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广深地区3种常见猫病毒的分离鉴定及遗传进化分析
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作者 孙媛 梁爽爽 +2 位作者 罗志莹 王婷 马静云 《华南农业大学学报》 北大核心 2026年第1期11-20,共10页
【目的】猫杯状病毒(Feline calicivirus,FCV)、猫细小病毒(Feline parvovirus,FPV)和猫疱疹病毒1型(Feline herpesvirus-1,FHV-1)是常见的高传染性、高致病性病原体,本文针对广深地区的这3种病毒开展研究,以期明确本地FCV、FPV和FHV-1... 【目的】猫杯状病毒(Feline calicivirus,FCV)、猫细小病毒(Feline parvovirus,FPV)和猫疱疹病毒1型(Feline herpesvirus-1,FHV-1)是常见的高传染性、高致病性病原体,本文针对广深地区的这3种病毒开展研究,以期明确本地FCV、FPV和FHV-1的流行情况、遗传变异和演化方向。【方法】本研究于2021年10月至2022年6月收集了广州、深圳地区的动物医院、动物收容所和华南农业大学病猫的眼鼻口拭子、肛拭子样本,通过提取临床样本核酸、one step RT-PCR、常规PCR技术检测FCV、FPV及FHV-1;对阳性样品进行基因扩增及测序,利用DNAStar分析核苷酸序列相似性,使用MEGA 7.0构建系统发育树;使用克兰德尔−里斯猫肾(Crandell-Reese feline kidney,CRFK)细胞接种FCV、FHV-1阳性样品进行病毒分离,连续盲传至出现细胞病变,利用PCR、电子显微镜等技术鉴定分离毒株。【结果】379例具有临床症状的病猫中,FPV、FCV、FHV-1感染率分别为22.16%、19.00%和3.17%;病毒阳性率与猫只性别无关,6月龄及以下患猫中FCV、FPV检出率最高,分别为63.89%、58.33%,FHV-1在12月龄及以上患猫中阳性占比最高,为66.67%。已免疫“妙三多”疫苗的患猫中FCV、FHV-1、FPV均有检出,阳性率分别为75.00%、75.00%、20.24%。成功分离到7株FCV、1株FHV-1和2株FPV。7株FCV分离株全基因组与参考株的核苷酸相似性为75.0%~87.5%,7株FCV分离株形成了两大分支,GZ-1-249和GZ-1-184属于GI分支,而其他5株分离株均属于GII分支。14条FPV VP2基因序列与参考株的核苷酸相似性为97.4%~100.0%,14条序列与“妙三多”疫苗株M38246.1(FPV USA Cu4)等序列共同归属于一大分支。【结论】研究结果丰富了FCV、FPV和FHV-1相关流行病学数据,增强了对本地流行毒株的认识,为未来本土疫苗的研发和优化提供了重要支持。 展开更多
关键词 猫杯状病毒 猫细小病毒 猫疱疹病毒1型 分离 鉴定 遗传进化
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猴痘病毒荧光定量PCR检测方法的建立
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作者 孙健 赵柏林 《山东畜牧兽医》 2026年第1期8-12,共5页
猴痘病毒(Monkeypox virus,MPXV)作为一种重要的人畜共患病毒,其在全球范围内传播和蔓延引起了广泛关注,尤其是在近年来的疫情中,及时有效的检测方法显得尤为重要。为建立一种快速诊断MPXV的检测方法,根据2022年公布的MPXV的靶基因片段F... 猴痘病毒(Monkeypox virus,MPXV)作为一种重要的人畜共患病毒,其在全球范围内传播和蔓延引起了广泛关注,尤其是在近年来的疫情中,及时有效的检测方法显得尤为重要。为建立一种快速诊断MPXV的检测方法,根据2022年公布的MPXV的靶基因片段F3L(462 bp,GenBank登录号AF380138.1)保守区域,设计了1对特异性的引物和1条探针,建立了猴痘病毒荧光定量PCR检测方法。结果显示,本方法仅能有效检测MPXV,与牛结节皮肤病病毒、非洲猪瘟病毒VP72片段质粒、圆环病毒Ⅱ型标准品均无交叉反应;对重组质粒标准品的最低检测限为5.1 copies/μL;批内与批间的重复试验变异系数均小于6%。结果表明,本试验方法具有较强的敏感性、特异性和稳定性,可以用于猴痘病毒的快速鉴别诊断。 展开更多
关键词 猴痘病毒 荧光定量 PCR 检测方法
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猪流行性腹泻病毒(GHN/HB01株)灭活病毒标准物质的研制
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作者 房琳琳 张锋 +3 位作者 刘爽 魏荣 董雅琴 包静月 《中国兽医杂志》 北大核心 2026年第1期45-55,共11页
为提高猪流行性腹泻病毒(PEDV)核酸检测结果的准确性,本试验建立PEDV微滴式数字聚合酶链式反应(ddPCR)检测方法;制备PEDV(GHN/HB01株)灭活病毒标准物质,通过实时荧光定量PCR(qPCR)和PCR方法检测外源病原体以评价其纯净性;采用ddPCR方法... 为提高猪流行性腹泻病毒(PEDV)核酸检测结果的准确性,本试验建立PEDV微滴式数字聚合酶链式反应(ddPCR)检测方法;制备PEDV(GHN/HB01株)灭活病毒标准物质,通过实时荧光定量PCR(qPCR)和PCR方法检测外源病原体以评价其纯净性;采用ddPCR方法检测PEDV N基因的绝对定量值以评估该标准物质的均匀性、稳定性并与9家实验室合作定值;进一步采用qPCR方法对该标准物质进行应用评估。结果显示,本试验建立并优化了PEDV ddPCR方法,制备的PEDV(GHN/HB01株)灭活病毒标准物质不存在外源病原体感染;组内和组间无显著性差异(P>0.05),均匀性好;该标准物质于-20℃稳定保存9个月,4℃稳定保存7 d,25℃稳定保存24 h,可反复冻融3次;该标准物质定值结果为(1.64±0.2624)×10^(3)copies/μL;应用评估证实,该标准物质在qPCR检测体系中表现可靠,适用性良好,可以用于qPCR检测。结果表明,本试验研制的PEDV(GHN/HB01株)灭活病毒标准物质具备准确的定值和良好的稳定性,可直接应用于检测试剂盒开发、实验室方法验证与质量控制全过程,是实现PEDV核酸检测标准化的关键物质基础。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒(PEDV) N基因 微滴式数字PCR(ddPCR) 标准物质 定值
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宏基因组测序技术在蜱媒病原体检测中的应用研究进展
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作者 彭永帅 王梦迪 宋予震 《中国兽医杂志》 北大核心 2026年第1期38-44,共7页
蜱可传播多种病原体,引发一系列蜱媒疾病,对动物和人类健康构成严重威胁。传统检测方法(如聚合酶链式反应)在多病原体同步检测中存在明显局限。近年来,宏基因组测序(mNGS)技术在蜱媒病原体检测中展现出独特的优势,已成为发现和鉴定新发... 蜱可传播多种病原体,引发一系列蜱媒疾病,对动物和人类健康构成严重威胁。传统检测方法(如聚合酶链式反应)在多病原体同步检测中存在明显局限。近年来,宏基因组测序(mNGS)技术在蜱媒病原体检测中展现出独特的优势,已成为发现和鉴定新发病原体、解析复杂微生物群落的有力工具。随着mNGS的不断发展和完善,该技术有望在蜱媒疾病的早期诊断、监测预警和综合防控中发挥更加重要的作用。本文对蜱媒病原体的特点及mNGS技术在蜱媒病原体检测领域的研究进展进行综述,以期为蜱媒疾病的诊断和防控提供技术思路。 展开更多
关键词 宏基因组测序(mNGS) 蜱媒病原体 快速检测 应用
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猪繁殖与呼吸综合征病毒多表位融合蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立及应用
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作者 陈志雄 勾明郗 +7 位作者 范杰 唐小明 张坤 刘甜甜 李欣 赵文龙 李润成 葛猛 《畜牧与兽医》 北大核心 2026年第1期71-78,共8页
旨在建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)多表位融合蛋白(MEFP)间接ELISA抗体检测方法并验证其应用效果。利用融合表达的PRRSV囊膜蛋白MEFP作为包被抗原,通过优化抗原包被浓度、血清稀释度和二抗稀释度等条件,建立检测PRRSV抗体的间接EL... 旨在建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)多表位融合蛋白(MEFP)间接ELISA抗体检测方法并验证其应用效果。利用融合表达的PRRSV囊膜蛋白MEFP作为包被抗原,通过优化抗原包被浓度、血清稀释度和二抗稀释度等条件,建立检测PRRSV抗体的间接ELISA方法(MEFP-ELISA)。结果:该方法最佳抗原包被浓度为200 ng/孔,最佳血清稀释度为1∶100,最佳酶标二抗稀释度为1∶500;具有较高的特异性,与猪圆环病毒2型(PCV2)、猪瘟病毒(CSFV)、伪狂犬病病毒(PRV)等病原抗体无交叉反应;批内和批间变异系数均低于10%,表现出良好的重复性;用该方法与商品化PRRSV囊膜蛋白抗体ELISA试剂盒同时检测447份临床血清,结果显示,总符合率达92.39%,Kappa系数为0.8219;针对疫苗免疫猪的抗体动态监测结果表明,2种方法的抗体变化趋势较为一致;利用该方法检测湖南省13个核心种猪场的650份临床血清,其抗体总阳性率为34.62%,结合PRRSV N蛋白抗体ELISA试剂盒检测结果,综合分析了猪群的PRRSV感染及免疫状况。综上,本研究建立的MEFP-ELISA方法适用于PRRSV血清学检测,具有良好的临床应用前景。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 多表位融合蛋白 抗体 血清学检测
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猫疱疹病毒Ⅰ型SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立及应用
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作者 刘雅雯 赵广荣 +9 位作者 许丽文 孙亚杰 李双双 刘佳佳 李智杰 张成琪 符建海 张子闯 胡博 白雪 《畜牧与兽医》 北大核心 2026年第1期79-84,共6页
猫疱疹病毒I型(FHV-1)是威胁猫科动物健康的重要传染性疾病,本研究旨在研发一种灵敏、高效的FHV-1检测技术。依据GenBank上FHV-1 US6保守区域的基因序列,设计合成1对针对FHV-1 gD基因的引物,建立了一种SYBR Green I荧光定量PCR的检测方... 猫疱疹病毒I型(FHV-1)是威胁猫科动物健康的重要传染性疾病,本研究旨在研发一种灵敏、高效的FHV-1检测技术。依据GenBank上FHV-1 US6保守区域的基因序列,设计合成1对针对FHV-1 gD基因的引物,建立了一种SYBR Green I荧光定量PCR的检测方法,构建标准曲线后分别验证该方法的特异性、敏感性、重复性,并将其进一步应用于人工感染猫产生的临床样本检测。结果:该特异性引物与猫杯状病毒(FCV)、猫细小病毒(FPV)和猫冠状病毒(FCoV)均未出现交叉反应,检测下限为14.78 copies/μL,组内和组间重复试验的变异系数均低于2%;该方法对临床样本的检出率比常规PCR高出25.46%;通过该方法检测人工感染FHV-1强毒后猫的每日排毒量,结果呈现上升趋势,与临床发病程度相符,猫的脏器病毒载量存在个体差异,但集中在心脏、肺脏、肠道和膀胱中检出。综上,该研究建立的SYBR Green I荧光定量PCR方法对FHV-1具有较好的特异性、灵敏度和重复性,为FHV-1感染的快速诊断以及疾病的防控提供方法支持。 展开更多
关键词 猫疱疹病毒Ⅰ型 荧光定量PCR SYBR GreenⅠ US6基因 猫病毒性鼻气管炎
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牛副流感病毒3型NP蛋白在昆虫杆状病毒系统中的表达
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作者 项钰 郭衍冰 +7 位作者 孙兴忠 郝良玉 张天宇 张艺馨 姜乐凡 周子博 王楠 曹利利 《畜牧与兽医》 北大核心 2026年第1期101-106,共6页
为表达牛副流感病毒3型(BPIV3)核衣壳蛋白(NP),利用昆虫表达系统构建pFastBAC-NP重组质粒,经转座获得重组杆粒Bacmid-NP,转染昆虫细胞(Sf9)后获得重组杆状病毒。通过Bacmid-NP感染Sf9细胞表达NP蛋白,利用高浓度咪唑洗脱纯化NP蛋白,利用... 为表达牛副流感病毒3型(BPIV3)核衣壳蛋白(NP),利用昆虫表达系统构建pFastBAC-NP重组质粒,经转座获得重组杆粒Bacmid-NP,转染昆虫细胞(Sf9)后获得重组杆状病毒。通过Bacmid-NP感染Sf9细胞表达NP蛋白,利用高浓度咪唑洗脱纯化NP蛋白,利用半数组织培养感染剂量(TCID_(50))测定病毒滴度,SDS-PAGE和Western blot分析NP蛋白的纯化效果,BCA测定蛋白浓度,并将蛋白免疫小鼠,检测免疫后抗体水平。结果:构建的Bacmid-NP采用pUC/M13通用引物验证,证实NP基因成功克隆至Bacmid杆粒;P3代重组病毒的TCID_(50)为10^(-6.86)/0.1 mL;Bacmid-NP传代后Western blot检测,可在67 ku出现特异性条带;通过SDS-PAGE对感染Bacmid-NP的Sf9细胞进行检测,结果表明上清液与沉淀均可表达;Western blot鉴定结果表明67 ku左右有特异性反应条带,说明NP蛋白可以分泌表达;采用镍柱纯化,SDSPAGE鉴定纯化效果,并将纯化蛋白与BPIV3阳性血清进行Western blot试验,结果显示纯化蛋白为单条带,可以与阳性血清特异性结合,蛋白浓度为0.596 mg/mL,免疫小鼠后血清效价可达1∶64000。综上,本试验利用昆虫表达系统成功表达了NP蛋白,为进一步建立检测方法和疫苗研制提供了技术基础。 展开更多
关键词 牛副流感病毒3型 杆状病毒表达系统 NP蛋白
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猪伪狂犬病毒变异株gB基因主要抗原表位区的鉴定
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作者 翟洪月 王玲 +4 位作者 宋佳静 王佳宝 曹家嘉 李丹丹 冷超粮 《南阳师范学院学报》 2026年第1期47-52,共6页
采用分段表达策略分析猪伪狂犬病毒(PRV)变异株gB蛋白的抗原表位区域。针对PRV变异株的gB基因设计5对特异性引物,成功扩增出包含不同抗原表位特征区的5个基因片段(gB-1至gB-5)。将各片段定向克隆至pET-28a表达载体构建重组质粒,经双酶... 采用分段表达策略分析猪伪狂犬病毒(PRV)变异株gB蛋白的抗原表位区域。针对PRV变异株的gB基因设计5对特异性引物,成功扩增出包含不同抗原表位特征区的5个基因片段(gB-1至gB-5)。将各片段定向克隆至pET-28a表达载体构建重组质粒,经双酶切和测序验证后,转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导重组蛋白表达。SDS-PAGE电泳结果显示,gB-3(16 kDa)、gB-4(30 kDa)和gB-5(30 kDa)片段在大肠杆菌中实现高效表达。Western Blot分析结果显示,3种重组融合蛋白均能与抗His标签蛋白的单克隆抗体发生特异性反应,同时与收集自河南省不同地区规模化猪场的PRV阳性猪血清发生特异性免疫反应,其中,与重组蛋白gB-5的反应活性显著高于gB-3和gB-4,表明gB-5蛋白有效保留了PRV天然gB蛋白的关键抗原表位。gB-5蛋白位于PRV gB蛋白的第543~743位氨基酸区域,在不同PRV毒株中高度保守。成功筛选出具有良好抗原活性的PRV gB基因重组蛋白,为后续建立PRV血清学诊断方法提供了重要依据和候选抗原。 展开更多
关键词 PRV变异株 GB基因 原核表达 抗原表位分析
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猪圆环病毒2型微滴数字PCR检测方法的建立及临床应用
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作者 刘武函 唐小明 +8 位作者 彭志 张坤 谢怡灵 范仲鑫 王卫国 尚玲 张梦凡 杨青 胡巧云 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2026年第1期120-125,共6页
为建立一种特异性强、敏感性高、重复性好的猪圆环病毒2型(PCV-2)微滴数字PCR检测方法,试验基于PCV-2 ORF1保守区域设计引物和探针,通过优化引物浓度、探针浓度和退火温度及特异性、敏感性和重复性试验建立微滴数字PCR方法,并采用该方法... 为建立一种特异性强、敏感性高、重复性好的猪圆环病毒2型(PCV-2)微滴数字PCR检测方法,试验基于PCV-2 ORF1保守区域设计引物和探针,通过优化引物浓度、探针浓度和退火温度及特异性、敏感性和重复性试验建立微滴数字PCR方法,并采用该方法对90份临床样本进行检测。结果表明:建立的PCV-2微滴数字PCR检测方法的最佳引物和探针浓度分别为18μmol/L和9μmol/L,退火温度为61℃;能特异性检出PCV-2,与多种常见猪病原[猪圆环病毒3型(PCV-3)、伪狂犬病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、非洲猪瘟病毒(ASFV)、猪瘟病毒(CSFV)和猪流行性腹泻病毒(PEDV)]无交叉反应;最低检测限为3.48 copies/μL;重复性试验中扩增后的拷贝数组内与组间变异系数范围分别在0.91%~6.13%和1.44%~8.53%之间,均小于10%。90份临床样本中,建立的微滴数字PCR方法检出PCV-2阳性样本43份,检出率为47.78%,经统计微滴数字PCR方法检出的阳性样本包含了实时荧光定量PCR方法检出的所有阳性样本,与实时荧光定量PCR方法的符合率为88.89%。说明本研究建立的PCV-2微滴数字PCR检测方法特异性强、敏感性高、重复性好,适用于临床样本(特别是低病毒载量样本)的检测。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 微滴数字PCR 病毒检测 检测方法 特异性试验 敏感性试验 重复性试验
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新疆地区牛呼吸道疾病综合征主要病毒性病原流行病学调查
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作者 何琴 刘馨博 +9 位作者 甄杰 冯琦 易鹏飞 马英才 李娜 王夕虎 钟旗 姚刚 陈如龙 马雪连 《中国畜牧兽医》 北大核心 2026年第1期402-417,共16页
【目的】牛呼吸道疾病综合征(BRDC)作为一种多病原疾病,可导致牛群出现高发病率和高死亡率,对养牛业造成了严重影响。为评估新疆地区患有BRDC牛的病毒性病原感染情况,本研究对新疆6个地区的BRDC进行了病毒性病原检测。【方法】2023年1-1... 【目的】牛呼吸道疾病综合征(BRDC)作为一种多病原疾病,可导致牛群出现高发病率和高死亡率,对养牛业造成了严重影响。为评估新疆地区患有BRDC牛的病毒性病原感染情况,本研究对新疆6个地区的BRDC进行了病毒性病原检测。【方法】2023年1-12月在新疆焉耆、喀什、昌吉、博乐、伊犁、阿克苏6个地区采集561份患有呼吸道症状牛的鼻拭子,采用PCR技术对引起BRDC常见的7种病毒牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)、牛腺病毒3型(BAV-3)、牛冠状病毒(BCoV)、A型牛鼻炎病毒(BRAV)、B型牛鼻炎病毒(BRBV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛副流感病毒3型(BPIV-3)进行检测,分析不同季节、不同地区和不同品种牛群的7种病原感染情况。【结果】7种病原均有检出,IBRV检出率最高(14.4%),BVDV次之(13.0%),BAV-3检出率最低(7.0%);混合感染以二重感染为主(13.4%),主要病原包括BAV-3+BCoV(1.8%)、IBRV+BPIV-3(1.6%)和BRBV+BVDV(1.6%);三重感染(3.7%)检出率最高的是IBRV+BPIV-3+BVDV(0.5%);四重感染(0.6%)和五重感染(0.6%)也均有检出,如IBRV+BRAV+BRBV+BPIV-3(0.4%)和IBRV+BAV-3+BCoV+BRAV+BPIV-3(0.2%)等。季节性分析显示,不同病原的检出率具有显著差异,春季BAV-3检出率最高(11.0%),夏季BVDV检出率最高(34.0%),秋季IBRV检出率最高(61.3%),冬季则以BPIV-3检出率最高(38.7%)。在地理分布上,焉耆地区的BRBV检出率最高(50.0%),喀什地区以BAV-3检出率最高(15.3%),昌吉和博乐地区以IBRV检出率最高(分别为28.8%和22.6%),伊犁地区以BVDV检出率最高(55.7%),而阿克苏地区则检出了相同比例的BRBV与BPIV-3(各35.3%)。此外,将样本按照牛的用途分类为肉牛和奶牛2组,结果显示,奶牛主要感染IBRV(29.5%),而肉牛则以BVDV感染为主(12.9%)。【结论】调查结果表明,2023年新疆部分地区BRDC的病毒性病原感染存在明显的季节、地区和品种之间的差异性,本研究可为制定新疆地区BRDC的防控策略提供参考。 展开更多
关键词 牛呼吸道疾病综合征 病毒检测 混合感染 流行病学调查
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2020—2024年广西贺州市非洲猪瘟病毒检测分析
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作者 虞与理 李志贤 +3 位作者 周小康 苏慧 徐宇嘉 周誉阳 《畜牧业环境》 2026年第2期97-98,共2页
为全面评估广西贺州市非洲猪瘟病毒(ASFV)的污染状况与风险态势,本研究于2020—2024年间对养殖、屠宰、市场等环节共计136 469份样品(包括生猪、环境拭子、猪肉及猪肉制品)进行了非洲猪瘟病毒荧光定量PCR(q PCR)检测。结果表明,分环节看... 为全面评估广西贺州市非洲猪瘟病毒(ASFV)的污染状况与风险态势,本研究于2020—2024年间对养殖、屠宰、市场等环节共计136 469份样品(包括生猪、环境拭子、猪肉及猪肉制品)进行了非洲猪瘟病毒荧光定量PCR(q PCR)检测。结果表明,分环节看,养殖环节ASFV阳性率为0.00%,屠宰环节阳性率为0.25%,市场及其他环节阳性率为0.65%;分样本类型看,生猪样本阳性率为0.00%,环境样本阳性率为0.17%,猪肉及肉制品样本阳性率为0.74%。本研究显示市场、其他环节以及猪肉及猪肉制品样本是ASFV污染的重要高风险点。为此,建议扩大流行病学调查覆盖面,增加病原学监测频次,以期及时、精准掌握本地病毒流行态势与传播规律,全面评估外部风险对养殖场的影响,切实保障非洲猪瘟疫情不发生。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 阳性率 流行病学
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鹅星状病毒ORF2蛋白多克隆抗体制备及鉴定
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作者 赵忠麒 邹蒙蒙 +5 位作者 张芸菁 何丽霞 武松山 张欣欣 杨桂君 李广兴 《中国畜牧兽医》 北大核心 2026年第1期368-377,共10页
【目的】采用原核表达系统表达鹅星状病毒(Goose astrovirus,GAstV)ORF2蛋白,并制备其兔抗多克隆抗体,为该病毒致病机制和诊断方法研究提供物质基础。【方法】构建重组原核表达质粒pGEX-6P-1-ORF2,并通过PCR和双酶切对重组质粒鉴定后,... 【目的】采用原核表达系统表达鹅星状病毒(Goose astrovirus,GAstV)ORF2蛋白,并制备其兔抗多克隆抗体,为该病毒致病机制和诊断方法研究提供物质基础。【方法】构建重组原核表达质粒pGEX-6P-1-ORF2,并通过PCR和双酶切对重组质粒鉴定后,将其转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,通过IPTG诱导蛋白表达并优化反应条件,获得GAstV ORF2蛋白。利用纯化的GAstV ORF2蛋白免疫新西兰大白兔,制备兔抗GAstV ORF2多克隆抗体。采用间接ELISA法测定多克隆抗体效价,通过Western blotting和间接免疫荧光(IFA)法检测多克隆抗体的免疫原性和特异性;为了明确GAstV在雏鹅组织中的嗜性和定位,利用制备的多克隆抗体,通过免疫组织化学(IHC)法检测感染雏鹅肝脏和肾脏组织中的病毒分布情况。【结果】PCR和双酶切鉴定表明成功构建重组原核表达质粒pGEX-6P-1-ORF2,通过原核表达成功获得GAstV ORF2蛋白,纯化后蛋白浓度为1.38 mg/mL。免疫新西兰大白兔后获得兔抗GAstV ORF2蛋白多克隆抗体,其效价达1∶100000。Western blotting结果显示,多克隆抗体与纯化后GAstV ORF2蛋白出现特异性反应条带;IFA结果显示,多克隆抗体与GAstV及真核表达GAstV ORF2蛋白产生特异性反应;IHC检测结果显示,GAstV在感染雏鹅的肝脏与肾脏广泛分布,GAstV特异性表达于实质细胞与炎性细胞的胞浆内。【结论】本研究成功构建重组原核表达质粒pGEX-6P-1-ORF2,并进行体外诱导表达制备了兔抗GAstV ORF2蛋白多克隆抗体,该多克隆抗体效价高、特异性强,可用于GAstV感染雏鹅体内病毒抗原检测。 展开更多
关键词 鹅星状病毒(GAstV) ORF2蛋白 原核表达 多克隆抗体
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一种基于截短N蛋白的猪丁型冠状病毒抗体ELISA检测方法的建立 被引量:1
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作者 王东升 于瑞明 +5 位作者 张莉萍 白英杰 刘霞 王永录 杜晓华 刘新生 《生物工程学报》 北大核心 2025年第7期2760-2773,共14页
为了建立一种猪丁型冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)抗体检测方法,将PDCoV CH/XJYN/2016毒株N基因序列插入原核表达质粒载体pColdⅡ中,表达重组蛋白PDCoV-N1和PDCoV-N2,经SDS-PAGE分析和Ni+-NTA纯化后,检测重组原核蛋白PDCoV... 为了建立一种猪丁型冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)抗体检测方法,将PDCoV CH/XJYN/2016毒株N基因序列插入原核表达质粒载体pColdⅡ中,表达重组蛋白PDCoV-N1和PDCoV-N2,经SDS-PAGE分析和Ni+-NTA纯化后,检测重组原核蛋白PDCoV-N1和PDCoV-N2与猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)阳性血清的反应原性和特异性。同时对重组真核蛋白PDCoV-N1和PDCoV-N2进行Western blotting和间接免疫荧光实验验证分析。最后使用重组原核蛋白PDCoV-N2建立间接ELISA方法,优化反应条件,检测敏感性、特异性及重复性,并对102份临床血清进行了检测。重组原核蛋白PDCoV-N2与PEDV抗血清交叉反应较低。以PDCoV-N2蛋白制备的间接ELISA方法的最优条件为:抗原包被浓度1.25μg/mL,37℃包被1 h,BSA封闭液4℃过夜,血清最佳稀释浓度1:50,37℃孵育1 h,酶标二抗最佳稀释比例为1:80000,37℃孵育1 h,加入四甲基联苯胺(tetramethylbenzidine,TMB)显色液37℃反应10 min。待检样品的S/P值(样本值–阴性对照值)/(阳性对照值–阴性对照值)≥0.45为阳性,S/P值≤0.38为阴性,S/P值介于0.45和0.38之间,则为可疑。检测猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)、猪圆环病毒2型(porcine circovirus 2,PCV2)、猪传染性胃肠炎病毒(transmissiblegastroenteritis of swine,TGEV)、口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)、非洲猪瘟病毒(african swine fever virus,ASFV)阳性血清,结果显示,其他冠状病毒的S/P值均小于0.38,表明其具有良好的特异性;PDCoV抗血清800倍稀释后仍为阳性;批间和批内重复性实验结果显示,本方法变异系数均小于10%;临床血清样本检测结果显示,该方法与中和实验的符合率为94.12%。本研究基于截短的PDCoV N蛋白,建立了能够检测抗PDCoV特异性IgG抗体的ELISA方法,且该方法敏感、特异、稳定、重复性好,为PDCoV的临床诊断提供了新的方法。 展开更多
关键词 猪δ冠状病毒 截短N蛋白 IGG抗体 间接ELISA
原文传递
山西地区鸽圆环病毒全基因组序列的测定与分析 被引量:3
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作者 张娟 任鹏飞 +3 位作者 李兴 高振 王仲兵 梁立滨 《中国预防兽医学报》 北大核心 2025年第1期96-101,共6页
为了解山西地区鸽圆环病毒(PiCV)的遗传演化特征,本研究从山西太原、晋中等地区鸽养殖场采集10份疑似感染PiCV的病料样品经常规处理后进行Cap基因的PCR检测。结果显示,从10份病料样品中检测到1份PiCV阳性样品,将鉴定的PiCV命名为SX01/Sh... 为了解山西地区鸽圆环病毒(PiCV)的遗传演化特征,本研究从山西太原、晋中等地区鸽养殖场采集10份疑似感染PiCV的病料样品经常规处理后进行Cap基因的PCR检测。结果显示,从10份病料样品中检测到1份PiCV阳性样品,将鉴定的PiCV命名为SX01/Shanxi/2023株。通过PCR分段扩增SX01/Shanxi/2023株的全基因组序列并测序,利用SeqMan软件将序列拼接。结果显示,分别获得759bp和1560bp的目的片段,经测序拼接后获得了PiCV全长2038bp的全基因组序列。利用MegAlign软件分析PiCV全基因组序列的同源性;采用IQ-tree软件构建PiCV全基因组的遗传进化树;利用ClusterW软件分析PiCV全基因组编码氨基酸序列的变异;利用Simplot和RDP4软件对SX01/Shanxi/2023株进行重组分析。结果显示:SX01/Shanxi/2023株与国内外PiCV全基因组序列的同源性在84.6%~96.3%,其中与德国PiCVCoCV株同源性最高达95.1%,与我国陕西TF1/SN/2016株的同源性最高达96.3%。进化树结果显示,SX01/Shanxi/2023株与国内陕西TF1/SN/2016株及DS1/GS/2018株处于同一进化分支,亲缘关系较近。氨基酸序列分析结果显示,SX01/Shanxi/2023株Cap蛋白及Rep蛋白氨基酸序列与PiCV参考株相比均发生了部分氨基酸位点的插入、缺失或突变,其中Cap蛋白氨基酸序列变异多于Rep蛋白。重组分析结果显示,该株病毒是由陕西TF1/SN/2016株为主要亲本,陕西WL1/SN/2018株为次要亲本形成的重组病毒,重组断点位于nt520。基于IQ-tree软件构建的重组断裂点位点前后(nt1~nt520、nt521~nt2038)的进化树进一步验证了上述结果。本研究首次在山西地区检测到PiCV,丰富了PiCV分子生物学特征和流行病学研究内容,也为山西地区PiCV感染的防控提供了重要参考依据。 展开更多
关键词 鸽圆环病毒 全基因组 遗传进化分析 重组分析
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猪繁殖与呼吸综合征疫苗研究进展 被引量:1
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作者 黄晓兵 刘爱军 +1 位作者 谢荣辉 张传亮 《中国兽医学报》 北大核心 2025年第6期1338-1347,共10页
猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是一种严重危害养猪业的传染病。该病的病原体为猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV),主要感染猪肺泡巨噬细... 猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是一种严重危害养猪业的传染病。该病的病原体为猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV),主要感染猪肺泡巨噬细胞并破坏免疫系统。由于缺乏针对PRRSV的特定抗病毒药物,疫苗接种在该病的防控中至关重要。目前,PRRS疫苗种类繁多,包括减毒活疫苗、灭活疫苗、亚单位疫苗、DNA疫苗和载体疫苗等,但只有减毒活疫苗和灭活疫苗被广泛应用于PRRS的防控。活疫苗提供了较好的保护效果,但交叉保护能力较弱,且存在安全隐患。灭活疫苗虽然安全性较高,但免疫效力相对较差。本文对减毒活疫苗、灭活疫苗、亚单位疫苗、载体疫苗、DNA疫苗、mRNA疫苗和病毒样颗粒疫苗等PRRS疫苗的优缺点及适用性进行了全面综述,旨在为下一代PRRS疫苗的研发提供理论依据。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征 PRRSV 疫苗
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禽白血病病毒抗体间接ELISA检测方法的建立与应用 被引量:1
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作者 苏晓月 吕转平 +2 位作者 沈亚安 赵明明 唐思静 《家畜生态学报》 北大核心 2025年第1期64-69,共6页
为了建立一种禽白血病病毒(ALV)抗体检测方法,利用原核表达禽白血病病毒的p27蛋白建立一种检测ALV抗体的间接ELISA方法。结果显示,p27蛋白以包涵体形式表达,Western blot检测显示p27蛋白具有良好的反应活性,以p27蛋白为包被抗原建立的间... 为了建立一种禽白血病病毒(ALV)抗体检测方法,利用原核表达禽白血病病毒的p27蛋白建立一种检测ALV抗体的间接ELISA方法。结果显示,p27蛋白以包涵体形式表达,Western blot检测显示p27蛋白具有良好的反应活性,以p27蛋白为包被抗原建立的间接ELISA方法检测NDV、IBDV、IBV、AIV-H9、ILTV阳性血清均为阴性,最低抗体检出效价为1︰12800,与进口试剂盒的符合率为94.87%,检测临床血清样品的阳性率为14.02%。结果说明该研究建立的间接ELISA方法特异性强、敏感性高、符合性好,可为ALV的检测和净化等提供一种简单快速的方法。 展开更多
关键词 禽白血病病毒 间接ELISA方法 抗体检测 净化
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抗猪流行性腹泻病毒活性物质及其作用机制研究进展 被引量:1
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作者 刘宇 苏思思 +3 位作者 汪子骞 吴佳壕 陈红伟 杨洪早 《生物工程学报》 北大核心 2025年第7期2519-2533,共15页
猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)是一种能引起猪流行性腹泻的肠道冠状病毒,可致仔猪腹泻、呕吐、消瘦甚至死亡。由于PEDV毒株类型多样,传统疫苗难以持续有效防治。本文综述了活性物质调控胞内信号通路及病毒蛋... 猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)是一种能引起猪流行性腹泻的肠道冠状病毒,可致仔猪腹泻、呕吐、消瘦甚至死亡。由于PEDV毒株类型多样,传统疫苗难以持续有效防治。本文综述了活性物质调控胞内信号通路及病毒蛋白、微生物代谢产物提高宿主免疫机能等抗PEDV策略及其作用机理,并强调了PEDV耐药性产生和PEDV突破种间屏障可能带来的危害,为新型抗病毒药物或疫苗研制提供了参考。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 混合感染 信号通路 病毒蛋白 微生物代谢产物
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鸽腺病毒的病原学特征及分子生物学检测技术研究进展 被引量:1
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作者 庄金秋 苗立中 +4 位作者 谢金文 宋云峰 王艳 王寒竹 王文秀 《家禽科学》 2025年第9期51-56,共6页
腺病毒是感染鸽的一种常见致病性病原体。通常单纯感染腺病毒的鸽群病死率较低,一旦与大肠杆菌等混合感染后,常造成鸽子的大量死亡,给养鸽业带来严重的经济损失。目前鸽腺病毒感染因在临床上既难以确诊又无疫苗预防,所以建立早期、快速... 腺病毒是感染鸽的一种常见致病性病原体。通常单纯感染腺病毒的鸽群病死率较低,一旦与大肠杆菌等混合感染后,常造成鸽子的大量死亡,给养鸽业带来严重的经济损失。目前鸽腺病毒感染因在临床上既难以确诊又无疫苗预防,所以建立早期、快速、敏感、特异的检测方法对疾病的有效防控具有重要意义。本文综述了鸽腺病毒的病原学特征、分子生物学检测技术的最新研究进展,以期为疾病防控提供参考。 展开更多
关键词 禽腺病毒 鸽腺病毒 病原学 检测技术
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非洲猪瘟弱毒疫苗效力评价研究进展 被引量:1
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作者 戈胜强 沙洲 +10 位作者 崔进 房琳琳 王潇葳 于家荣 胡永新 张永强 李瑞红 左媛媛 郑辉 魏荣 王志亮 《中国动物检疫》 2025年第2期51-56,共6页
非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)感染引起的烈性传染病。目前在研的ASF疫苗仍难以兼顾安全绝对保证及效力确实可靠。本文对已报道的ASF弱毒疫苗相关研究数据进行总结分析,分别从攻... 非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)感染引起的烈性传染病。目前在研的ASF疫苗仍难以兼顾安全绝对保证及效力确实可靠。本文对已报道的ASF弱毒疫苗相关研究数据进行总结分析,分别从攻毒剂量及途径、攻毒后评价指标等方面进行综述。总结分析发现:ASF弱毒疫苗研究主要以免疫攻毒方式探究其效力;肌内注射剂量多为102~104 HAD50/TCID50,而与自然感染相似的口鼻接种途径不同感染方式采用的剂量差异较大;疫苗免疫后攻毒常以体温反应、临床表现、死亡情况、病毒血症、排毒水平等作为评价指标,并结合临床评分标准科学展示临床指标。未来在技术层面,ASF弱毒疫苗效力评价还应进一步探索模拟自然感染途径的疫苗攻毒保护试验。 展开更多
关键词 非洲猪瘟 弱毒疫苗 评价指标 效力评价
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2株鹅源呼肠孤病毒的分离鉴定及血清学相关性研究 被引量:1
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作者 梁昭平 杨惠湖 +6 位作者 李雨泽 黄剑标 林俊杰 王一侨 罗浩健 梅堃 黄淑坚 《中国家禽》 北大核心 2025年第1期71-81,共11页
为了解当前流行的鹅源呼肠孤病毒(Goose reovirus,GRV)的分子特征及血清学相关性,研究将RT-PCR检测GRV阳性的病鹅肝脏组织悬液接种鹅胚成纤维细胞进行病毒分离,通过RT-PCR、测序获取病原全基因组序列并进行分析,并将分离病原接种ST、LMH... 为了解当前流行的鹅源呼肠孤病毒(Goose reovirus,GRV)的分子特征及血清学相关性,研究将RT-PCR检测GRV阳性的病鹅肝脏组织悬液接种鹅胚成纤维细胞进行病毒分离,通过RT-PCR、测序获取病原全基因组序列并进行分析,并将分离病原接种ST、LMH和Vero细胞,探究其在不同细胞上的生长特性,通过交叉中和试验确定病原与其他水禽源呼肠孤病毒间的血清学相关性。结果显示:从病鹅肝脏组织中分离到2株GRV,命名为GD208和GD225,两分离株间核苷酸同源性较低;GD208株与参考株GRV-GD2020遗传距离较近,核苷酸相似性为99.1%~99.6%;GD225株与2018年之后报道的新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)XT18、DE150、QR等毒株遗传距离较近,核苷酸相似性为95.3%~98.9%;GD208株和GD225株在LMH细胞中增殖效果较好,TCID50分别为10-3.7/0.1 mL和10-5.0/0.1 mL;GD208株仅能被同源血清及番鸭呼肠孤病毒(MDRV)阳性血清中和,GD225株可被同源血清、NDRV、MDRV和GD208株阳性血清中和。结果表明,试验分离到两株不同基因型和血清型的GRV,其分子特征和抗原相关性与其他禽源呼肠孤病毒存在一定差异,该结果可为GRV感染的防控提供参考。 展开更多
关键词 鹅源呼肠孤病毒 遗传进化 细胞培养特性 交叉中和
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