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基于牛流行热病毒G蛋白的免疫胶体金检测方法的建立 被引量：1
1
作者 王雪妍 靳双媛 +3 位作者 杜家伟 温宏武 李永琴 许立华 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期4429-4439,共11页
【目的】建立牛流行热病毒(Bovine ephemeral fever virus,BEFV)的免疫胶体金检测方法,为牛流行热(BEF)诊断提供研究基础。【方法】构建原核表达载体pET32a-BEFV-G,将其转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行表达,对诱导成功后的表达产... 【目的】建立牛流行热病毒(Bovine ephemeral fever virus,BEFV)的免疫胶体金检测方法,为牛流行热(BEF)诊断提供研究基础。【方法】构建原核表达载体pET32a-BEFV-G,将其转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行表达,对诱导成功后的表达产物进行纯化和SDS-PAGE、Western blotting鉴定。以纯化后的蛋白作为特异性抗原包被检测线,以链球菌G蛋白作为金标抗原,与金纳米颗粒结合后标记在金标垫上,用羊抗鼠IgG作为质控线,通过优化不同的反应条件,建立检测BEFV的免疫胶体金检测方法,并对试纸条进行敏感性、特异性和重复性检测。【结果】SDS-PAGE结果显示,在IPTG终浓度为0.75 mmol/L时,37℃诱导8 h的条件下重组BEFV G蛋白表达量最大,且以包涵体形式表达,分子质量约为46 ku。Western blotting结果显示,浓缩纯化后的重组BEFV G蛋白具有较好的反应原性,可作为包被抗原用于免疫胶体金试纸条的建立。在质控线包被的抗体羊抗鼠IgG浓度为2 mg/mL,BEFV G蛋白包被浓度为0.6 mg/mL,喷金量为2.5μL/cm的条件下,3~5 min就可完成检测。制备的试纸条有较高的敏感性和特异性,血清稀释倍数为40倍的时候显色接近消线,且试纸条仅与BEFV阳性血清发生显色反应,与牛冠状病毒(BCoV)、牛轮状病毒(BRV)、牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)等其他病毒阳性血清均无交叉反应,阳性血清样本重复性试验证明试纸条的重复性较高,成功建立了免疫胶体金检测方法。【结论】本研究以原核表达的G蛋白为抗原成功制备了检测BEFV的新型免疫胶体金试纸条,该检测试纸条特异性强、稳定性好,适合用于临床快速检测BEF。 展开更多
关键词 牛流行热病毒(BEFV) G蛋白 原核表达 蛋白纯化 免疫胶体金
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黑龙江尚志地区莱姆病伯氏疏螺旋体的鉴定与遗传进化分析 被引量：8
2
作者 牛庆丽 杨吉飞 +10 位作者 关贵全 付钰广 马米玲 李有全 刘军龙 刘志杰 刘爱红 任巧云 郝雪峰 罗建勋 殷宏 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期661-666,共6页
自我国黑龙江省尚志市野外采集的蜱体内分离出1株莱姆病伯氏疏螺旋体,并对其进行了形态观察及分子生物学分析。利用BSK H分离培养法,经暗视野显微镜和姬姆萨染色观察,菌体呈螺旋状。根据已报道的伯氏疏螺旋体16S rRNA基因序列设计引物,... 自我国黑龙江省尚志市野外采集的蜱体内分离出1株莱姆病伯氏疏螺旋体,并对其进行了形态观察及分子生物学分析。利用BSK H分离培养法,经暗视野显微镜和姬姆萨染色观察,菌体呈螺旋状。根据已报道的伯氏疏螺旋体16S rRNA基因序列设计引物,结合参考文献设计的外膜蛋白A(OspA)基因引物经PCR扩增并测序,与GenBank中的各种伯氏疏螺旋体基因型建立系统发生树并进行同源性分析。结果表明,16S rRNA基因核苷酸序列与GenBank中的伽氏疏螺旋体(Borrelia garinii)DK27(X85193)具有较高的同源性,可达99.5%;OspA基因核苷酸序列与报道的Borrelia gariniiKhab(AY502600)有较高的同源性,为93.6%。根据序列分析结果,认为该分离株属于Borrelia garinii基因型,命名为SZ,该菌株16SrRNA基因和OspA基因核酸序列已提交到GenBank(登录号分别为HM007279和HM007278)。 展开更多
关键词 伯氏疏螺旋体 分离 鉴定 系统发生树
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致仔猪腹泻的雷氏普罗威登斯菌的分离鉴定 被引量：7
3
作者 芮萍 田瑞 +6 位作者 刘玄福 张东林 杨彩然 刘谢荣 宋涛 孟亚娜 马增军 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第10期1910-1912,1932,共4页
秦皇岛市某猪场哺乳仔猪发生以腹泻为主要临床表现的疾病,为查明其病因,无菌采集濒死仔猪小肠内容物进行细菌分离培养、培养特性、生化特性鉴定,初步表明该分离菌株为雷氏普罗威登斯菌(编号:Q20160503)。该菌的16SrRNA基因序列同源性比... 秦皇岛市某猪场哺乳仔猪发生以腹泻为主要临床表现的疾病,为查明其病因,无菌采集濒死仔猪小肠内容物进行细菌分离培养、培养特性、生化特性鉴定,初步表明该分离菌株为雷氏普罗威登斯菌(编号:Q20160503)。该菌的16SrRNA基因序列同源性比对分析表明,分离菌与Providencia rettgeri同源性达99.1%~99.3%。动物回归试验证实该分离菌株为致病菌。分离菌株对阿莫西林-克拉维酸钾、头孢噻呋钠、丁胺卡那霉素、多西环素、氟苯尼考、左氧氟沙星、黏菌素、磺胺异恶唑等13种药物高度耐药,仅对美罗培南、乙酰甲喹敏感。 展开更多
关键词 仔猪 雷氏普罗威登斯菌 16S RRNA 分离鉴定 致病性
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国内莱姆病研究进展 被引量：24
4
作者 牛庆丽 殷宏 罗建勋 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2009年第10期89-93,共5页
莱姆病是由伯氏疏螺旋体引起的,由蜱传播的自然疫源性疾病,是新发现的人兽共患传染病,主要经蜱叮咬人、兽而传播。该病分布广泛,全世界至今已有五大洲的70多个国家报告发现了该病,而且发病区域仍在继续扩大,发病率呈现上升趋势。我国自... 莱姆病是由伯氏疏螺旋体引起的,由蜱传播的自然疫源性疾病,是新发现的人兽共患传染病,主要经蜱叮咬人、兽而传播。该病分布广泛,全世界至今已有五大洲的70多个国家报告发现了该病,而且发病区域仍在继续扩大,发病率呈现上升趋势。我国自从1986年调查发现东北林区人群中存在莱姆病的发生和流行以来,现已证实29个省(市、区)的人群中存在莱姆病的感染,并从病原学上证实其中至少有19个省(市、区)存在该病的自然疫源地,人群中有莱姆病的发生和流行。对动物宿主的调查证实,牛、马、羊、狗、鼠等均存在莱姆病感染,不同地区及不同种动物莱姆病感染存在较大差异。论文从莱姆病的病原分类、流行病学、传播途径、传染源和分子生物学等几方面阐述了莱姆病在中国的流行情况,为进一步了解莱姆病的流行及有效防控提供参考。 展开更多
关键词 莱姆病 分类 流行病学 分子生物学 防控
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莱姆病的研究进展 被引量：12
5
作者 付钰广 罗建勋 殷宏 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期99-105,共7页
结合国内外对莱姆病的研究结果,从病原学、流行病学(地理分布、贮存宿主、传播媒介和易感人群)、发病机理、临床症状、诊断(包括病原学诊断、血清学诊断和分子生物学诊断)、预防和治疗等方面阐述了莱姆病的研究进展,旨在为该病的深入研... 结合国内外对莱姆病的研究结果,从病原学、流行病学(地理分布、贮存宿主、传播媒介和易感人群)、发病机理、临床症状、诊断(包括病原学诊断、血清学诊断和分子生物学诊断)、预防和治疗等方面阐述了莱姆病的研究进展,旨在为该病的深入研究提供参考。 展开更多
关键词 莱姆病 病原学 流行病学 临床症状 检测
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陕西省蜱莱姆病螺旋体分子流行病学研究 被引量：8
6
作者 李志清 刘增加 +4 位作者 宫占威 张芳 费晋秀 刘涛 杨广 《寄生虫与医学昆虫学报》 CAS 2010年第3期148-151,共4页
采用巢式PCR和RFLP方法分析研究陕西地区不同蜱种感染莱姆病螺旋体情况及基因型.结果共检测蜱样1 116只,检测出阳性138只,阳性率为12.35%.嗜群血蜱B.b.s.l.阳性率为30.06%（107/356）,其中84只为B. garinii基因型,23只为B. afzelii基因... 采用巢式PCR和RFLP方法分析研究陕西地区不同蜱种感染莱姆病螺旋体情况及基因型.结果共检测蜱样1 116只,检测出阳性138只,阳性率为12.35%.嗜群血蜱B.b.s.l.阳性率为30.06%（107/356）,其中84只为B. garinii基因型,23只为B. afzelii基因型 达吉克斯坦革蜱B.b阳性率为3.88%（29/747）,24只为B. garinii基因型,5只为B. afzelii基因型 日本血蜱B.b.s.l.阳性率为15.38%（2/13）,均为B. garinii基因型.3个地区蜱感染莱姆病螺旋体的阳性率有显著性差异（P〈0.01,χ2=36.16）,其中以富县林区阳性率（17.44%）为最高.研究证实陕西地区嗜群血蜱、达吉克斯坦革蜱和日本血蜱存在莱姆病螺旋体的感染,以伯氏疏螺旋体B.garinii基因型为主. 展开更多
关键词 陕西省 莱姆病 伯氏疏螺旋体 基因型 蜱类
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一株藏绵羊源短小芽孢杆菌的分离鉴定及生物学特性研究 被引量：14
7
作者 郭政宏 周彪 严亨秀 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第6期1610-1617,共8页
为获得来源于藏绵羊的益生菌菌株,对健康母藏绵羊新鲜粪便进行90℃水浴处理5min以筛选具有抗逆性的芽孢杆菌,再综合形态学、生理生化特征及16SrDNA序列分析进行鉴定,通过抑菌试验、耐酸、耐胆盐试验及产水解酶试验等方法对其生物学特性... 为获得来源于藏绵羊的益生菌菌株,对健康母藏绵羊新鲜粪便进行90℃水浴处理5min以筛选具有抗逆性的芽孢杆菌,再综合形态学、生理生化特征及16SrDNA序列分析进行鉴定,通过抑菌试验、耐酸、耐胆盐试验及产水解酶试验等方法对其生物学特性进行研究。结果显示,从新鲜粪便样品中分离到的芽孢杆菌菌株SWUN-G43对大肠杆菌和沙门氏菌有明显的抑菌效果,通过分析鉴定其为短小芽孢杆菌,该菌株在pH 2.0的环境中存活率为50.43%,在0.3%胆盐环境中存活率为44.35%,可产生蛋白酶和纤维素酶,对12种常用的抗生素具有很高的敏感性。从试验结果可分析出该短小芽孢杆菌(SWUN-G43)有一定的抗逆性和潜在的益生能力,且该菌株不含耐药质粒,不会在动物肠道微生态系统中造成抗生素抗性的水平传递,具有作为微生态添加剂开发的潜力。 展开更多
关键词 藏绵羊 短小芽孢杆菌 分离 鉴定 特性
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上海地区多种动物莱姆病的血清学调查 被引量：3
8
作者 刘佩红 徐锋 +2 位作者 沈莉萍 葛菲菲 王建 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2010年第1期119-121,共3页
为探讨猪、牛、羊、马、犬、鸡、鸭和野鸟等与人类关系密切的多种动物莱姆病的血清流行病学状况,从上海地区采集血清870份,应用酶联荧光测定技术(ELFA)检测莱姆病抗体。猪、牛、羊、鸡、鸭和野鸟中均未检测到莱姆病抗体,马血清中莱姆病... 为探讨猪、牛、羊、马、犬、鸡、鸭和野鸟等与人类关系密切的多种动物莱姆病的血清流行病学状况,从上海地区采集血清870份,应用酶联荧光测定技术(ELFA)检测莱姆病抗体。猪、牛、羊、鸡、鸭和野鸟中均未检测到莱姆病抗体,马血清中莱姆病抗体阳性率为18.5%,犬血清中莱姆病抗体阳性率为12.3%。结果表明,上海地区动物群中莱姆病的感染率相对较低,马和犬在莱姆病传播中的重要性应引起重视。 展开更多
关键词 莱姆病 动物 感染率 酶联荧光测定技术
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上海地区野鸟中伯氏疏螺旋体和西尼罗病毒感染的血清学调查 被引量：3
9
作者 孙泉云 袁明龙 +2 位作者 薛霞 李凯航 鞠龚讷 《动物医学进展》 CSCD 2006年第11期90-91,共2页
于2005年从飞抵上海的12种候鸟和4种留鸟中采集208份血清样品,采用酶联荧光测定(ELFA)法和酶联免疫吸附试验(ELISA),分别对伯氏疏螺旋体和西尼罗病毒的感染状况进行了血清抗体调查,结果受检野鸟样品的检测结果均为阴性。
关键词 野鸟 伯氏疏螺旋体 西尼罗病毒 酶联荧光测定法 酶联免疫吸附试验
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莱姆病诊断技术研究进展 被引量：9
10
作者 仝彩玲 李培英 周金林 《中国动物传染病学报》 CAS 2009年第3期76-80,共5页
莱姆病是一种经硬蜱传播的新发人畜共患病,可引起人类的慢性游走性红斑及心脏、神经、关节等多系统受损的疾病,造成病人不同程度的活动障碍和肢体瘫痪。该病在世界范围内广泛分布,我国许多地区是该病的自然疫源地。因此,莱姆病越来越引... 莱姆病是一种经硬蜱传播的新发人畜共患病,可引起人类的慢性游走性红斑及心脏、神经、关节等多系统受损的疾病,造成病人不同程度的活动障碍和肢体瘫痪。该病在世界范围内广泛分布,我国许多地区是该病的自然疫源地。因此,莱姆病越来越引起人们的重视。伯氏疏螺旋体是引起莱姆病的病原体,因其培养周期长、抗原结构复杂给莱姆病的诊断带来了一定的困难。本文对莱姆病病原体的直接检测、免疫学检测、分子生物学检测和一些新的诊断技术进行了概述。 展开更多
关键词 莱姆病 伯氏疏螺旋体 诊断技术
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牛伯氏疏螺旋体感染的间接ELISA检测方法的建立 被引量：2
11
作者 梅琳 王慧煜 +5 位作者 李佳 吴绍强 林祥梅 关贵全 郝琴 韩雪清 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期551-556,共6页
本研究使用狭义伯氏疏螺旋体B31菌株全菌抗原作为包被抗原,建立了牛伯氏疏螺旋体感染的间接ELISA诊断方法,并对该方法的特异性、灵敏度进行了评价。结果,该方法能够特异性地检出牛伯氏疏螺旋体感染阳性血清,当血清稀释到1∶800时仍可检... 本研究使用狭义伯氏疏螺旋体B31菌株全菌抗原作为包被抗原,建立了牛伯氏疏螺旋体感染的间接ELISA诊断方法,并对该方法的特异性、灵敏度进行了评价。结果,该方法能够特异性地检出牛伯氏疏螺旋体感染阳性血清,当血清稀释到1∶800时仍可检出莱姆病阳性。分别用本研究建立的ELISA以及IFA对200份已知样本的血清及300份临床样品进行检测,两种方法对已知样本检测的符合率为100%,对临床样品检测的符合率为81.8%。上述结果表明,本研究建立的方法可用于牛伯氏疏螺旋体感染的血清学检测。 展开更多
关键词 莱姆病 伯氏疏螺旋体 间接酶联免疫吸附试验
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马传染性贫血病毒感染马免疫控制机制的研究进展 被引量：3
12
作者 耿庆华 相文华 沈荣显 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期577-579,共3页
关键词 马传染性贫血病毒 体液免疫 细胞免疫 免疫控制
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浙江中部地区鼠类中检出莱姆病螺旋体感染 被引量：5
13
作者 孟真 姜理平 +3 位作者 李钟梁 应凯满 凌峰 陆群英 《中国卫生检验杂志》 CAS 2010年第10期2503-2505,共3页
目的:了解浙江省中部地区鼠类中莱姆病的感染情况。方法:采用巢式PCR对采集的野鼠肝脾标本进行莱姆病伯氏疏螺旋体5s-23s核糖体DNA间隔区片段分析。结果:从101份标本中检出阳性结果10份,分别来自社鼠、黄胸鼠、针毛鼠、褐家鼠和黑线姬鼠... 目的:了解浙江省中部地区鼠类中莱姆病的感染情况。方法:采用巢式PCR对采集的野鼠肝脾标本进行莱姆病伯氏疏螺旋体5s-23s核糖体DNA间隔区片段分析。结果:从101份标本中检出阳性结果10份,分别来自社鼠、黄胸鼠、针毛鼠、褐家鼠和黑线姬鼠,并以社鼠中的检出率最高。除一个序列可能为新的基因型外,其余均与伯氏疏螺旋体法雷氏基因型高度相似。结论:在浙江中部地区检出莱姆病疏螺旋体感染尚属首次。综合历年的调查结果,社鼠可能是莱姆病的重要宿主,伯氏疏螺旋体法雷氏基因型在浙江占优势,并可能存在其他基因型。今后应继续加强野生动物中莱姆病病原体的监测,密切关注莱姆病人群发病状况。 展开更多
关键词 鼠 莱姆病 伯氏疏螺旋体法雷氏基因型 巢式PCR
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不同动物源性大肠杆菌多重耐药调控基因SoxS的同源性分析 被引量：2
14
作者 马红霞 于晓颖 +1 位作者 刘玉堂 伞治豪 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2008年第8期33-34,共2页
关键词 抗生素耐药性 大肠杆菌 调控基因 同源性分析 多重 动物源 细胞膜通透性 过量表达
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五味子萃取物有效成分含量测定及其对鸡肉中肌苷酸含量的影响 被引量：9
15
作者 闫俊书 单安山 《中国畜牧兽医》 CAS 2008年第12期36-39,共4页
作者采用高效液相色谱测定五味子萃取物有效成分含量,并研究其对肉仔鸡胸肌、腿肌肌苷酸含量的影响。试验选择1日龄艾维茵肉仔鸡200羽,公母各半,随机分为5组,每组设4个重复,每个重复10羽。各组间鸡体重无统计学上的差异(P>0.05),试... 作者采用高效液相色谱测定五味子萃取物有效成分含量,并研究其对肉仔鸡胸肌、腿肌肌苷酸含量的影响。试验选择1日龄艾维茵肉仔鸡200羽,公母各半,随机分为5组,每组设4个重复,每个重复10羽。各组间鸡体重无统计学上的差异(P>0.05),试验全期56 d。空白组饲喂基础日粮(不添加任何药物),试验组分别在基础日粮中添加黄霉素5 mg/kg、五味子萃取物0.1%、0.2%、0.4%。56日龄屠宰试验鸡,取胸肌、腿肌肉,测定肌苷酸含量。研究结果表明,各试验组胸(腿)肌肌苷酸含量均高于空白组与黄霉素组,其中0.4%五味子萃取物组与空白组和黄霉素组相比差异显著(P<0.05)。 展开更多
关键词 五味子萃取物 肉仔鸡 肌苷酸 高效液相色谱
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伯氏疏螺旋体外膜蛋白C的表达及抗原性分析 被引量：1
16
作者 付钰广 关贵全 +9 位作者 牛庆丽 杨吉飞 刘志杰 李有全 马米玲 任巧云 刘爱红 彭欲率 罗建勋 殷宏 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期661-665,共5页
以伯氏疏螺旋体SZ(B.garinii)、BO23(B.afzelii)、B31(B.burgdorferi sensu stricto)菌株的外膜蛋白OspC基因为靶基因,将PCR扩增出的目的片段克隆到表达载体pGEX-4T-1中构建重组质粒进行表达,表达的蛋白用MagneGSTTMProtein Purificatio... 以伯氏疏螺旋体SZ(B.garinii)、BO23(B.afzelii)、B31(B.burgdorferi sensu stricto)菌株的外膜蛋白OspC基因为靶基因,将PCR扩增出的目的片段克隆到表达载体pGEX-4T-1中构建重组质粒进行表达,表达的蛋白用MagneGSTTMProtein Purification System纯化,之后用此3株菌株免疫羊制备的阳性血清做Western-blot,检测该重组蛋白。证明这3个基因型菌株的重组OspC具有抗原性及交叉反应性。本研究表达的重组蛋白OspC(SZ菌株)为建立羊体内伯氏疏螺旋体抗体的ELISA检测方法奠定了基础。 展开更多
关键词 伯氏疏螺旋体 OspC基因 克隆 表达 抗原性分析
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犬用钩端螺旋体抗体ELISA检测实验研究 被引量：2
17
作者 辛晓芳 贺争鸣 +1 位作者 秦进才 王国治 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2006年第5期53-54,共2页
通过对犬用钩端螺旋体病(钩体)ELISA检测方法的研究,建立了犬用ELISA钩体抗体检测方法。实验的最佳方案:包被抗原蛋白质含量为20μg/mL,酶结合物稀释度为1∶10 000,检测血清稀释度为1∶160。经10份犬免疫血清验证,均为阳性。此研究为犬... 通过对犬用钩端螺旋体病(钩体)ELISA检测方法的研究,建立了犬用ELISA钩体抗体检测方法。实验的最佳方案:包被抗原蛋白质含量为20μg/mL,酶结合物稀释度为1∶10 000,检测血清稀释度为1∶160。经10份犬免疫血清验证,均为阳性。此研究为犬用钩体抗体检测提供了一种简便快速的方法,具有重要的实用价值。 展开更多
关键词 钩体 ELISA 检测
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一株犬型钩端螺旋体的分离与鉴定 被引量：1
18
作者 邱薇 范泉水 +4 位作者 孙阳 周卫国 龙沛然 覃敏 李丽红 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2004年第6期71-72,共2页
关键词 犬 钩端螺旋体 分离 鉴定 人兽共患病 病理变化
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流感病毒在诱导A549细胞凋亡过程中对MDM2和p53蛋白的影响 被引量：1
19
作者 段铭 张茂林 关振宏 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期12-14,24,共4页
采用Hoechst 33258染色和流式细胞术观察了流感病毒诱导A549细胞凋亡的情况,同时应用Western-blot方法研究了MDM2和p53等蛋白表达的情况。结果表明,100 TCID50/0.1 mL剂量病毒感染A549细胞后,细胞表现出典型的凋亡特征,死亡细胞比例随... 采用Hoechst 33258染色和流式细胞术观察了流感病毒诱导A549细胞凋亡的情况,同时应用Western-blot方法研究了MDM2和p53等蛋白表达的情况。结果表明,100 TCID50/0.1 mL剂量病毒感染A549细胞后,细胞表现出典型的凋亡特征,死亡细胞比例随感染进程逐渐增加。在流感病毒诱导细胞凋亡过程中,MDM2蛋白表达下降,p53和p-p53表达上升,其下游p21蛋白也被激活。可见,p53及其下游p21蛋白参与了流感病毒诱导的A549细胞凋亡,同时通过下调MDM2蛋白表达促进了p53蛋白诱导的细胞凋亡。 展开更多
关键词 流感病毒 凋亡 MDM2蛋白 P53蛋白
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大肠杆菌对β-内酰胺类抗生素耐药性的水平传播机制研究 被引量：2
20
作者 张珍珍 吴俊伟 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第10期75-77,共3页
关键词 Β-内酰胺类抗生素 抗生素耐药性 大肠杆菌 水平传播 超广谱Β-内酰胺酶 传播机制 耐药基因 临床意义
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