测猪肠道病毒(PEV)和猪捷申病毒(PTV)的荧光RT-PCR方法,根据NCBI中PEV VP1(NCBI AF363453)和PTV VP1(NCBI GQ293092)基因序列,分别设计特异性引物和探针,通过优化反应体系和扩增程序,建立了一种无需提取核酸即可同时检测PEV和PTV的双重荧光RT-PCR检测方法,对该方法的特异性、敏感性及重复性进行评估,并对临床样品进行检测。结果表明,20μL体系中各引物和探针最适加入量为:PEV-F 0.8μL、PEV-R 1.3μL、PEV-P 0.6μL、PTV-F 1.2μL、PTV-R 1.4μL和PTV-P 0.7μL,优化后的扩增程序为:90℃3 min;60℃反转录5 min;95℃5 s,52℃退火延伸20 s(此处收集荧光),共计40个循环。该对猪常见病原均无扩增,对PEV和PTV检测敏感性分别为5.13 TCID 50/100μL和3.47 TCID 50/100μL,对135份临床样品检测结果与传统核酸提取法结果一致。成功建立了PEV和PTV的免提取核酸双重荧光RT-PCR方法,特异性好,敏感性高,可用于临床两种疑似病例的快速检测。 展开更多
关键词 猪肠道病毒 猪捷申病毒 免提取核酸 荧光PCR
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广深地区3种常见猫病毒的分离鉴定及遗传进化分析
3
作者 孙媛 梁爽爽 +2 位作者 罗志莹 王婷 马静云 《华南农业大学学报》 北大核心 2026年第1期11-20,共10页
【目的】猫杯状病毒(Feline calicivirus,FCV)、猫细小病毒(Feline parvovirus,FPV)和猫疱疹病毒1型(Feline herpesvirus-1,FHV-1)是常见的高传染性、高致病性病原体,本文针对广深地区的这3种病毒开展研究,以期明确本地FCV、FPV和FHV-1... 【目的】猫杯状病毒(Feline calicivirus,FCV)、猫细小病毒(Feline parvovirus,FPV)和猫疱疹病毒1型(Feline herpesvirus-1,FHV-1)是常见的高传染性、高致病性病原体,本文针对广深地区的这3种病毒开展研究,以期明确本地FCV、FPV和FHV-1的流行情况、遗传变异和演化方向。【方法】本研究于2021年10月至2022年6月收集了广州、深圳地区的动物医院、动物收容所和华南农业大学病猫的眼鼻口拭子、肛拭子样本,通过提取临床样本核酸、one step RT-PCR、常规PCR技术检测FCV、FPV及FHV-1;对阳性样品进行基因扩增及测序,利用DNAStar分析核苷酸序列相似性,使用MEGA 7.0构建系统发育树;使用克兰德尔−里斯猫肾(Crandell-Reese feline kidney,CRFK)细胞接种FCV、FHV-1阳性样品进行病毒分离,连续盲传至出现细胞病变,利用PCR、电子显微镜等技术鉴定分离毒株。【结果】379例具有临床症状的病猫中,FPV、FCV、FHV-1感染率分别为22.16%、19.00%和3.17%;病毒阳性率与猫只性别无关,6月龄及以下患猫中FCV、FPV检出率最高,分别为63.89%、58.33%,FHV-1在12月龄及以上患猫中阳性占比最高,为66.67%。已免疫“妙三多”疫苗的患猫中FCV、FHV-1、FPV均有检出,阳性率分别为75.00%、75.00%、20.24%。成功分离到7株FCV、1株FHV-1和2株FPV。7株FCV分离株全基因组与参考株的核苷酸相似性为75.0%~87.5%,7株FCV分离株形成了两大分支,GZ-1-249和GZ-1-184属于GI分支,而其他5株分离株均属于GII分支。14条FPV VP2基因序列与参考株的核苷酸相似性为97.4%~100.0%,14条序列与“妙三多”疫苗株M38246.1(FPV USA Cu4)等序列共同归属于一大分支。【结论】研究结果丰富了FCV、FPV和FHV-1相关流行病学数据,增强了对本地流行毒株的认识,为未来本土疫苗的研发和优化提供了重要支持。 展开更多
关键词 猫杯状病毒 猫细小病毒 猫疱疹病毒1型 分离 鉴定 遗传进化
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基于代谢组学和网络药理学探究槲皮素抑制PRRSV诱导炎症的作用机制
4
作者 陈洪博 江雨蔓 +3 位作者 李佳铠 唐歆 曹翀 邱龙新 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 北大核心 2026年第3期133-142,152,共11页
【目的】探究槲皮素治疗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)诱导炎症的作用机制。【方法】将28日龄仔猪随机分为PRRSV组和PRRSV+槲皮素低、中、高剂量组(分别在基础日粮中添加12.5,25和50 mg/kg的槲皮素),并设置空白对照组。于PRRSV感染后7,... 【目的】探究槲皮素治疗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)诱导炎症的作用机制。【方法】将28日龄仔猪随机分为PRRSV组和PRRSV+槲皮素低、中、高剂量组(分别在基础日粮中添加12.5,25和50 mg/kg的槲皮素),并设置空白对照组。于PRRSV感染后7,14,35 d采集血清样品,测定各组猪血清炎症因子;感染后35 d采集猪肺脏,检测肺脏组织病变;对猪血清代谢谱进行分析,筛选差异代谢物及相关代谢通路;采用网络药理学,构建槲皮素治疗炎症的“成分-靶点-通路-疾病”图。采用分子对接法验证活性成分与核心靶点的相互作用。将血清代谢组学与网络药理学联合分析,构建“靶点-代谢途径-代谢物”网络图,检测关键调控靶点磷脂酶A2(PLA2)、环氧合酶(COX)、脂氧化酶(LOX)mRNA的表达水平。【结果】与空白对照组相比,PRRSV感染7~35 d PRRSV组仔猪血清炎症因子蛋白和肺脏炎症因子mRNA均显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01);与PRRSV组相比,不同浓度槲皮素组仔猪血清炎症因子蛋白、肺脏炎症因子mRNA和PRRSV N基因的表达水平均显著或极显著降低(P<0.05或P<0.01);病理组织学检测结果显示,槲皮素可改善PRRSV引起的间质性肺炎。通过代谢组学技术,从血清中筛选出16个差异代谢物,与PRRSV组相比,槲皮素能回调这些差异代谢物水平;筛选出5条关键代谢途径(甘油酯代谢、醚脂代谢、甘油磷脂代谢、酪氨酸代谢和花生四烯酸代谢)。网络药理学分析表明,槲皮素治疗间质性肺炎主要作用于EGFR、MMP9、PTGS2、CDK2和APP等靶点蛋白,与代谢通路、PI3K-Akt信号通路、IL-17信号通路和T细胞受体信号通路等密切相关。整合分析显示,甘油磷脂代谢和花生四烯酸代谢是槲皮素治疗间质性肺炎的关键代谢途径。整合分析验证结果显示,与PRRSV组相比,槲皮素组仔猪肺脏PLA2、COX1和LOX mRNA水平大多显著或极显著降低。【结论】槲皮素可通过甘油磷脂代谢和花生四烯酸代谢途径调节血清代谢物,调控炎症相关核心靶点,降低炎症水平,缓解机体代谢紊乱,发挥治疗炎症的作用。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 槲皮素 猪 网络药理学 代谢组学
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猴痘病毒荧光定量PCR检测方法的建立
5
作者 孙健 赵柏林 《山东畜牧兽医》 2026年第1期8-12,共5页
猴痘病毒(Monkeypox virus,MPXV)作为一种重要的人畜共患病毒,其在全球范围内传播和蔓延引起了广泛关注,尤其是在近年来的疫情中,及时有效的检测方法显得尤为重要。为建立一种快速诊断MPXV的检测方法,根据2022年公布的MPXV的靶基因片段F... 猴痘病毒(Monkeypox virus,MPXV)作为一种重要的人畜共患病毒,其在全球范围内传播和蔓延引起了广泛关注,尤其是在近年来的疫情中,及时有效的检测方法显得尤为重要。为建立一种快速诊断MPXV的检测方法,根据2022年公布的MPXV的靶基因片段F3L(462 bp,GenBank登录号AF380138.1)保守区域,设计了1对特异性的引物和1条探针,建立了猴痘病毒荧光定量PCR检测方法。结果显示,本方法仅能有效检测MPXV,与牛结节皮肤病病毒、非洲猪瘟病毒VP72片段质粒、圆环病毒Ⅱ型标准品均无交叉反应;对重组质粒标准品的最低检测限为5.1 copies/μL;批内与批间的重复试验变异系数均小于6%。结果表明,本试验方法具有较强的敏感性、特异性和稳定性,可以用于猴痘病毒的快速鉴别诊断。 展开更多
关键词 猴痘病毒 荧光定量 PCR 检测方法
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鸡传染性喉气管炎弱毒株FJ19株的关键基因遗传演化分析及作为候选疫苗株的安全性、有效性评价
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作者 王晨燕 张巍嘉 +4 位作者 柳珊 李亚杰 赵丽霞 刘云涛 侯博 《畜牧兽医学报》 北大核心 2026年第2期994-1007,共14页
本研究旨在分析鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)弱毒株FJ19株的部分关键抗原基因及毒力基因的遗传演化特点,评估FJ19株对SPF鸡的安全性和免疫原性,为ILTV FJ19株弱毒活疫苗的开发提供参考依据。通过将FJ19株进行多次尿囊腔途径接种适应后,... 本研究旨在分析鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)弱毒株FJ19株的部分关键抗原基因及毒力基因的遗传演化特点,评估FJ19株对SPF鸡的安全性和免疫原性,为ILTV FJ19株弱毒活疫苗的开发提供参考依据。通过将FJ19株进行多次尿囊腔途径接种适应后,对其关键抗原和毒力基因进行测序分析,点眼或口服接种14日龄SPF鸡观察其安全性,并且通过点眼或口服途径免疫14日龄SPF鸡21 d后用ILTV强毒株攻毒评价保护效果,测定免疫持续期等验证FJ19株作为弱毒活疫苗的潜力。结果显示:将FJ19株在10日龄SPF鸡胚以尿囊腔途径接种连续传代适应后,收获P0、P1、P2、P3代病毒液的EID50分别为10^(5.0)、10^(6.5)、10^(6.9)、10^(6.5)·mL^(-1)。核酸序列分析结果表明:FJ19株主要免疫原性基因gB-gC-gD-UL32和毒力相关基因gE-gI-TK-ICP4-gG-gH-gK-gL-gM-gN与弱毒株K317、Nobilis Laringovac®、LT Blen、Poulvac ILT®、Laryngo Vac和我国2009年分离株LJS09株、2012年分离株ck/CH/LHLJ/120305株、2019年分离强毒株WF03的亲缘关系较近。安全性试验显示,FJ19株以104.0EID50·羽-1的剂量(10羽份)点眼接种14日龄SPF鸡后有40%出现轻度眼炎症状,而口服接种SPF鸡未表现出明显的临床症状;当以104.0EID50·羽-1的剂量气管途径接种21日龄SPF鸡时有30%鸡出现一过性的呼吸道反应,未发生严重的ILTV感染典型症状。免疫后强毒攻毒结果显示,FJ19株以0.2羽份或1羽份的剂量点眼或口服途径免疫14日龄SPF鸡21d后,采用ILTV强毒株以104.0EID50·只-1的剂量气管攻毒后,所有免疫组的鸡均获得了至少90%的保护,未观察到明显的临床症状,而未免疫攻毒组至少有90%的鸡出现了严重的ILTV感染典型症状,FJ19株免疫后的免疫持续期至少可达6个月。ILTV FJ19株采用尿囊腔途径接种可获得高滴度病毒含量,其主要抗原基因和毒力基因与我国早期分离株和疫苗株相比未发生明显变异,通过动物试验证实点眼或口服该弱毒株对14日龄SPF鸡具有良好的安全性和免疫有效性,且免疫持续期可达6个月,通过口服接种不影响其安全性和免疫有效性。因此,ILTV弱毒株FJ19株不仅适应尿囊腔接种途径收获病毒,且具备良好的安全性和免疫有效性,还可适应口服接种途径进行免疫,是一株理想的具有潜力的弱毒疫苗候选毒株。 展开更多
关键词 传染性喉气管炎 弱毒株 遗传进化 安全性 有效性
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鸭短喙矮小综合征病毒单克隆抗体制备及竞争ELISA检测方法的建立
7
作者 朱小丽 王劭 +5 位作者 董慧 程晓霞 江丹丹 肖世峰 陈少莺 陈仕龙 《中国畜牧兽医》 北大核心 2026年第2期948-958,共11页
【目的】建立一种快速检测鸭短喙矮小综合征病毒(Short beak and dwarfism syndrome virus,SBDSV)抗体的血清学方法,为SBDSV抗体检测及诊断试剂盒研发提供技术支撑。【方法】本研究用纯化的SBDSV M15株灭活毒免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠... 【目的】建立一种快速检测鸭短喙矮小综合征病毒(Short beak and dwarfism syndrome virus,SBDSV)抗体的血清学方法,为SBDSV抗体检测及诊断试剂盒研发提供技术支撑。【方法】本研究用纯化的SBDSV M15株灭活毒免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞(SP2/0)进行融合,利用间接ELISA筛选可分泌SBDSV单克隆抗体的杂交瘤细胞株。用筛选出的杂交瘤细胞接种小鼠制备腹水。通过间接ELISA测定单克隆抗体效价,通过间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay,IFA)和胶乳凝集(latex particle agglutination,LPA)试验鉴定单克隆抗体特性。通过中和试验测定单克隆抗体中和活性,使用试剂盒鉴定单克隆抗体亚类。运用棋盘滴定法优化反应体系,建立基于SBDSV单克隆抗体的竞争ELISA检测方法。通过检测阴性血清确定该方法的临界值。对建立的竞争ELISA检测方法进行特异性、灵敏性和重复性测定。用该方法检测临床血清样品,并与胶乳凝集抑制(latex particle agglutination inhibition,LPAI)试验结果进行比对。【结果】经间接ELISA筛选,获得3株稳定分泌SBDSV单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别命名为D5-3、G11-23和H2-27。间接ELISA结果显示,3株杂交瘤细胞D5-3、G11-23和H2-27培养上清的抗体效价分别为1∶2~6、1∶2~5和1∶2~6,腹水的抗体效价分别为1∶10~5、1∶10~4和1∶10~6。IFA结果显示,单克隆抗体D5-3、G11-23和H2-27均具有较好的结合活性,可用于IFA检测。LPA试验结果显示,仅单克隆抗体H2-27具有致敏胶乳的特性。中和试验结果显示,3株单克隆抗体均具有中和SBDSV的能力,其中单克隆抗体H2-27的中和活性最强。单克隆抗体亚类鉴定结果显示,单克隆抗体D5-3和G11-23均为IgG1,H2-27为IgM。以纯化的SBDSV(M15株)灭活毒作为包被抗原,单克隆抗体H2-27为竞争抗体,建立了一种检测SBDSV抗体的竞争ELISA方法,当抑制率(PI)≥23.70%时,判定为SBDSV抗体阳性;PI≤15.91%时判定为阴性。该方法特异性好,与番鸭细小病毒(Muscovy duck parvovirus,MDPV)、番鸭呼肠孤病毒(Muscovy duck reovirus,MDRV)、鸭源副黏病毒(Duck paramyxovirus,DPMV)、鸭肝炎病毒1型(Duck hepatitis virus-1,DHV-1)和鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus,DTMUV)阳性血清均无交叉反应;敏感性高,高免血清(LPAI效价1∶2~8)1∶25600稀释时仍为阳性;批间、批内重复性好,变异系数均<6%。竞争ELISA检测结果与LPAI结果具有良好的正相关性,二者的符合率为89.10%(188/211)。【结论】本研究成功制备3株SBDSV单克隆抗体,基于单克隆抗体H2-27建立的竞争ELISA方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可高通量检测SBDSV抗体,为监测SBDSV在中国的流行情况及雏鸭母源抗体水平评价提供技术支撑。 展开更多
关键词 鸭 短喙矮小综合征病毒(SBDSV) 单克隆抗体 竞争ELISA
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非洲猪瘟病毒P72蛋白磁微粒化学发光抗体检测技术的建立和应用
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作者 汪葆玥 任雪建 +8 位作者 胡冬梅 吕园园 马静 李秀梅 顾小雪 刘玉良 倪建强 周智 李琦 《病毒学报》 北大核心 2026年第1期135-145,共11页
目的非洲猪瘟缺乏有效的疫苗,防控有赖于及时准确的诊断和清除病原,随着低致病力毒株的出现和持续流行,检测抗体成为感染监测的重要手段。方法本研究在表达纯化非洲猪瘟病毒P72蛋白并筛选获得单克隆抗体的基础上,将羧基磁珠与重组P72蛋... 目的非洲猪瘟缺乏有效的疫苗,防控有赖于及时准确的诊断和清除病原,随着低致病力毒株的出现和持续流行,检测抗体成为感染监测的重要手段。方法本研究在表达纯化非洲猪瘟病毒P72蛋白并筛选获得单克隆抗体的基础上,将羧基磁珠与重组P72蛋白进行偶联反应形成免疫磁珠,建立了磁微粒化学发光抗体检测技术(P72-MPCLIA)。结果在对220份临床样品的检测结果分析后确定其阈值阻断率为50.00%,敏感性检测表明P72-MPCLIA检测为阳性的最大稀释倍数为1:256,特异性试验与其他生猪疫病阳性血清无交叉反应性,重复性检测批内、批间变异系数分别为1.68%~4.70%和1.90%~4.72%。在对66份临床样品的检测中,与世界动物卫生组织推荐的确诊技术间接免疫荧光抗体检测方法和商品化间接ELISA试剂盒,相符率分别为96.97%和100%。结论P72-MPCLIA特异性高、敏感性好,且检测时间缩短至30min以内,可实现自动化操作,为非洲猪瘟的抗体检测技术提供了新的技术手段。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 磁微粒化学发光检测方法 化学发光免疫分析法 间接免疫荧光试验
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口蹄疫病毒3D蛋白与宿主互作蛋白的筛选及鉴定
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作者 刘永杰 兰喜 +4 位作者 李玉星 张勇 何继军 尚佑军 郑海学 《中国兽医科学》 北大核心 2026年第1期13-19,共7页
口蹄疫是由口蹄疫病毒(FMDV)引起的猪、牛、羊等偶蹄类动物急性、热性,高度接触性传染病。FMDV 3D蛋白是病毒编码RNA的RNA依赖性聚合酶(3D^(pol)),是病毒RNA复制的重要蛋白,有关3D蛋白与宿主蛋白相互作用的报道较少。本研究应用PK-15细... 口蹄疫是由口蹄疫病毒(FMDV)引起的猪、牛、羊等偶蹄类动物急性、热性,高度接触性传染病。FMDV 3D蛋白是病毒编码RNA的RNA依赖性聚合酶(3D^(pol)),是病毒RNA复制的重要蛋白,有关3D蛋白与宿主蛋白相互作用的报道较少。本研究应用PK-15细胞cDNA酵母表达文库,利用酵母双杂交技术,最终获得与3D有潜在相互作用的15个宿主潜在蛋白,通过免疫共沉淀和共聚焦试验进一步验证,鉴定出宿主ataxin-3和voltage-dependent anion channel 1(VDAC1)与3D具有相互作用,研究结果为宿主蛋白与3D蛋白相互作用在病毒复制中的功能提供了数据支撑。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 3D蛋白 酵母双杂交技术 蛋白质相互作用
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猫杯状病毒感染性克隆的构建及拯救病毒的鉴定
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作者 朱雪敏 李鑫基 +7 位作者 华炯钢 陈柳 叶伟成 张传亮 朱寅初 付媛 张存 云涛 《中国兽医科学》 北大核心 2026年第1期20-26,共7页
旨在建立猫杯状病毒(FCV)反向遗传系统,以探究FCV的致病机制,为后续疫苗研发提供科学依据。以FCV HZ2024株为对象,构建DNA-launched感染性克隆系统。FCV全基因组的4个片段被依次插入pAY-CHS重组质粒后转染F81细胞并传代鉴定。结果显示,F... 旨在建立猫杯状病毒(FCV)反向遗传系统,以探究FCV的致病机制,为后续疫苗研发提供科学依据。以FCV HZ2024株为对象,构建DNA-launched感染性克隆系统。FCV全基因组的4个片段被依次插入pAY-CHS重组质粒后转染F81细胞并传代鉴定。结果显示,FCV HZ2024基因片段扩增后插入DNA-launched系统质粒,成功构建DNA-launched系统拯救病毒rFCV HZ2024-RE,转染细胞24 h后出现细胞病变效应,病毒滴度稳定在10^(7)~10^(8T)CID_(50)/m L。间接免疫荧光检测证实VP1蛋白抗原表位完全保留,重组病毒的衣壳蛋白成功表达。且重组病毒与亲本毒株的复制动力学高度相似,蚀斑形态无显著差异。Eco R V酶切及测序验证表明,突变位点(C7183T、A7186C)被精准引入且稳定遗传。总之,构建的DNA-launched系统实现了FCV高效拯救与精准遗传。 展开更多
关键词 猫杯状病毒 感染性克隆 反向遗传学 病毒拯救
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鸭星状病毒1型信阳株全基因组扩增及遗传进化分析
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作者 张敏 李迎晓 +5 位作者 张璐璐 何书海 曲哲会 秦东升 刘纪成 焦凤超 《中国畜牧兽医》 北大核心 2026年第2期959-972,共14页
【目的】了解信阳地区鸭星状病毒1型(Duck astrovirus type 1,DAstV1)流行株基因组的演化特征,为进一步研究信阳地区DAstV1的流行、遗传进化及致病特性提供参考依据。【方法】对某养殖场送检的病鸭进行禽腺病毒、禽星状病毒和鸭甲型肝... 【目的】了解信阳地区鸭星状病毒1型(Duck astrovirus type 1,DAstV1)流行株基因组的演化特征,为进一步研究信阳地区DAstV1的流行、遗传进化及致病特性提供参考依据。【方法】对某养殖场送检的病鸭进行禽腺病毒、禽星状病毒和鸭甲型肝炎病毒等12种常见病毒的PCR/RT-PCR筛查。采集病鸭肝脏组织,无菌处理后经卵黄囊途径接种10日龄SPF鸭胚,连续传代4次,并逐代收集尿囊液进行DAstV RT-PCR鉴定。对分离到的病毒进行全基因组测序,并对ORF1a、ORF1b和ORF2基因序列及其编码蛋白的氨基酸变异位点进行比对分析。【结果】送检病料筛查结果显示,禽星状病毒呈阳性。第1~4代鸭胚尿囊液中均呈DAstV1阳性,将该病毒命名为HN24XY06。第4代接种鸭胚全部死亡,死亡胚体发育不良且体表出血。HN24XY06基因组全长7 755 nt,包含ORF1a、ORF1b和ORF2 3个开放阅读框。序列比对和系统发育分析表明,HN24XY06属于DAstV1毒株,与山东分离株DAstV-SDZZ和DAstV-SDWF亲缘关系较近。ORF1a、ORF1b和ORF2蛋白的氨基酸序列分析显示,存在不同程度的突变,多发生在ORF1a编码的氨基酸序列中。【结论】本研究分离到了1株DAstV1,丰富了信阳地区DAstV1的分子流行病学资料,并为进一步研究DAstV1的致病机制奠定了基础。 展开更多
关键词 鸭星状病毒1型(DAstV1) 病毒分离与鉴定 全基因组扩增 遗传进化分析
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一株猪流行性腹泻病毒G2b亚型细胞适应性毒株的复制特性及致病性
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作者 杨帆 胡国芳 +5 位作者 魏子文 周莹珊 宋厚辉 何海健 董婉玉 王晓杜 《畜牧兽医学报》 北大核心 2026年第2期955-964,共10页
旨在探究猪流行性腹泻病毒(PEDV)流行株细胞适应后的复制特性及致病性,本研究将分离自某规模化猪场的PEDV流行毒株在Vero细胞中连续传代至不同代次,分别评价该毒株在细胞上的生物学特性,并将第25代和第141代病毒接种至3日龄仔猪,以比较... 旨在探究猪流行性腹泻病毒(PEDV)流行株细胞适应后的复制特性及致病性,本研究将分离自某规模化猪场的PEDV流行毒株在Vero细胞中连续传代至不同代次,分别评价该毒株在细胞上的生物学特性,并将第25代和第141代病毒接种至3日龄仔猪,以比较其致病性差异。结果表明:临床病料接种液盲传至第4代时,在Vero细胞上形成PEDV典型合胞体病变;传代至25代时,细胞病变形态与病毒滴度趋于稳定;传代至141代时,病毒滴度显著提高,并诱发更快速的细胞病变效应。间接免疫荧光试验(IFA)可特异性检出PEDV N蛋白表达,序列分析表明该毒株为G2b型。仔猪攻毒试验表明,与亲本低代次毒株(YJH/2017/F25)相比,YJH/2017/F141接种组未出现明显临床症状或组织病理损伤,且肛拭子病毒排放量显著减少,各项指标与DMEM对照组无显著差异,该毒株的致病性较低而具有较好安全性。以上结果说明该流行毒株在体外连续传代后获得了更好的细胞适应性且对新生仔猪的致病性降低,本研究为PEDV弱毒疫苗研发提供新的候选毒株,其全基因组序列和生物学特征也为后续重组病毒研究奠定了基础。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 G2b型 细胞适应毒株 生物学特性
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猪流行性腹泻病毒(GHN/HB01株)灭活病毒标准物质的研制
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作者 房琳琳 张锋 +3 位作者 刘爽 魏荣 董雅琴 包静月 《中国兽医杂志》 北大核心 2026年第1期45-55,共11页
为提高猪流行性腹泻病毒(PEDV)核酸检测结果的准确性,本试验建立PEDV微滴式数字聚合酶链式反应(ddPCR)检测方法;制备PEDV(GHN/HB01株)灭活病毒标准物质,通过实时荧光定量PCR(qPCR)和PCR方法检测外源病原体以评价其纯净性;采用ddPCR方法... 为提高猪流行性腹泻病毒(PEDV)核酸检测结果的准确性,本试验建立PEDV微滴式数字聚合酶链式反应(ddPCR)检测方法;制备PEDV(GHN/HB01株)灭活病毒标准物质,通过实时荧光定量PCR(qPCR)和PCR方法检测外源病原体以评价其纯净性;采用ddPCR方法检测PEDV N基因的绝对定量值以评估该标准物质的均匀性、稳定性并与9家实验室合作定值;进一步采用qPCR方法对该标准物质进行应用评估。结果显示,本试验建立并优化了PEDV ddPCR方法,制备的PEDV(GHN/HB01株)灭活病毒标准物质不存在外源病原体感染;组内和组间无显著性差异(P>0.05),均匀性好;该标准物质于-20℃稳定保存9个月,4℃稳定保存7 d,25℃稳定保存24 h,可反复冻融3次;该标准物质定值结果为(1.64±0.2624)×10^(3)copies/μL;应用评估证实,该标准物质在qPCR检测体系中表现可靠,适用性良好,可以用于qPCR检测。结果表明,本试验研制的PEDV(GHN/HB01株)灭活病毒标准物质具备准确的定值和良好的稳定性,可直接应用于检测试剂盒开发、实验室方法验证与质量控制全过程,是实现PEDV核酸检测标准化的关键物质基础。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒(PEDV) N基因 微滴式数字PCR(ddPCR) 标准物质 定值
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禽网状内皮组织增殖病毒IBD-C1605株经胎粪外泌体介导感染并逃逸抗体抑制
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作者 傅子豪 耿瑞强 +4 位作者 任志浩 崔文平 王一新 常爽 赵鹏 《病毒学报》 北大核心 2026年第1期253-268,共16页
目的禽网状内皮组织增殖病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)是一种经过鸡胚垂直传播的免疫抑制性病毒,感染REV的雏鸡胎粪以及粪便中可持续排出病毒造成水平传播,即使在一些母源抗体阳性鸡群也可以介导水平传播,本研究的目的便是验... 目的禽网状内皮组织增殖病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)是一种经过鸡胚垂直传播的免疫抑制性病毒,感染REV的雏鸡胎粪以及粪便中可持续排出病毒造成水平传播,即使在一些母源抗体阳性鸡群也可以介导水平传播,本研究的目的便是验证雏鸡胎粪中存在REV感染相关外泌体并介导形成水平传播和免疫逃逸。方法本研究将REV野毒株IBD-C1605株接种鸡胚后从出壳雏鸡检测为REV阳性的雏鸡胎粪中提取外泌体,进行纳米颗粒追踪分析、电镜观察、基因组测序和蛋白质组分析。本研究将REV阳性雏鸡胎粪外泌体经特异性REV抗体中和后接种DF-1细胞,以验证其逃避抗体中和的能力。本研究将REV游离病毒或REV阳性雏鸡胎粪外泌体分别接种REV母源抗体阳性雏鸡和阴性雏鸡,观察不同时间的雏鸡体重增长、器官发育指数、血液、泄殖腔和免疫器官中REV的复制情况等指标。结果本研究证实了REV阳性雏鸡胎粪外泌体中包含REV完整基因组成分和3种主要蛋白。REV阳性雏鸡胎粪外泌体经特异性REV抗体中和后接种DF-1细胞,证实在细胞上检出REV高效感染,说明REV阳性雏鸡胎粪外泌体可介导REV逃避抗体中和形成体外感染。将REV游离病毒分别接种REV母源抗体阳性雏鸡和阴性雏鸡,观察不同时间的雏鸡体重增长、器官发育指数、血液、泄殖腔和免疫器官中REV的复制情况等指标,证实REV游离病毒接种母源抗体阴性雏鸡引起严重的体重增长迟缓、肝脏脾脏肿大,而接种母源抗体阳性雏鸡则因为中和作用而显著降低了对鸡的致病性。但REV阳性雏鸡胎粪外泌体按照上述操作接种REV母源抗体阳性雏鸡和阴性雏鸡后,两组鸡的相关致病指标无显著差异,证明母源抗体对外泌体介导的感染无法发挥有效抑制作用。结论本研究解析了REV阳性胎粪外泌体并证实其可作为传染途径在体内外造成有效感染,其感染能力不受抗体的限制,推测胎粪外泌体是介导REV形成早期水平传播和突破抗体抑制的途径之一。 展开更多
关键词 禽网状内皮组织增殖病毒 胎粪 外泌体 免疫逃逸 致病性
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POP基因敲除PK-15细胞系的建立及其对口蹄疫病毒增殖的影响
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作者 卢炳州 李建斌 +10 位作者 王姿逸 杨洋 赵陇和 李亚军 刘华南 李明桂 马坤 郑海学 郭建宏 茹毅 郝荣增 《中国兽医科学》 北大核心 2026年第1期27-32,共6页
为探索脯氨酰寡肽酶(POP)缺失对口蹄疫病毒(FMDV)增殖的影响,采用CRISPR/Cas9基因编辑技术,通过慢病毒包装、嘌呤霉素筛选及有限稀释法单克隆培养,构建POP基因敲除的PK-15细胞系(POP-KO),并以野生型PK-15(WT-PK-15)细胞为对照,接种FMDV... 为探索脯氨酰寡肽酶(POP)缺失对口蹄疫病毒(FMDV)增殖的影响,采用CRISPR/Cas9基因编辑技术,通过慢病毒包装、嘌呤霉素筛选及有限稀释法单克隆培养,构建POP基因敲除的PK-15细胞系(POP-KO),并以野生型PK-15(WT-PK-15)细胞为对照,接种FMDV后采用实时荧光定量RT-PCR检测FMDV RNA水平,通过Western-blot分析病毒结构蛋白VP1表达量及病毒滴度测定(TCID50)方法综合评估POP缺失对FMDV增殖的影响。结果表明,与WT-PK-15细胞相比,POP-KO细胞中VP1蛋白表达水平显著降低(P<0.001),病毒滴度降低了1.24 lg TCID50/m L(P<0.001),FMDV RNA拷贝数显著低于对照细胞(P<0.001)。本研究成功建立了POP基因敲除的PK-15细胞系,证实POP缺失可显著抑制FMDV的增殖,揭示POP是FMDV复制的关键宿主促进因子。 展开更多
关键词 脯氨酰寡肽酶 CRISPR/Cas9 基因敲除 口蹄疫病毒 病毒增殖
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非洲猪瘟病毒CP312R蛋白线性抗原表位鉴定
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作者 张龚蕊 司安琪 +4 位作者 刘田雨 巩明霞 张仕强 张永强 王志亮 《病毒学报》 北大核心 2026年第1期115-125,共11页
目的为深入探究非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)CP312R蛋白的生物学特性,通过2株与CP312R蛋白发生特异性反应的单克隆抗体,识别出该蛋白的一个线性抗原表位,通过合成多肽与ASF阳性临床猪血清反应,确认阳性血清中含有该线... 目的为深入探究非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)CP312R蛋白的生物学特性,通过2株与CP312R蛋白发生特异性反应的单克隆抗体,识别出该蛋白的一个线性抗原表位,通过合成多肽与ASF阳性临床猪血清反应,确认阳性血清中含有该线性抗原表位的抗体。方法通过原核表达一系列CP312R蛋白截短体多肽,使用此前制备的两株单克隆抗体进行Western blot试验,鉴定出单克隆抗体结合位点。进一步诱导表达截短重叠蛋白,与两株单克隆抗体进行Western blot反应,鉴定该蛋白的线性抗原表位。继而合成包含该抗原表位的多肽,与ASF临床阳性猪血清进行ELISA反应。结果初步鉴定出这两株单克隆抗体结合位点为^(117)GLTVKKNEQG^(126)氨基酸,进而通过截短重叠蛋白鉴定出CP312R蛋白1个核心线性抗原表位,即^(118)LTVK^(121)。对ASFV不同基因型比对发现,该位置在ASFVⅠ/Ⅱ型重组毒株和基因Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅳ型、Ⅸ型、ⅩⅩ型、ⅩⅫ型中高度保守。包含该抗原表位的多肽与ASF临床阳性猪血清进行ELISA反应,显示血清中含有该抗原表位的抗体,证明猪感染ASFV后可以产生针对该抗原表位的抗体。结论上述研究结果有助于了解ASFV CP312R的抗原表位,为开发更精准的ASF血清学诊断方法和设计基于CP312R蛋白的疫苗候选抗原提供了理论依据。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 CP312R蛋白 抗原表位 原核表达
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以猴轮状病毒SA11株为骨架表达猪轮状病毒VP4/VP7基因重组病毒的构建及其免疫原性评价
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作者 程曦 陶然 +8 位作者 邓慧 卞贤宇 韩楠 王晨 朱雪蛟 周金柱 张雪寒 杨晓静 李彬 《病毒学报》 北大核心 2026年第1期228-241,共14页
目的为开发新型猪轮状病毒候选疫苗,本研究以猴轮状病毒rSA11株为骨架,利用反向遗传技术构建表达猪轮状病毒NJ2012株(G9P[7]型)VP4、VP7及VP4/6/7基因的三种重组病毒(rSA11-NJ2012-VP4、rSA11-NJ2012-VP7、rSA11-NJ2012-VP4/6/7),并开... 目的为开发新型猪轮状病毒候选疫苗,本研究以猴轮状病毒rSA11株为骨架,利用反向遗传技术构建表达猪轮状病毒NJ2012株(G9P[7]型)VP4、VP7及VP4/6/7基因的三种重组病毒(rSA11-NJ2012-VP4、rSA11-NJ2012-VP7、rSA11-NJ2012-VP4/6/7),并开展体外生物学特性测定及小鼠体内免疫原性分析。方法以NJ2012株为模板构建其VP4、VP6和VP7基因的感染性克隆质粒,分别替换SA11株的相应基因,利用完全基于质粒的反向遗传操作系统构建重组病毒。利用western blot、间接免疫荧光、dsRNA-PAGE、一步生长曲线、蚀斑实验及透射电镜等对拯救的重组病毒进行体外生物学特性鉴定,经免疫小鼠后结合ELISA和中和试验评价其免疫原性。结果细胞病变观察、基因测序、dsRNA-PAGE、间接免疫荧光等实验证实三种重组病毒拯救成功。一步生长曲线、噬斑实验及透射电镜验证了重组病毒与亲本毒株之间生物学特性存在一定差异。三种重组病毒可有效刺激小鼠持续产生高水平特异性IgG,诱导的中和抗体对同型毒株具有良好中和活性。结论本研究成功构建并拯救出表达猪源VP4/VP7基因的重组轮状病毒,其在小鼠体内具有优良免疫原性,为新型猪轮状病毒候选疫苗的快速研发奠定了实验基础。 展开更多
关键词 轮状病毒 反向遗传学 重组病毒 VP4 VP7 免疫原性
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猪繁殖与呼吸综合征病毒CHlh23株的分离、鉴定及遗传进化分析
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作者 李建柱 陈仕斌 +10 位作者 刘培研 孔瑶 王念念 杨大苗 马云欣 胡静 董建国 于林洋 赵攀登 饶丹 张宁 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2026年第3期117-127,共11页
为了解河南省漯河地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行株的遗传变异情况,试验从该地区某疑似猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)发病猪场的病死猪肺脏组织进行PRRSV的分离、鉴定,并对分离毒株进行全基因组扩增与遗传进化分析。结果表明:分离到... 为了解河南省漯河地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行株的遗传变异情况,试验从该地区某疑似猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)发病猪场的病死猪肺脏组织进行PRRSV的分离、鉴定,并对分离毒株进行全基因组扩增与遗传进化分析。结果表明:分离到1株PRRSV,命名为CHlh23,病毒滴度可达1×106.50TCID50/mL;CHlh23株全基因组序列大小为15630 bp。CHlh23株位于美洲型亚谱系1.5分支中,与NADC30-like PRRSV毒株HENAN-HEB、CHsx1401和NADC30株遗传距离较近;其NSP2基因和GP5基因均位于美洲型亚谱系1.5分支中。与美洲型代表毒株VR-2332株比对,CHlh23株GP5基因编码氨基酸的非中和表位区域(第180~197位氨基酸)存在1个氨基酸变异位点(V192I),中和表位区域(第37~45位氨基酸)存在2个氨基酸变异位点(H38Q和L41S),非表位区域存在16个氨基酸变异位点(C10Y、L15P、C19Y、P22L、N33S、L47I、A57R、K59R、V91A、V94I、I121G、L127S、E168D、E170G、V192I、R199C)。CHlh23株的NSP1α、NSP1β、NSP2、NSP3、NSP4、NSP5、NSP7、NSP8、NSP9、NSP10、NSP11、NSP12、ORF1a、ORF1b、ORF2、ORF3、ORF4、ORF5、ORF6、ORF7基因与HENAN-HEB株的核苷酸相似性最高且遗传距离最近,5′UTR(第1~453位核苷酸)和NSP6基因(第1129~1560位核苷酸)与JXA1-P80株的核苷酸相似性最高且遗传距离最近。说明分离到1株NADC30-like PRRSV毒株(CHlh23),CHlh23株属于美洲型亚谱系1.5,可能由HENAN-HEB株(主要亲本毒株)和JXA1-P80株(次要亲本毒株)重组而成。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 分离 鉴定 遗传进化 基因重组
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宏基因组测序技术在蜱媒病原体检测中的应用研究进展
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作者 彭永帅 王梦迪 宋予震 《中国兽医杂志》 北大核心 2026年第1期38-44,共7页
蜱可传播多种病原体,引发一系列蜱媒疾病,对动物和人类健康构成严重威胁。传统检测方法(如聚合酶链式反应)在多病原体同步检测中存在明显局限。近年来,宏基因组测序(mNGS)技术在蜱媒病原体检测中展现出独特的优势,已成为发现和鉴定新发... 蜱可传播多种病原体,引发一系列蜱媒疾病,对动物和人类健康构成严重威胁。传统检测方法(如聚合酶链式反应)在多病原体同步检测中存在明显局限。近年来,宏基因组测序(mNGS)技术在蜱媒病原体检测中展现出独特的优势,已成为发现和鉴定新发病原体、解析复杂微生物群落的有力工具。随着mNGS的不断发展和完善,该技术有望在蜱媒疾病的早期诊断、监测预警和综合防控中发挥更加重要的作用。本文对蜱媒病原体的特点及mNGS技术在蜱媒病原体检测领域的研究进展进行综述,以期为蜱媒疾病的诊断和防控提供技术思路。 展开更多
关键词 宏基因组测序(mNGS) 蜱媒病原体 快速检测 应用
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猪繁殖与呼吸综合征病毒多表位融合蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立及应用
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作者 陈志雄 勾明郗 +7 位作者 范杰 唐小明 张坤 刘甜甜 李欣 赵文龙 李润成 葛猛 《畜牧与兽医》 北大核心 2026年第1期71-78,共8页
旨在建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)多表位融合蛋白(MEFP)间接ELISA抗体检测方法并验证其应用效果。利用融合表达的PRRSV囊膜蛋白MEFP作为包被抗原,通过优化抗原包被浓度、血清稀释度和二抗稀释度等条件,建立检测PRRSV抗体的间接EL... 旨在建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)多表位融合蛋白(MEFP)间接ELISA抗体检测方法并验证其应用效果。利用融合表达的PRRSV囊膜蛋白MEFP作为包被抗原,通过优化抗原包被浓度、血清稀释度和二抗稀释度等条件,建立检测PRRSV抗体的间接ELISA方法(MEFP-ELISA)。结果:该方法最佳抗原包被浓度为200 ng/孔,最佳血清稀释度为1∶100,最佳酶标二抗稀释度为1∶500;具有较高的特异性,与猪圆环病毒2型(PCV2)、猪瘟病毒(CSFV)、伪狂犬病病毒(PRV)等病原抗体无交叉反应;批内和批间变异系数均低于10%,表现出良好的重复性;用该方法与商品化PRRSV囊膜蛋白抗体ELISA试剂盒同时检测447份临床血清,结果显示,总符合率达92.39%,Kappa系数为0.8219;针对疫苗免疫猪的抗体动态监测结果表明,2种方法的抗体变化趋势较为一致;利用该方法检测湖南省13个核心种猪场的650份临床血清,其抗体总阳性率为34.62%,结合PRRSV N蛋白抗体ELISA试剂盒检测结果,综合分析了猪群的PRRSV感染及免疫状况。综上,本研究建立的MEFP-ELISA方法适用于PRRSV血清学检测,具有良好的临床应用前景。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 多表位融合蛋白 抗体 血清学检测
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